HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白的亚细胞定位研究

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HBV表面抗原大蛋白与C53蛋白在肝细胞内的相互作用研究

Ｓ／Ｔｐ一ｅ／Ｈｓ一ｄ培养基上生长１Ｄ一ｒ／Ｌｕ一ｉＡｅ／６ｄ后，仍清；非变性细胞裂解液洗涤沉淀后，心弃上清；离向在此培养基上生长且变成蓝色的为阳性菌落。沉淀中加入适量的５× ＳＳ缓冲液，Ｄ高温煮沸，心离阳性质粒的分析：取上述阳性菌落，大培养收集上清，挑扩即可用于蛋白电泳及蛋白免疫印迹实验。后用酸化玻璃珠法提取酵母质粒，行电穿孔法转再
【ｅｏｄ】Ｈｐｔｓｒｒｒｃｐｔｎ（Ｈ）Ｃ３ｐｔｎＩｅｃｏＫｙｗｒｓｅａｔｖｓａｅｕａｅｒｅＬＢ；５ｒｅ；ｎｒｔｎｉＢｉｌｇｓｆｏｉｉｕｏｉｔａｉ
乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（ｅａｔｉｓ肿瘤的发生及发展过程中所起的作用及其机制提供ｈｐｔｉＢｖｕｉｓｒｌｇｕｆｅｒｔｎＬＢ）ＰｅＳ＋ＰｅｓＳ基因ａｅｓＹｅｐｏｉ，Ｈｓ（ｒ－１ｒ—２＋ｒａｅ定的实验依据。编码）乙型肝炎病毒３种包膜蛋白之～，是近年来对材料与方法Ｌｓ达在乙型病毒性肝炎发病机制中的作用，ＨＢ表与材料病毒复制、脂类代谢以及肿瘤发生的关系等方面糖
ｗｔｌｇｕａｅｐｏｉ（ＨｓａｄｉｎｉｅｉｔａｔｎｂｔｅｎＬＢｎ５ｎＨｐ２ｃｌ．ｉｒｅｓｒｃｒｔｎＬＢ）ｎｄｔｙｔｎｅｃｏｅｗｅＨｓａｄＣ３ｉｅＧｅｓｈａｆｅｅｆｈｒｉｌ

慢性乙型肝炎信号转导及转录激活因子3、5与Treg_Th17平衡的关系

!N"!慢性乙型肝炎信号转导及转录激活因子３、５与Ｔｒｅｇ／Ｔｈ１７平衡的关系李敏癑１，杨红菊１，李　静２，宋　瑞１，游　晶１１国家卫健委毒品依赖和戒治重点实验室，昆明医科大学第一附属医院老年消化内科，昆明６５００３２；２昆明医科大学公共卫生学院，昆明６５０５００摘要：慢性乙型肝炎持续感染的免疫机制与Ｔ淋巴细胞密切相关，Ｔ淋巴细胞的发育需要多种细胞因子的协调作用，而信号转导及转录激活因子家族蛋白主要参与细胞因子的信号转导，尤其是ＳＴＡＴ５ａ／ｂ和ＳＴＡＴ３在调节性Ｔ淋巴细胞（Ｔｒｅｇ）和辅助性Ｔ淋巴细胞１７（Ｔｈ１７）的分化、发育过程中有着重要作用。

本文主要就在慢性乙型肝炎中，对信号转导及转录激活因子３、５与Ｔｒｅｇ／Ｔｈ１７平衡的关系进行分析，研究ＨＢＶ感染的慢性化及其引起的肝脏炎症调控机制。

关键词：乙型肝炎，慢性；ＳＴＡＴ３转录因子；ＳＴＡＴ５转录因子；Ｔ淋巴细胞，调节性；Ｔｈ１７细胞基金项目：国家自然科学基金项目（８１７６０１１１，８１７６０６１７）；国家卫生健康委毒品依赖和戒治重点项目（２０２０ＤＡＭＡＲＡ－００３）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ３ａｎｄｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ５ｗｉｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌ／Ｔｈｅｌｐｅｒ１７ｃｅｌｌｂａｌａｎｃｅｉｎｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢＬＩＭｉｎｙｕｅ１，ＹＡＮＧＨｏｎｇｊｕ１，ＬＩＪｉｎｇ２，ＳＯＮＧＲｕｉ１，ＹＯＵＪｉｎｇ１．（１．ＮＨＣＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｒｕｇＡｄｄｉｃｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｒｉａｔｒｉｃＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００３２，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０５００，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＹＯＵＪｉｎｇ，ｊｉｎｇｙｏｕｋｍ＠１２６．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－５９１９－５８６４）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｍｍｕｎｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ（ＣＨＢ）ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＴｃｅｌｌｓ，ａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴｃｅｌｌｓｒｅｑｕｉｒｅｓｔｈｅｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｔｈｅｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ（ＳＴＡＴ）ｆａｍｉｌｙａｒｅｍａｉｎｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ａｎｄＳＴＡＴ５ａ／ｂａｎｄＳＴＡＴ３ｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓ（Ｔｒｅｇ）ａｎｄＴｈｅｌｐｅｒ１７ｃｅｌｌｓ（Ｔｈ１７）．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｎａｌｙｚｅｓｔｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＳＴＡＴ３ａｎｄＳＴＡＴ５ｗｉｔｈＴｒｅｇ／Ｔｈ１７ｂａｌａｎｃｅｉｎＣＨＢａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｓｔｈｅｃｈｒｏｎｉｃｉｔｙｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｌｉｖｅｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢ，Ｃｈｒｏｎｉｃ；ＳＴＡＴ３ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ；ＳＴＡＴ５ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ；Ｔ－Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ；Ｔｈ１７ＣｅｌｌｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（８１７６０１１１，８１７６０６１７）；ＮａｔｉｏｎａｌＨｅａｌｔｈＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎＫｅｙＰｒｏｊｅｃｔｏｆＤｒｕｇＤｅｐｅｎｄｅｎｃｅａｎｄＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ（２０２０ＤＡＭＡＲＡ－００３）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０６．０３６收稿日期：２０２１－０９－２６；录用日期：２０２１－１１－０２通信作者：游晶，ｊｉｎｇｙｏｕｋｍ＠１２６．ｃｏｍ慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）已经是全球严重公共卫生事件之一，虽然现在乙型肝炎疫苗已经问世多年，但是全球仍然有超过２４亿的人群感染ＨＢＶ，并逐渐往肝硬化、肝癌方向发展［１］。

羊脓包型病毒感染后宿主细胞差异表达基因的筛选与鉴定赵魁吉林大学24万

杆状病毒复制过程中病毒DNA甲基化动态及其对病毒复制和基因表达的影响钟江复旦60乙型肝炎病毒与干扰素在宿主细胞内相互作用时间:2009-11-19 10:11来源:未知作者:金主任点击:755次内容摘要：HBV与宿主细胞及干扰素之间复杂的相互作用是乙型肝炎发生、发展及转归的基础，探讨这种相互作用的分子机制，有利于揭示IFN的抗病毒机制以及了解HBV复制如何影响细胞功能、拮抗I乙型肝炎病毒(HBV)是一中严重危害人类健康的病原体，已有研究提示HBV的持续感染或拮抗病毒治疗与病毒逃避宿主天然免疫尤其是干扰素密切相关，但尚不清楚其详尽机制. 本课题组几年来利用乙型肝炎体外病毒复制细胞系统和肝炎患者，一方面研究乙肝病毒基因复制和蛋白表达对调节天然免疫信号通路,干扰素合成和效应作用的影响, 另一方面研究干扰素诱导的细胞基因在抗病毒及信号传导途径中的作用。

首先发现乙肝病毒表面抗原影响机体天然免疫的直接证据。

通过研究慢性乙肝患者外周血淋巴细胞的TLR表达及其功能，发现TLR2和TLR4表达低下,相应配体刺激后免疫细胞分泌因子12等减少，并与血中存在病毒表面抗原有关，提示HBV感染能够干扰TLR信号传导通路的活化. 进一步研究乙型肝炎患者pDCs产生干扰素功能是否受损及其机制，发现CHB病人PBMCs和pDCs经TLR7/9配体介导产生IFN-α的能力显著低于;证实HBsAg参与抑制TLR9介导pDCs干扰素合成, 抑制作用的机制包括与pDCs上干扰素抑制性受体BDCA-2结合，干扰IRF-7 mRNA表达和IRF-7核转位而抑制IFN-α合成等，提示HBV病毒可能通过表面抗原影响天然免疫细胞功能而影响获得性应答导致HBV持续感染.同时通过研究乙肝病毒在细胞内基因复制和蛋白表达对细胞因子相关信号通路影响，发现HBV polymerase抑制肝细胞内干扰素的产生，并拮抗干扰素的作用,机理为通过HBV多聚酶蛋白与Stat1相互作用，阻碍Stat1核内转移，抑制IFN-α诱导的相关细胞蛋白的表达,提示HBV 可能通过病毒蛋白表达对干扰素信号通路上的关键环节进行干预，使干扰素的作用被拮抗，从而导致感染慢性化、对干扰素的治疗不敏感。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测

乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位与结构预测伦永志;雷莎;成军;王毓婧;王琦;沈立婷;蒋海辉;张尧【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2009(034)003【摘要】目的利用真核细胞绿色荧光表达系统分析乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的亚细胞定位,并用生物信息学方法对其结构进行分析.方法将HBVDNAPTP1基因片段插入pEGFP-C1载体中,分别转染HepG2细胞与CX3S7细胞,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光融合蛋白的细胞内定位,并应用生物信息学技术分析HBVDNAPTPl的结构特征.结果经RT-PCR扩增获得HBVDNAPTP1基因片段,成功构建HBVDNAPTP1基因的绿色荧光表达载体,转染细胞后,48～72h内细胞质出现明显的绿色荧光信号.结构预测结果表明HBVDNAPTPl无卷曲螺旋区域,有6个疏水区;无特殊二级结构,有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点;不具有跨膜螺旋结构,无信号肽.结论 HSVDNAPTP1的亚细胞定位结果与生物信息学分析相符,为进一步研究其生物学功能及其在乙型肝炎、肝细胞癌中的作用机制奠定了基础.【总页数】3页(P280-282)【作者】伦永志;雷莎;成军;王毓婧;王琦;沈立婷;蒋海辉;张尧【作者单位】116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室;116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室;北京地坛医院传染病研究所;116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室;北京地坛医院传染病研究所;116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室;116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室;116622,辽宁大连,大连大学医学院辽宁省高校生物物理学重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R373.21【相关文献】1.乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1相互作用蛋白的筛选与鉴定 [J], 伦永志;成军;武会娟;于增国;王琦;王芳2.乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节人类新基因HBVDNAPTP1的克隆及原核表达与组织表达分析 [J], 伦永志;张黎颖;成军;郭江;洪源;赵宝昌3.乙型肝炎病毒DNA聚合酶逆转录酶反式调节蛋白1基因的克隆化研究 [J], 张黎颖;成军;邓红;王春花;刘妍4.非洲猪瘟病毒MGF360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位 [J], 申超超;刘湘涛;李国丽;张大俊;徐国伟;侯景;李丹;党文;张克山;郑海学5.非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位 [J], 侯景;陈学辉;张克山;郑海学;刘湘涛;申超超;张大俊;杨博;史喜绢;张婷;崔卉梅;袁兴国;赵登率因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用

巩雪俐，张丽。，张建龙ｐ，张锦前。
（新疆医科大学基础医学院病理生理学教பைடு நூலகம் 室，组织胚胎学教研室，疆新乌鲁木齐８０１；北京地坛医院传染病研究所，京３０１。北１０１）００５
摘要：目的验证ＨＢ表面抗原大蛋白（ｓ与人胰腺ＣＫ５ＰＶＩＨＢ）ＤＲＡ３蛋白在细胞内是否存在相互作用关
新疆医科大学学报
ＪＯＵＲＮＡＩＯＦＸＩＩＮＪＡＮＧＭＥＤＩＵＮＩＣＡＩＶＥＲＳＴＹ２１ｂ３（）Ｉ００Ｆｅ．，３２
１３１
哺乳动物双杂交技术验证ＨＢ表面抗原大蛋白与Ｖ人胰腺ＣＤＫ５ＲＡＰ白问的相互作用３蛋
有自身激活作用。
Ｉｓ人胰腺Ｃ５ＡＰＨＢ与ＤＫＲ３蛋白在细胞内存在相互作用关系，单独转染后没且
关键词：Ｖ表面抗原大蛋白；腺癌细胞；哺乳动物双杂交ＨＢ胰
中图分类号：４Ｒ３文献标识码：Ａ文章编号：０９５５（０００ — １３Ｏ１０ — ５１２１）２０１一３
ＴｈｅｃｎｉｍａｉｎｏｈｎｅａｔｏｅｗｅｎＨＢＶａｇｏｅｎａｏｏｆｒｔｏｆｔｅｉｔｒｃｉｎｂｔｅｌｒｅｐｒｔｉｎｄｈｍｏｓｐｉｎａｅｓｐｎｒａｉａｃｅｔｃＣＤＫ５ＲＡＰ３ｐｏｅｎｕｉａｍａｉｎｔ — ｙｒｄｅｐｅｉｅｒｔｉｓｎｇｍｍｌａｗｏｈｂｉｘｒｍｎｔ

乙肝病毒表面大蛋白检测在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值

乙肝病毒表面大蛋白检测在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值【摘要】目的分析乙肝病毒表面大蛋白（LHBs）和慢性乙型肝炎(CHB)血清标志物之间的关系，探讨LHBs对CHB诊断的临床价值。

方法：研究对象124例接受抗病毒治疗的慢性HBV患者，为124例表面抗原(HBsAg)阳性至少6个月的CHB患者，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)检测CHB 血清标志物和LHBs，同时检测HBV-DNA。

结果：在慢性非活动性乙型肝炎(IH)诊断中，LHBs和HBV-DNA具有良好的一致性(P>0.05)，而在CAH中，LHBs 比HBV-DNA具有更高诊断性，组间比较有统计学差异(P＜0.05)。

不同慢性活动性乙型肝炎(CHB)血清标志物中，LHBs的阳性率均比HBV-DNA高，说明LHBs 对诊断CHB均有较高的敏感性。

HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)、HBsAg(+) HbeAb(+)HBcAb(+)和HBsAg(+)HBeAg(+)组间阳性率比较有显著性统计学意义(P＜0.01)。

HBV-DNA与LHBs对诊断HBsAg(+)HBcAb(+)也具有良好的一致性(P>0.05)。

结论：LHBs可以作为辅助诊断CHB的一项血清学指标。

【关键词】慢性乙型肝炎(CHB)；乙肝病毒表面大蛋白(LHBs)；HBV-DNA；应用临床上，约10%的乙型肝炎转变为慢性肝炎（CHB）。

随着分子诊断学的发展，人们对乙型肝炎病毒（HBV）的生命周期、临床过程和发病机制有了进一步的认识。

病毒学因子的血清学测定在慢性乙肝（CHB）的诊断和治疗中起了重要作用[1]。

本研究通过对比分析124例CHB血清标本的LHBs和HBV-DNA检测结果，探讨LHBs在CHB临床诊断中的应用价值。

1材料与方法1.1 研究对象124份CHB患者血清标本均来自2010年5月至2011年2月我院门诊患者，其中男68例，女56例，年龄19岁～58岁，平均年龄22±4.5岁。

PI3Kp55PIK调节亚单位N末端在肿瘤生长及侵袭转移中作用的研究

酸化的磷脂酰肌醇的水平，因而显得更重要。

到目前为止，还没有发现下调Ａｋｔ活性的特异的磷酸酶，但用磷酸酶抑制剂处理细胞后，发现Ａｋｔ磷酸化和活性均有所增加。

最近发观，Ａｋｔｆｉ＇＆，被一种ｃ一末端调节蛋白（Ｃ’ＦＭＰ）所失活，ｃＴＭＰ能结合Ａｋｌ，通过阻ｉ卜其磷酸化而抑制下游信号传递，ＣＴＭＰ的过表达能逆转ｖ—Ａｋｔ转化绌胞的表型［４Ｉ。

而热休克蛋［Ｊ９０（ＨＳＰ９０）亦能结合Ａｋｔ，阻止Ａｋｔ被ＰＰ２Ａ磷酸酶的去磷酸化而失活，从而具有保护Ａｋｔ防止其失活的作用１４，６１。

图１Ｐ１３Ｋ．Ａｋｔ信号通路２．Ｐ１３Ｋ—Ａｋｔ信号通路与肿瘤２．１Ｐ１３Ｋ的异常与细胞转化Ｐ１３Ｋ的活性与多种人类肿瘤包括乳腺癌、肺癌、黑色素瘤和淋巴瘤等相关‘７１（表１）。

据报道在人类肿瘤中，参与Ｐ１３Ｋ—Ａｋｔ通路的蛋白质的编码基因在ＤＮＡ水平』＝１竽在结构的变化，例如：在一些卵巢癌病例中发现编码Ｐ１３Ｋ的ｐｌｌ０催化亚单位的基凶被扩增”Ｉ，最Ｊ匠ＧａｏＮ等１９１报道卵巢癌中Ｐ１３Ｋｐｌｌ０ａｌｐｈａ频繁扩增，抑制Ｐ１３Ｋ活性能抑制卵巢癌细胞增殖诱导Ｇｌ细胞周期停止，伴随着Ｇｌ期相关蛋１１１ＣｙｃｌｉｎＤｌ和ＣＫＤＫ４表达的减少以及Ｒｂｆｉｑ磷酸化。

这种细胞周期的停滞能因细胞中活性Ａｋｔ和ｐ７０Ｓ６Ｋ的表达而恢复。

在乳腺癌、卵巢痛和胰腺癌中发现Ａｋｔ２的扩增【４１；这两种情况弓乳腺癌中非突变ＥＲＢＢ２ＲＴＫ的Ｎ饥和医科人学ｒ｛·Ｈ医学科学院硕ｆ：研究生学位论文图２：Ｐ１３Ｋ／Ａｋｔ通路和Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ通路的相互作用４．Ｐ１３Ｋ—Ａｋｔ信号通路——肿瘤化学治疗的靶点Ｐ１３Ｋ．Ａｋｔ信号通路在肿瘤的发生和发展等方面均具有作用，该通路的抑制能阻止失控细胞的增殖，因此由Ｐ１３Ｋ和其下游分子所转导的抗凋亡信号已经成为药物研究领域的焦点。

目前用于抑制该信号通路的策略主要有以下几个方面：发展和应用小分子抑制剂（ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｓＭｌｓ）。

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用巩雪俐;张丽;张建龙;张锦前【摘要】目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础.方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用.结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05).结论 LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2010(033)002【总页数】3页(P113-115)【关键词】HBV表面抗原大蛋白;胰腺癌细胞;哺乳动物双杂交【作者】巩雪俐;张丽;张建龙;张锦前【作者单位】新疆医科大学基础医学院,病理生理学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,组织胚胎学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,病理生理学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;北京地坛医院传染病研究所,北京,100015【正文语种】中文【中图分类】R34HBV表面抗原大蛋白(LHBs)(由PreS1、PreS2、S 3种基因编码)是乙型肝炎病毒3种包膜蛋白之一，近年来的研究证实LHBs表达在乙型肝炎病毒感染的发病机制中具有重要的临床意义[1]。

因此本课题组应用酵母双杂交技术筛选出LHBs与CDK5RAP3存在相互作用，但LHBs与CDK5RAP3的相互作用是否会进一步导致糖代谢紊乱，促进代谢综合征的发生、发展尚不清楚。

由于酵母双杂交系统存在假阳性率，因此本研究通过相关实验验证LHBs与CDK5RAP3之间是否存在相互作用，为进一步研究HBV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供理论依据。

1 材料与方法1.1 材料胰腺癌细胞系Capan2由协和医科大学药物研究所惠赠，pACT空质粒、pBIND空质粒、pACT-myoD质粒、pBIND-Id质粒、pG5luc质粒、pBIND-LHBs由本室保存，1640细胞培养基、胎牛血清、双抗购自美国GIBCO公司，LipofectamineTM 2000细胞转染试剂、Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统购自美国Promega公司，引物合成及DNA测序由北京奥科生物公司完成。

CDK5RAP3 Knockout Lentivirus 产品说明书

CDK5RAP3 Knockout Lentivirus产品简介：CDK5RAP3 Knockout Lentivirus (CDK5RAP3基因敲除慢病毒)是一种感染动物细胞后可以同时表达Cas9、目的基因sgRNA 和puromycin 抗性基因的慢病毒。

本产品用于在动物细胞中基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因，并且本慢病毒中sgRNA 的有效性已经通过T7EI 法的验证。

本慢病毒基因序列的关键图谱信息请参考图1。

本慢病毒可用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 可同时表达sgRNA 、Cas9和puromycin 抗性的本慢病毒其基因序列的关键图谱信息。

用于包装本慢病毒的质粒中的sgRNA 基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA 快速筛选和验证体系获得，sgRNA 的有效性已经通过T7EI 法验证。

本慢病毒用于实验时，建议同时选购无任何靶向的对照慢病毒Control Knockout Lentivirus (L00015)或靶向GFP 的对照慢病毒GFP Knockout Lentivirus (L00017)。

碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的CDK5RAP3基因敲除的质粒(L25400 pLenti-CDK5RAP3-sgRNA)、慢病毒(L25401 CDK5RAP3 Knockout Lentivirus)、HEK293T 细胞(L25402 CDK5RAP3 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T 敲除细胞的RIPA 裂解液(L25403 CDK5RAP3 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T 敲除细胞的Trizol 裂解液(L25404 CDK5RAP3 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品，具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。

乙型肝炎病毒X蛋白、雄激素受体及p53蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

乙型肝炎病毒X蛋白、雄激素受体及p53蛋白在肝细胞癌中的表达及意义陈江;杨柳明;赵延龙;崔彬;王丽红【摘要】目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)、雄激素受体(androgen receptor,AR)及p53在肝细胞癌(HCC)中的表达及意义.方法采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的碱性磷酸酶及底物色素混合液(SP)免疫组化方法检测58例患者乙型肝炎病毒相关原发肝细胞癌组织(HCC)及相应癌旁组织中HBx 、AR及p53的表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果 HCC和癌旁组织中HBx、AR及p53的表达率分别为63.8%(37/58)、58.6%(34/58)及62.0%(36/58)和20.9%(12/58)、27.6%(16/58)及8.6%(5/58);差别有统计学意义(P ＜ 0.05).HBx阳性和HBx阴性的HCC组织中AR及p53的表达率分别为72.3%(27/37)、83.8(31/37)和33.3%(7/21)、23.8%(5/21),在 HCC组织中HBx 表达与AR及p53表达正相关(r = 0.4532 及r = 0.4754,P ＜ 0.05).HBx染色的阳性率与AFP水平和分化程度相关;AR染色的阳性率与性别及肿瘤直径相关;p53染色的阳性率与TNM分期相关.结论在HCC组织中HBx蛋白可上调AR及p53的表达,HBx-AR信号传导途径及p53基因突变可能促进HBV相关肝细胞癌的发生发展.%Objective To investigate expression of HBx and androgen receptor (AR) and p53 in hepatocellular carcinoma (HCC) and its significance. Methods The expressions of the proteins mentioned above in 58 hepatitis B virus (HBV) related HCC tissues and in respective peritumoral tissues were detected by SP immunohistochemistrymethod, and the follow-up informations of the patients were investigated. Results The positive expression of HBx, AR and p53 in HHC tissues was 63.8% (37/58), 58.6%(34/58) and 62.0% (36/58), it was 20.9% (12/58), 27.6% (16/58) and 8.6% (5/58) in non-cancerous adjacent liver tissues. Differences were significant (P < 0.05). The positive expression of AR and p53 in HHC tissues with HBx-positive and in HHC tissues with HBx-negative was 72.3% (27/37), 83.8% (31/37) and 33.3% (7/21), 23.8 (5/21) respectively, there were significnant correlations between the expression of HBx and AR and p53 in HCC tiusses (r = 0.4532 and r = 0.4754, P < 0.05). The expression rates of HBx was related to differentiation and AFP level, the expression rates of AR was related to gender and tumour size. The expression rates of p53 was related to TNM. Conclusion In HBx-postive hepatocellular carcinoma HBx up-regulate expresses of AR and p53 suggest HBx with AR signaling pathway and p53 mutation involved in HBx-related hepatocarcinogenesis.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)012【总页数】3页(P65-67)【关键词】乙型肝炎病毒X蛋白;雄激素受体;抑癌基因P53;肝细胞癌【作者】陈江;杨柳明;赵延龙;崔彬;王丽红【作者单位】广东省廉江市人民医院肝病中心,广东廉江,524400;广东省廉江市人民医院肝病中心,广东廉江,524400;广东省廉江市人民医院肝病中心,广东廉江,524400;广东省廉江市人民医院肝病中心,广东廉江,524400;广东省廉江市人民医院肝病中心,广东廉江,524400【正文语种】中文【中图分类】R735.7乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBx）是一个多功能调节蛋白，对于启动和维持HBV的复制是必须的，是HBV自然感染过程中的关键的调节因子；是HBV感染诱发肝细胞癌变的主要蛋白，故亦称癌蛋白。

靶向乙肝病毒核心蛋白治疗慢性乙型肝炎的研究进展

靶向乙肝病毒核心蛋白治疗慢性乙型肝炎的研究进展戴胜兰;姚俊;许亚平【摘要】乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白是HBV核衣壳的组成部分,参与病毒包装、病毒成熟以及病毒向细胞外释放等过程,具有cccDNA调节功能并参与诱导机体免疫反应.本文就HBV核心蛋白的结构、功能以及在HBV治疗中的研究进展等方面,综述了近年来靶向HBV核心蛋白治疗慢性乙型肝炎的研究现状,表明核心蛋白质变构调节剂(CpAMs)可作为抗HBV药物直接靶向HBV核心蛋白而干扰其活性,利用HBV核心蛋白为靶抗原诱导HBV特异性免疫反应具有抗HBV及免疫调节作用,以期为慢性乙型肝炎的治疗发展提供参考.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2018(015)022【总页数】4页(P35-38)【关键词】乙型肝炎病毒;慢性乙型肝炎;核心蛋白;共价闭合环状DNA;免疫反应【作者】戴胜兰;姚俊;许亚平【作者单位】江苏大学附属人民医院消化内科,江苏镇江212002;江苏大学附属人民医院消化内科,江苏镇江212002;江苏大学附属人民医院消化内科,江苏镇江212002【正文语种】中文【中图分类】R512.6慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染引起的肝脏慢性炎症性疾病。

据统计，全世界约有2.4亿慢性HBV感染者，每年约有50万人死于CHB相关的并发症（如肝硬化和肝细胞癌等）［1］。

当前使用的抗病毒药物主要为核苷（酸）类似物和干扰素-α，可以有效抑制HBV增殖，减缓乙型肝炎患者的发病进程，但由于不能作用于共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA），很难彻底清除病毒［2］。

HBV 核心蛋白是HBV核衣壳的组成部分，具有重要的生物学特性和功能，在T细胞和B细胞水平上，HBV核心蛋白的抗原性较乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HbeAg）强100倍，几乎所有HBV感染者都产生HBV核心抗体（hepatitis B virus core antibody，HBcAb），同时存在T细胞免疫应答，机体对核心蛋白的免疫应答在清除HBV过程中具有重要作用［3］。

慢性乙型肝炎抗病毒治疗中监测乙肝大蛋白的临床价值

慢性乙型肝炎抗病毒治疗中监测乙肝大蛋白的临床价值徐瑞芳;张红云;田怡;张志峰;刘红;张曹庚;邓文宗;刘雨;施燕芬【摘要】目的评估血清乙肝大蛋白(hepatitis B virus large protein,HBV-LP)在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者抗病毒治疗中的临床价值.方法经恩替卡韦治疗120例CHB患者,分别于用药0周、12周、24周、36周、48周、72周、96周检测HBV-LP、HBV DNA水平.结果在CHB患者中,HBV-LP及HBV DNA检出率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);在抗病毒治疗中,HBV-LP与HBV DNA降低呈一致趋势,HBV-LP的消减晚于HBV DNA(P ＜0.05).结论血清HBV-LP检测是抗病毒疗效评估及治疗终点判断的有效指标.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2016(025)002【总页数】3页(P171-173)【关键词】乙肝大蛋白;慢性乙型肝炎;抗病毒治疗【作者】徐瑞芳;张红云;田怡;张志峰;刘红;张曹庚;邓文宗;刘雨;施燕芬【作者单位】上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199;上海市闵行区中心医院感染科,上海201199【正文语种】中文【中图分类】R512.6+2乙型肝炎是我国常见的慢性传染病之一，严重危害人类健康[1-2]。

核苷(酸)类似物随着疗程的延长而耐药率升高[3]。

目前临床上多采用HBV DNA、HBeAg等来检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在肝脏复制情况及判断抗病毒治疗的疗效，邓宜楚等[4]研究发现依据HBV DNA低于检测下限的停药标准，复发率达81.6%。

乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系

乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系杨延敏;王洪笑;王桂利;崔亚利;梁萍【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2006(14)27【摘要】目的:检测不同模式乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)、乙肝前S1,HBV DNA以及ALT,比较HBV-LP以及乙肝前S1的检出与HBV DNA及ALT之间的关系,探讨HBV-LP用于乙肝患者临床诊断的意义．方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测177例HBV患者血清HBV-LP和乙肝前S1,荧光定量PCR 方法检测患者HBV DNA,全自动生化分析仪检测ALT．结果:相同乙肝模式患者血清HBV-LP与HBV DNA检出率无显著差异;HBeAg阳性患者血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者(95．45％vs 44．36％,P<0．05; 93．18％vs 41．35％,P<0．05):相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV DNA的检出,两者差异显著(P<0．05);HBV-LP阳性患者的ALT明显高于HBV-LP阴性患者．结论:乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA有较高的符合率,是反映乙肝患者体内病毒复制情况的可靠指标;而且乙肝表面抗原大蛋白阳性患者ALT 较阴性患者高,表明HBV-LP同时也反映了乙肝病情的活动情况．【总页数】4页(P2733-2736)【关键词】乙肝病毒表面抗原大蛋白;HBV;DNA;丙氨酸转氨酶【作者】杨延敏;王洪笑;王桂利;崔亚利;梁萍【作者单位】北京丰台医院【正文语种】中文【中图分类】R512.62【相关文献】1.HBsAg阳性患者乙肝病毒表面大蛋白检测与HBV-DNA、ALT之间的关系探讨[J], 皮红泉2.乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA、ALT的关系及其临床意义 [J], 牛文强;陈杰3.慢性乙型肝炎患者血清HBV外膜大蛋白、HBsAg、HBV DNA及ALT水平与肝组织炎症活动度的相关性 [J], 李阳;咸建春4.乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系 [J], 牛文强;陈杰5.HBsAg阳性患者乙肝病毒表面大蛋白检测与HBV-DNA、ALT之间的关系探讨[J], 皮红泉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定

HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定李志刚;杨林;江元森;顾琳;姚集鲁【期刊名称】《热带医学杂志》【年(卷),期】2005(5)1【摘要】目的构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)大分子表面蛋白基因的重组载体,以便进一步研究其基因免疫以及对宿主细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响。

方法设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S 基因)片段;用HindⅢ和BamHI双酶切后,连接到质粒pcDNA3.1(+)相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。

结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。

测序结果与文献报道序列及预计结果一致。

结论成功构建了HBV大分子表面蛋白基因的重组载体。

【总页数】3页(P19-21)【关键词】乙型肝炎病毒;大分子表面蛋白;重组载体【作者】李志刚;杨林;江元森;顾琳;姚集鲁【作者单位】中山大学附属第三医院感染科【正文语种】中文【中图分类】R512.62【相关文献】1.HBVS基因、PreS2/S基因真核重组载体的构建与鉴定 [J], 李志刚;江元森;杨林;庄鹏;凌小强;李刚;姚集鲁2.重组外源性人热休克蛋白70基因真核表达载体的构建及鉴定 [J], 韩世伟;张阳德;万小平;陈玉祥3.汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价 [J], 张锦鹏;张冠文;宣国云;孟强;谢文宇;高宏;姜东伯;杨琨4.HBV S基因、PreS2／S基因真核重组载体的构建与鉴定 [J], 李志刚;江元森;杨林;庄鹏;凌小强;李刚;姚集鲁5.绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定 [J], 张文成;扎拉嘎胡;陈莉;买霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞MKK3,p38MAPK表达的影响

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞MKK3,p38MAPK表达的影响蒲长宇;周后龙;彭亮;宋扬;冯英明【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2011(19)4【摘要】Objective : To observe the change of expressions of MKK3 andp38MAPK in HCC induced by hepatitis B virus X protein, and the correlative mechanisms of the effect in signal transduction, to investigate the effect of hepatitis B virus X protein to HCC. Methods: The human hepatoma carcinoma cells HepG2 were transfected with pCDNA3. 1 and pCDNA - 3. 1 - HBx recombinant plasmids by lipofectamine 2000. Then the stable cell lines expressing constantly HBx protein and the negative control cell lines were established by adding G418 to select single cell G418 - resistant clones and identification with reverse transcriptase - PCR and Western blot assays, named respectively HepG2 - HBx and HepG2 - pCDNA3. 1 cells, meanwhile with the HepG2 as blank. To detect the change on mRNA and protein level of MKK3 and p38MAPK in above three species cells by RT - PCR and Western blot assays,changes of phosphorylation - p38MAPK protein in nucleus and cytoplasm were observed with cell immunofluorescence method ;To measure the proliferation,cell cycle and apoptosis of these cells by MTT assays. Data were analysed by SPSS12 system. Results: Expressing of MKK3 on mRNAand protein was higher in HepG2 - HBx than in other two species cells. There was no evident change on the mRNA and total protein level ofp38MAPK for all various cell models,but the phosphorylation of p38 and the quantity of it in nucleus were up - regulated in HepG2 - HBx. HepG2 - HBx's cell was stronger in proliferation than other two species cells. Conclusion: HBx can up - regulate the expression of MKK3 in hepatoma carcmoma cell and promote the phosphorylation of p38 and precipitatep38 into nucleus, further activate the downstream molecule. p38MAPK signal transductional path plays important role in the changes of proliferation hepatoma carcinoma cell induced by HBx. This may be one of the mechanisms that make an tumor biological behaviour different in clinic character between the HBV - correlated and no HBV - correlated hepatocellular carcinoma.%目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MKK3)及其下游分子p38丝裂酶原活化的蛋白激酶(p38MAPK)的表达的影响,探讨相关的信号转导机制,及其对肝癌细胞生物学行为的影响.方法:分别将质粒pCDNA3.1及pCDNA3.1-HBx重组质粒经脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,G418筛选培养,并用反转录PCR和Western blot鉴定,获得表达X蛋白的稳定细胞株HepG2-HBx和阴性对照细胞株HepG2-pCDNA3.1,以HepG2细胞株作空白对照.通过RT-PCR和Western blot检测上述三种细胞株中MKK3,p38MAPK在mRNA水平和蛋白水平的表达变化,并用细胞免疫荧光法检查磷酸化p38MAPK蛋白在细胞浆及细胞核中的变化;通过MTT实验检测三种细胞株的增殖情况.采用SPSS 12软件进行统计学分析.结果:MKK3在mRNA和总蛋白水平的表达在HepG2-HBx中均高于其他两组,其他两组无明显差异;p38MAPK在mRNA和总蛋白水平三组无明显差异,而其蛋白磷酸化水平和在核蛋白中的表达在HepG2-HBx中较其他两组升高;HepG2-HBx较其他两组细胞有更强的增殖能力.结论:HBx可以通过上调肝癌细胞中MKK3的表达,促进p38MAPK磷酸化和入核,从而进一步激活下游分子发挥生物活性.p38MAPK通路在HBx促进肝癌细胞的增殖中发挥重要作用.可能是导致HBV相关性肝癌与非HBV相关性肝癌临床特点及肿瘤生物学差异的机制之一.【总页数】5页(P640-644)【作者】蒲长宇;周后龙;彭亮;宋扬;冯英明【作者单位】第四军医大学唐都医院肿瘤科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院肿瘤科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院肿瘤科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院肿瘤科,陕西,西安,710038;第四军医大学唐都医院肿瘤科,陕西,西安,710038【正文语种】中文【中图分类】R730.231+.3;R735.7【相关文献】1.乙型肝炎病毒X基因-丙型肝炎病毒C基因融合表达蛋白对肝癌细胞胰岛素样生长因子1受体表达的影响 [J], 刘重阳;王军;杨丽2.乙型肝炎病毒对人肝癌细胞脂类代谢相关蛋白表达的影响 [J], 颜彩玲;彭仙娥;吴云丽;林旭;陈婉南3.乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白表达对肝癌细胞免疫逃逸的影响及其机制 [J], 侯建平;徐珂佳;王文义;张琪;丁文金4.EpCAM和CD13在不同肝癌细胞系中的表达和乙型肝炎病毒X蛋白对其表达的影响 [J], 闫霞;江建新;黄早早;吴超;刘平;姚弘毅5.乙型肝炎病毒X蛋白A1762T/G1764A双突变对肝癌细胞生物钟基因表达的影响 [J], 彭桦;占静;张乙凡;孙飞;邱梦君;杨盛力因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。