对猪瘟细胞活疫苗效价测定
猪瘟疫苗不同免疫剂量对抗体效价的影响试验
２ １ 试 验 Ｉ 猪 瘟 、 丹 毒 、 肺 疫 三 联 苗 免疫 头 ． 猪 猪
份对猪瘟抗体效价 的影响。选取仔猪 ２窝， 每窝随
机 分成 ３组 （ １ Ｂ 、 ３ 。 Ｂ 、 ２ Ｂ ）
表 ５ 体 重 与肥肝 重 、 脂重 的相 关分 析 体
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２０ ０ ８年 第 ３期
浙江 畜牧兽 医
３
猪 瘟 疫 苗不 同免疫 剂 量 对抗 体 效 价 的影 响 试 验
项雷 生 ， 叶峰 ， 伟祥 ， 军华 ， 朱 虞 朱 王 超
（ 海盐县 畜牧 兽 医局 ， 江海盐 ３ ４ ０ ） 浙 １ ３ ０ 摘要： 据研究 ， 对猪瘟抗体产生影响的因素很多， 包括疫苗种类 、 免疫剂量、 免疫抑制性疾病、 环境因素、
第一 组 （ １ ： 头 肌 肉 注 射 猪 瘟 单 联 苗 ２头 Ｆ）每
［ ］吴 ２
伟， 刘景胜． 鹅肥肝与相关 性状 的相关 分析 ［ ］ 中 Ｊ． 烈 。 战笙 等． 毛 中国一 些鹅 种 的产 肝性 能
国 家禽 。９ ０ ６２ ３ ． １９ 。 ：８— ０
３ 结果 讨论
［ ］艾 文森 ， ３ 陈
３１ 从试验结果看 ， ． Ｚ×Ｌ级 进 杂 交 Ｆ 和 Ｆ 相 比 ， 。 ：
２０ ０７年 １ ０～１ １月 ， 盐县 畜牧 兽 医局 从 海盐 ４ 海 个不 同养 猪场 户 中选 取长 嘉 杂种 一代仔 猪 ５ ５头 ， 分 组 进行 猪瘟 、 丹毒 、 猪 猪肺 疫三 联苗 不 同剂 量 的免疫 试验 ， 二免 时使 用 猪 瘟 、 丹 毒 、 猪 猪肺 疫 三联 苗 和 猪 瘟 单联 苗免 疫 ， 以探 讨 不 同 剂 量 ， ４７ ９ 生产批 号 ：１２３ ， 效 期 ：０８年 ６月 ； ７ ３０６ 有 ２０ 猪瘟 、 猪丹毒 、 多 杀 性 巴 氏杆 菌 三联 活 疫 苗 ， 猪 由南 京 某 生 物 药 厂 生 产 ， 准 文 号 ： 药 生 字 （ ０５） 批 兽 ２０ １０８０ ６ ， 产 批 号 ：７３ ６ ， 效 期 ：０ ８年 ３ ００ １１ 生 ００ ９４ 有 ２０
猪瘟免疫接种抗体效价检测试验
在血 凝 板的第 ８排 第 １ 加 阳 ４１ 该 地 区 猪 瘟 免 疫 保护 总 体 状 孔 ．
３ 检测 结果 ２ ４份血 清样 品 有 ２ １份抗 体 ２ ０
择了２ ４个商 品代 养猪 场 ． 集 全血 丢 弃 。 采 分 离血 清 ．进行猪 瘟抗 体效 价 检测 ２ ． 稀 释 阴性对 照血 清 ．３ ３
试验。
２ 材 料 与 方 法
在血 凝 板的第 ７排 第 １ 加 阴 免 疫效 价 达 到 １３ 孔 ：２以上 ： 疫 保护 免 性 血清 ５ ｌ ０ ，倍 比稀 释至 第 ３孔 ， 率 ９ ％：８份 仔 猪血 清 ．有 ３份 抗 ０ １ 混 匀后 取 出 ５ ｌ 弃 。第 ５ ６孔 体 效 价 达 到 １３ ０ 丢 － ： ２以 上 ． 保 护 率
瘟 兔 化 弱毒 苗 自 １ ５ ９ ６年 研 制 成 功 采血部 ．采血 ２Ｉ 于 ５塑料 离心管 ｌ Ｉ ｌ
被 检血清各孔 、 阴性对照血清各
斜放 静 置 ４ｈ后 ．℃冰 箱 过夜 ， ４ 低 孔 、 阳性对 照血 清各 孔 、 释 液对 照 稀 以来 ． 全 国各 地广 泛应 用 ， 明安 中． 在 证 全 有效 免疫疫 苗 ２ ４小 时后 ． 即可 速 离心 ． 血清 于 塑 料试 管 中一 ０ 取 ２ ℃ 孔加入混合均匀 的血凝抗原 ２ ｌ ５ 。 抵 抗 自然 感染 ．第 ３天 产生 可靠 的 保存 。 周 内检 测 。 １
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一
３ ５一
中 国 动 物检 疫
２０ 第 ２ ０ ６年 ３卷第 ７期
目主持 人 ：庞素 芬
文章编号：０５９４ （０６０—ｏ６０ １０—４ Ｘ ２０ ） ０３—２ ７
猪 瘟 免 疫 接 种 抗体 效 价检 测试 验
仔猪注射猪瘟细胞苗免疫效果试验
张 素丽 ， 等． 不 同厂 家猪 瘟 疫苗 免疫 效果对 比研 究
１ ０ １
均表 现较好 的免疫反应 ，整体 离散度较小 ： ９ ９日龄 从表 ３ 可 以看 出， 首免后 ， ４组猪整体变 异系数 后 ， 河南细胞苗组和广东细胞苗组整体离散度较大 ， 均较高 ， 离散度较大 ， 可 能主要 由于疫苗免疫后母源 由于 部分猪只 的抗体持续 时间较短 、抗体水平开始 抗 体 中和 影响及免疫反应产 生较慢 ； 二免后 ， ４组猪 下 降。
２ － ３ 变异 系数
表 ３ 不同厂家猪瘟疫苗免疫商品猪的抗体变异 系数
３ 小 结
从抗体转阳速度来看， 南京脾淋苗组 由于免疫应答速 本次 试验 表 明， ４个 厂 家生产 的猪 瘟疫 苗猪群 度较慢 ， 因此转阳速度滞后 ， 而河南细胞苗组、 广东细 免疫后均表现 出较好 的免疫反应 ， 抗体水平较 高、 持 胞苗组和湖南细胞苗组抗体转阳速度基本一致。 续时 间长 ， 免疫效 果较好 。 从抗 体持续时间来看 ，南京脾淋苗组和湖南细 从免疫应答速度来看 ， 南京脾淋苗组较慢 ， 河 南 胞苗组较河南细胞 苗组和广 东细胞苗组稍好 。 细胞苗组 、广 东细胞苗组和湖南细胞苗组基本一致； （ 编辑 ： 姜雪 ）
仔 猪 注 射 猪 瘟 细 胞 苗 免 疫 效 果 试 验
中图分类号 ： ｓ ８ ５ ８ ． ２ ８ 文献标志码 ：Ｂ 文章编号： １ ０ ０ ２ — １ ９ ５ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ — ０ １ ０ １ 一后抗 体消长规 律 ， 笔者于 ２ ０ １ ２年 ５月 １ ５日至 １ ０月 ３ １日在 北京养猪 育 种 中心 银 冶岭 种猪 场进 行 了猪瘟 细 胞苗 免疫 效 果 试验， 现将结果报告如下 。 １ 试验 材料与方法 从２ ０窝 ２ ８日龄 断奶 仔 猪 中每 窝选 取 性别 相 同、 体重相近 的仔 猪 １ ２头， 随机分 为 ２组 ， 每组 ３ ５ 头， 试验 １ 组于仔猪 ４ ５日龄免疫注射 １ 次猪瘟 细胞 苗 １ 头份／ 头， 试验 ２组仔猪 ４ ５日龄注射猪瘟细胞苗 １ 头份／ 头， １ 个 月后 （ ７ ５日龄） 加 强免疫猪瘟 细胞 苗 １ 头份／ 头 。注射疫 苗前， 所 有试验猪于 ３ Ｏ日龄和 ４ ５ 日龄进行猪瘟 病毒母源抗体检测 ； 注射疫 苗后 ， 所 有 仔 猪 分别 于 ５ ５ 、 ６ ５ 、 ７ ５ 、 ８ ５ 、 ９ ５ 、 １ ２ ０ 、 １ ５ ０日龄 抽 取 静 脉血进行猪瘟病 毒抗体检测 。猪瘟细胞苗从 市场 上 购 买，每 头份疫苗毒含 量不低于 ７ ５ ０ ０个 家兔感染 量； 猪瘟病毒酶联免疫吸附试 验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ） 抗体检测试 剂盒 ， 批号为 ９ ９ － － ４ ３ ２ ２ ０ ， 由Ｉ Ｄ Ｅ Ｘ Ｘ公司生产 。 ２ 试验结果与分析 由表 １ 可知 ， 两组仔猪 ３ ０日龄猪瘟病毒母源抗 体 阳性率为 ６ ２ ． ８ ５ ％～ ６ ２ ． ９ ％，之后快速下降 ， ４ ５日龄 仅为 ２ ０ ％左右 。 由表 ２ 可知 ， 两组仔猪 ５ ５日龄 （ 首免 后 １ Ｏ天） 猪瘟病 毒抗体水平 继续下 降， 直至 降为 ０ ； ６ ５日龄 （ 首免后 ２ ０天） 猪瘟病毒抗体水平开始 回升 ，
浦江县规模猪场猪瘟抗体效价实验室检测结果及免疫程序的确定
１ 材 料和方 法
分离血清备用 。 １２ 试 剂及设 备 ．
９ ６孔 １０或 １０Ｖ型 医用血 凝 １。 ２ 。
板 、 道 、 道 移 液 器 （ ５ １ ５ １ ） 微 量 移 液 器 单 多 ２ １、 ０ １ 、 ￣ ￣
（０ １２ ） 微 量 振 荡 器 、 型 离 心 机 、 瘟 血 凝 ５ １、５ 、 ￣ 小 猪 抗原 、 猪瘟 阴性对 照血清 、 猪瘟 阳性 对照 血清 。 １３ 检测 方 法 ． 采用 正向 间接凝集 法 。 判定 标准 ： 群免疫 抗体 效价 达 到 １３ （ 猪 ：２ 即第 ５
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３ ２
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浙 江畜牧 兽 医
２０ ０ ８年 第 ４期
兽 医 防疫
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浦江 县规 模猪 场 猪瘟 抗体 效价 实 验室 检 测 结 果 及 免 疫 程 序 的确 定
刘红 英 ， 建 山 ， 赵 张淑 霞
（ 浦江县 畜牧 兽 医局 ， 浙江 浦江 ３ ２ ０ ） ２ ２ ０ 中图分 类号 ：８８２ 文 献标识 码 ： 文章编 号 ： ０ — ３７２０ ）４ ０３ ０２ ￥５．８ Ａ １ ５ ７０ （０８ Ｏ — ０２— ０ ０
度， 科学合理的免疫程序等。二是规范保健药品使 用 。化学药 品制剂 、 中成 药制剂和 生化制剂 类动 物保 健药品， 消毒类药和抗生素类药 ， 必须按剂量 、 休药期 规定规范使用 ， 淘汰、 禁用药品坚决不用 ， 使消费者吃 上“ 放心肉” 。三是要科学、 合理配制全价饲料 ， 严格 按不 同畜种、 生长 阶段 、 生产水平 的营养需 要 ， 准确配 制出符合畜禽营养需要和饲养标准的 日 ， 粮 减少饲料 浪 费和养殖场排泄物对环境 造成 的污染 。
猪瘟活疫苗细胞毒液效力检验方法对比试验
吸 取 ７０Ｉ ０ Ｌ上清 液转 移 人树 脂 柱 中 。⑤将 脂柱 置 Ｌ 于 ４Ｃ，２００ｒ ｉ ￣ １ ０ ｒｎ离心 ３ ／ ａ ０ Ｓ，弃去 收集 管 中的液 体 。⑥加入 ５ ０ ０ Ｌ洗涤液 ，ｃ ，２００ｒ ｉ 离 心 ４ｃ １ ０ ｍｎ ／ ３ｓ， 去 收集管 中 的液 体 。⑦ 重复 步骤⑥ 一次 。⑧ ０ 弃 ４Ｃ，２Ｏ ０／ ｉ ￣ １ ０ｒ ｎ离心 １ｍｎ 弃去 收集 管 中 的液 体 ， ｍ ｉ，
关键 词 ： 瘟活 疫 苗 ； 力检 验 ； 体检 验 ；Ｔ Ｐ Ｒ 猪 效 兔 Ｒ —Ｃ
我 国猪 瘟 活疫 苗 （ 胞 源 ） 细 系用 猪 瘟 病 毒 兔 化 弱毒 株接 种 于犊 牛睾 丸 细胞 培养 繁殖 ， 收获 细胞 培 养液 ， 碎细 胞后 ， 适 当保 护剂 及抗 生 素 ， 破 加 经冷 冻 真空干燥 制 。该 疫 苗 白研 制 成功 以来 ， 在我 国
各 收 次 样 品 病 毒 液 用 生 理 盐 水 稀 释 １ ００ ０ ０ ０
收 混合样 品 。新 西兰 大耳 白兔 １０只 。 ０
１ 猪瘟 病毒 细胞 液 Ｒ — Ｃ ． ２ Ｔ Ｐ Ｒ检测 方
１２１主要 试剂 。 猪瘟病 毒 滴度 检测 试 剂盒 购 自北 ．． 京 赛尔 泰和 生物 医药 科技 有 限公 司 。
管 （ ｇ Ｌ， Ｍ Ｃ ２特异 性 引 物 、Ｎｐｂｆ ｒ 混 合 物 ）加 ｄ ｔ、ｕｆ 等 ｅ ， 入 ０４ｚＢ液 （ａ ．ｔ Ｌ Ｔ ｑ酶 ） 。再 加 入 １ ． 备 的 Ｒ Ａ ．３制 ２ Ｎ 作 为 Ｒ — Ｃ 反应模 板 １ ， ＴＰＲ Ｌ 混合后 ， 时离 心 。② 瞬
用ELISA对猪瘟免疫抗体效价监测的效果分析
的消毒灭菌工作 ， 严防带菌（ 毒） 操作。同时在预防工
作中要做到每一头换一个针头， 避免交叉感染。 第 四、 按剂量免疫 ， 做好加强免疫工作 ， 预 防接
种 过 程 中应 严 格 按 照 产 品说 明 书规 定 剂量 进 行 免
疫 ，并推行第二次加强免疫的措施 ， 确保达到有效 免疫率。 第五 、 是积极开展猪只抗体监测工作 。充分发
挥区（ 县）综合 防制提供科学依据。在春秋两
疫 的猪 只 实施 强 制 补免 ，确保 猪 瘟 的 有效免疫
密度 。■Ｇ Ｙ
置诱虫灯 ， 用以捕杀金龟子等中间宿主。
（ 二） 及 时 治 疗 病 猪 。流 行 地 区 的猪 应 定 期 驱
虫， 每年春秋各 １ 次， 以减少传染源 。常用药 品有 ：
① 左 旋 咪唑 ， 剂量 为 每千 克体 重 １ ５毫 克 一 ２ ０毫 克 ，
②病理变 化 。剖检 是最 可靠 的诊 断方 法 ， 在 小 肠 壁 可见 叮 附着 的成 虫及 被 虫体 造成 的炎 性 病灶。 ③实验室检查 。由于猪棘头虫卵 比重大 ， 可采 用直接涂片法或水洗沉淀法检查粪便虫卵。猪棘头
中 国 动物 保 健 ２ ０ １ ３年 （ 第 １ ５卷 ） 第 ４期 ３ ５
二、 防治 措施 （ 一） 消灭 中间宿 主 。在 猪 场 以外 的适宜 地点 设
一
、
①临床症状 。ｌ ０ 月龄以上猪受害严重 ， 病猪食
欲减退 ， 发生刨地 、 互相对 咬或匍匐爬行 ， 不断哼哼
等腹痛症状 ， 下痢 ， 粪便带血。 经ｌ ～ ２ 个月后 ， 日 益消
瘦 和 贫血 ， 生 长发育 迟 缓 ， 有 的成为僵 猪 。有 的 因肠 穿 孔 引起 腹膜 炎而 死 亡 。
三个厂家猪瘟活疫苗免疫效果比较试验
（ Ｓ） ｒｄ ｃｄ ｙ ｉｅｅｔｅｅｉ ｒ ｏ ｈｒ ｃｕｉ ｌ ３ ａｃｎｓ ｎ ｆｃ ｒ ｉｇ ｕｌ ｓ ｃｌ （Ｄ ｌ ｒ Ｃ Ｆ ｐｏｕ ｅ ｆ ｒｎ ｔｒ ａｙ ｉ ａ ｂｄ ｖ ｎ ｂ ｐ ｍａｅ ｔａｓ ｃｉｅ ｕａｔ ｅ ｕ ｎ ｌｔ ｔｕａ Ｂ ｃ ｔ ｅ ｃ ，ｖ ｍａ ｕｄｓ ｂ ｉ ｒ ｅ ｕｕ
疫 １ ，抗体合格率 高，持续 时间长，猪 瘟细胞 源活疫苗要免疫两次才能获得 比较好的效果 同时 ，我们 次
发现 高致病性猪 蓝耳 病活疫苗 （ Ａ－ 株） 对猪瘟抗体产生有一定影响 Ｊ １Ｒ Ｘ
关 键 词 ：猪瘟 疫 苗 ：免 疫 ； 抗体 ； 比较
中 图分 类号 ：￥ ５ ． ８２４ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ ０ — ５ ７ ２ １ ） ２ ０ ２ — ４ ０ ５ ８ ６ （０ ２ ０ — ０ ９ ０
ａ ｄｏ ｅｖ ｃ ｉｅｐ ｏ ｕ ｅ ｓｎ Ｗｉｅｔｓｉｕａ （ ｎ ｕｔｒ ｒ ｓｄｆｒｈ ｘ ｅｉ ｎｓｉ ｅｅ ｔｄｓ ｎ ｒ ． ｎ ｎ ａ ｃｎ ｒ ｄ ｃ ｄｕ ｉｇＳ ｎ ｔ ｌｒ Ｓ ｃ ｌ ｅｗｅｅｕ ｅ ｅｅ ｐ ｒ ｅ ｃ ｕ ｏ ｔ ｍｅ ｔ ｓｌｃｅ ｎ ｗｉｅｆ ｍｓ ａ
ｃ ｌ ｏ ｇ ａ ｅ ｉ ｅ ＣＳ ａ ｃｎ Ｓ ｓｔ ｅ ｗｈ ｌ． ｒ ｆ ｃ ｉｅ ｔ ａ ｏ ｅ ｏ ｒ ｅＢＴ ｃ ｌ ｏ ｇｈ ｔｄ １ ｅ ＣＳ ｅ１ ｒ ｉ ｔ ｄ １ Ｆ ｖ ｃ ｉ ｅ ｉ ．ｉ ｎ ｖ ．ａ ｈ ｏ ｅ ｍｏ ｅ ｅ ｅ ｔ ｈ ｎ ｔ ｓ ｆｔ ｅ ｅ １ ｒ ￣ ａｅ ｉ Ｆ ｖ ｈ ｈ ．ｉ ｖ
（ ａ ｇｏ ｇＡ ｉ ｌ ｅｌ ｕ ｅｖｓ ｎＩｓｔｔ， ｕ ｎ ｚｏ １２ ０ Ｃ ｉ ） Ｇｕｎ ｄ ｎ ｎｍａ Ｈ ａ ｈＳ ｐｒｉ ｏ ｔｕｅＧ ａｇｈ ｕ５ ０ ３ ， ｈｎ ｔ ｉ ｎｉ ａ
猪瘟免疫接种抗体效价检测试验
中国动物检疫 ２００６ 年第 ２３ 卷第 ７ 期
防检技术
－ ３６－
况良好。根据农业部规定， 免疫保护 率大于 ８０％为免疫保护合格， 检测 结 果 显 示 ， ２２４ 份 猪 血 清 有 ２０１ 份 抗体免疫效价达到 １： ３２ 以上，合格 率 ９０％， 超过农业部规定标准。这 反映了各级政府对猪瘟防制工作高 度重视， 各级动物防疫监督部门的
［１０］ Ｗｏｏｌｃｏｃｋ ＰＲ， Ｃａｒｄｏｎａ Ｃ Ｊ． Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｋｉｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ａ： ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅ ｗｉｔｈ ｐｏｕｌｔｒｙ． Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ［Ｊ］． ２００５ ４９（４）：４７７－ ４８１．
中，斜放静置 ４ ｈ 后，４℃冰箱过夜，低 孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照
速离心，取血清于塑料试管中－ ２０℃ 孔加入混合均匀的血凝抗原 ２５ μｌ。
保存，１ 周内检测。
２．３．６ 取血凝板于微量震荡器混匀
２．２ 检测用试剂和器材
后， 盖上玻板置室温下作用 ２ ｈ 判
２．２．１ 中国农业科学院兰州兽医研 定结果。
ｚｙｍｅ － Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ Ａｎｔｉｇｅｎ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ａｖｉａｎ Ｉｎ－ ｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ［Ｊ］． Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ． ２００４ ４８ （４）：８７０－ ８７８．
接种猪瘟疫苗的猪群免疫抗体
至第 ２ 孔， 混匀取 ５０ μｌ 至第 ３ 孔 效价达到 １∶３２（ 即第 ５ 孔 ） ， 为 免 疫
关于猪瘟采用不同免疫接种方式免疫抗体效价对比试验报告
１ ． ２ ． ４ ． ３ 以单道移液器滴人备检血清 ， 以多道移液
价进行 了检测 ， 结果 见表 １ 、 ２ ：
表１ 猪 瘟 疫 苗 注 射 及 抗 体 检 测试 验 结果 比对 源自３ 结 果分 析与 结论
３ ． １ 结 果分析
３ ０ ｄ 以后进 行次 二免 疫效 果最 佳 。 ３ ． １ ． ４ Ａ ２ 组２ ０ 头 猪抗 体 合 格 率 ３ ５ ％， 不论 长 、 短针 头 注 射 的疫 苗 合格 率 都 不超 过 ４ ０ ％， 主要 原 因在 于 注射 时 采用 飞 针 注射 ， 注射 部 位 和剂 量 不能 达 到基
的健康 生 猪 ） 作 为试 验对 象 。长 针 头 ３ ． ５ ｃ ｍ、 短 针头 ２ ｅ ｍ。其 中 Ａ１ 组１ ０ 头 猪 为二次 强化 免疫 。 １ ． １ ． ２ 试 验 用疫 苗 试 验 全 部 采 用 中 牧 股 份 有 限 责 任 公 司生 产 的 猪 瘟 疫 苗 。县 级 冷 藏 室 提 供 同批 次 ２ 瓶 乡 级地 下
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材料
定 时微 量振荡 器 、 封板玻 璃板 等 。
１ ． １ ． ４ 检 测用 试剂
猪 瘟 正 向 间接 血凝 试 验 诊 断试 剂 （ 批 号
２ ０ ４ ０ ０ １ ６ ） 。
１ ． ２ 方 法
１ ． ２ ． １ 试 验 时间
本试验从 ２ ０ １ ４ 年１ 月 ７日开始 ， 至２ ０ １ ４ 年２ 月 １ Ｏ 结束 ， 试验期为免疫后 １ 个月左右。 １ ． ２ ． ２ 试验设计方案
８ ４ １ ０ ０ ０ ；
库 尔勒
３ ． 和 静县 动物 卫 生监督 所 ， 新疆
和静
政府采购猪瘟疫苗免疫效果评估实验
政府采购猪瘟疫苗免疫效果评估实验作者：李莉董慧梅胜等来源：《兽医导刊》 2016年第5期李莉董慧/ 湖北省黄石市畜牧兽医局动物疫病预防控制中心梅胜刘莉/ 湖北省大冶市畜牧兽医局动物疫病预防控制中心为检测猪瘟细胞苗和猪瘟脾淋苗的免疫效果, 更好地开展猪瘟免疫工作, 我们选择猪瘟细胞苗和猪瘟脾淋苗进行免疫效果跟踪试验。
试验分为4 个组, 每组10头实验猪，每种疫苗免疫2 个组, 其中分别在哺乳仔猪21 日龄进行首免, 再到15 d、30 d、60 d 时跟踪检测免疫效果。
试验结果表明, 猪瘟细胞苗和猪瘟脾淋苗的免疫效果没有明显差异, 猪瘟细胞苗免疫30 d 后，注射1头份和3 头份的免疫效果没有明显差异；猪脾淋苗免疫30 d 后，注射1 头份免疫效果比3 头份的要好。
一、实验原因目前生猪养殖场（户）在免疫问题上普遍存在二个观点，一是认为政府采购疫苗的免疫效果不理想，二是免疫注射要加大剂量，据调查本地区猪瘟免疫剂量一般都在4 头份以上，普遍使用猪瘟细胞苗和猪瘟脾淋苗。
二、实验目的1. 监测政府采购疫苗的免疫效果。
2. 探索免疫剂量不同是否免疫效果不同。
三、实验方法1. 试验对象的选择。
选择大冶市陈贵镇上效养猪场作为试验场地，以未免疫任何疫苗的4 窝仔猪，每窝选取10 头作为试验对象。
2. 免疫疫苗的选择。
猪瘟细胞苗（2015 年省政府采购疫苗，疫苗批号：201423）、猪瘟脾淋苗（2015 年省政府采购疫苗，疫苗批号：201448）。
3. 实验分组。
（1）一组注射猪瘟细胞苗，每头猪注射1 头份猪瘟疫苗。
（2）二组注射猪瘟细胞苗，每头猪注射3 头份猪瘟疫苗。
（3）三组注射猪瘟脾淋苗，每头猪注射1 头份猪瘟疫苗。
（4）四组注射猪瘟脾淋苗，每头猪注射3 头份猪瘟疫苗。
4. 试验材料。
试剂：猪瘟病毒ELISA 抗体检测试剂盒，批号：150302 ；由武汉科前动物生物制品有限责任公司生产。
仪器：酶标仪（瑞士帝肯）、高速离心机（TGL-16B）、生化培养箱（SPX-250B-Z）、单道、多道移液器。
猪瘟疫苗免疫抗体效价初探
猪瘟疫苗免疫抗体效价初探摘要通过对裕安区养猪场、规模养殖户及散养户生猪随机抽样进行血清学检测，结果表明，大部分猪只的猪瘟抗体效价均不高，不能达到免疫保护水平。
关健词猪瘟疫苗；抗体效价；测定猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性败血性、高度接触性传染病，多通过消化道、呼吸道感染，常呈多发性出血、坏死、梗死等病理变化，以高发病率和高死亡率给养猪业带来极大危害。
本病常采用注射猪瘟疫苗进行预防。
为了了解我区猪只注射猪瘟疫苗后体内抗体水平，2006年11月，笔者对全区范围内的养猪场、规模养猪户及散养户的生猪随机采样，进行猪瘟抗体效价的测定。
1材料和方法1.1材料1.1.1实验器材。
微量反应板、移液器（配有滴头）、微量振荡器。
1.1.2试剂。
猪瘟正向血凝诊断液，标准阳性血清、标准阴性血清，稀释液，均为兰州兽医研究所生产。
1.1.3待检血清。
随机采集猪血液177份，分离血清，待检。
1.2方法1.2.1采样方法。
在全区范围内随机抽取养猪场2个（1~2号样品），养猪专业户8户（3~10号样品），散养户2户（11~12号样品），前腔静脉采血，采血部位剪毛、消毒，每猪采血2~3mL，在4℃冰箱斜放静置过夜，分离血清。
1.2.2样品猪瘟疫苗免疫情况。
见表1。
1.2.3试验方法。
采用猪瘟正向血凝实验方法检测血清抗体效价。
2结果与分析2.1检测结果猪瘟抗体效价检测结果见表2。
2.2分析2.2.1本次所测样品中，所注射疫苗共有四种类型：即猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联苗，猪瘟细胞苗，猪瘟乳兔脾淋组织苗，猪瘟成兔脾淋组织苗。
从检测结果看，猪三联苗的免疫合格率为0；猪瘟苗的最高免疫合格率为16.7%；猪瘟成兔脾淋苗的免疫合格率为90%；注射猪瘟乳兔脾淋苗后，仔猪母源抗体合格率为33.3%。
由此可见，两种脾淋苗的免疫效果好于其他疫苗。
2.2.2在本次检测中，样品猪猪瘟疫苗免疫剂量高低不一，有的注射1头份，有的注射5头份、10头份，甚至达20头份。
一种猪瘟基因工程亚单位疫苗成品效力检验方法
一种猪瘟基因工程亚单位疫苗成品效力检验方法一种猪瘟基因工程亚单位疫苗成品效力检验方法引言猪瘟，也称为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），是猪的一种常见传染病。
猪瘟疫苗是预防和控制猪瘟的重要手段之一。
传统的猪瘟疫苗制备方法主要依赖于病毒感染和繁殖，存在病毒毒力低、传染风险高等问题。
基因工程亚单位疫苗则是一种新型的疫苗制备方法，通过表达并纯化病毒表面蛋白相关抗原，实现对病毒的免疫。
目的本文旨在介绍一种猪瘟基因工程亚单位疫苗成品效力检验方法，通过该方法可以准确、快速地评估疫苗的免疫效力。
方法1.疫苗制备：利用基因工程技术将病毒表面相关抗原基因序列导入表达载体，然后在适当的宿主细胞中进行表达。
表达后，使用化学方法或亲和纯化技术获得疫苗成品。
2.动物模型建立：选取一定数量、相同种群和背景的健康猪作为实验对象。
在实验开始前，对猪进行基础检查，确保它们没有任何其他疾病。
3.疫苗接种：将疫苗根据一定剂量和接种途径注射到猪的适当部位，确保疫苗充分发挥作用。
4.抗体测定：在接种疫苗之后的一定时间内，通过采集猪体血液样品，使用ELISA或其他适当的检测方法检测猪的抗体水平。
猪体内生成的抗体水平可以反映疫苗的免疫效力。
5.病毒挑战：在接种疫苗后的一定时间内，将猪暴露于感染猪瘟病毒的环境中，观察病症表现、病程和生存率等指标。
6.数据分析：通过对疫苗接种组和对照组进行抗体水平、病程和生存率等指标的统计学分析，评估疫苗的免疫效力。
结果与讨论通过以上方法，可以准确地评估猪瘟基因工程亚单位疫苗的免疫效力。
抗体测定可以提供疫苗接种后体内抗体的水平，从而判断疫苗是否成功诱导了免疫反应。
病毒挑战实验可以模拟实际疫情，进一步验证疫苗的免疫保护能力。
通过数据分析，可以得出疫苗接种组和对照组在抗体水平、病程和生存率等方面的差异，评估疫苗的效力。
结论猪瘟基因工程亚单位疫苗是一种新型、安全、有效的疫苗制备方法。
本文介绍的成品效力检验方法可以帮助评估疫苗的免疫效力，为疫苗生产和应用提供有效的保障。
疫苗效价测定方法
疫苗效价测定方法疫苗效价测定是评估疫苗质量和有效性的重要指标之一。
通过准确测定疫苗中的有效成分，可以确定疫苗的效力。
本文将详细介绍疫苗效价测定的方法及其步骤，旨在帮助读者了解和应用这一重要的测定方法。
一、疫苗效价测定方法的基本原理疫苗效价测定是通过实验方法测定疫苗中有效免疫物质的含量，进而评估疫苗的免疫力。
一般来说，疫苗效价的测定主要分为两种方法：生物学方法和化学物理方法。
生物学方法是通过动物实验来评估疫苗效力，如活病毒疫苗的TCID50法、灭活疫苗的保护性实验法等。
化学物理方法则是通过测定特定成分的含量来评估疫苗效力，如疫苗抗原含量的酶标法、蛋白质含量的比色法等。
1. 建立实验流程：首先，需要确定实验目的和所需测定的疫苗成分，然后制定实验方案和操作流程，确保实验的可重复性和准确性。
2. 样品制备：样品制备是疫苗效价测定的关键步骤之一。
根据实验方案，选择适当的方法提取和纯化疫苗中的有效成分。
具体方法可以根据疫苗类型和测定对象的不同而有所区别。
3. 样品检测：将制备好的样品进行检测，可以选择合适的化学物理方法或生物学方法进行测定。
比如通过酶标法检测疫苗中的抗原含量，或通过保护性实验评估疫苗的免疫力。
4. 数据处理和分析：根据实验结果，进行数据处理和统计分析，计算出疫苗中有效成分的含量，并评估疫苗的效力。
在此过程中，需要根据实验设计和原理进行相应的计算和判断。
三、疫苗效价测定方法的举例说明以灭活疫苗的抗体测定为例，介绍疫苗效价测定的具体步骤：1. 实验目的：评估灭活疫苗中免疫抗体的含量，以确定疫苗的效力。
2. 实验方案：按照标准操作要求，严格控制所有实验条件，包括实验设备、试剂和动物模型的选取。
3. 样品制备：将灭活疫苗经过特定处理提取出相关免疫抗体。
方法可以采用比色法、酶标法等。
4. 样品检测：选取合适的生物学方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)，进行免疫抗体的定量测定。
5. 数据处理和分析：根据测定结果，计算出免疫抗体的含量，并进行统计分析。
猪瘟细胞疫苗和猪瘟脾淋疫苗及不同免疫剂量免疫效果的试验
免疫 副反应 观察结 果见表 １ ，本试
行＿ ｒ ｊ 符 瘟 细 胞 疫 苗 和 猪 瘟 牌 淋 疫 曲 及 采取耳根 后肌肉注射法 。Ａ组 每 头仔猪 １ ０头。出现 免疫副 反应 的 ２ ９头 猪经精 小㈦免疫 卉 ｌ Ｊ 量免疫效果 的试验 。
临Ｊ 未隐 感 染 ） ，胎 盘垂 感染 （ 什 猪 瘟 细 胞 疫 苗 ，２ ０头 份 ／瓶 ；国 内 另一 率 ＞ ／ － ４ ０ ％为抗体阳性 ，抗 体阻断率 低 ＿ ｊ ： 先 火性感 染 ） 、妊娠 母猪带 毒感 染 （ 母 生物 制 品 有 限公 司生产 的 猪瘟 脾 淋疫 ４ ０ ％ 为 阴性 １ ９ １ 。 猪 繁 障 ）及新 生 仔 猪 的免 疫而 寸 受 苗 ，２ ０头 份 ／瓶 。以 上 两 种疫 苗 均 配 １ ． ６ 免疫副反应观察 等 Ｉ Ｉ ｏ这 带 毒 猪的存 任 ，成 为猪瘟 有专用稀释液。 发， 的 嘤原 因 ，尤 其是 、 Ｉ 临 床 感染 １ ． ３ 检 测试 剂 的ｊ ＿ ｛ ＝ ｝ ，常 方法 很难 确 诊 ，从 而给 防
育种 地 猪 瘟 的 免 疫 程 序 提 供 依 据 ， 我ｆ 『 ］ ｊ ２ ０ ｌ ５年 在本 中心 育种 基地 ，进
１ ． ４ 免疫方法
高 、呕 吐和腹泻 等。其 中 Ａ 组 ４灭 ，Ｂ
组 均 日龄达 ３ ０ ｄ时 进 行 免疫 ，均 组 １ ５头 ， Ｃ组 未 见 免 疫 副 反 应 ，Ｄ 组 注射 猪瘟 细胞苗 ２ 头 份、Ｂ组每头 仔猪 心 护理 均 在 ９ ６ｈ内 自愈。说 明不 论细 注射 猪瘟 细胞苗 ４头 份 ； Ｃ组每头 仔注 胞 苗还 是 脾 淋 苗 加 大 免疫 剂 量 均 会 增 大 射猪瘟脾 淋苗 １ 头份 、Ｄ组每 头仔猪注 出现 免 疫 副 反 应 的 风 险 。
对猪瘟细胞活疫苗效价测腚
对猪瘟细胞活疫苗效价测腚
王琼秋;孙武芳;李琼英;刘永成;肖福庭;张镜云
【期刊名称】《云南畜牧兽医》
【年(卷),期】2008(000)003
【摘要】@@ 猪瘟细胞活疫苗中猪瘟病毒的活力及效价对环境条件十分敏感.由于交通运输不便,在无疫苗冷藏运输车的情况下,运用冷藏箱冰块保温运送疫苗,对疫苗质量心中无底,为此特作了不同温度和冰块保存运输情况下,对猪瘟细胞活疫苗效价的测定,为今后疫苗安全有效运输提供科学依据.
【总页数】1页(P9-9)
【作者】王琼秋;孙武芳;李琼英;刘永成;肖福庭;张镜云
【作者单位】红河州动物防疫监督所,云南,蒙自,661100;金平县畜牧局,云南,金平,661500;红河州动物防疫监督所,云南,蒙自,661100;弥勒县动物防疫监督所,云南,弥勒,662300;蒙自县农广校,云南,蒙自,661100;蒙自县农广校,云南,蒙自,661100【正文语种】中文
【中图分类】S858.282.65
【相关文献】
1.猪瘟活疫苗(传代细胞源)猪瘟病的克星 [J], 范艺凡;霍英
2.猪瘟活疫苗(传代细胞源)对我国不同猪瘟病毒流行毒株的免疫保护研究 [J], 王琴;范学政;徐璐;赵启祖;张乾义;邹兴启;朱元源;杨劲松;宁宜宝
3.高效价猪瘟活疫苗的田间试验 [J], 张立昌;虞德屏;刘泽军;王冰飞;张成军;王荣;白朝勇
4.高效价猪瘟活疫苗的田间试验 [J], 张立昌;杨汉春
5.猪睾丸(ST)细胞系作为猪瘟活疫苗生产用细胞基质的研究 [J], 任向阳;吴文福;岑小清;刘秋燕;游启有;赖月辉
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用ELISA对猪瘟免疫抗体效价监测的效果分析____
疫病防制为切实了解、掌握遂宁市安居区农村生猪散养户猪瘟免疫效果，给以后免疫预防提供科学依据，使猪瘟等动物重大疾病得到更好控制，遂宁市安居区动物预防控制中心于2013年2月在5个乡镇的农村生猪散养户中随机抽取了176份猪血清，用酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测免疫抗体，并对有关情况进行了进一步的分析。
结果表明，随机抽取的176份猪血清的猪瘟免疫抗体合格率为71.02%，但部分散养户猪瘟免疫结果不够理想，还需进一步加大力度，采取切实有效措施，提高猪只的有效免疫率，确保养猪业健康发展。
1材料与方法1.1血清样品从5个乡镇的农村生猪散养户中随机抽取了176份猪血清，其中玉丰镇41份，拦江镇38份，分水镇35份，聚贤乡30份，马家乡32份。
1.2诊断试剂与方法猪瘟抗体监测ELISA 试剂：购自深圳市绿诗源生物技术有限公司，诊断试剂在有效期内使用；试验严格按照诊断试剂说明书的要求进行操作。
1.3试验原理利用猪瘟抗原包被ELISA 板，然后加入适当稀释的待检猪血清与之反应形成CSFV-IgG 结合，再通过辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG 二抗来检测与包被抗原结合的猪瘟特异抗体，最后加入颜色反应系统显色，显色的深浅与CSFV-IgG 的量成正比，通过酶标仪对待检血清的OD450值测定，当显色超过设定的临界值时结果判为阳性，反之则为阴性。
1.4判定标准本试剂盒的临界值为0.4，在酶标仪上测各孔的OD 值。
试验成立的条件是阳性对照孔的平均OD 值≥0.7，阴性对照孔的平均OD 值必须＜0.1；样品OD 值≥0.4时判为阳性；样品OD 值＜0.35时判为阴性；0.35到0.4之间为可疑。
2结果与分析结果表明：被检测的176份血清中OD 值高于或等于0.4的有125份血清，比例为71.02%；OD 值介于0.35到0.4之间的为9份血清，比例为5.11%；OD 值小于0.35有42份血清，比例为23.86%。
在检测的176份血清样品中，玉丰镇、拦江镇、用ELISA 对猪瘟免疫抗体效价监测的效果分析尹杰1，李洁萍2（1.四川省遂宁市安居区畜牧食品局四川遂宁629000；2.四川省遂宁市船山区畜牧食品局四川遂宁629000）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2013.04.013B 0.3210.2130.3550.3140.6390.7450.5550.6350.2130.2630.2440.463C 0.5530.6930.4830.560.6720.8990.7630.4630.7770.2110.3220.631D 0.4440.1550.5430.5320.6210.3610.7560.7230.6320.6120.5440.455E 0.4960.5830.3740.4630.5130.5660.7520.3860.4630.5360.2270.156F 0.4360.5630.6330.2660.7530.8230.4660.4750.2990.4960.5260.188镇；D6~D12、E1~E12、F1~F12、G1~G7血清采至拦江镇；G8~G12、H1~H7血清采至分水镇）。
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1 mL
+ + ( 2 /2)
1 mL
+ + ( 1 /2) 、+ ( 1 /2)
合格
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+ + ( 2 /2)
合格
1 mL
无反应
保存条件不是 很好的情 况下, 疫 苗的有 效期 实际 有多长, 还 需作进一步验 证。
1 3 双抗青 霉素钠 石家 庄制药 集团有 限公司 生产, 批号 2 2 2 轻热反应 ( ﹢ ) 潜伏期 48~ 96 h, 体温上升呈明显
020203, 规格每瓶 80万 IU, 有效期 200401; 硫酸链霉素, 华北 曲线, 至少有 2个温差超过常温 0 5 , 并稽留 12~ 36 h。
此特作了不同温度和冰块保存 运输情况下, 对猪瘟 细胞活疫 1 000 IU, 置冰箱 内感作 40 m in, 试验各批号的每一 梯度药液
苗效价的测定, 为今后疫苗安全有效运输提供科学依据。
接种家兔 2只, 每只兔耳静脉 注射 1 mL; 另取 本站保 存的同
1 试验材料
一 批号 疫苗 和 生理 盐水 作 对照 组, 每 个对 照 组注 射家 兔 2
制药 股份 有 限公 司 生产, 规 格每 瓶 1 g, 批 号 010503, 有 效 2 2 3 可疑反应 ( ) 潜伏期 48~ 96 h, 体温 曲线 起伏不
期 20040430。
定, 稽留不到 12 h或潜 伏期在 24 h以上, 不 足 宏兔业有限公司, 选择体重为 2 ~ 至 120 h出现热反应。
2 5 kg健康白兔, 连续观察和测温 3 d, 无异常 者用于试验。 2 2 4 无反应 ( - ) 体温正常。
2 试验方法及判定标准
2 3 疫苗合格 注射 后, 当 2只 家 兔均 呈定 型 热反 应 (﹢
按云南省生物制药厂监察 室提供的 猪瘟细胞 活疫苗效 ﹢ )或 1只家兔呈 (﹢﹢ )、另 1只呈 (﹢ )时。
中受环境条件的 影响, 保温 用的 冰块刚 化完 的情况 下, 运送
的疫苗作兔体 试验, 仍达 到 750分 之一头 份的 效价 标准, 但 疫苗经反复冻融 其保 存有 效期必 然受 到影响。 尤其在 基层
1 mL
+ + ( 1 /2) 、+ ( 1 /2)
合格
1 mL
+ + ( 1 /2) 、+ ( 1 /2)
1 1 疫苗 猪 瘟活细胞疫苗, 云南 省生物制 药厂生产, 批号 只, 每只 1 mL, 接种 家兔 48 h内, 每 天 上、下午 各 测体 温 1
20010607、20010219、20011126, 规 格 均为 每瓶 60 头 份, 有效 次, 48 h后, 每 6 h测体温 1次, 连续 120 h。
[ 8] N iestra th M, T akla M, Joach im A, et a.l The ro le of Isospo ra su is as a pathogen in conventional p ig let produc-
tion in G erm any [ J]. Journa l o f V eterina ry M ed icine Se-
( 1 红河州动物防疫监督所, 云南 蒙自 661100; 2 金平县畜牧局, 云南 金平 661500; 3 弥勒县动物防疫监督所, 云南 弥勒 662300; 4 蒙自县农 广校, 云南 蒙自 661100)
中图分类号: S858 282 65+ 1 文献标识码: B 文章编号: 1005- 1341( 2008) 03- 0009- 01
猪瘟细胞活疫 苗中 猪瘟病 毒的 活力及 效价 对环境 条件 2 1 试 验方法 按 标签注 明每 瓶 60 头份用 生理 盐水 以无
十分敏感。由于交通运输不便, 在无疫 苗冷藏运输 车的情况 菌方法将各批 疫苗 每头 份各 稀释 为 750、375 和 180倍 三个
下, 运用冷藏箱冰块保温运送疫苗, 对疫苗质 量心中无 底, 为 梯度, 各 个 梯 度 药 液 中, 1 mL 均 含 青 霉 素 和 链 霉 素 各
期 18个月。
2 2 家 兔接种疫苗后, 体温反应标准。
1 2 疫苗稀释 液 生理盐水, 云南 省生物制 药厂生产, 批号 2 2 1 定型热反应 (﹢﹢ ) 潜伏期 48~ 96 h, 体温上升呈明显
200209, 规格为每瓶 100 mL, 有效期 200403。
曲线, 至少有 3个温差超过常温 1 以上, 并稽留 18~ 36 h。
对照一 20011126 本站冰柜保存
750
对照二 生理盐水
4 小结与讨论 猪 瘟细胞 活疫苗 中猪瘟 病毒的活 力及效 价对环 境条件
十分敏 感, 按 猪 瘟 防 制 规 程 , 疫 苗 有 效 期 是 指 保 存 在
- 15 温度下的有效期, 在保存或运输过 程中如达 不到此温 度, 疫苗有效期势必受到影响。本试验 虽然证明在 运输过程
云南畜牧兽医 ( 2008年第 3期 )
9
[ 7] Ernst J V, L indsay D S, CurrentW L. Contro l o f Isospo ra suis induced cocc idiosis on a svine farm [ J]. Am J V et R es, 1985, 46: 643- 645.
力检验方法和判定标 准 进行。
3 疫苗效价测定结果 详见表 1。
表 1 猪瘟疫苗效价测定结果
组别 疫苗批号 运输冰块情况 疫苗 稀释倍数 接种量
体温反应标准
判定结果
试验一 20010607
路途 3~ 6 h
188
冰块未化完
375
750
试验二 20010619
路途 3~ 6 h
188
冰块未化完
375
750
ries B, 2002, 49: 4176- 4180. [ 9] 蔡建 平, 谢 明 权, 覃 宗华. 猪球 虫 与 球虫 病 研 究 进展
[ J] . 广东畜牧兽医科技, 2001, 26( 4): 3- 7. 收稿日期: 2007- 07- 09
对猪瘟细胞活疫苗效价测定
王琼秋 1, 孙武芳2, 李琼英 1, 刘永成 3, 肖福庭4, 张镜云 4
疫 苗的贮 存和运 输中的 条件是 确保疫苗 安全有 效的重
要因素, 利用疫苗保 温箱加 冰块 保温, 虽能 起到 一定 保温作
用, 但不能达到疫苗 保存所 规定 温度, 必需 进一 步完 善兽医
冷链系统, 使用疫苗 冷藏车 运输, 确 保疫苗 质量 和防 疫注射
效果。
收稿日期: 2007- 08- 27