猪MiR-148a对肝脏发育调控的初步研究
ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析
收 稿 日 期 ：2015-11-19
基金项目：广 西 壮 族 自 治 区 研 究 生 教 育 创 新 计 划 项 目 国 （YCBZ2014013）； 家 自 然 科 学 基 金 广 （31560632）； 西 自 然 科 学 基 金 项 目
广 （2014GXNSFAA118084）； 西水牛遗传繁育重点实验室开放课题项目（SNKF-2014-03）
畜牧兽医学报 2016，47（10）：1969-1976
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi：10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.004
启动子 ssc-miR-148a 克隆及其特征分析
王 萍1，郝文艳1，曹丽华1，沈开元1，代小丽1，李海艳1，梁贤威2，石德顺1* ，李湘萍1*
Abstract：Inordertounderstandthetranscriptionalregulatory mechanism ofssc-miR-148a，we haveclonedandanalyzeditspromoter.Firstly，wedesignedspecificPCRprimerstoamplify3upstreamfragmentsofssc-miR-148aprecursors，theninsertedthemintopGL3-Basicexpressionvector.Basedontheamplifiedfragments，ssc-miR-148apromoterregion，methylationsitesandtranscriptionfactorbindingsiteswerepredictedbybioinformatics.Theplasmid wastransfectedinto 293Tcellstoanalyzethepromoteractivity.Expressionofssc-miR-148aand DNA methylation transferase1 （DNMT1）intreatedporcinefibroblastsbyBasicFibroblastGrowthFactor（bFGF） withdifferentconcentrationswasdetected.Theresultsshowedthatthecloned2043bpsequence hadpromoteractivity，whichhad5 CpGsandtranscriptionalfactorbindingsites，suchasSp1， AP2.Aftertreatedporcinefibroblastswith0，5and10ng·mL—1 bFGF，theexpressionofsscmiR-148awasdecreasedsignificantly（P ＜0.05），DNMT1 mRNAlevelincrea ssc-miR-148a 动子区 片 2043bp 段具有启动子活性，该序列存在5个 CpG 岛、Sp1及
广西巴马小型猪miR-148b慢病毒制备及靶基因通路预测分析
广西巴马小型猪miR-148b慢病毒制备及靶基因通路预测分析作者：张名媛郭晓萍孙晴超司景磊兰干球郭亚芬蒋钦杨来源：《南方农业学报》2019年第07期摘要：【目的】构建广西巴马小型猪miR-148b慢病毒表达载体并对其靶基因进行预测及相关通路分析，为揭示miR-148b的作用机制打下基础。
【方法】以广西巴马小型猪血液基因组DNA为模板，扩增miR-148b的前体及部分侧翼序列，使用T4连接酶将目的片段连接至pLV-CMV-MCS-EF1载体上，构建获得pLV-miR-148b慢病毒表达载体;以pLV-miR-148b慢病毒表达载体转染293T细胞48 h后进行表达验证;利用miRDB、miRWalk 2.0和TargetScan 7.2三大数据库预测分析广西巴马小型猪miR-148b的靶基因，并以MirPath v.3分析miR-148b靶基因相关通路。
【结果】广西巴马小型猪miR-148b片段大小为385 bp，与miRBase 21.0网站上已发布猪miR-148b成熟序列（前体和侧翼序列）的同源性达100%。
构建获得的pLV-miR-148b慢病毒表达载体能在293T细胞中成功表达，且相对表达量极显著高于pLV-GFP慢病毒空载质粒转染组（P<0.01）。
数据库预测分析得到18个广西巴马小型猪miR-148b的靶基因，分别为CLOCK（时间昼夜调控因子）、MIER1（转录调控因子）、MECP2（甲基化CpG结合蛋白）、ZNF704（锌指蛋白）、SPTY2D1（SPT2染色质蛋白）、QKI（RNA结合蛋白）、ZBTB20（锌指蛋白）、MGAT4A（钠/磷酸转运蛋白）、UHMK1（编码蛋白激酶）、PIK3C2A（磷酸肌醇-3-激酶2α肽）、C6orf62（6号染色体开放阅读框62抗体）、HECW2（E3泛素蛋白连接酶）、MAP1B（微管相关蛋白）、NHS（NHS肌动蛋白调节因子）、B4GALT6（β-1，4-半乳糖基转移酶）、ATP2A2（肌浆ATP酶/内质网Ca2+转运酶）、AP4E1（蛋白复合物接头分子）和BBX（锌指蛋白）;且发现有11条靶基因相关通路，其中与疾病相关的通路有脂肪酸合成通路、细胞外基质受体相互作用通路、癌症的蛋白聚糖通路、神经胶质瘤通路、癌症的小分子核糖核酸通路、肾细胞癌通路、N-聚糖生物合成通路和致心律失常性右室心肌病通路。
MiR-148a对乳腺癌生物学行为的影响及机制研究
MiR-148a对乳腺癌生物学行为的影响及机制研究MicroRNAs(miRNAs)作为一种非编码RNA,通过靶向调节肿瘤相关基因的表达参与肿瘤的发生和发展。
新近的研究发现miR-148a在多种肿瘤中表达水平很低,并且被证实具有抑制肿瘤的功能,但是其在乳腺癌癌变过程中的确切作用,尚不完全明确。
本研究从离体实验和在体实验两个方面对miR-148a在乳腺癌中的功能进行了探索,发现乳腺癌中低表达的miR-148a能有效抑制乳腺癌细胞的增殖和耐药能力。
随后通过miRNAs生物信息学软件分析预测发现抗凋亡基因BCL-2(B cell lymphoma/leukemia-2)可能是miR-148a作用的直接下游靶点,并通过双荧光素酶报告基因实验进行了证实。
BCL-2是一个非常著名的癌基因,其主要通过抑制细胞凋亡促进肿瘤发生,并且目前研究已经证实BCL-2的过表达能显著抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进乳腺癌细胞的生长和体内成瘤。
最后我们在转染了 BCL-2过表达质粒的乳腺癌细胞中共同转染miR-148a,发现原本受到抑制的凋亡有所恢复,所对应的细胞增殖能力也受到了削弱。
因此,我们的研究发现miR-148a通过靶向癌基因BCL-2来调控乳腺癌细胞的凋亡水平和增殖能力,在乳腺癌进展中发挥了负性抑制作用,这些数据强烈地提示miR-148a有可能成为乳腺癌治疗的又一个新的靶点。
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miR-148a 通过靶向调节己糖激酶2 基因抑制乳腺癌细胞糖酵解和细胞增殖能力
１４８ａ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｂｊｅｃｔｓ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉＲ￣１４８ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅꎬ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
Ｔａｎｇｓｈａｎ ０６３２１０ꎬ Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｉｎ ｏｒｄｅｒ Nhomakorabeaｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｉＲ￣１４８ａ ａｎｄ ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ ２ ( ＨＫ２) ｇｅｎｅ ｏｎ ｇｌｙｃｏｌｙｔｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ
ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓꎬ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ( ｑＲＴ￣ＰＣＲ) ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ
从中筛选 ｍｉＲ￣１４８ａ 表达量相对较低的乳腺癌细胞系作为研究对象ꎮ 再通过观察 ｍｉＲ￣１４８ａ 表达量的变化对乳腺癌细胞
葡萄糖摄取量、乳酸生成量和细胞增殖指标的影响ꎬ以探究 ｍｉＲ￣１４８ａ 对乳腺癌细胞糖代谢能力的影响ꎮ 随后ꎬ通过
ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ 在线数据库预测 ｍｉＲ￣１４８ａ 和 ＨＫ２ 基因的靶向关系ꎬ再通过双荧光素酶报告实验、Ｗｅｓｔｅｒｎ 免疫印迹以及基因
ｄａｔａｂａｓｅ ｏｆ ＴａｒｇｅｔＳｃａｎꎬ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ
miRNA-148a在上皮间质转化及肝癌转移中的作用及意义的开题报告
miRNA-148a在上皮间质转化及肝癌转移中的作用
及意义的开题报告
研究背景：
肝癌是一种常见且具有高度侵袭性和转移率的恶性肿瘤。
其中，上
皮间质转化（EMT）是一种关键的过程，它使肝癌细胞从上皮细胞向间充质细胞转变，从而促进其转移和侵袭。
miRNA-148a作为一种miRNA可
以参与肝癌的发生发展，但对miRNA-148a在肝癌中参与EMT和转移的
作用和意义的研究尚不充分。
研究目的：
本研究旨在探究miRNA-148a在肝癌中参与EMT和转移的作用及意义，为肝癌的诊断和治疗提供新的靶点。
研究方法：
1.通过实时定量PCR检测miRNA-148a的表达水平；
2.利用分子生物学实验（Western blot, Transwell, Wound healing等）检测miRNA-148a的作用；
3.通过临床病理分析相关样本的miRNA-148a表达及其与EMT和转
移的关系。
研究预期结果：
1.明确miRNA-148a在肝癌中的表达及其与肝癌恶性程度的关系；
2.探究miRNA-148a通过参与EMT调节肝癌细胞转移的分子机制；
3.筛选miRNA-148a干预肝癌EMT及转移的潜在靶点。
miR-148a促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞的分化
Mao Qing, MD, Associate chief physician, Department of Cardiology, The Second Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530007, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
毛庆，男，1977 年生，江 苏省盐城市人，汉族，2011 年南京大学毕业，博士， 副主任医师，主要从事冠 心病介入诊断和治疗。
文献标识码:B 投稿日期：2019-06-11 送审日期：2019-06-14 采用日期：2019-08-01 在线日期：2019-12-05
文题释义： 人诱导性多能干细胞来源的心肌样细胞：在体外直接将人诱导性多能干细胞定向诱导分化为心肌样细胞具有 供者个体基因的特异性，不仅可以进行发病机制的深入研究，还可以进行个体化药物治疗测试，为精准个性 化治疗带来希望。来自于患者自身体细胞的心肌细胞扩增速度快，没有免疫排斥和伦理问题，但目前的主要 问题是来自于人诱导性多能干细胞的心肌样细胞成熟程度不佳，分化的细胞不具备成人心肌细胞的电生理活 动，且纯化有一定困难。 微小 RNA 的调节作用：微小 RNA 是一类内源性的非编码单链 RNA，通常含有 19-22 个核苷酸，可通过靶向 结合 mRNA来，基于芯片分析技术发现有多 个 miRNA 在心肌分化发育或干细胞向心肌样细胞定向分化过程中发挥调控作用，有正向调控也有负向调控。
观察指标：
(1)CCK-8 检测细胞增殖活力； (2)qRT-PCR 检 测 miR-148a
mRNA 的表达； (3)免疫荧光染色检测 MHC 和
cTnT 的表达； (4)Western blot 检测 MHC 和
miR-146a在肝脏疾病中的作用
•综述. miR-146a在肝脏疾病中的作用周丽云李校天李丽杨俊超郭永泽尹燕【摘要】微RN A(miRNA)最早于1993年在秀丽线虫杆菌中被发现，是一类大小为18〜25 nt的单链非编码R N A，广泛存在于真核生物及单核生物的细胞核内。
随着研究的不断深入，发现m iRN A对多种生物学过程有重要的调控作用，如细胞的有丝分裂、分化、增殖、凋亡，个体的生长发育等，其控制着体内约1/3蛋白基因的表达。
miR-146a是m iR N A家族的一员，近年来细胞及分子生物学研究发现其与肝脏疾病的发生发展有关。
该文就miR-146a在肝脏疾病发生发展中的作用作一综述，以期提供潜在的诊断和治疗靶点，并为肝脏疾病研究提供思路。
【关键词】miR-146a;肝脏；治疗靶点DOI:10.3969/j.issn. 1673-534X.2017. 04. 001微RN A(miRNA)是由D N A转录产生的，但并 不直接翻译蛋白，而是通过调控其他蛋白质编码基 因来影响蛋白质的翻译及表达。
m iRN A作用于靶 m RN A导致其降解或抑制其翻译，一种m iRN A可 调控多种m R N A的表达，而一种m R N A可受多种 m iR N A的调控。
m iR N A的初始转录产物(pn-miRNA)是含有至少一个发夹样结构miRNA 前体的长R N A转录本。
在细胞核内pri-m iRN A被 核酸酶Drosha加工成m iRN A前体1，随后被输出 蛋白5 (exportin-5 )转运出细胞核2。
成熟的m iRN A被细胞质中的核糖核酸酶m(RNaSem)和 Dicer酶从m iRN A发夹样前体结构剪切出来发挥 调控功能。
2007年D ai等3首次在系统性红斑狼 疮患者体内发现了 m iRN A表达具有差异性，随着 研究的不断深入，发现在不同物种、组织以及疾病 中，m iR N A的表达均有不同。
miR-146是miRNA 家族的一员，包括两个进化保守的基因miR-146a 和miR-146b，其成熟序列仅在3'末端有2个单位的 核苷酸不同。
紫花牡荆素通过miR-148a-3p／Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭
网络出版时间：２０２３－０５－０９１４：５４：２２ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０５０８．１４２９．０２２．ｈｔｍｌ紫花牡荆素通过ｍｉＲ １４８ａ ３ｐ／Ｗｎｔ１信号通路抑制肝癌ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞的迁移和侵袭娄 磊，王靓厚，王 智，李 翔（湖南师范大学医学院基础医学系，湖南长沙 ４１００１３）收稿日期：２０２２－１１－１８，修回日期：２０２３－０２－１０基金项目：湖南省自然科学基金面上项目（Ｎｏ２０２１ＪＪ３０４６２）作者简介：娄 磊（１９９８－），男，硕士生，研究方向：肿瘤细胞特性及抗肿瘤药物作用机制，Ｅ ｍａｉｌ：１９８５０２５４９５＠ｑｑ．ｃｏｍ；李 翔（１９７７－），男，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：肿瘤药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｘ５８６１６＠１６３．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０５０６３文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０５－０８６８－０８中国图书分类号：Ｒ２８２ ７１；Ｒ３９４ ２；Ｒ７３ ３７；Ｒ７３５ ７摘要：目的 用紫花牡荆素（ｃａｓｔｉｃｉｎ，ＣＡＳ）处理ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞，观察其迁移和侵袭能力的变化，并初步探讨ＣＡＳ的分子作用机制。
方法 ＣＣＫ ８试剂盒检测不同浓度ＣＡＳ对ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞活力的影响；分组开展细胞迁移和侵袭实验，评估ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞的迁移和侵袭能力；逆转录荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ ｑＰＣＲ）检测ＣＡＳ处理后，ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞的ｍｉＲ １４８ａ ３ｐ和Ｗｎｔ１ｍＲＮＡ表达变化；迁移侵袭相关蛋白（ＭＭＰ２、ＭＭＰ９）和Ｗｎｔ１蛋白表达量采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测；Ｄｕａｌ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ报告基因检测ｍｉＲ １４８ａ ３ｐ与Ｗｎｔ１３′ ＵＴＲ的结合情况。
结果 ＣＡＳ明显抑制ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞的生存活力，其对这种细胞的ＩＣ５０约为１０ ０μｍｏｌ·Ｌ－１，亚细胞毒浓度的ＣＡＳ（３ ０μｍｏｌ·Ｌ－１）可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力；ｍｉＲ １４８ａ ３ｐｍｉｍｉｃ或ＣＡＳ均能抑制ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞迁移和侵袭能力，且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用；过表达Ｗｎｔ１能有效减弱ＣＡＳ的抑制作用；ＣＡＳ能明显上调ＭＨＣＣ９７Ｈ细胞ｍｉＲ １４８ａ ３ｐ表达，同时Ｗｎｔ１、ＭＭＰ２和ＭＭＰ９的表达呈现下降；Ｄｕａｌ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ报告基因发现，ｍｉＲ １４８ａ ３ｐ可以直接靶向Ｗｎｔ１３′ ＵＴＲ。
急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p和miR-551b-3p的表达水平及其临床价值
中华胰腺病杂志 2021 年 4 月第 21 卷第 2 期Chin J Pam.reatol，April 2021, Vol. 21，No. 2•99 ••论著.急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值许海梅李永超刘海珊廖雪霞张裕照海南儋州市人民医院消化内科，儋州 571179通信作者：许海梅，Email:xuhaimeil9860220@ 163. com【摘要】目的探讨AP患者血清miR-148a-3p和miK-551b-5p的表达水平及其临床价值。
方法选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组（70例）、MSAP组(40例）和SAP组(42例），SAP组又根据患者预后情况分成生存组（25例）和死亡组（17例）。
另选取50例体检健康者作为对照组。
于患者发病当天采集空腹静脉血,采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和nliR-551b-5p表达水平。
绘制受试者工作特征曲线（ROC)，计算曲线下面积（AUC),分析血清m iR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。
采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。
结果AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组（3.18 ± 1.27比0.96±0.28,1.94±0.85比0.51±0.12，/5值均<0.001)。
5人？组血清[11;11-1483-3卩及1^11-55丨1)-5?表达水平均明显高于 M SA P组、M AP组（4.36 ± 1.70 比2.84 ± 1.10、2.50 ± 0.92,2.80 ± 1.04 比1.68 ± 0.53、1.42 ± 0.45，P值均<0. 001)。
利用miRNA芯片筛选不同月龄香猪肝脏中差异表达的miRNA
摘!要为研究 :$;45 在香猪发育时期的调控功能!试验对*和/月龄香猪 肝 脏 组 织 中 存 在 表 达 差 异 的 :$;45 进行了筛选'提取*和/月龄香猪肝脏组织总 ;45!通过与 :$;45 芯 片 杂 交!经 统 计 学 分 析!以 变 化 倍 数p;2#为阈值!筛选*和/月龄香猪肝脏中表达丰度差异的 :$;45!并运用 实 时 荧 光 定 量 <=; 进 行 验 证' 结 果发现!与*月龄相比!/月龄香猪肝脏中有%%条 :$;45 表 达 下 调 和 B 条 :$;45 表 达 上 调!下 调 倍 数 最 多 的 是 :$;!0/@!上调倍数最多的是 :$;!%22'对选取的)条差异表达的 :$;45 进行实时荧光定量 <=; 反应!结果显示! )条 :$;45 表达变化趋势与芯片结果一致'本研究结果 表 明!不 同 月 龄 香 猪 肝 脏 中 的 :$;45 表 达 丰 度 有 差 异! 其中一些可能参与了机体生长发育时期肝细胞的脂肪代谢过程' 关键词:$;45 表达谱&香猪&肝脏 中图分类号>?0?!!!!文献标识码5 !!!!文章编号%(/%!/0*("0&%/#&*!&(/*!&(
;=TTT6TTT==TT=5=56T66=T55
:$;!%00 =6=6TTT55==6565TTT5==5=555=5== O==6=6TTT55==6565TTT5==
;=5T66=5T6656T6T65=55T6
:$;!0&0 56==T6T5T=66555TT6=TTTTT===5T=6 O6656==T6T5T=66555TT6=T
miR-148用于制备控制胰岛β细胞的增殖的药物[发明专利]
![miR-148用于制备控制胰岛β细胞的增殖的药物[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ae1e7781f5335a8103d2201d.png)
专利名称：miR-148用于制备控制胰岛β细胞的增殖的药物专利类型：发明专利
发明人：宁光,山爱景,曹亚南,姜秀丽,顾卫琼
申请号：CN201310303423.6
申请日：20130717
公开号：CN103417987A
公开日：
20131204
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物和医药领域，公开了miR-148在胰岛β细胞增殖和凋亡中的作用，为糖尿病治疗和制备或筛选治疗2型糖尿病的药物提供了新的靶点，可将miR-148应用于制备或筛选控制胰岛β细胞的增殖的药物、制备或筛选控制胰岛β细胞的凋亡的药物，或者用于制备或筛选治疗2型糖尿病的药物。
申请人：上海交通大学医学院附属瑞金医院
地址：200025 上海市卢湾区瑞金二路197号
国籍：CN
代理机构：上海伯瑞杰知识产权代理有限公司
代理人：吴瑾瑜
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miR-148a／b真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达
miR-148a／b真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达肖卫东;刘智文;文武;王福飞;廖国良;李勇【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】目的：构建miR-148a/b真核表达质粒，转染胰腺癌AsPC-1细胞，并观察其miR-148a/b的表达水平。
方法根据miRBase提供的序列合成miR-148a/b前体，PCR扩增后形成双链，插入线性化真核表达质粒pcDNA3．1，构建pcDNA3．1/miR-148a/b，进行酶切和测序鉴定。
将胰腺癌 AsPC-1细胞分4组进行质粒转染：转染 pcDNA3．1/miR-148a（miR-148a组）、转染pcDNA3．1/miR-148b（miR-148b组）、转染 pcDNA3．1（空质粒对照组）和仅加脂质体（空白对照组）。
转染48 h后，采用定量 PCR法检测各组细胞中miR-148a/b 的表达量。
结果 pcDNA3．1/miR-148a/b的酶切和测序与miRBase提供的序列完全一致。
转染48 h后，miR-148a组 AsPC-1细胞中的miR-148a表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（6．76±0．35比1．00±0．54、1．02±0．40，均P＜0．05），miR-148b 组AsPC-1细胞中的miR-148b表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（3．28±0．08比1．02±0．35、1．01±0．28，均P＜0．05）。
结论成功构建了 miR-148a/b 真核表达质粒 pcDNA3．1/miR-148a/b，该质粒能显著上调胰腺癌 AsPC-1细胞的miR-148a/b表达水平。
%Objective To construct miR-148a/b eukaryotic expression vector,and to explore its expression in pancreatic cancer AsPC-1 cells.Methods The pri-miR-148a/b was synthesized ac-cording to themiRBase and double-stranded oligonucleotides were generated by PCR.The miR-148a/b were cloned into pcDNA3.1 vector and identified by enzyme digestion and sequence analy-sis.AsPC-1 cells were divided into four groups:pcDNA3.1/miR-148a transfection group(miR-148a group),pcDNA3.1/miR-148b transfection group(miR-148bgroup),pcDNA3.1 transfection group(empty vector controlgroup),lipofectamine transfection group(blank control group).The expression of miR-148a/b was detected by real-time quantitative PCR at 48 hours after transfec-tion.Results The pcDNA3.1/miR-148a/b identified by enzyme digestion and sequence analysis was completely consistent with the sequence from miRBase database.After of transfection 48 hours,the AsPC-1 cells expression of miR-148a in miR-148agroup(6.76±0.35)was significantly higher than that in empty vector control group(1.00±0.54)and blank control group(1.02± 0.40)(P<0.05).In addition,the expression of miR-148b in miR-148b group(3.28±0.08)was significantly higher than in empty vector control group(1.02±0.35)and blank control group(1. 01±0.28)(P<0.05).Conclusion The miR-148a/b eukaryotic expression vector has been suc-cessfully constructed.The pcDNA3.1/miR-148a/b can significantly increase the expression of miR-148a/b in pancreatic cancer AsPC-1 cells.【总页数】3页(P7-9)【作者】肖卫东;刘智文;文武;王福飞;廖国良;李勇【作者单位】南昌大学第一附属医院普通外科;江西省儿童医院新生儿外科，南昌330006;南昌大学第一附属医院普通外科;南昌大学第一附属医院普通外科;南昌大学第一附属医院普通外科;南昌大学第一附属医院普通外科【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.pCDNA3.1/NY-ESO-1真核表达质粒的构建及在肝癌细胞系HepG2中稳定高表达 [J], 徐珩;杨硕;顾娜;冯丹丹;闾军;汪思应2.靶向人GSK-3β基因的shRNA真核表达质粒的构建及其在人胰腺癌细胞株PANC-1中的稳定表达 [J], 汪理;勾善淼;周伟;王统林;刘涛;王春友3.重组GSTP1真核表达质粒的构建及稳定转染NCI-H520细胞系的建立 [J], 曾谷清;许艳;易红;李萃;李茂玉;张鹏飞;李国庆;肖志强4.Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染H9c2细胞系的构建 [J], 李帆;廖四芳;刘华友;鲁建鑫;刘宪楚;刘明;吴秀山;李永青5.miR-148a／b真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达 [J], 肖卫东;刘智文;文武;王福飞;廖国良;李勇;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
miRNAs在肝细胞癌中的功能及应用前景
miRNAs在肝细胞癌中的功能及应用前景陈彩霞;苏秀兰【摘要】肝细胞癌(HCC)是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,是全世界癌症死亡的主要原因之一,其显著特征是预后不良.因此,越来越多的研究集中于为HCC诊断和预后寻找新的分子标志物.microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA.表达失调的miRNAs其本身充当癌基因或肿瘤抑制基因,参与癌症的发生发展.新近研究发现,miRNAs的异常表达参与了HCC的许多生物过程,本文主要总结近年关于miRNAs在HCC肿瘤发生发展中作用的研究,为miRNAs用于HCC诊断、预后或作为治疗靶点提供理论依据.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2018(015)034【总页数】5页(P37-40,48)【关键词】microRNAs;肝细胞癌;诊断;治疗【作者】陈彩霞;苏秀兰【作者单位】内蒙古医科大学附属医院临床医学研究中心,内蒙古呼和浩特010050;内蒙古医科大学附属医院临床医学研究中心,内蒙古呼和浩特 010050【正文语种】中文【中图分类】R73一直以来，癌症危害着人类健康，人类也在不断地打“抗癌战”。
在过去的三十年中，研究人员不断开发靶向性强、毒副作用低的抗癌药物，但是，与此同时，癌细胞也在不断进化，不仅以各种途径得以存活而且对目前的治疗产生抗性。
相关研究已经发现，小分子能够通过影响癌细胞存活和增殖的信号转导途径，从而影响癌细胞存活[1]。
其中，microRNA（miRNA）可以抑制或增强癌基因或肿瘤抑制基因的表达，从而影响参与癌症发展和进展的关键调控蛋白转录和翻译。
miRNAs属于一个庞大的非编码RNA家族，一般由19～24个碱基的核苷酸序列组成，通常通过靶向特定的mRNA来控制基因表达。
一个特定的mRNA可能被不同的miRNAs靶向，而一个miRNA可能有几个mRNA靶点。
miRNAs与人类癌细胞增殖、细胞代谢、基因不稳定性、肿瘤侵袭、转移、血管生成、凋亡及免疫应答有关，已被用于多种恶性肿瘤的的临床治疗中，如肺癌、乳腺癌、血液恶性肿瘤、前列腺癌等，因此，miRNA可以用作癌症的诊断、预后和预测性生物标志物[2]。
阉割对金华猪肝脏miR-122和miR-378表达量和膻味性状的影响
阉割对金华猪肝脏miR-122和miR-378表达量和膻味性状的影响马义涛;李艳华;周辉云;王颖;徐宁迎【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2013(21)8【摘要】microRNA是一种小分子RNA,是细胞内复杂而精确的调控网络的组成部分.为了研究阉割对miR-122和miR-378表达量的影响以及miR-122和miR-378对雄烯酮和粪臭素代谢的调控作用,本研究利用荧光定量PCR检测了miR-122和miR-378在不同生长阶段金华猪(Sus scrofa)公猪肝脏中的表达量变化及其在阉割和非阉割公猪体内表达量的差异,利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测了金华猪皮下脂肪的粪臭素含量,并预测了调控pre-miR-122和pre-miR-378转录的相关转录因子及miR-122和miR-378与雄烯酮、粪臭素代谢相关基因的靶关系.结果发现,miR-122在胚胎期高表达,随着日龄的增加表达量逐渐下降;miR-378在胚胎期高表达,生长期呈现先增后减的态势.阉割后两者的表达量均较同期非阉割组表达下调.并且阉割后皮下脂肪中粪臭素的含量显著下降(P＜0.01).根据研究结果推测,阉割后激素水平的变化通过相关转录因子影响microRNA的表达,直接或间接影响雄烯酮和粪臭素代谢而实现对公猪膻味性状的调控.而在这个调控网络中,microRNA可能发挥了重要作用,为深入研究公猪膻味性状提供了一个新的思路.%MicroRNA(miRNA) is a class of small RNA,it is involved in the intracellular complicated and precise regulatory networks.In order to study the effect of castration on the expression of miR-122 and miR-378 and the regulation effect of miR-122 and miR-378on androstenone and skatole metabolism,we detected the skatole content in subcutaneous fat of boars and barrows with the help of high performance liquid chromatography (HPLC) and the expression of miR-122 and miR-378 in various growth stages in liver of Jinhua Pig (Sus scrofa) by quantitative Real-time PCR (qRT-PCR) and analysed the expression variation between boars and barrows.The results showed that the skatole content in adipose tissue was higher (P＜0.01) in boars (mean 87.21μg/kg,n=9) than that in barrows (79.87 μg/kg,n=9),and there was a significance change of the expression of miR-122 and miR-378 between embryonic and growth period.In the embryonic period the expression of miR-122 increased firstly and lasted to the 80th day,and then decreased.In the growth period the expression of miR-122 was decreased gradually.With the development of embryonic liver the expression of miR-378 continued to increase,while in the growth period miR-378 increased firstly and then decreased,and at 60 d reached the maximum.After 60 d the expression of both miR-122 and miR-378 of boars and barrows decreased significantly (P＜0.01) with the increase of day age.At 60 and 120 d the expression of miR-122 of barrows were significantly decreased (P＜0.01) by comparison to boars,and at 90th day it was also decreased significantly (P ＜0.05).After castration,the expression of miR-378 was decreased significantly (P＜0.01) at 60,90 and 120 d.We also predicted the transcription factors which may affect the transcription of pre-miR-122 and pre-miR-378,and the target genes which may affect the androstenone and skatole metabolism.We found that miR-122 and miR-378 had targetrelationship with androstenone and skatole metabolism genes SULT1A1 (sulfotransferase family,cytosolic,1A,phenol-preferring,member1),SULT2A1(sulfotransferase family,cytosolic,2A,dehydroepiandrosterone (DHEA)-preferring,member 1) and CYP2E1(cytochrome P450,family2,subfamily E,polupeptide 1).We forecasted that the upstream sequence of 5.2～4.9 kb of pre-miR-122 and the upstream sequence of 2.2～1.8 kb of pre-miR-378 were the promoter region,and there were related transcription factor binding sites.In the upstream sequence of pre-miR-378,there was a CpG island close to the promoter region,which indicated that the transcription of pre-miR-378 might be affected by methylation.In conclusion,we suggested that the changes of hormone level after castration may affect the expression of microR-NA through the relevant transcription factors,and then affect the boar taint by regulating the androstenone and skatole metabolism directly or indirectly.And microRNAs may play an important role in the regulatory networks.All in all,we provide a new idea for further research on boar taint.【总页数】8页(P957-964)【作者】马义涛;李艳华;周辉云;王颖;徐宁迎【作者单位】浙江大学动物科学学院,杭州310058;浙江大学动物科学学院,杭州310058;浙江大学动物科学学院,杭州310058;浙江大学动物科学学院,杭州310058;浙江大学动物科学学院,杭州310058【正文语种】中文【相关文献】1.阉割对金华猪甲状腺球蛋白(TG)和甲状腺过氧化酶(TPO)基因表达的影响 [J], 王颖;赵晓枫;徐宁迎2.LHRH融合蛋白免疫性阉割和手术性阉割对放牧育肥瘤牛公牛生长和胴体性状的影响 [J], E．L．deA．Ribeiro;高雪;许尚忠3.丙型肝炎病毒感染患者血清外泌体miR-122的表达量及临床意义探讨 [J], 宋晓菲;徐元宏4.猪miR-378种子序列的多态性对其功能以及胴体性状的影响 [J], 张廷焕;张利娟;陈四清;郭宗义5.阉割对金华猪甲状腺组织GNAS基因表达的影响 [J], 王颖;党文庆;吕尊周;翟继鹏;徐宁迎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
MicroRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及临床预测价值
MicroRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及临床预测价值李敏霞;陈红梅;郭晶晶;何文娟【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2024(34)4【摘要】目的探讨microRNA-148a在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)中的表达及临床预测价值。
方法选取2020年2月—2022年1月天水市中西医结合医院收治的113例ICP患者作为ICP组,另选取同期在该院产检的80例健康孕妇作为对照组。
对比两组肝功能及microRNA-148a相对表达量。
随访统计ICP患者妊娠结局,并依据妊娠结局分为不良组和良好组。
对比不同妊娠结局ICP患者临床资料及microRNA-148a相对表达量。
多因素逐步Logistic回归模型分析影响ICP患者妊娠结局的相关因素。
绘制受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析microRNA-148a对ICP患者妊娠结局的预测效能。
结果 ICP组总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及microRNA-148a相对表达量高于对照组(P <0.05)。
不良组与良好组年龄、体质量指数、孕周、产次构成、DBIL、AST、ALT、白细胞计数、血小板计数、平均血小板体积、血红蛋白、尿蛋白、血肌酐比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
不良组重度ICP病情占比高于良好组,TBA、TBIL、microRNA-148a相对表达量高于良好组(P <0.05)。
多因素逐步Logistic回归分析结果显示:重度ICP病情[OR=2.875(95%CI:1.093,7.559)]、microRNA-148a高表达[OR=3.343(95%CI:1.272,8.791)]均为影响ICP孕妇预后的危险因素(P <0.05)。
ROC曲线分析结果显示,血清microRNA-148a预测ICP孕妇妊娠结局的最佳截断值为1.12,敏感性、特异性及曲线下面积分别为72.73%(95%CI:0.496,0.884)、81.32%(95%CI:0.715,0.884)、0.798(95%CI:0.712,0.868)。
当归多糖调控miR-148a-3p对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响
当归多糖调控miR-148a-3p对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响王艳新;贾冠美;曹朗;王江涛;王瑜;王胜辉【期刊名称】《益寿宝典》【年(卷),期】2022()4【摘要】目的:探讨当归多糖调控 miR-148a-3p 对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响。
方法:将高糖诱导视网膜神经节细胞(RGCs)分为 9 组,均进行 CCK-8 实验和流式细胞术检验 RGCs 增殖抑制率和凋亡率,测定 RGCs 内 SOD、MDA,用RT-qPCR 检测 miR-148a-3p 表达。
结果:HG+当归多糖+miR-148a-3p In￣hibitor 组中 RGCs 增殖抑制率和凋亡率均低于其他组(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中RGCs 内 SOD 含量最高,MDA 最低(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中 miR-148a-3p 表达低于其他组(P<0.05)。
结论:当归多糖可上调 miR-148a-3p,促进 RGCs 增殖,抑制凋亡,减轻对高糖诱导RGCs 的损伤。
【总页数】3页(P0155-0157)【作者】王艳新;贾冠美;曹朗;王江涛;王瑜;王胜辉【作者单位】保定市第二中心医院;河北省第七人民医院;定州市人民医院;临城县人民医院【正文语种】中文【中图分类】TS【相关文献】1.罗格列酮对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的保护作用2.黄芪多糖对急性高眼压诱导大鼠视网膜神经节细胞的保护作用3.黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用4.枸杞多糖对高糖所致视网膜神经节细胞凋亡、基因表达及延迟整流钾电流的影响5.牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡和氧化损伤的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ， ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｊ ｉ ｎ ｈ ｕ ａ ｐ ｉ ｇ（ Ｓ ｕ ｓ ｓ ｃ ｒ ｏ ｆ ￣ ）ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ａ ｔ ｖ ａ ｒ ｉ ｏ ｕ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ
ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｅ ｓ ， ｓ ｕ ｃ ｈ ａ ｓ ｃ ｅ ｌ １ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ａ ｎ ｄ Ｓ Ｏ ｏ ｎ ． Ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ
李艳华 赵俊生 周辉 云 徐 宁迎
浙江大学 动物科 学学院， 杭州 ３ Ｉ １ ０ ０ ５ ８ 通讯作者 ， ｎ ｙ ｘ ｕ ＠ｚ ｊ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ａ
摘
要
ｍｉ Ｒ． １ ４ ８ ａ 是 ｍｉ Ｒ － １ ４ ８ ／ １ ５ ２ 家 族 中 的一 员 ， 对 细胞 增 殖 、 细胞 分 化 、 癌 症 发生 等生 物 过程 有重 要 的
抑 制表 达 的细 胞模 型 ， 以此来 探 究 ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 的表 达 变化对 靶 基 因在 ｍＲ ＮＡ水 平 的影 响 。结果 发现 ， 在 小
鼠胎 肝 细 胞 中过 表 达 ｍｉ Ｒ ． １ ４ ８ ａ 可 以显 著 降低 Ｃ Ｃ ＡＡ Ｔ增 强 子 结 合 蛋 白０ 【 基因 （ Ｃ Ｃ ＡＡ Ｔ － ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ 。 ａ ｌ ｐ ｈ ａ ， Ｃ ｅ ６ ｐ ｎ ） 的表 达 量（ Ｐ＜０ ． ０ ５ ） 。进 一步 检 测 发现 ， 在 金 华 猪肝 脏 生 长 过程 中 Ｃ ｅ ｂ ｐ ａ与 ｍｉ Ｒ一 １ ４ ８ ａ 的表 达呈 负相 关 。根 据这 些 结 果推 测 ， ｍｉ Ｒ－ １ ４ ８ ａ 可 能在 肝 脏发 育过 程 中通 过 降低 Ｃ ｅ ｂ ｐ ａ的表达 来调 控细 胞 增 殖和 分化 效应 之 间的平 衡 。 关键词 ｍｉ Ｒ一 １ ４ ８ ａ ， 肝脏 发 育 ， Ｃ Ｃ ＡＡ Ｔ增 强子 结合 蛋 （ Ｃ ｅ ｂ ｐ ａ ）
ｓ ｔ ａ ｇ ｅ ｓ ｂ ｙ ｑ ＲＴ － Ｐ ＣＲ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｉ ｔ ｓ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ａ ｂ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ ｎ ｅ ｍｂ ｒ ｙ ｏ ｎ ｉ ｃ ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ ｂ ｅ ｃ ａ ｍｅ
蚕 ｔ ｐ ： ／ ／ ｗ ｗ ｗ ｊ ａ ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｏ ｒ ｇ
． ．
张躺攫鞠髓 蠛
…
…
ｇｙ
器罄 蚕藏 ｌ ＝： ：
猪 Ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 对肝脏发 育调控 的初 步研 究
调 控作 用 。本研 究采 用 Ｒ ｅ ａ ｌ — ｔ ｉ ｍｅ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ （ ｑ Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ ） 方法 ， 定 量 检 测 ｍｉ Ｒ一 １ ４ ８ ａ 在金 华猪（ Ｓ ｕ ｓ ｓ ｃ ｒ ｏ ｙ ， ） 不 同发 育时 期 肝脏 中 的表达 变 化 ， 结 果 显示 ， ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 在 胚 胎 期 的肝脏 中表 达量 最 高 ； 出生后 ， 随 着 日龄 的增加 表达 量逐 渐 降低 ； 为 了了解 ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 的生物 学 功能和 过 程 ， 对 其进 行 Ｇ Ｏ（ ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ） 功 能注 释和 Ｋ Ｅ ＧＧ（ ｋ ｙ ｏ ｔ ｏ ｅ ｎ ｃ ｙ ｃ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｉ ａ ｏ ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｅ ｓ ） ￣路 分析 。结果 显示 ， ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 参与 肝脏 的 生 长 发 育 调控 过程 。为 了验 证 ｍｉ Ｒ ． １ ４ ８ ａ 的靶 基 因 ， 利用 胎 鼠（ Ｍｕ ｓ ｍｕ ｓ ｃ ｕ ｌ ｕ ｓ ） 肝 细 胞构 建 ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ８ ａ 过表 达和
Ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ Ｍｉ Ｒ一 １ ４ ８ ａ Ｒｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｏ ｒ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｌｉ ｖ ｅ ｒ Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ
ＬＩ Ｙａ ｎ— Ｈｕ ａ ＺＨＡＯ Ｊ ｕ ｎ— Ｓ ｈｅ ｎｇ ＺＨＯＵ Ｈｕ ｉ — Ｙｕ ｎ ＸＵ Ｎｉ ｎｇ — Ｙｉ ｎｇ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｚ ｈ ｅ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｈ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ １ ０ ０ ５ ８ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ， ｎ ｙ ｘ ｕ ＠ｚ ｊ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ａ Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｍｉ Ｒ一 １ ４８ ａ ｉ Ｓ ａ ｍｅ ｍｂ ｅ ｒ ｏｆ ｔ ｈ ｅ ｍｉ Ｒ—ｌ ４８ ／ １ ５ ２ ｆ ａ ｍｉ ｌ ｙ ，ｗｈｉ ｃ ｈ ｐａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｉ ｐａ ｔ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｇｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ ｍａ ｎ ｙ