白细胞分离技术汇总

外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液）

1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）

2> 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。

3> 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp 管中。

4> 3000r/min离心20 min，弃上清。

即得白细胞

可以试试红细胞裂解液

提供我的配方：

氯化铵82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成1升

所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则

2.分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也

比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清

3.细节：

a.淋巴细胞分离液要避光保存

b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的

c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操作，切不可混匀

d.所有操作都应在无菌环境进行

e.把离心管放入离心机是也应小心，不要太大幅度的摇幌离心管，当然离心后拿出来也要小心

就这么多了吧，这个操作是不是很难的，比较基本

祝您好运了！

.参考方法：

人外周血, 肝素抗凝(100U öm l) , 等量无血清培养液（或者PBS等缓冲液）稀释。按1∶2 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 ×g 离心

30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。于无血清培养液, 400×g 离心10 m in, 洗涤2次。用培养液重新悬浮细胞并计数

我也是最近要做所以查了一下，仅供分享，呵呵！

一外周血白细胞的分离

1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液（（33.9%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：2.4体积比混合））液面上，1500r/min离心20 min。（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）

2> 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。

3> 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp管中。

4> 3000r/min离心20 min，弃上清。

即得白细胞

二自然沉降法

本法是利用血細胞自然沉降率的分離法，採集血液後應及時抗凝，通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉化為凝血酶，從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min後，血液分成明顯三層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細胞，緊貼紅細胞層上面的灰白層為白細胞，輕輕吸取即得富含白細胞的細胞群，離心洗滌後加入少量蒸餾水或含氯化銨的Gey溶液，經短時間的低滲處理，使紅細胞裂解，經過反復洗滌可得純度較高的白細胞懸液。