瑞香素平衡溶解度和表观油水分配系数的测定

瑞香素平衡溶解度和表观油水分配系数的测定
单进军;狄留庆;赵晓莉;徐建亚
【摘要】OBJECTIVE To determine the equilibrium solubility of daphnetin and its partition coefficients for the n-oc-tanol-water/buffer solution systems. METHODS A high HPLC was established to detect the concentration of daphnetin in water and seven organic solvents. The partition coefficients for the n-octanol-water/buffer solution systems of daphnetin were determined by shaking flask method. RESULTS The equilibrium solubility of daphnetin was 176. 7 μg/mL in water at 25℃, a higher equilibrium solubility of daphnetin was reached at 485. 4 μg/mL in methanol, Papp of daphnetin was 2.4 (lgPapp =0.38).CONCLUSION The solubility of daphnetin was poor. It had little change in apparent partition coefficient in acidic and neutral phosphate buffer solution. Daphnetin belongs to the class II drug of Biopharmaceutics Classification System(low solubility, high permeability).%目的测定瑞香素的平衡溶解度及表现油水分配系数.方法采用HPLC法测定了瑞香素在水和7种有机溶剂中的平衡溶解度,摇瓶法测定瑞香素在正辛醇-水/缓冲盐溶液中的表现油水分配系数.结果25℃下瑞香素在水中的平衡溶解度为176.7μg/mL,常用有机溶剂甲醇对瑞香素的溶解性较好,为485.4μg/mL,正辛醇/水表现分配系数Papp为2.4(lgPapp＝0.38).结论瑞香素的水溶性差,在酸性和中性条件下,正辛醇/缓冲液分配系数受缓冲液的pH值影响不大;瑞香素属于FDA生物药剂学分类中的第二类药物(低溶解性、高渗透性).
【期刊名称】《南京中医药大学学报》
【年(卷),期】2011(027)005
【总页数】3页(P449-450,458)
【关键词】瑞香素;平衡溶解度;表观油水分配系数
【作者】单进军;狄留庆;赵晓莉;徐建亚
【作者单位】南京中医药大学第一临床医学院,江苏南京210046;南京中医药大学药学院,江苏南京210046;南京中医药大学药学院,江苏南京210046;南京中医药大学第一临床医学院,江苏南京210046
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
瑞香素是从中药祖师麻中分离出的香豆素类成分，具有较好的抗炎、镇痛及免疫调节作用[1]，是祖师麻治疗风湿痹痛、关节炎和类风湿性关节炎的主要活性成分。

为进一步开展瑞香素的体内过程和剂型研究，本实验对瑞香素的平衡溶解度和油／水分配系数进行了初步研究。

1 材料
1.1 仪器
Agilent1100型高效液相色谱仪：四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器（DAD），HP1100ChemStation色谱工作站（Agilent科技有限公司）；pH S－3C 精密pH 计（上海雷磁仪器厂）；BP211D型电子分析天平（德国Satrorius公司）；SHZ－88型恒温水浴摇床（江苏省金坛市医疗仪器厂）；Anke TGL－16G 高速离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2 试剂与药品
瑞香素原料（上海康九化工有限公司，纯度大于98%）；瑞香素对照品（中国药
品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0900－200102）；水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18（4.6mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇－0.5%醋酸水（25∶75）；检测波长：327nm；流速：1.0mL／min；柱温：30℃。

2.2 线性关系考察
精密称取瑞香素素对照品（五氧化二磷减压干燥过夜）8.36mg，置10mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

（瑞香素浓度为836μg／mL）。

用甲醇分别将对照品储备液稀释成209、83.6、20.9、10.45、5.225μg／mL，按从低浓度到高浓度液相色谱仪进样10 μL，记录峰面积。

以瑞香素浓度X （μg／mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y＝46.378 X＋23.097，r＝0.999 9（n＝5），表明瑞香素浓度在5.225～209μg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验
取瑞香素对照品溶液（20.9μg／mL），按上述色谱条件连续进样6次，记录瑞香素的峰面积，结果瑞香素RSD为0.34%，表明该方法的精密度良好。

2.4 稳定性试验
分别对不同溶剂、不同pH条件下的瑞香素溶液在振摇前和振摇24h后进样测定。

记录瑞香素的峰面积，结果RSD均小于1%，表明样品溶液24h内稳定（25℃）。

2.5 平衡溶解度的测定[2]
取过量瑞香素原料于10mL具塞试管中，分别加入以下2组介质适量：①有机溶
剂组：甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正辛醇、二氯甲烷；②水及缓冲溶液组：pH1.2的盐酸溶液，pH 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.0、7.4、8.0、9.0的磷酸盐缓冲溶液，于25℃ 空气振荡器中振摇24h，12 000r／min离心
15min后，进样10μL，超出线性范围的样品用甲醇适当稀释后进样，记录峰面积。

按外标法以峰面积计算瑞香素在各介质中的平衡溶解度。

瑞香素在水中的平衡溶解度为176.7μg／mL，在不同有机溶剂中的平衡溶解度见表1，在盐酸和不同pH缓冲溶液中的平衡溶解度见图1。

瑞香素在盐酸溶液和不同pH磷酸盐缓冲溶液中的溶解度都较低，在pH 4～5范围内的溶解度相对较高。

表1 瑞香素的平衡溶解度有机溶剂平衡溶解度／（μg·mL－1）485.4乙醇 230.6乙腈 174.4丙酮 141.9乙酸乙酯 72.7正辛醇 43.4二氯甲烷甲醇24.6
图1 瑞香素的平衡溶解度
2.6 表观油水分配系数的测定[3]
取瑞香素原料适量，溶于水饱和的正辛醇中，使成饱和状态，静置后3 000r／
min离心10min。

精密吸取上清液0.5mL于10mL具塞试管中，分别加入正辛醇饱和的水、pH 1.2的盐酸溶液，pH 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.8、7.0、7.4、8.0、9.0的磷酸盐缓冲溶液各5mL，于25℃ 空气振荡器中振摇24h，静置后吸
取上层油相和下层水相，12 000r／min离心15min，进样10μL，记录峰面积，
按外标法以峰面积计算瑞香素的浓度，按照公式计算表观油水分配系数。

计算公式如下：
上式中Papp为瑞香素的表观油水分配系数；C油为分配平衡时测得瑞香素在正辛醇中的浓度，C水为分配平衡时测得瑞香素在水相中的浓度。

25℃瑞香素的正辛醇／水表观分配系数Papp为2.4（lgPapp＝0.38），在不同
的pH 值缓冲液中的表观正辛醇／缓冲液分配系数见图2。

结果表明，在酸性和中
性条件下，正辛醇／缓冲液分配系数受缓冲液的pH值影响不大，但在偏碱性的情况下，分配系数有所升高。

图2 瑞香素的正辛醇／水表观分配系数
3 讨论
在预实验中发现瑞香素在碱性条件下不稳定，经考察该药在酸性及pH值小于9的磷酸盐缓冲液中25℃均可稳定放置24h，继续升高溶液的pH值则该药的稳定性
明显下降，发生降解反应。

故本实验只考察该药在pH 9以下缓冲液中的平衡溶解度和油水分配系数。

油水分配系数是指当药物在水相和油相达平衡时，药物在油相的浓度和在水相中的浓度之比。

药物在体内的溶解、吸收、分布、转运与药物的油水分配系数有关[4]。

体外测定油水分配系数，是为了模拟生物体内药物在水相和生物相之间的分配情况。

从实验结果看出，本药物的脂溶性大，大部分进入油相，水相中溶解很小。

瑞香素的水溶性较差，在水中的平衡溶解度仅为176.7μg／mL，油水分配系数为Papp为2.4（lgPapp＝0.38）。

按照 FDA 生物药剂学分类[5]，瑞香素属于第二类药物（低溶解性、高渗透性）。

因此疏水性强不是限制瑞香素口服吸收的重要原因（一般lgPapp大于5的药物不易吸收），导致其口服生物利用度低的主要原因之一可能是药物溶解度较小导致的溶出速度较慢。

【相关文献】
[1] Gao Q，Shan JJ，Di LQ，et al.Therapeutic effects of daphnetin on adjuvant－induced arthritic rats[J].J Ethnopharmacol，2008，120：259－263.
[2] 王弘，陈济民，张清民.黄芩苷的物化常数测定[J].沈阳药科大学学报，2000，17（2）：105－106.
[3] 金玉燕，张均寿，张英，等.西红花苷大鼠小肠吸收研究及油水分配系数的测定[J].中国药科大学
学报，2004，35（3）：283－284.
[4] 苏德森，王思玲.物理药剂学[M].北京：化学工业出版社，2004：102.
[5] Amidon GL，Lennernas H，Shah VP，et al.A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification：The correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability[J].Pharm Res，1995，12：413－420.。