植物细胞骨架的显示及光镜观察实验原理及步骤

实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察
一、原理：
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织形成一个十分复杂的立体网络
结构。

它们对于细胞形状的保持、细胞内物质运输、细胞运动、细胞内各结构相
对位置的固定都有重要作用，故而称为细胞骨架。

细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、高压、酸处理等。

当采
用适当的手段，如M-缓冲液洗涤细胞，可以提高细胞骨架的稳定性，戊二醛在
室温下固定能较好的保存细胞骨架的成分，另外，Triton X-100处理能抽取掉
一部分杂蛋白，可使骨架成分显现的更加清晰。

微丝、微管、中间纤维等都是直径很小的结构。

最大的单根微管才
25nm左右，只能在电镜下才能看见，目前研究细胞骨架的主要方法是应用高压
电镜或免疫荧光显微技术，本实验用普通光镜观察到细胞骨架，是因为骨架纤维
成束分布，结构经染色以后，有夸大作用。

由于细胞经Triton X-100提取剩下
的主要成分是细胞骨架成分，使得显现等价清晰。

二、药品及器材：
材料：洋葱鳞茎
器材：显微镜、烧杯、吸管、镊子、载片、盖片
试剂： M-缓冲液（配制方法如下）：
咪唑 2.90g
KCl 3.70g MgCl2
0.012g
EGTA 0.38g EDTA
0.042g
巯基乙醇 0.086ml 加水到 1000 ml 6mM磷酸缓冲液
KH2PO4 0.74g。