实验一血常规检查

二、白细胞计数
操作步骤
取小试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。 用清洁干净微量吸管取末稍血20ul。 擦去管尖外部余血，轻轻吹入白细胞稀释液底 部，再轻吸上层清液喇洗吸管2-3次，然后立 即混匀。 充池后待2-3min，用低倍镜依次计数四角的大 方格细胞数，按数上不数下，数左不数右的原 则进行目视计数。 计算：白细胞数/L＝4个大方格内白细胞数 /4×10×20× 106
2．病理性白细胞增高：
(1)某些细菌性感染所引发的疾病，特别是化 脓性球菌引起的局部炎症和全身性感染，如： 脓肿、化脓性脑膜炎、肺炎、阑尾炎、中耳 炎、扁桃体炎、脓胸、肾盂炎、输卵管炎、 胆囊炎及败血症等。 (2)某些病毒性感染所导致的疾病：乙型脑炎，传染 性单核细胞增多症，麻疹等。 (3)严重的组织损伤或坏死：如大手术后，烧伤，急 性出血严重创伤，血管栓塞等。
实验操作内容： 1.白细胞与血小板计数。 2.白细胞分类。

病例分析
病例1 患者女性，28岁，从事导游职业，以头
昏、乏力一年余之主诉入院。平时饮食 以素食为主，月经不规律，持续时间较 长，量较多 体检：T 36.6℃，P 96次/分， R 20次/分，Bp14/9.3kPa。贫血貌、皮 肤粘膜无出血点，巩膜无黄染，浅表淋 巴结不大。胸骨无压痛，心肺无异常。 肝脾肋下未触及。
血细胞计数
熟悉计数室
血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏 (Improved-Neubauer) 计数板在中央横沟的两边各有 一计数室，两计数室结构完全相同。计数室较两边的 盖玻片支柱低0.1毫米。因此，放上盖玻片时，计数板 与其间距即计数室空间的高为0.1毫米。 (见图)在低 倍显微镜下可见计数室被双线划分成９个边长为１毫 米的大方格。四角的大方格又各分为１６个中方格， 这是用来计数白细胞的。中央大方格被划分为２５个 中方格，每一中方格又划分成１６个小方格。中央大 方格的四角及其中心５个中方格为红细胞或血小板计 数范围。(见图)

百分比 1－５％ ５0－70％ 0.5－5％ ０－1％ ２0－40％ ３－８％
方法
瑞氏染色法： 1.制作血片：将一滴血置玻片一端，用推片以 30~45度角匀速推片，制成血片，一张好的血 片应具有头体尾三部分。 2.将瑞氏染液3~4滴滴在已干的血膜上，10秒 钟后再滴上等量缓冲液，用洗耳球轻轻吹匀， 染色5分钟。用清水冲洗干净。 3.待血片干后，用油镜观察100个白细胞的形 态，并计数分类各种白细胞的百分比。
病理性白细胞减少：
(1)某些病毒性感染：如流感，病毒性肝炎，风 疹等。某些细菌性感染，如伤寒和副伤寒。 (2)血液系统疾病：如再生障碍性贫血，原发性 粒细胞缺乏症。 (3)脾功能亢进。 (4)理化因素：如放射线，放射性治疗，化学治 疗药物，解热镇痛药物等，抗肿瘤类细胞毒 性药物等均可导致白细胞数量减少。
实验室检查： 1 血液一般检查： RBC 2.8×1012/L，Hgb 78g/L，HCT 0.27，MCV 73fL，MCH 23pg， MCHC 270g/L， RDW 17.5% ；PLT 148×109/L，MPV 0.10fL，PDW 16%；网织 红细胞计数2%。 WBC 8.0×109/L，L 20%， E 3%，B 1%，M 6%, Sg 65%, St 5%; 2 尿液和粪便检查:未见异常。 思考题： 1．提出本病例的初步诊断。 2．根 据实验室检查，提出贫血的形态学分类。 3．提出进一步的检查计划。
异常直方图示例二
分析与实践
该标本镜检结果为幼稚细胞14％。
血小板直方图的应用
拟合曲线的概念。血小板的体积分布呈
对数分布。所有在拟合区内的均为血小 板，在拟合区外的均非血小板。仪器实 际测定的范围为2-20FL,而拟合覆盖范围 为2-70FL. 所有不符合拟合规律的血小板严格意义 上均应镜检即均不可靠。
方法
手工法(显微镜)
手工计数费事费力,精确性、准确性也较差。

血细胞分析仪(三分类,五分类) 准确性、精确性、效率大大提高。
血细胞分析仪
近年来，随着血液分析仪在国内检验科迅速普 及，使血常规检验的参数逐渐增多，不仅提高 了工作效率和工作质量，而且为临床医生提供 了更广泛的参考数据。血液分析仪的白细胞分 类计数，先后推出了两分类、三分类、四分类 和五分类的仪器。应该说血液分析仪的飞速发 展，使血常规检验进入了新阶段，这是医学检 验的一大进步。
参考值

男: (4.0～5.5)×1012/L 女：（3.5～5.0）×1012/L 新生儿：（6.0～7.0）×1012 /L
临床意义
红细胞增多见于： （1）严重呕吐、腹泻、大面积烧伤及晚期消化道 肿瘤患者。多为脱水血浓缩使血液中的有形 成分相对地增多所致。 （2）心肺疾病：先天性心脏病、慢性肺脏疾患及 慢性一氧化碳中毒等。因缺氧必须借助大量 红细胞来维持供氧需要。 （3）干细胞疾患：真性红细胞增多症。
(4)过敏反应：如输血反应，药物过敏，急性变态反应 性疾病等。 (5)中毒反应：如各种药物中毒，农药中毒，重金属中 毒，糖尿病酸中毒，妊娠中毒症等。 (6)肿瘤及血液病：慢性粒细胞白血病，急性粒细胞白 血病等。 (7)应用某些升白细胞的化学药物促使白细胞增高，多 见于化疗和放疗治疗期间因白细胞数量急剧减少时， 需要尽快提升白细胞而进行下一步疗程治疗的患者。
各警示标志说明
R1:大血小板，血小板团，有核红细胞，疟原
虫， 嗜酸细胞，嗜碱细胞。
R3:单核细胞，嗜酸细胞，嗜碱细胞，原幼细
R2：异型淋巴细胞，原幼稚细胞，单核细胞，
胞
R4:中性粒细胞过多。
异常直方图示例一
分析与实践
该标本镜检结果为：中幼粒12％，杆状核34 ％，晚幼粒18％，中性粒25％，单核3％，淋 巴细胞8％。 骨髓检查证实为慢性粒细胞白血病。
白细胞分类原理
1.电阻抗法 电阻抗法白细胞计数原理是根据血细胞
非传导性的性质,以对电解质溶液中悬浮 颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化 进行检测为基础, 进行白细胞计数和体积 测定。 白细胞直方图：两个明显分离的峰：左 峰：小细胞群（淋巴细胞：35-90fl）,两 峰之间：中间细胞群（中间细胞：90160fl）的分布。右峰：大细胞群（粒细 胞：160-450fl）
容量、电导、光散射白细胞分类 （VCS） 体积（volume）：电阻抗原理； 电导性（conductivity）：采用高频电磁 探针测量细胞内部结构—细胞核、细胞 质的比例、细胞内的化学成份； 光散射（scantter）：特别具有对细胞颗 粒的构造和颗粒质量的区别能力，细胞 粗颗粒的光散射要比细颗粒强。
2
阻抗与射频法 通过四个不同检测系统完成： （1）嗜酸性粒细胞检测系统：特殊的 pH的溶血剂溶解或萎缩除嗜酸性粒细胞 以外的所有细胞。 （2）嗜碱性粒细胞检测系统： （3）淋巴、单核、粒细胞的检测系统： (4）幼稚细胞检测系统：
3
四

多角度偏振光散射法术
四个角度测定散射光的密度： ①0°：前角光散射粗略地测定细胞大小； ②10°：狭角光散射测细胞结构及其复杂性； ③90°：垂直光散射主要对细胞内部颗粒和细 胞成份进行测量； ④90°：90°消偏振光散射（70°～110°） 从这四个角度同时对每个白细胞进行测量，将 白细胞分为嗜酸粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性 粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。
采用“由上至下，由左至右，顺序如弓” 的顺序，对压边线细胞采取“数上不数 下，数左不数右”的原则
计数池充液时应注意的问题
1.不可断续充液， 2.充液量要适中， 3.充液完成后不可挪动盖玻片。
一 、红细胞计数
操作步骤
1 稀释液的配制：NaCL1.0g、Na2SO4· 10H2O5.0g、 HgCL20.5g以蒸馏水稀释到200ml。溶解后加伊红水溶 液1滴，过滤后用。 2 取小试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。 3 用清洁干净微量吸管吸取末稍血10ul。 4 擦去管尖外部余血，轻轻吹入红细胞稀释液底部，再轻 吸上层清液喇洗吸管2-3次，然后立即混匀。 5 充池后待2-3min，用高倍镜依次计数中央大方格四角和 正中共5个中方格内的红细胞，按数上不数下，数左不 数右的原则进行目视计数。 6 计算：红细胞数/L＝5个中方格内红细胞数 ×5×10×201×106
血常规检查
苏州大学附属第二医院检验科
郭敏 谢晓芳
Baidu Nhomakorabea常规检查

血常规检查（blood routine examination）指对外周血中红细胞、白 细胞和血小板数量和质量的化验检查， 包括RBC、Hb、WBC、PLT及白细胞分 类计数（DC），同时注意观察血涂片中 红细胞及白细胞形态有无异常，某些情 况下应注意观察有无异常细胞或寄生虫 等。
四、血红蛋白测定
一
原理 血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁 血红蛋白，后者与氰结合形成稳定的棕 色氰化高铁血红蛋白(HiCN)，HiCN在规 定的波长和液层厚度的条件下具有一定 的吸光系数，据此可求出血红蛋白浓度。
二
方法
氰化高铁血红蛋白法

操作步骤
取全血 20ul,加到5ml HiCN 试剂中,充分混和,

参考值
成人：4.0—10.0x109/L 儿童：5.0-12.0Xl09／L 6个月--2岁婴儿：11.0-12.0x109／L 新生儿：15.0—20.0xl0 9／L
临床意义
1．生理性白细胞增多：
(1)胎儿及初生儿白细胞常在10.0—20.0xl09／L。 (2)孕妇妊娠5个月以上时，白细胞总数常可达 10.5x109／L或更高，后期可达20.0x109／L (3)剧烈的运动和劳动可使白细胞高达12.0x109／L， 甚至20.0x10 9／L以上。 (4)暴热和严寒，白细胞总数常有一过性增高,复温 后迅速恢复至正常水平。
四
临床意义 1.血红蛋白减少多见于各种贫血，如急 性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血 等。 2.血红蛋白增多常见于身体缺氧、血液 浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。
白细胞分类计数
一 分类 细胞名称 中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞 嗜酸粒细胞 嗜碱粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
静置5分钟. 分光光度计波长540nm处,光径(比色杯内 径)1.000cm,以HiCN 试剂或蒸馏水调零,测定 吸光度(A). 计算血红蛋白(g/L)=A*64458/44000*251 =A*367.7
三
参考值 男：120-160g/L(12-16g/dL) 女：110-150g/L(11-15g/dL) 儿童：120-140g/L(12-14g/dL)



参考答案：
1．初步诊断：缺铁性贫血，诊断依据有：患者
为年轻女性，有头昏乏力症状和面色苍白体征； 平时以素食为主，进食含铁丰富的肉食较少； 病史中有慢性失血史，即月经量多，持续时间 长；血红蛋白及红细胞减少（Hgb78g/L， RBC2.8×1012/L），红细胞比容减低（HCT 0.30）符合贫血诊断；MCV（73fl）、MCH （23pg）及MCHC（270g/L）均减少，RDW， 均提示为小细胞低色素性贫血，符合缺铁性贫 血。 2.为明确诊断，进一步应做的检查：血清铁、 转铁蛋白饱和度，总铁结合力；血清铁蛋白； 骨髓细胞学检查和骨髓细胞铁染色（查细胞内 铁和细胞外铁）。
注意事项
1.釆血时不能挤压过甚，以免混入组织
液 2.如无上述稀释液时，也可用新鲜配制 的等渗盐水代替 3.正常数值范围内，两次红细胞计数相 差不得超过10% 4.不允许血红蛋白浓度来折算红细胞数
红细胞减少见于： （1）急性或慢性失血。 （2）红细胞遭受物理、化学或生物因素破坏。 （3）缺乏造血因素、造血障碍和造血组织损伤。 （4）各种原因的血管内或血管外溶血。

分类图谱：
中性分叶核粒细胞
中性杆状核粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
二 临床意义 中性粒细胞增高见于各种化脓菌所致的炎症， 如大叶性肺炎、流行性脑脊髓膜炎等、减少见 于伤寒等疾病，病毒感染如肝炎、流感、疟疾 等，再生障碍性贫血，急性粒细胞缺乏症等、 嗜酸性粒细胞增高见于支气管哮喘等变态反应 性疾病，钩虫病等寄生虫病等、 淋巴细胞增高见于结核病等、 单核细胞增高见于单核细胞性白血病，疟疾等， 某些急性传染病的恢复期。