高效液相色谱法测定磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物含量

高效液相色谱法测定磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物含量
发布时间：2021-01-13T14:11:07.717Z 来源：《医师在线》2020年9月18期作者：吴萍黄皆竣石小磊蒋红梅[导读] 采用高效液相色谱法测定磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物含量
吴萍黄皆竣石小磊蒋红梅
（扬子江药业集团江苏紫龙药业有限公司；江苏常州213000）
摘要
目的：采用高效液相色谱法测定磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物含量
方法：色谱柱：Dionex CarboPacTM PA1预柱，Dionex CarboPacTM PA1色谱柱，4×250mm；柱温：25℃；1.0ml/min；检测波长：210nm；进样量：100μl；流动相：流动相A为二甲亚砜磷酸盐缓冲液溶液【1000ml磷酸盐缓冲液中加入约15±10μl二甲亚砜，如基线产生正相漂移，则增加二甲亚砜的用量，反之则减少二甲亚砜的用量，二甲亚砜的实际用量为5~25μl不等】；流动相B为2.0mol/L氯化钠磷酸盐缓冲液溶液【取0.210g磷酸二氢钠二水物和0.650g磷酸氢二钠二水物用水溶解，然后稀释至1000ml，用磷酸调节溶液pH约为7.3】。

结果：磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物磺达肝癸钠在12.9088μg/ml -161.36μg/ml范围内线性关系良好，不锈钢板的平均回收率在70%，RSD值为18%。

结论：本方法稳定、简便、准确，灵敏度高，适用于磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物的含量测定。

正文：
磺达肝癸钠注射液，西药名。

为抗血栓形成药。

用于进行下肢重大骨科手术如髋关节骨折、重大膝关节手术或者髋关节置换术等患者，预防静脉血栓栓塞事件的发生等。

在药品生产过程中，为防止污染与交叉污染，需对涉及的生产设备进行清洁，为保证清洁的有效性，需对设备表面化学残留物进行检测，本文建立了高效液相色谱法测定磺达肝癸钠注射液清洁验证残留量。

1 仪器和试药
Agilent Infinity II 生物惰性色谱仪
磺达肝癸钠对照品（WSFS-191201，5.0425mg/ml）；二甲亚砜（20181205，99.8%）；磷酸二氢钠（20190116，99.0%）；磷酸氢二钠（20170401，99.0%）；氯化钠（K5072204913）；
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液的制备
取磺达肝癸鈉对照品一支（标定浓度约5mg/ml），精密量取0.4ml，置25.0ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备
将在同一块平板上取样的四根棉签，置TOC瓶中，精密加入5ml水，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3块同一材料平板所得3份供试品溶液为一组试验。

具体操作过程如下：
取磺达肝癸鈉对照品一支（标定浓度约5mg/ml），精密量取0.8ml，置10.0ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取此溶液1.00ml，分别均匀涂布于3块编号为3块编号为bxg1、bxg2、bxg3的不锈钢板平板自然挥干或用吹风机温和吹干。

取棉签，加注射用水0.2ml浸湿，将棉签分别按在涂布好并干燥后的平板（10cm×10cm）上，尽量使棉签一面与取样点表面完全接触，平稳而缓慢地按图一所示方向均匀擦拭一遍，然后翻转棉签，用另一面按图二所示方向进行第二次擦拭。

取另三根棉签(其中第四根棉签无需用注射用水浸湿，保持干燥)同法擦试取样。

取样必须尽快完成以免溶剂挥发和污染物沉积到样品表面。

稀释剂：水；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：25℃；进样量：100μl；
2.3 系统适用性试验
待仪器平衡后，取超纯水100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，在0~30分钟的运行时间内，测定基线漂移应在0.00～0.02AU之间，如有必要，可调整二甲亚砜的用量直至基线漂移符合要求，同时要求在4.0~30.0分钟时间内，色谱图上应无色谱峰。

2.4 线性关系的考察
取磺达肝癸鈉对照品一支（标定浓度约5mg/ml），精密量取0.8ml，置10.0ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别量取0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml、1.8ml、2.0ml，分别置5.0ml量瓶中，分别用水稀释至刻度，摇匀，制成20%-200%浓度水平的对照品溶液。

取上述溶液各100μl，注入已平衡的液相色谱仪，记录色谱图，以浓度X为横坐标，以测得峰面积Y为纵坐标（包括定量限），进
行线性回归，结果见表1。

结果表明，残留物磺达肝癸钠在一定浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.5 精密度试验
取“2.1.1”项下100%浓度水平的对照品溶液100μl，注入已平衡的液相色谱仪，重复进样6次，记录色谱图，计算6次测得峰面积的RSD为2%，表面精密度良好。

2.6 灵敏度试验
取“2.1.2.”项下对照品溶液用溶剂逐步稀释，直至定量限峰高为基线噪声的8-12倍为止，结果得到磺达肝癸钠的定量限为12.9088μg/ml。

用溶剂逐步稀释，直至定量限峰高为基线噪声的2-4倍为止，结果得到磺达肝癸钠的检测限为4.130816μg/ml。

2.7 回收率试验
分别量取对照品溶液（2.1.1项下）和供试品溶液（2.1.2项下）各100μl，注入已平衡的液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品溶液中磺达肝癸钠的量。

取样回收率为测得值与理论值之比，一般规定不低于70%。

结果见表2。

表2 不锈钢板磺达肝癸钠擦拭回收率结果验证人1的结果：根据擦拭法回收率取两个操作者所得平均回收率中的最低值的原则，磺达肝癸鈉注射液清洁验证不锈钢平板中磺达肝癸鈉取样回收率为70%，RSD为18%。

2.8 溶液稳定性
取100%浓度水平的对照品溶液，将此溶液于室温条件下放置约0小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、30小时、36小时、42小时、48小时、54小时、60小时后分别精密量取100μl，注入已平衡的液相色谱仪，重复进样2次，记录色谱图。

对照品溶液60小时内，计算每个时间点测得的主峰峰面积与初始的峰面积的相对平均偏差均不超过5.0%，各个时间点测得主峰的保留时间与0小时测得的保留时间的比值均在0.90~1.10之间，表明溶液是稳定的。

2.9 样品的测定
取工艺验证后清洁验证擦拭样品，按色谱条件进行测定，化学残留均未检出。

3 讨论3.1 擦拭溶剂的选择因磺达肝癸钠的水溶性较强，故采用注射用水作为擦拭溶剂，能有效保证回收率。

3.2 仪器的选择
曾选择普通的Agilent 1260高效液相色谱仪，发现色谱柱压力过大，而且盐相比例较大，仪器的承受力较差，重复性不佳，故更换Agilent Infinity II 生物惰性色谱仪，重复性良好。

3.3 小结
本文建立的方法稳定、简便、准确、灵敏度高，适用于磺达肝癸钠注射液清洁验证残留物的测定。

参考文献：
1 Fondaparinux sodium.Reactions Weekly.2017. Vol.1653 (1).pp.146-146
2干浩徐珊珊周喜泽李振重. [磺达肝癸钠注射液有关物质的合成].中国医药工业杂质. 2019.11. 1280-1284。