革兰染色检查方法

革兰染色检查标准操作程序
1.检验目的
规范革兰染色程序，确保染色结果可靠。

2.原理
细菌经结晶紫初染染成紫色。

革兰氏染色阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为紫色。

而革兰氏染色阴性菌（G-—）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。

3.试剂来源及组成
购自贝索公司
第一液龙胆紫主要成分：龙胆紫、乙醇
第二液碘溶液主要成分：碘、碘化钾
第三液脱色液主要成分：丙酮、乙醇
第四液沙黄溶液主要成分：沙黄、乙醇
4. 操作步骤
4.1 制备厚薄均匀适中的菌涂片，自然干燥后酒精灯火焰加热固定。

4.2 用第一液初染10秒，细流水冲洗，甩尽水滴。

4.3 媒染10秒，细流水冲洗，甩尽水滴。

4.4 脱色10-20秒，细流水冲洗，甩尽水滴。

4.5 复染10秒后，细流水冲洗，甩尽水滴。

自然干燥，镜检。

5. 结果判断:使用油镜观察，菌体呈紫色者为革兰阳性菌，呈红色者为革兰阴性。

6. 注意事项:
6.1制片要厚薄适中。

6.2 染色时间可根据环境温度或者染液自身情况微调。

6.3 应结合菌落形态，湿润还是干燥、镜下细菌的排列方式及在含万古霉素巧克力平板和MAC上生长与否综合判断染色不典型细菌。

7. 质量控制
使用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌进行质控，金黄色葡萄球菌应为革兰阳性球菌，大肠埃希菌为革兰阴性杆菌。

可将二者混在一起制作涂片。