人体肾透明标本的设计与制作

ｄｏｉ：１０．１１６５９／ｊｊｓｓｘ．１０Ｅ０１７０１６
·技术方法·
人体肾透明标本的设计与制作
李　兵１，姚　伟２，孙建永１，伏　辉１　（１．长沙医学院形态学实验室，湖南长沙４１０２１９；２．长沙医学院临床学院五官科，湖南
长沙４１０２１９）
［摘　要］　目的　探讨人体透明肾标本的制作技术及研究进展。

方法　选取死亡不超过２４ｈ的男性成人肾标本，通过填充、固定、漂白、脱水、透明步骤制作肾透明标本。

结果　成功制作出的人体透明肾标本能清楚显示肾段、肾动静脉、分支数量及走行，又保证了肾柱、肾椎体、肾乳头等结构没有损伤及变化。

结论　改良方法制作出的肾透明标本可在保留肾整体外形的基础上充分展示出肾动、静脉血管的走行及肾段之间的界限。

［关键词］肾；血管铸型；透明标本；标本制作
［中图分类号］Ｒ３２２．６＋１　［文献标识码］Ａ　［收稿日期］２０１７ １０ ０７
　［通信作者］伏　辉，Ｅ ｍａｉｌ：７８２５９１５９０＠ｑｑ．ｃｏｍ
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｈｕｍａｎｋｉｄｎｅｙｓｐｅｃｉｍｅｎ
ＬＩＢｉｎｇ１，ＹＡＯＷｅｉ２，ＳＵＮＪｉａｎ ｙｏｎｇ１，ＦＵＨｕｉ１　（１．ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｈａｎｇｓｈａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｈａｎｇｓｈａＨｕｎａｎ
４１０２１９，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＣｈａｎｇｓｈａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｈａｎｇｓｈａＨｕｎａｎ４１０２１９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｕｍｍａｒｉｚｅｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｒｅｎａｌｈｙａｌｉｎｅｓｐｅｃｉｍｅｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍａｌｅａｄｕｌｔｋｉｄｎｅｙｓｐｅｃｉｍｅｎｓｎｏｔｅｘｃｅｅｄｉｎｇ２４ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｄｅａｔｈｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｆｉｌｌｉｎｇ，ｆｉｘａｔｉｏｎ，ｂｌｅａｃｈｉｎｇ，ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｐｒｏｃｅ ｄｕｒｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅｈｕｍａｎｂｏｄｙｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｋｉｄｎｅｙｓｐｅｃｉｍｅｎｃａｎｃｌｅａｒｌｙｓｈｏｗｔｈｅｒｅｎａｌｓｅｇｍｅｎｔ，ｒｅｎａｌａｒｔｅｒｉａｌｖｅｉｎ，ｎｕｍｂｅｒｏｆｂｒａｎｃｈｅｓａｎｄｔｈｅｃｏｕｒｓｅ，ａｎｄｉｔｃａｎｉｎｓｕｒｅｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｄａｍａｇｅａｎｄｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｋｉｄｎｅｙｃｏｌｕｍｎ，ｒｅｎａｌｖｅｒｔｅｂｒａ，ｒｅｎａｌｐａｐｉｌｌａａｎｄｏｔｈｅｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｋｉｄｎｅｙｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｓｐｅｃｉｍｅｎｓｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｃｌｅａｒｌｙｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｅｎａｌ；ｖａｓｃｕｌａｒｃａｓｔ；ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｓｐｅｃｉｍｅｎ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｍｅｎ
肾是实质器官，位于腹后壁，左右各一，形似蚕豆，
新鲜时为红褐色［１］。

肾内部结构精细复杂，在实验教
学中很难观察清楚。

对此，透明标本可在保留肾外形结构的基础上显示出其内在管道的分支、数量、走行，在教学和科研工作中有着重要作用。

自１８８５年Ｂｅａｌ首先制作出人的胚胎透明标本，对之后的研究发展有
了进一步的改进［２］。

直至１９５８年我国解剖学家钟世
镇教授等采用丙酮、氯仿、乙醚、冰醋酸混合液加速脱水，制作了水杨酸甲酯的透明标本，透明标本在我国才
得以发展［３］。

近几年来，也有学者用Ｓｉｈｌｅｒ染色法成功制作了喉软骨和神经染色透明标本［４］，表明人体透
明标本设计制作在我国又有了新的突破。

以往对双肾的研究大多是基于尸体解剖标本，离体肾血管铸型腐蚀标本，仅局限于肾的表面和肾血管的简单观察，不能可靠地展示血管供应的肾段解剖结构的位置关系，肾透明标本的制作就能弥补上述不足，也为肾段应用于基础研究和手术治疗提供了依据。

本文通过改良的方法制作出人体肾透明标本，为研究与教学提供了基础，
现将相关制作方法报告如下。

１　材料与方法１．１　取材及化学药品
选取长沙医学院形态实验室人体新鲜肾标本２只；２０ｍＬ注射器、手术线、乳胶管、手术剪、止血钳、手术镊、研钵。

试剂：固定液５％福尔马林，漂白液５％～８％过氧化氢溶液，脱水剂酒精溶液（浓度为５０％、７０％、９０％、９５％），透明剂苯或二甲苯溶液、冬青油，填充剂义齿基托树脂Ⅱ型（牙托粉）、义齿基托树脂Ⅰ
型（牙托水）、邻苯二甲酸二丁酯和蓝、粉红色染料。

１．２　方法１．２．１　填充剂的配制 按牙托粉（ｇ）∶牙脱水（ｍＬ）∶邻苯二甲酸（ｇ）＝１∶１∶０．４的比率，再加入染料，分别配置蓝（肾静脉）、红（肾动脉）、白（肾盂）３种颜色填充剂。

用玻璃棒调匀，充分溶解后备用。

１．２．２　排血 将肾浸于５０～６０℃生理盐水中，用针管抽吸血管内残血，然后轻轻挤压使血液自血管断端流出，反复进行，至肾表面颜色苍白，且不再有血液
流出为止［
５］。

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１．２．３　制作插管 插管是灌注成败的关键之一，可以说该标本只要插管和结扎成功了，就等于任务完成了一半。

插管时选用合适的过渡管来连接肾血管和乳胶管，使用直接结扎法扎牢，避免在灌注过程中溢漏或滑脱。

１．２．４　血管注射 将配置好的填充剂吸入２０ｍＬ注射器，肾静脉插管注入蓝色填充剂，肾动脉管注入粉红色填充剂，肾盂注入白色的填充剂，缓慢注入，不宜太多，开始快速推注，感到有阻力后，边推注边按摩肾，一般发现标本变硬即可停止注射。

１．２．５　固定 标本制作的好坏与固定有重要的关系，要求放入固定液之前应摆放好标本自然位置。

为了短时间内固定标本形状使其不易变型，建议用５％福尔马林固定。

１．２．６　漂白 用蒸馏水清洗经浸泡的肾，目的是为了去除固定液，然后置于５％～８％过氧化氢溶液中４～５ｄ进行漂白。

定期观察漂白液，如发现溶液浑浊需及时更换，以免影响漂白效果。

１．２．７　脱水 用蒸馏水清洗，除去残留的漂白液。

然后将肾逐级放入浓度为５
０％、７０％、９０％、９５％的酒精溶液，每级３ｄ，在脱水过程中时刻用酒精比重计测量酒精浓度，以保持酒精浓度恒定［６ ７］。

１．２．８　透明 经过脱水后，将标本放在空气中稍晾干，再将脱水标本放入苯或二甲苯溶液内２ｄ，温度控制在３５～４５℃，然后再将其移入冬青油内直到完全透明为止。

标本完全透明后，再换一次新的冬青油，作为永久保存液。

２　结果
将新鲜肾标本（图１）采用苯或二甲苯溶液和冬青油透明法制作的透明肾标本，既能清楚显示肾段、肾动静脉、分支数量及走行，又保证了肾柱、肾椎体、肾乳头等结构没有损伤及变化。

肾内部血管和外部解剖结构的位置关系清晰可见、色泽鲜艳、美观（图２）。

图１　
新鲜肾病理切面图
１：肾皮质；２：肾锥体；３：肾动脉；４：肾盂
图２　肾透明标本
３　讨论
透明标本制作原理是利用某些折光指数和器官组织的折光指数相同或相似的化学药品作为透明剂，使
透明剂渗透进器官组织中而达到透明的目的［
８ ９］。

随着透明肾标本制作技术的发展与现代高科技技术的紧密结合，透明标本不仅能分析和识别现代医学图像的形态学基础，而且还可以为疾病的介入放射治疗和外科手术治疗提供形态学依据，极大地方便了临床诊断和外科手术治疗，为肿瘤、血管疾病的介入治疗，肾段
切除高难度手术奠定了形态学基础［１０ １１］。

有学者在
探讨多层螺旋ＣＴ组合后处理技术评价肾段动脉的价值中提到使用多平面重建（ＭＰＲ）可以从任意层面、任意角度显示某一段肾段动脉图像，并且同时观察肾实
质内及其周围病变［１２ １３］。

虽然薄层ＭＰＲ应用减少了
肾皮质对血管的干扰，对肾段动脉细小血管分支显示得更加清晰，但是同样不能完整地显示其大体解剖结
构。

Ｘｉｎｇ等［１４］最早报道通过选择性肾段动脉阻断技
术获得肿瘤局部缺血，与传统完全阻断肾动脉术式相比，该方法能够最大限度减少热缺血时间，保护残肾功能。

但是在研究中发现存在血管阻断遗漏或是血管过度阻断的问题。

因此，在手术肾段的切除范围选择方面，准确掌握血管解剖特点及阻断目标血管十分重
要［１５ １６］。

祁洪刚等［１７］报道当前治疗肾细胞癌的首选
是肾癌根治手术，其次就是保留肾单位手术。

这是根据肿瘤大小、部位、基础病变情况及对侧肾功能来决定手术方法。

保留肾单位手术应该根据患者年龄、主观要求和期望、肿瘤对侧肾功能情况、肿瘤的大小和部位、术者熟练程度、所具备的医疗设备条件以及术中具
体情况谨慎进行。

因此，只有熟练掌握肾段的分界，才能达到在完整切除肿瘤的同时尽可能保留正常的肾组
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织的目的。

进行肾透明标本制作时，首先所取材料要新鲜且形态结构完整，以免灌注时填充剂溢出导致铸型缺失。

选好标本后对肾先进行血管铸型，然后对其透明，可在保留肾整体外形的基础上，清晰显示出其内在管道的分支、数量、走行。

郑楠等［５］在肝血管铸型透明标本制作方法中采用２％氢氧化钾和甘油透明法，来制作透明肝。

赵凤基等［１８］在喉软骨染色透明标本制作法中采用改进的染色透明显示法，清楚地显示出被喉肌和黏膜包埋的所有喉软骨。

他们认为标本通过磺化油处理，可以增进组织的渗透力，使透明效果更好。

本实验采用苯或二甲苯溶液和冬青油来透明标本，可以更有效提高标本透明度，提高实验成功率。

插管结扎时使用的过渡钢管要适中，长３～４ｃｍ，两端需要打磨，以免损坏血管，并连接一段合适的胶管，长５～６ｃｍ，保证灌注时有缓冲的空间，避免因手的抖动而捅破血管［１９ ２０］。

而且在整个灌注过程中，要切实掌握好标本的灌注量，要根据标本的不同来选择溶剂，灌注时要掌握好压力，不能硬往管道里挤压，以免将管道挤破影响标本的美观和成效［２１］。

通过以上操作制备的肾段透明标本，可在保留肾整体外形的基础上，充分展示出肾动、静脉血管的走行及肾段之间的界限。

随着透明肾标本制作技术的发展、与现代高科技技术的紧密结合，人体肾透明标本的设计与制作必定为临床提供一定的参考价值。

本方法存在的问题和改进的措施：牙托粉的气味刺激性大，影响实验人员操作，应提供良好的通风设备［２２］；制作过程中尽量做到一气呵成，切勿造成灌注不充分，肾段有断端的情况，最好是边灌注边轻轻按压；标本来源稀缺，缺乏大数据支持，应加大研究数量。

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（编辑：周小林）
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