维生素C压片糖果微生物限度检验方法适用性试验

品 的 检 验， 反 之 需 要 分 析 原 因， 调 整 方 法 进 一 步
（1）试验组。分别无菌称取维生素 C 压片糖果于
验证。
7.5% 氯化钠肉汤和 BPW 增菌液中，加入“1.7.1”制
控制菌方法试验通过加入一定量的标准菌株到 备的菌悬液，按照金黄色葡萄球菌、沙门氏菌国标
样液中，按照控制菌检测方法若检出试验菌，则该 检测方法进行试验，观察结果。
取冻存菌株金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌
的值与菌液对照组菌落数的比值应在 0.5 ～ 2 范围 复苏后，按要求制备成适宜菌悬液，备用。 内 [2]。 若 各 试 验 菌 的 回 收 试 验 均 符 合 要 求， 可 确 1.7.2 试验流程
认所用的供试液制备方法与计数方法适合该供试
分 3 组进行试验，观察结果。
63501 F3、 大 肠 埃 希 氏 菌 ATCC 25922 F2、 黑 曲 霉 菌落计数。经证实，实验根据阳性比例计算样品中
CMCC（F） 98003 F4、白色念珠菌沙门氏菌 ATCC 14208 F2。
（2）菌液组。取“1.6.1”制备的菌悬液加入无菌
到无菌培养皿中，每一稀释度 2 个平行培养皿，其 组未出现目标菌被抑制现象。
76 食品安全导刊 2021年12月 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
分析检测
菌种 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌
白色念珠菌 黑曲霉
大肠埃希氏菌
平板计数琼脂（PCA）、孟加拉红培养基（虎红）、 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）、煌绿乳糖胆盐肉 汤（BGLB）、缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌 绿增菌液基础（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、
作者简介：程琳琳（1983—），女，辽宁鞍山人，硕士，工程师。研究方向：微生物检验检测。
75 Dec. 2021 CHINA FOOD SAFETY Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
4/6
TNTC/TNTC 96/114 13/13
TNTC/TNTC 98/112 8/6
313/302
36/33
3/2
306/310
38/34
5/3
301/312
37/36
4/3
309/302
34/32
3/3
198/190
19/14
2/2
186/166
13/17
2/1
162/170
13/16
2/0
稀释液
生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液 生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液 生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液 生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液 生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液 生理盐水 10-1 样液 10-2 样液 10-3 样液
1.4 试验样品
培养皿中，测试试验菌的菌落数，培养温度及时间
维生素 C 压片糖果：批号 21F24ADH01。
与试验组一致。
1.5 试验原理
（3）供试品对照组。取“1.6.2”中各稀释级的样
计 数 方 法 试 验 是 通 过 加 入 一 定 数 量 级 的 标 准 品稀释液，测试样品本身菌落数，培养温度及时间
1.6.1 菌悬液制备
糖果于 7.5% 氯化钠肉汤和 BPW 增菌液中，按照国
取冻存菌株：将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 标方法进行检测，观察结果。
枯草芽孢杆菌、黑曲霉、白色念珠菌、大肠埃希氏
菌复苏后，制备成适宜浓度的菌悬液，备用。
2 结果与讨论
1.6.2 供试液制备
2.1 计数方法试验
无菌称取维生素 C 压片糖果 25 g，加入 225 mL
1 材料与方法
1.1 仪器与设备 GR85DR 型 高 压 蒸 汽 灭 菌 锅（ 厦 门 致 微）、
BSC-1000IIA2 型 生 物 安 全 柜（ 苏 净 安 泰 ）、 EB-250B 型生化培养箱（安胜科技）、KB240 型霉菌 培养箱（BINDER）、PRACTUM1102-1CN 型电子天 平（Sartorius）。 1.2 培养基与试剂
1.3 试验菌株
菌菌悬液的样品稀释液倾注孟加拉红培养基，置于
金 黄 色 葡 萄 球 菌 ATCC 6538 F3、 铜 绿 假 单 胞 28 ℃培养 5 d，菌落计数。加入大肠埃希氏菌菌悬液
菌 CMCC（B） 10104 F3、枯草芽孢杆菌 CMCC（B） 的样品稀释液倾注 VRBA 琼脂，置于 36 ℃培养 24 h，
9 mL，备用。
2.2 控制菌方法试验
1.6.3 试验流程
由表 2 可知，维生素 C 压片糖果按照国标方法
分 3 组进行试验，计算回收率。
检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌时，试验组与菌液
（1）试验组。分别取 1 mL“1.6.1”制备的菌悬液 组均检出金黄色葡萄球菌和鼠伤沙门氏菌，样品对
加入到各稀释级供试液中，混匀后，分别接种 1 mL 照组未检出金黄色葡萄球菌和鼠伤沙门氏菌，试验
表 1 计数方法试验结果
10-6
10-7
10-8
TNTC/TNTC 140/145 13/21
TNTC/TNTC 148/144 10/22
TNTC/TNTC 128/164 11/15
TNTC/TNTC 132/139 15/25
TNTC/TNTC 87/102 6/7
TNTC/TNTC 56/49
分析检测
维生素 C 压片糖果微生物限度检验方法适用性试验
程琳琳，吕焕鹏，黄美山，郭 杨
（无限极（营口）有限公司，辽宁营口 115010）
摘 要： 目 的： 验 证 维 生 素 C 压 片 糖 果 的 微 生 物 限 度 检 验 方 法。 方 法： 按 GB 4789.2—2016、 GB 4789.15—2016、GB 4789.3—2016（第二法）、GB 4789.10—2016 和 GB 4789.4—2016 方法，人为添加 目标微生物，分别进行菌落总数、霉菌和酵母、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌试验。结果：样品经 pH 调节后基本无抑菌性，计数试验回收比值均在 0.5 ～ 2 范围内，控制菌试验组均未检出金黄色葡萄球菌和 沙门氏菌。结论：上述方法适用该产品的微生物限度检验，结果有效可行。
160/178
22/16
2/2
TNTC/TNTC 65/69
9/7
TNTC/TNTC 62/68
9/8
TNTC/TNTC 72/64
9/9
TNTC/TNTC 63/70
7/7
118/122
11/9
1/0
108/102
14/10
2/0
126/109
11/13
1/1
103/134
12/9
0/1
供试品对照 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0
分析检测
木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂、亚硫酸铋（BS）琼 中，加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢
脂、7.5% 氯化钠肉汤、Baird-Parker 琼脂平板、血琼 杆菌菌悬液的样品稀释液倾注平板计数琼脂，置于
脂平板（广东环凯微生物科技有限公司）。
36 ℃培养 48 h，菌落计数。加入黑曲霉、白色念珠
结果
1.4×109 1.5×109 1.5×109 1.4×109 9.5×108 5.3×108 1.1×109 1.1×109 3.5×107 3.6×107 3.7×107 3.3×107 1.7×108 1.5×108 1.5×108 1.9×108 6.7×106 6.5×106 6.8×106 6.7×106 1.2×108 1.1×108 1.2×108 1.2×108
(Infinitus (YingKou) Co., Ltd., YingKou 115010, China)
Abstract: Objective: To verify the microbial limit test method of vitamin C pressed candy. Method: According to GB 4789.2—2016,GB 4789.15—2016,GB 4789.3—2016（the second method）,GB 4789.10—2016 and GB 4789.4—2016, artificially add target microorganisms, and respectively test the aerobic plate count, moulds and yeasts, coliforms, Staphylococcus aureus and Salmonella. Results: The samples were basically non-bacterial after pH adjustment, and the recovery ratios of the counting test were all in the range of 0.5 ～ 2. The control bacteria test group did not detect Staphylococcus aureus and Salmonella. Conclusion: The above method is applicable to the microbial limit test of the product, and the results are effective and feasible.
关键词：维生素 C 压片糖果；微生物限度检验方法；方法适用性试验
Applicability Test of Microbial Limit Test Method for Vitamin C Tableted Candy
CHENG Linlin, LV Huanpeng, HUANG Meishan, GUO Yang
由表 1 可知，经 pH 调节后，维生素 C 压片糖果
0.85% 无 菌 生 理 盐 水 稀 释 液 中 完 全 溶 解 后， 加 入 10 mL 1 mol/L NaOH 混匀，得到 10-1 样液；同法制 备 10-2、10-3 稀释度样液，分装灭菌小试管中，每管
不同稀释度供试品对铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、大肠埃希 氏菌基本没有抑制，回收比值均在 0.5 ～ 2 范围内。
产品可按此控制菌检测方法进行检测；若未检出试
（2）菌液组。直接取“1.7.1”制备的菌悬液加入
验菌，则应选择适宜的方法消除样品的抑菌性，并 7.5% 氯化钠肉汤和 BPW 增菌液中培养，按照国标
对方法重新验证。
方法进行检测，观察结果。
1.6 计数方法试验
（3）供试品对照组。分别无菌称取维生素 C 压片
菌 株 到 样 品 系 列 稀 释 液 中， 按 照 检 验 流 程 进 行 检 与试验组一致。
测，计算回收率，参考 2020 版《中国药典》中 1105 1.7 控制菌方法试验
《 非 无 菌 产 品 微 生 物 限 度 检 查： 微 生 物 计 数 法》 1.7.1 菌悬液制备
的 要 求， 试 验 组 菌 落 数 减 去 供 试 品 对 照 组 菌 落 数
Keywords: vitamin C pressed candy; microbial limit test method; method suitability test
维 生 素 C 压 片 糖 果， 精 选 6 大 植 物 成 分， 富 含天然维生素 C（主要来源于针叶樱桃和刺梨）， 是一款具有莓果风味的预包装片剂类食品。CNASCL01-A001：2018《 检 测 和 校 准 实 验 室 能 力 认 可 准 则 在 微 生 物 检 测 领 域 的 应 用 说 明》7.2.1.5 中 有 明 确 规 定， 标 准 方 法 在 引 入 检 测 之 前， 实 验 室 应 证 实 能 够 正 确 地 运 用 这 些 方 法。 在 进 行 方 法 证 实 时， 样 品 的 选 择 最 好 采 用 自 然 污 染 样 品 或 人 为 添 加目标微生物的样品进行方法证实试验 [1]。本文人 为 加 入 标 准 菌 株， 计 数 方 法 试 验 通 过 计 算 回 收 率 比值；控制菌方法试验，通过定性检测目标菌的方 式，验证维生素 C 压片糖果适宜的微生物限度检验 方法。