免疫组化总结(猪羊)
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析在免疫组化实验中，结果分析是一个关键的步骤，它能够帮助研究者准确评估目标分子的表达情况。
通过对免疫组织染色结果的观察和分析，我们可以了解到免疫反应的程度和位置，从而为研究提供有力的依据和指导。
本文将围绕免疫组化实验结果的分析展开讨论。
1. 实验结果描述在开始分析之前，首先要对实验结果进行描述。
描述应当包括样本编号、实验日期、染色报告等基本信息，并对结果进行文字描述，如颜色的强度、分布情况、阳性细胞数量等。
此外，还可以结合图像或照片进行结果展示，以便更直观地表达实验结果。
2. 染色结果的分析根据染色结果的颜色强度和阳性细胞的分布情况，可以分析免疫反应的程度和位置。
通常，颜色较深且阳性细胞较多的区域表示目标分子的高表达区域，而颜色较浅或无阳性细胞的区域则表示其低表达或无表达区域。
通过对颜色和阳性细胞数量的定量分析，可以量化目标分子的表达水平，并与其他样本进行比较和分类。
3. 阳性细胞计数和分布情况在免疫组化实验中，阳性细胞的计数和分布情况是结果分析的重要指标之一。
通过对染色结果图像的定量分析，可以计算出阳性细胞的数量，并使用统计学方法对不同样本之间的差异进行比较和验证。
此外，还可以通过细胞计数的分析，了解阳性细胞在组织中的分布情况，从而为目标分子的功能和作用机制提供线索。
4. 结果的统计学分析除了定性和定量分析，还可以使用统计学的方法对结果进行进一步的分析。
例如，可以计算平均值、标准差和标准误等统计指标，并进行方差分析和t检验等统计检验，以评估不同样本之间的显著性差异。
此外，还可以使用聚类分析、主成分分析等多元分析方法，对大规模的实验结果进行系统整理和分类。
5. 结果的生物学意义和临床应用最后，要将实验结果的分析归纳到生物学意义和临床应用上。
通过对目标分子的表达情况进行分析，可以了解其在生理和病理过程中的功能和作用机制，进而为相关疾病的预防、诊断和治疗提供新的线索和靶点。
此外，还可以将实验结果的分析与其他实验数据进行综合，构建更完整和准确的分子机制模型。
实验结果免疫组化结果解读
实验结果免疫组化结果解读
免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种用于检测组织中特定蛋白质表达的技术。
通过对组织切片进行染色，可以观察到特定蛋白在组织中的分布和表达水平。
在解读免疫组化结果时，需要考虑以下几个方面：
1. 样本准备，首先需要确认样本的质量和处理是否符合实验要求。
样本的保存和处理对免疫组化结果至关重要，因为不恰当的处理可能会导致蛋白质的降解或者失活，影响最终的结果。
2. 阳性对照，在解读免疫组化结果时，需要对照阳性对照组织切片，确保实验条件和试剂的有效性。
阳性对照通常是已知含有目标蛋白的组织切片，用于验证实验条件和试剂的有效性。
3. 组织结构，观察组织切片的整体结构和形态，确保实验过程中组织的完整性和准确性。
免疫组化结果需要在正确的组织结构基础上进行解读，以排除可能的伪阳性或伪阴性结果。
4. 染色结果，观察组织切片的染色结果，包括颜色强度、分布和细胞定位。
根据染色结果的强弱和分布情况，可以初步判断目标
蛋白在组织中的表达水平和分布情况。
5. 数据分析，将染色结果进行定量分析，通常使用图像分析系统或者手动计数的方式进行。
通过定量分析可以得到目标蛋白的表达水平，进一步验证免疫组化结果的可靠性和准确性。
6. 结果解读，根据样本准备、阳性对照、组织结构、染色结果和数据分析，对免疫组化结果进行综合解读。
需要考虑目标蛋白在组织中的表达水平和分布情况，结合实验条件和其他实验结果进行综合分析。
综上所述，解读免疫组化结果需要综合考虑多个因素，包括样本准备、阳性对照、组织结构、染色结果、数据分析和综合解读，以确保结果的准确性和可靠性。
猪自然感染PRRSV后组织学及免疫组化变化
猪自然感染ＰＲＲＳＶ后组织学及免疫组化变化
Ｔｕａｎｇｔｈｏｎｇ Ｐａｔｃｈｉｍａｓｉｒｉ
引言
泰国１９８６血清学检测到有ＰＲＲＳＶ，１９９６年首次分离出
ＰＲＲＳＶ病毒。
ＰＲＲＳＶ是正链ＲＮＡ病毒属于动脉炎病毒属。
该属病毒包括小鼠促乳酸脱氢酶病毒、马动脉炎病毒、和猴
出血热病毒２。
该病导致的繁殖障碍、易于继发其他疾病，
给养猪业带来巨大的经济损失，很多国家都在试图控制和消
除该疾病。
然而该病毒易于通过直接接触传播和配种传播，
导致该病仍然流行。
本文报道在泰国中部的猪场，８头猪自
然感染ＰＲＲＳＶ ＵＳ株后组织学和免疫免疫组化的变化。
黄亚平。
免疫组化抗体选择
免疫组化抗体选择免疫组化是一种广泛应用于生物医学研究的技术，可以利用特异性抗体对组织或细胞中的分子进行定位和分析。
在实际操作中，选择合适的抗体是至关重要的，因为抗体选择的正确性决定了实验结果的准确性和可信度。
本文将对免疫组化抗体选择的相关内容进行介绍。
一、抗体来源在抗体选择中，首先要确定抗体的来源。
常见的抗体来源有动物、人类和单克隆抗体等。
1.动物抗体：常用的动物抗体包括兔、小鼠、大鼠、绵羊、猪等。
其中，小鼠和兔的抗体较为常用。
小鼠抗体制备相对容易，价格较便宜，但存在交叉反应和不同克隆间的差异等问题；兔抗体的特异性较高，但价格相对较高，且易产生非特异性的背景信号。
2.人类抗体：人类抗体的来源可以是人体免疫细胞库、人类B淋巴细胞杂交瘤等。
人类抗体具有高度的特异性和亲和性，且不存在动物来源抗体引起的交叉反应等问题，但价格较高。
3.单克隆抗体：单克隆抗体是指来自同一种克隆细胞的抗体。
与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的特异性和更好的重复性，但价格较高，且制备过程复杂。
二、抗原选择抗体的特异性是由其结合的抗原决定的，因此选择合适的抗原对于获得特异性抗体是至关重要的。
1.天然蛋白：天然蛋白是最常见的抗原形式之一。
其中，重组蛋白是一种受欢迎的选择，因为其可以通过工程技术来优化其受体结合性能。
2.肽段：肽段也是常用的抗原，其具有较低的价格和良好的重复性。
通常，选择相应的肽段以覆盖目标蛋白质中的所需区域，从而提高抗原的特异性。
3.人工合成分子：人工合成分子可以通过选择特定的化合物或糖类等，以获得与目标分子不同的抗原。
这种抗原的优点在于其纯度高、具有良好的重复性以及可控性高。
三、特异性测试在选择抗体之前，需要进行一系列的测试来确定其特异性和亲和力。
1. Western Blot: Western blot是一种常见的蛋白质检测方法，可以用于检测抗体对蛋白质的特异性，同时检测蛋白质是否纯化以及蛋白质的大小。
在选择抗体时，可以将其与不同表达蛋白质的细胞系一起进行Western blot测试，以确定其特异性。
免疫组化实验结果分析
免疫组化实验结果分析免疫组化实验是一种常用于检测细胞或组织中特定蛋白质表达的方法，通过特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过染色反应来显示该蛋白质的位置和表达水平。
免疫组化实验可以提供关于细胞功能、病理状态以及疾病预后的重要信息。
本文将分析免疫组化实验的结果，探讨其中的数据和意义。
1. 实验设计免疫组化实验的可靠性和准确性受实验设计的影响。
在进行实验时，应考虑以下因素：合适的抗体选择、适当的试样处理和固定、充足的阳性和阴性对照以及恰当的染色方法。
实验设计的合理性对于准确解读实验结果至关重要。
2. 观察结果观察免疫组化实验结果时，需要关注以下几方面内容：2.1. 细胞定位根据实验的目标，观察目标蛋白质的定位情况。
目标蛋白质的定位可出现在胞质、核或细胞膜等位置。
定位的结果有助于了解目标蛋白质在细胞内的功能和调控机制。
2.2. 过程表达和相对强度通过免疫组化实验可以对目标蛋白质的表达水平进行初步评估。
观察染色结果的颜色强度，并与阳性和阴性对照进行比较，可以初步了解目标蛋白质的相对表达水平。
2.3. 阳性细胞/组织的百分比在观察免疫组化实验结果时，通常会评估阳性细胞/组织的百分比。
例如，在肿瘤样本中，阳性细胞的百分比可以反映肿瘤中目标蛋白质的表达水平。
3. 数据分析对于免疫组化实验结果的数据分析，可以采用以下方法：3.1. 图像分析软件利用图像分析软件对染色图像进行处理和分析，可以提高数据的准确性和可靠性。
图像分析软件可以从定量和定性方面评估目标蛋白质的表达水平，并产生可视化的统计结果。
3.2. 数据统计与图表展示对实验结果进行统计学分析，如计算平均表达水平、标准差和显著性差异等。
将结果用表格或图表形式展示，可以更直观地了解实验数据的分布和变化趋势。
3.3. 结果解读与比较将实验结果与基准值、对照组或其他相关实验进行比较，进一步解读结果中的意义。
通过比较不同样本之间的差异，可以揭示目标蛋白质在生理和病理过程中的作用和变化。
免疫组化总结
免疫组化总结免疫组化定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学( immunohistochemistry )技术或免疫细胞化学( immunocytochemistry )技术。
原理免疫组织化学染色方法的原理抗原( antigen)1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质(抗体和效应细胞)在体内或体外发生特异性结合反应的物质。
抗原具有两种性能：(1)免疫原性(immunogenicity)指抗原分子具有诱导机体产生免疫应答的特性。
(2)反应原性(reactogenicity)指抗原分子与抗体或效应T细胞等免疫应答产物发生特异性反应的特性。
2. 抗原的分类 -- 完全抗原、半抗原免疫学分类胸腺依赖抗原与非依赖抗原外源性抗原：微生物、花粉等内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿瘤相关抗原等临床分类同种异型抗原：人类白细胞抗原、血型抗原异嗜性抗原：人与其他动物、植物等之间存在的共同抗原抗体( antibody)1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B 淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白，称为抗体。
大部分抗体电泳后位于丫区带，1972年国际免疫学联合会正式将化学结构相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白(immunoglobin，Ig)。
2. 抗体的种类：五类，即IgA、IgD、IgE、IgG、IgM。
免疫组织化学染色技术中，使用的抗体主要是IgG,个别情况下使用IgG的亚型，多为lgG1。
免疫组织化学染色的反应原理染色反应的最基本原理是抗原抗体的反应。
通过对针对标本中相应抗原的抗体上标记某种发色剂或酶类，再通过激发发色剂或使用某种显色剂，在显微镜下使标本中抗原抗体反应的部位产生肉眼可观察到的颜色以确定所要检测的抗原是否存在。
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结1、方法操作不难，最大得难处就是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样您才敢大胆地改革先前得不对得方法步骤。
如抗体孵育条件主要就是抗体浓度、温度、时间,这三者一般就是相互成反比得（相对)，其中浓度就是最重要得先决条件,温度决定反应得速度、时间决定反应得量。
就拿温度来说,可以有4度、室温、37度,我推荐4度最佳,反应最温与,背景较浅；而3７度反应速度较快，时间较短;室温我不太提倡,除非您每次都把环境温度控制在一定得范围,否则,尽量选择前两者。
２、免疫组化最大得优势就是定位与定性。
相比于其她蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，就是定位检测分析首选方法。
尤其对于有些因子得转位研究十分有用。
3、免疫组化结果定量分析得前提就是高质量得染色切片.免疫组化结果也能定量分析,但必须就是背景染色浅而特异性染色较深得情况下，分析最为准确,这种原则可能也就是我们日常审稿时判定研究结果得必备条件。
４、免疫组化实验一定要设置阳性对照与阴性对照。
阳性对照一般就是用肯定表达这种抗原得切片来做；阴性对照一般就是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。
前者就是排除方法与实验系统有无问题;后者就是排除有无一抗外得非特异性染色。
５、免疫组化得应用广泛,就是当前实验研究得最重要方法之一。
如今发ＳCI论文时,明显感觉仅靠量化得数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎，可能就是怕您学术造假吧。
当然也不能做假阳性或假阴性结果。
6、免疫组化技术掌握与否得鉴定标准就是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良得染色切片。
我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟得反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质得切片与同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗得种属来源都拿错了。
免疫组化经验总结
免疫组化经验总结冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么？1、从一抗的选择方面来看。
有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
2、从研究目的来看。
石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
3、从抗原的保真性来看。
冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
4、从操作步骤的繁琐程度看。
染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
如何避免荧光素提前衰退？1、从荧光标记的二抗孵育开始、二抗孵育后的清洗、保存均要进行避光；2、选择质量好的荧光素标记的二抗：亲和力强且衰退时间延长；3、用含有抗荧光萃灭的封片液来封片；4、拍照时尽量缩短激发光对切片的照射时间，最好在暗场环境；5、保存要用指甲油封固后4度避光保存。
6、荧光素标记的二抗浓缩液一定要避光保存：没加石蜡，最后-70度以下低温保存；若加了石蜡油，则-20度保存即可。
普通荧光显微镜的操作指南和注意事项？1、操作指南：（1）关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯。
为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到15-30分钟的请在15-30分钟后关闭汞灯。
免疫组化经验总结
免疫组化经验总结做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。
我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。
经过一段时间的浏览和学习，从一些在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享下。
以免疫组化实验为例来详述。
从我接触的很多本科生和研究生中发现，他们的确是免疫组化“新手”，他们只注重如何做和最终的结果，但对为什么这样做不太感兴趣。
他们常按照网上所说的方法，摸索好的抗体浓度和条件后做出很漂亮的染色结果后，他们就认为自己已经掌握了免疫组化方法了，结果不求上进，更换一种新抗体后或实验出现异常结果后就很难做出来了。
当然，免疫组化对于我来说，做过很多，但也不能说什么都会，只不过我做的多了，失败多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的诀窍，拿来与大家进行分享。
此外，我个人经验不可能面面俱到，还需要更多有经验的高手一起分享、纠正和补充。
在这里，我需要感谢中华病理网、丁香通、小木虫论坛给我很大的帮助，还有上海舜田生物技术人员花老师给我实验很多指导和帮助，让我受益匪浅。
免疫组化个人感悟：1、其实免疫组化，我个人感觉方法和操作都不是很难，关键是结果出现异常时该如何去解决？我认为首先需要掌握好免疫组化实验的原理，知道每一个操作步骤的目的，这样你才能大胆地去改革和纠正一些错误的步骤，如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。
比如温度有4℃、室温、37℃。
我推荐4℃最佳，反应最温和，背景较浅；而37℃反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。
免疫组化年终总结
免疫组化年终总结在过去的一年中，我们的免疫组化实验室取得了许多令人骄傲的成就和进展。
以下是我们的年终总结：1. 实验方法和技术提升：我们不断努力改进实验室的技术和方法，以确保获得准确可靠的结果。
我们引入了新的抗体和染色剂，优化了染色程序，并且进行了严格的品质控制，以确保实验的有效性和准确性。
2. 创新实验设计：我们积极探索新的实验设计和方法，以应对各种挑战和需求。
我们成功地开展了多重免疫组化染色，进行了细胞定位和表达水平的研究，并尝试了新的标记技术和分析方法。
3. 多学科合作：我们与其他实验室和研究小组展开了广泛的合作，促进了知识的共享和交流。
我们与病理学、分子生物学和临床医学的专家密切合作，共同探索免疫组化在疾病诊断和治疗中的潜力。
4. 科研成果发表：我们的实验室成员积极投稿并成功发表了多篇研究论文，向学术界和科研社区分享了我们的研究成果。
这些成果得到了同行的认可，并为免疫组化领域的进一步研究提供了有价值的参考。
5. 培训和教育：我们注重培训和教育，提高实验室成员的技术水平和科研素养。
我们定期组织内部培训和学术讲座，并积极参与国内外的学术交流会议和研讨会，提升实验室的学术声誉和影响力。
6. 设备更新和维护：我们及时更新和维护实验室的设备，确保实验能够顺利进行。
我们定期检查和校准设备，保持其良好的工作状态，并提供必要的维修和保养服务，以提高实验效率和结果质量。
7. 团队合作和沟通：我们注重团队合作和良好的沟通。
实验室成员之间相互协作，共同解决问题和挑战。
我们定期组织实验室会议和讨论，分享实验经验和技术进展，加强团队的凝聚力和合作精神。
通过这些努力和成就，我们的免疫组化实验室在过去一年中取得了显著的进展，为疾病诊断和治疗领域的研究做出了重要贡献。
我们将继续致力于免疫组化的研究和应用，为人类健康事业做出更大的贡献。
资料：免疫组化成功的经验和失败的教训汇总
提醒0» »窗体顶端版内版内全站搜索窗体底端1...【原创】免疫组化成功的经验和失败的教训汇总 [精华]丁香园版主2007-09-22 10:37 分享分享到哪里？本人最近已做石蜡切片的免疫组化多次，多是成功的，但也遇到许多预想不到的结果和现象，现汇总问题如下，望高手们参与讨论，给出正确的、完整的、权威答案。
同时也希望大家补充问题，共同交流经验、体会、感悟。
1. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？2. DAB显色后发现切片着色不均匀：如一片着色，一片不着色或染色浅？3. 免疫组化结果老是出现阴性结果？4. 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？5. 一抗从4度拿出后，为什么有人说要37度复温，目的是什么？6. 免疫组化中抗原修复的最佳条件是什么？尤其是微波修复。
7. 有人在一抗孵育前用tritonX100来通透细胞，对石蜡切片需要否？8. 苏木素复染的时间应该是多少？复染过度咋办？9. 抗原修复应在灭活POD之前还是之后？10. DAB显色时间到底多少为最佳？一定要是3~10分钟吗？11. DAB呈色后到底什么样染色是特异性染色？。
相关链接：【整理】免疫组化技术资料大全（原理、步骤、注意事项、教程及常见问题解答）【整理】免疫荧光组织（细胞）化学和免疫胶体金技术大全（原理、试剂和器材、操作流程、常见问题及其解决方法）【原创】免疫组化技术常见问题及其解答集锦票数论文版历年精品荟萃wh2008 edited on 2008-07-20 19:26 •2007-09-22 10:56 分享分享到哪里？丁香园版主针对问题2着色不均匀：1. 脱蜡不充分。
可以60度烤20min，立即放入新鲜的xylene1－2；2. 水化不全。
应经常配制新鲜的梯度乙醇；3. 抗体没混匀。
用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂；4. 抗体孵育时，切片放倾斜；5. 抗体孵育后PBS冲洗不充分。
6. 制片厚薄不均匀等问题。
母猪免疫工作总结
母猪免疫工作总结
母猪的免疫工作对于猪群的健康和生产具有至关重要的作用。
在现代养猪业中，如何有效地管理母猪的免疫工作成为了养殖户们关注的重点之一。
在这篇文章中，我们将总结母猪免疫工作的重要性以及一些有效的管理方法。
首先，母猪的免疫工作对于猪群的健康至关重要。
母猪的免疫系统直接影响着
猪群的抵抗力和疾病防控能力。
一个健康的母猪能够产生健康的猪仔，从而保证了猪群的生产性能和经济效益。
其次，有效的管理方法是确保母猪免疫工作成功的关键。
定期进行免疫接种是
保证母猪健康的重要手段。
养殖户们应该根据当地的疫情情况和养殖环境制定合理的免疫接种计划，确保母猪获得足够的免疫保护。
此外，科学的饲养管理也是至关重要的。
母猪的饲养环境应该保持清洁卫生，饲料应该营养均衡，确保母猪获得充足的营养，从而提高其免疫力。
最后，母猪的免疫工作需要全员参与。
养殖户们应该加强员工的培训，提高他
们对母猪免疫工作的重视和管理水平。
只有全员参与，才能够确保母猪的免疫工作得到有效的执行和管理。
总之，母猪的免疫工作对于猪群的健康和生产至关重要。
养殖户们应该重视母
猪的免疫工作，制定合理的管理方法，确保母猪获得充分的免疫保护。
只有这样，才能够保证猪群的健康和生产效益。
母猪免疫工作总结
母猪免疫工作总结
母猪的免疫工作对于其健康和生产力起着至关重要的作用。
在养猪业中，保障
母猪的免疫健康是非常重要的，因为它直接影响着猪群的健康和生产效率。
在这篇文章中，我们将总结母猪免疫工作的重要性以及一些有效的免疫管理措施。
首先，母猪的免疫工作对于其自身的健康和生产力至关重要。
良好的免疫系统
可以帮助母猪抵抗各种疾病和病原体的侵袭，从而保证其健康和生长发育。
同时，免疫系统也对母猪的生殖健康起着重要的作用，可以保证母猪的生殖系统正常运作，提高母猪的生产效率。
其次，有效的免疫管理措施可以帮助提高母猪的免疫健康。
定期对母猪进行疫
苗接种是非常重要的，可以帮助提高其免疫力，预防各种疾病的发生。
此外，保持母猪的生活环境清洁卫生，定期进行消毒和杀菌也是非常重要的，可以减少病原体的传播，保证母猪的免疫健康。
最后，定期进行健康检查和疾病监测也是非常重要的。
及时发现并治疗母猪的
疾病可以帮助提高其免疫健康，保证其生产效率。
同时，定期进行疾病监测可以帮助发现潜在的疾病威胁，及时采取措施预防疫情的发生。
综上所述，母猪的免疫工作对于其健康和生产力至关重要。
通过有效的免疫管
理措施和定期的健康检查，可以帮助提高母猪的免疫健康，保证猪群的健康和生产效率。
希望养猪业者能够重视母猪的免疫工作，从而提高养猪业的发展水平。
免疫组化实验报告
免疫组化实验报告实验目的：探究免疫组化技术在细胞和组织中的应用，以了解其在生物学和医学研究中的重要性和价值。
实验原理：免疫组化是一种常用的实验技术，通过免疫反应和荧光染色等手段，能够识别出特定的抗原或蛋白质分子。
主要原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合，实现对抗原分子进行检测和定位。
实验步骤：1. 样本处理：准备好待测的细胞或组织样本，并进行固定处理。
2. 抗体选择：根据待测抗原的特异性，选择与之匹配的特异性抗体。
3. 抗体染色：将抗体与待测样本进行孵育反应，使抗体与目标抗原结合。
4. 信号显示：利用荧光或酶标记的二抗，对抗原-抗体复合物进行信号放大和可视化。
5. 显微镜观察：将处理后的样本放置在显微镜下观察，记录并分析结果。
实验结果：经过免疫组化实验，我们得到了如下结果：1. 免疫染色显示出目标抗原在细胞或组织中的存在与分布情况。
2. 通过显微镜观察，我们可以定量测定待测抗原的表达水平和定位情况。
实验讨论：本次免疫组化实验结果表明，该技术能够可靠地检测和定位特定的抗原或蛋白质分子。
通过将抗体与待测样本发生特异性结合，荧光或酶标记的二抗能够将抗原分子放大并可视化，从而实现了对细胞和组织中蛋白质的定位和检测。
此外，免疫组化技术的应用范围广泛，可用于细胞生物学、病理学和药物研究等领域。
例如，在肿瘤学研究中，免疫组化可以用于检测肿瘤标志物的表达情况，以及研究肿瘤细胞内相关信号通路的变化。
此外，在神经学研究中，免疫组化也可以用于观察神经元的连接和突触传递等过程。
总结：免疫组化技术作为一种重要的实验手段，能够准确地检测、定位和可视化特定的抗原和蛋白质分子。
通过该技术，我们可以深入研究细胞和组织的功能和结构，以及相关疾病的发生机制。
相信在未来的研究中，免疫组化技术将继续发挥重要作用，并为生物学和医学领域的发展做出更大的贡献。
免疫组化总结(猪羊)
免疫组化阶段总结一实验所用试剂配方：1 苦味酸饱和液的配制：1 缓冲液：1×TBS:6.06g TRIS,8.5g NaCL，先加超纯水溶解（约800ml）然后使用pH计调节pH至7.4，定容至1L。
2 抗原修复液：根据Sigma抗体说明书配制。
1×柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/l）：二水柠檬酸三钠2.941g；0.292g EDTA 加超纯水溶解（约800ml），调节pH至6.0，定容至1L。
1×Tris/EDTA：4.84g Tris,3.72g EDTA,加超纯水溶解（约800ml）调pH至9.0, 定容至1L（先加较多NaOH）。
3 细胞通透液：使用超纯水配制0.5﹪Tritonx-100，在100ml 超纯水中加入0.5ml Tritonx-100后轻轻搅拌，尽量不要产生气泡，直至溶解完全方可使用。
4 封闭血清：根据二抗来源选择封闭血清，一般血清来源于二抗来源形同。
血清浓度为10％,TBS配制，或者使用3﹪BSA配制10﹪封闭血清。
5 抗体稀释液：使用TBS配制3﹪BSA。
6 3﹪H2O2：30﹪H2O2，超纯水配制。
7 DAB显色液（试剂盒）配制：1mlTBS中加50mlA液，50mlB 液，充分混匀。
8 荧光二抗的配制：Alexa Flour488、594规格为2mg/ml,说明书建议使用浓度在2ug/ml-10ug/ml之间，所以建议稀释200-1000倍，本实验所使用浓度为5ug/ml，即稀释400倍。
二组织采集与处理材料：取不同时间点猪的睾丸组织观察精原干细胞的表达，新生小猪，3-5月龄,成年猪。
采集适龄猪睾丸组织，置于PBS中带回实验室，用PBS清洗若干次，将睾丸白膜去除，组织切成适宜大小，用苦味酸固定过夜，次日进行清洗（PBS）3-4次，每次30min,然后用70％酒精清洗3次，每次30min，储存于70％酒精备用。
包埋：80％酒精--90％酒精—100％Ⅰ酒精--100％Ⅱ酒精各30 min，无水乙醇：二甲苯1:1 2h，二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ依照所取组织大小确定处理时间，二甲苯：石蜡1:1 2h,石蜡Ⅰ1h,石蜡Ⅱ2h，包埋。
免疫组化总结
第一章绪论组织化学（histochemistry）也称细胞化学(cytochemistry),是运用物理学、化学、免疫学、分子生物学等原理与技术，对组织与细胞的化学成分或酶活性进行定性、定位和定量研究的科学。
第一节组织化学发展的基础扫描隧道显微镜原理：扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM）由Binnig 等1981年发明，根据量子力学原理中的隧道效应而设计。
当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV－2V），针尖与样品之间产生隧道效应而有电子逸出，形成隧道电流。
特点：扫描隧道显微镜的分辨率很高，横向为0.1－0.2nm，纵向可达0.001nm。
它的优点是三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察，而普通电镜只能观察制作好的固体标本。
应用：利用扫描隧道显微镜直接观察生物大分子，如DNA、RNA和蛋白质等分子的原子布阵，和某些生物结构，如生物膜、细胞壁等的原子排列。
使放大倍数可达数千万倍。
第三节组织化学技术基本要求一、组织化学的分支和分类:目前组织化学从细胞、亚细胞和分子三个水平，从定性、定位和定量三个层次，利用物理、化学、免疫学和分子生物学原理，揭示着组织和细胞的化学本质。
根据显示原理，组织化学技术大致可分为以下几种类型：①化学方法：根据化学反应原理。
在组织切片上生成沉淀以表示其定性定位的存在。
绝大部分的组织化学方法都属于此类。
如磷酸酶等。
②类化学方法：如Best胭脂红显示糖原；Mayer姻脂红显示糖蛋白。
虽然染色反应有特异性，但机制尚未完全阐明。
③物理学方法：荧光分析法、组织吸收光谱法、X 射线显微分析法、放射自显影技术、图像分析、电镜细胞化学、能谱分析等。
④显微烧灰法：对组织中无机物质和微量元素的测定。
⑤免疫学方法：利用免疫学原理与其技术研究细胞的化学成分。
如免疫组织化学、免疫电镜等。
⑥分子生物学法：原位杂交组织化学技术等。
免疫组化（IHC）经验超全总结
免疫组化（IHC）经验超全总结做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。
我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。
经过一段时间的浏览和学习，在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享。
一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80oC的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到4μm左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
免疫组化实验技术自我总结
免疫组化技术自我总结一、实验步骤（SABC法）1．动物准备成年SD大鼠用1％戊巴比妥腹腔注射麻醉(剂量1ml/100g)。
2．取材、固定（以取脑组织为例）1) 将麻醉后的动物仰面固定，用水湿润毛皮，暴露心脏。
2) 用剪刀在左心室剪开一道小口，插入灌注针头至主动脉，用止血钳自心室钳紧。
3) 用37℃生理盐水灌注，剪开右心耳，至流出液体变清亮为止。
4) 立即注入Zamboni’s固定液300-400ml(灌注时先快后慢，约15分钟结束。
5) 灌注后剥离脑组织并修块后置于固定液中(6-18h)。
3．玻片处理（可直接购买包被好的防脱载玻片）新的载玻片和盖玻片须经清洁液浸泡12-14h，流水充分冲洗后，蒸馏水清洗5次，入95％乙醇2h以上，用精白布擦干，置切片盒内备用。
用前用硌钒明胶包被或者用0.01％多聚赖氨酸等均匀涂在载玻片上，贴片后入烘箱中烤1-2小时，取出置-20℃冰箱内储存。
4．制片切片前将标本移入30％蔗糖溶液中(用固定液配)，直到标本沉入瓶底。
在标本上滴上OCT，于-70℃快速冻5分钟，后放入-20℃冰冻切片机内50分钟后准备切片，切片后收集在固定液中或0.01M PBS 4℃保存备用，或贴于载玻片上。
5. 抗体特异性检测及阴性对照运用1：50、1：100、1：200、1：300、1：400、1：500的兔来源的一抗、1：200生物素标记的二抗以及SABC复合物进行免疫细胞化学实验。
一抗对照采用抗原吸收肽、0.01MPBS，二抗对照采用未用生物素标记的IgG以及0.01MPBS。
6．免疫组化1) 贴片或捞片经0.01M PBS漂洗5分钟×3次。
2) 0.3％H2O2，15分钟。
3) 滴加封闭用山羊血清或者0.3% Triton X-100 / 4% BSA封闭液37℃孵育30分钟。
4) 用滤纸吸去多余血清，滴加不同浓度一抗，37℃ 2小时，后入4℃冰箱过夜。
5) 0.01M PBS漂洗5分钟×3次。
免疫组化总结
免疫组化总结1、酶免疫组化的关键环节1）标本固定：固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存。
固定剂的选择一般用4%多聚甲醛，但睾丸组织、眼可能要选用Bouin’s 液或mDF 液效果较好。
2）脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。
否则，容易裂片和脱片等。
3）脱蜡和水化：这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。
脱蜡可以先60 度20min，然后立即二甲苯1-3 分别10min（这个时间是由二甲苯新鲜程度和室温等综合决定的），但当天制好的切片一般先60 度3-4h。
水化用梯度乙醇（由高到低）。
若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。
4）抗原修复：由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。
常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。
修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH 的等）。
我们实验室一般用微波修复中火6min*4 次，效果不错。
注意微波修复后自然冷却30min 左右（只要你觉得修复液的温度达室温即可）。
5）细胞通透：目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。
一般用Triton X-100、蛋白酶k 等通透液。
如Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
在免疫组织化学（>10um 厚切片）和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。
同时也是一种去污剂，一般在PBS 中加入后终浓度是0.05%即可，而前者终浓度是0.5%-1%。
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免疫组化阶段总结一实验所用试剂配方：1 苦味酸饱和液的配制：1 缓冲液：1×TBS:6.06g TRIS,8.5g NaCL，先加超纯水溶解（约800ml）然后使用pH计调节pH至7.4，定容至1L。
2 抗原修复液：根据Sigma抗体说明书配制。
1×柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/l）：二水柠檬酸三钠 2.941g；0.292g EDTA 加超纯水溶解（约800ml），调节pH至6.0，定容至1L。
1×Tris/EDTA：4.84g Tris,3.72g EDTA,加超纯水溶解（约800ml）调pH至9.0, 定容至1L（先加较多NaOH）。
3 细胞通透液：使用超纯水配制0.5﹪Tritonx-100，在100ml 超纯水中加入0.5ml Tritonx-100后轻轻搅拌，尽量不要产生气泡，直至溶解完全方可使用。
4 封闭血清：根据二抗来源选择封闭血清，一般血清来源于二抗来源形同。
血清浓度为10％,TBS配制，或者使用3﹪BSA配制10﹪封闭血清。
5 抗体稀释液：使用TBS配制3﹪BSA。
6 3﹪H2O2：30﹪H2O2，超纯水配制。
7 DAB显色液（试剂盒）配制：1mlTBS中加50mlA液，50mlB 液，充分混匀。
8 荧光二抗的配制：Alexa Flour488、594规格为2mg/ml,说明书建议使用浓度在2ug/ml-10ug/ml之间，所以建议稀释200-1000倍，本实验所使用浓度为5ug/ml，即稀释400倍。
二组织采集与处理材料：取不同时间点猪的睾丸组织观察精原干细胞的表达，新生小猪，3-5月龄,成年猪。
采集适龄猪睾丸组织，置于PBS中带回实验室，用PBS清洗若干次，将睾丸白膜去除，组织切成适宜大小，用苦味酸固定过夜，次日进行清洗（PBS）3-4次，每次30min,然后用70％酒精清洗3次，每次30min，储存于70％酒精备用。
包埋：80％酒精--90％酒精—100％Ⅰ酒精--100％Ⅱ酒精各30 min，无水乙醇：二甲苯1:1 2h，二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ依照所取组织大小确定处理时间，二甲苯：石蜡1:1 2h,石蜡Ⅰ1h,石蜡Ⅱ2h，包埋。
组织切片：7um，37℃烤片5h。
三免疫组化（SP法，各种抗体稀释浓度附于后表）：1 脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 min。
复水：100％乙醇Ⅰ、Ⅱ，90％乙醇,80％乙醇,70％乙醇各3min，超纯水清洗5min*3次。
2 用超纯水配制0.5％的Tritonx-100,室温孵育10min，超纯水清洗3*5min 。
3 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L,pH=6）高压修复：将玻片同修复液（1L烧杯）一起放入高压锅内，加热加压至125℃，修复5min，放气后降温至90℃时将烧杯拿出自然冷却至室温。
TBS清洗3*5min；微波修复：柠檬酸钠缓冲液加热煮沸，将玻片置入烧杯内，加热6min，停1min,重复3次，冷却；煮沸修复：Tris/EDTA（pH=9）置于1L烧杯中微波炉里加热至沸腾，水浴锅提前加热至99℃。
置入玻片修复10 min.自然冷却。
TBS清洗3*5min4 3％H2O2（试剂盒）孵育10 min.，TBS清洗3*5min。
5 封闭血清（试剂盒），封闭2h，勿洗。
6 一抗稀释：含3％BSA的TBS。
置于湿盒，4℃过夜。
7 次日，取出湿盒，恢复至室温40min，TBS清洗3*5min。
8 二抗（试剂盒）室温孵育30 min，TBS清洗4*5min。
9 辣根过氧化物酶（试剂盒）室温孵育30 min，TBS清洗4*5min。
10 DAB显色，用倒置显微镜严格控制显色时间，待背景染色浅，特异性染色深时，终止染色，TBS清洗2*5min。
11 苏木精：3min，清洗（流水冲一下）后，5%冰醋酸分化30秒（可短些），流水蓝化5min，脱水（70％,80％,90％,100％Ⅰ,100％Ⅱ酒精各1min），二甲苯透明1min，中性树胶封片。
四免疫荧光染色（各种抗体稀释浓度附于后表）:1 脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 min。
复水：100％乙醇Ⅰ、Ⅱ，90％乙醇,80％乙醇,70％乙醇各3min，超纯水清洗5min*3次。
2 用超纯水配制0.5％的Tritonx-100,室温孵育10min，超纯水清洗3*5min 。
3 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L,pH=6）高压修复：将玻片同修复液（1L烧杯）一起放入高压锅内，加热加压至125℃，修复4min，放气后降温至90℃时将烧杯拿出自然冷却至室温。
TBS清洗3*5min；微波修复：柠檬酸钠缓冲液加热煮沸，将玻片置入烧杯内，加热6min，停1min,重复3次，冷却；煮沸修复：Tris/EDTA（pH=9）置于1L烧杯中微波炉里加热至沸腾，水浴锅提前加热至99℃。
置入玻片修复10 min.自然冷却。
TBS清洗3*5min4 封闭血清（10％），使用TBS稀释，封闭2h，勿洗（置于湿盒）。
5 一抗稀释：用含3％BSA的TBS稀释后置于湿盒，4℃过夜。
6 次日，取出湿盒，恢复室温40 min，TBS清洗3*5min。
7 荧光二抗：含3％BSA的TBS稀释，37℃（提前打开烘箱），30min，避光（以后都注意），TBS清洗4*5min。
第一次使用加Tween20(0.05％)的TBS清洗，二，三，四次使用TBS，每次5min。
8 DAPI：室温10min,TBS稀释，TBS清洗一次即可。
9 80％甘油缓冲液封片，荧光显微镜观察。
五免疫双荧光染色（各种抗体稀释浓度附于后表）：1 脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 min。
复水：100％乙醇Ⅰ、Ⅱ，90％乙醇,80％乙醇,70％乙醇各3min，TBS清洗。
2 用超纯水配制0.5％的Tritonx-100,室温孵育10min，超纯水清洗2*5min。
3 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L,pH=6）高压修复：将玻片同修复液（1L烧杯）一起放入高压锅内，加热加压至125℃，修复4 min ，自然降温至90℃，放气，将烧杯拿出自然冷却至室温；微波修复：柠檬酸钠缓冲液加热煮沸，将玻片置入烧杯内，加热6min，停1min,重复3次，冷却；煮沸修复：Tris/EDTA（pH=9）加热至沸腾，水浴锅调至99℃.置入玻片修复10 min.自然冷却。
TBS清洗3*5min4 封闭血清（10％），TBS稀释，封闭2h，勿洗。
5 一抗稀释：使用含3％BSA的TBS稀释，两种抗体混合稀释，如要配制50ulTHY1-PLZF抗体，则用50ul抗体稀释液中加1ulTHY1和1ulPLZF。
置于湿盒，4℃过夜。
6 次日，取出湿盒，恢复室温40 min，TBS清洗3*5min。
7 荧光二抗：含3％BSA的TBS稀释，两种抗体混合稀释，如需要400ul双荧光二抗，则在400ul抗体稀释液中分别加入1ul 488和594，37℃，30 min，避光，TBS清洗4*5min。
第一次使用加Tween20(0.05％)的TBS清洗，二，三，四次使用TBS，每次5min。
8 DAPI：室温10min,TBS稀释，TBS清洗一次即可。
9 80％甘油缓冲液封片，荧光显微镜观察。
各种抗体适合修复方法及稀释比例（猪，羊）注意事项：1 组织处理时，组织快不能切太小，否则不能保证切片数量；不能切太小，否则透明时间和浸蜡时间不好把握。
切片厚度以5um或7um为佳，贴片需使用多聚赖氨酸包被的玻片，展片是要把握好展片温度，一般多聚甲醛与苦味酸固定的组织所用温度不同，苦味酸大概所需温度为45℃左右，多聚甲醛为42℃左右，展片后要在37℃烘烤4-6小时。
2 包埋蜡温度不宜过高，以免烫坏组织，切片时易碎，透明时间要依据组织块大小准确把握。
3 脱蜡要彻底，复水后使用超纯水将酒精清洗干净，TBS 缓冲液和抗原修复液的pH值要准确，否则不利于抗原抗体复合物的形成。
4抗原修复后要自然冷却，切不可立即清洗，易造成脱片，H2O2浓度不能太高，孵育时间不宜太长，否则易脱片。
5 血清封闭后勿洗，加一抗前使用离心机将一抗离心，加稀释液后，用枪反复吹打，一定要将一抗混匀。
6 次日将湿盒从冰箱拿出后恢复至室温，如若使用了不同抗体，清洗时要分开清洗。
7 二抗孵育完后可多次清洗以减少背景，免疫组化后苏木精复染要把握好时间，以免苏木精颜色过深影响免疫组化效果，免疫荧光染色一定要避光操作，孵育时可置于恒温烘箱中，清洗时可用锡箔纸包住染色缸。
作好免疫组化染色必须注意的问题一、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。
在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。
因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的抗原由于机体的作用，可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质，这是抗原发生弥散的一种方式。
另一种抗原弥散的方式就是，由于组织没有及时的固定所引起的。
离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散，这是一非常普通的常识，但要做好却是极不容易。
标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间，在这段时间里，有的抗原就可以发生扩散。
虽然已浸入了固定液，但标本较大，固定液的量又不足，当然由于固定液的渗透需要时间，当渗入到组织之中时，中间的细胞已发生了变化，抗原也随着发生扩散，这种现象在产酶多的器官是比较明显的，如胃癌，当切除后标本较大，虽然在手术室期间已放入了固定液，但固定液要透过肌层达到胃粘膜面起码需要几个小时的时间，当固定液发挥作用时，组织已经发生变化。
因此，这了达到免疫组织化学染色的要求，对于离体的组织尽量快的进行固定，有条件的应将其剖开，早取材，早固定。
二、组织脱水必须彻底干净组织块取材不能太大过厚，才能较好地完成脱水的过程。
如果取材太厚，在较短的时间内脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。
由于先天不足，导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败，或者由此反复操作，造成年人力物力的浪费，造成病理报告的延期发出等。
因此，对取材的要求是除了要求要有艺术性外，即平整、外观好看，还要求适中。
三、切片必须完整、均匀、平展、无邹折应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附贴。
如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染色不均匀的现象，颜色深浅不一，不平。
如果切片有汽泡切片在烘烤时，由于汽泡的破裂影响了汽泡周围的组织，在其周围可观察到深浅不一的染色。
如果切片有邹折，免疫组化染色后，在邹折的地方有深浅不一的颜色，这是一种假阳性，容易引走混淆。