“十二五”职业教育国家规划教材编写组

学习情境四
• 在365nm或254nm紫外灯下观察滤纸条，用铅笔划 出标准苯并(a)芘及其同一位置的样品的蓝紫色斑点， 剪下此点分别放入小比色管中，各加4mL苯加盖，放 入50～60℃水浴摇荡浸泡15min；
– 测定
• 将样品和标准液的苯浸出液移入荧光分光光度计的石 英杯中，以365nm为激发光波长，以365～460nm 波长进行荧光扫描，所得荧光光谱与标准苯并(a)芘的 光谱对比；
食品中苯并(a)芘的限量指标 GB 2762-2012
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学习情境四
检测依据 GB/T5009.27-2003
1 荧光分光光度法 2 目测比色法
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学习情境四 荧光分光光度法
GB/T5009.27-2003第一法
测定原理
试样先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经 液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a) 芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分 离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光 分光光度计测荧光强度与标准比较定量。
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学习情境四
试剂
苯、无水乙醇、丙酮，重蒸； 环乙烷(或石油醚，沸程30～60℃)重蒸或氧化柱处理除荧光 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜、95％乙醇、氢氧化钾； 无水硫酸钠，乙醇(95%)～二氯甲烷(2+1)展开剂
硅镁型吸附剂、层析用(中性)氧化铝、乙酰化滤纸；
100 μg/mL，1.0 μg/mL，0.1 μg/mL苯并(a)芘标准溶液
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学习情境四
（一）仪器及试剂
仪器
①脂肪提取器。 ②层析柱：内径10mm，长350mm，上端有内径25mm， 长80mm～100mm内径漏斗，下端具有活塞。 ③层析缸（筒）。 ④K-D全玻璃浓缩器。 ⑤紫外光灯：带有波长为365nm或254nm的滤光片。 ⑥回流皂化装置：锥形瓶磨口处连接冷凝管。 ⑦组织捣碎机。 ⑧荧光分光光度计。
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学习情境四
食品中黄曲霉毒素的限量指标 GB 2761-2012
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学习情境四
食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定 检测依据
5009.24-2010
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学习情境四
测定原理
样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1与B1在 紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层 上显示荧光的最低检出量来测定含量。
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食品理化检验技术（第二版）
子情境三 其他有害物质的测定
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学习情境四
子情境三 其他有害物质的测定
学习目标
知识目标：
1. 了解食品中其他有害物质的种类及在食品中的限量标准。 2. 熟悉食品中黄曲霉毒素和苯并(a)芘的特征、污染途径及对人体的危害。 3. 掌握食品中黄曲霉毒素、苯并(a)芘和甲醇的测定方法和操作要点。
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（二）操作方法
– 样品提取、净化 – 薄层层析分离
• 在乙酰化滤纸上一端5cm处，吸取 样品液点于 滤纸上，用电吹风从背面吹散溶剂； 同样点 苯并(a)芘标准液，滤纸下端浸入 层析缸内展开 剂约1cm，待溶剂前沿至20cm时 取出阴干；
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X S F

F1

F2
1000
mV2
V1
式中 X——样品中的苯并(a) 芘含量(μg/Kg) S——苯并(a) 芘标准斑点的质量(μg) F——标准斑点浸出液荧光强度(mm) F1——样品斑点浸出液荧光强度(mm) F2——试剂空白斑点浸出液荧光强度(mm) V1,V2 ——分别为样品浓缩液体积和点样体积(mL) m——样品质量(g)
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二、食品中黄曲霉毒素的测定
概述 黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，温特曲霉也能少量 产生毒素； 黄曲霉毒素是一族结构类似化合物的总称，基本结构是二呋喃环和香豆 素，紫外线下能发荧光； 目前已分离鉴定出12种，包括B1、B2、G2、M1、M2、P1、Q、H1、 GM、B2a和毒醇； 黄曲霉毒素是剧毒物质，毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍，具 有极强的致癌性，长期摄入会诱发肝癌； 各种黄曲霉毒素中以黄曲霉毒素B1毒性和致癌性最强，在食品中污染最 为严重。
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• 在分析同时做试剂空白、处理样品所用全部试剂，分
别读取样品、标准及试剂空白于波长406±5nm处荧
光强度，按基线法由下式计算数值，为定量计算的荧
光强度。
F F406 F401 F411 / 2
荧光分光光度计
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学习情境四
结果计算
样品中的苯并(a)芘按下式计算：
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学习情境四
甲醇进入人体后分解缓慢，有蓄积作用。少量甲醇也容易 引起中毒，因此蒸馏酒必须严格控制甲醇含量。我国《食品安 全国家标准 蒸馏酒及其配制酒》（GB 2757）规定以粮谷类为 原料的酒甲醇不得超过0.6g/L，其他不得超过2.0g/L。通过查 阅《食品安全国家标准 蒸馏酒及其配制酒》（GB 2757）和 《蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方法》（GB/T 5009.48）， 小组讨论后制订检验方案，正确测定白酒中甲醇的含量，并评 价甲醇含量是否符合要求。
技能目标：
1. 会进行样品处理、标准溶液配制、比色等操作。 2. 能测定白酒中的甲醇含量。
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学习情境四
一、食品中苯并[a]芘的测定
苯并芘的危害 – 苯并芘为致癌物质多环芳烃中的一种。3,4-苯并芘是一种有5个苯环 构成的多环芳烃，性质稳定； – 在有机溶剂中，用波长365nm紫外线照射可产生典型的紫色荧光； – 3,4-苯并芘是已发现的200多种多环芳烃中最主要的环境和食品污染 物，是一种强烈的致癌物质，对机体各器官具有致癌作用；