07_人类性染色质（Barr氏小体和Y小体）标本制备与观察（6张1页）[1]

07_人类性染色质（Barr氏小体和Y小体）标本制备与观察
（6张1页）[1]
实验八人类性染色质(Barr 氏小体和Y 小体)
标本制备与观察
（教材P47-49实验11,有改动，并增Y 小体检测）
一、实验目的：
1.掌握哺乳动物性染色质检测方法；
2.掌握X 染色质失活机制及其意义。

二、实验原理
原理：1.剂量补偿观点的提出：
Muller （1932）：剂量补偿（Dosage
compensation ）观点——可能存在着一种维持雌、雄两性生物基因表达一致的遗传机制。

2. X 小体的发现（1949，M.L.Barr 等）：
雌猫神经细胞核膜边缘深染的小体
见于人类女性口腔上皮细胞（大小1~1.5μm ）Barr 小体为Δ形/Ο形，数目=X 染色体数目-1
间期失活的异固缩状态的X 染色体
⑴正常雌性个体，两条X 染色体中有一条是失活的；
⑵失活是随机的
⑶失活出现在胚胎早期，且总是这条X 染色体失活。

（4）杂合雌体在伴性基因作用上为嵌合体
3. Lyon 假说
是否所有组织、全部细胞、任何时间都存在这种X 小体；
失活的X 小体是如何复制……5. 应用
遗传临床法医诊断
4. 疑问：
不同性染色体组成的人的X 小体
另外: Y 小体（Pearson,1970）男性细胞核内近中央，直径0.25-
0.3μm Ο形
为Y 染色体长臂远端异染色质
示意图
应用
遗传性别鉴定Y 染色体异常检查
三、实验步骤
人体毛囊细胞性染色质的标本制备
X 小体和Y 小体分析各用女、男材料（至少各两根）①取材（女、男）
拔取带毛囊头发→45%醋酸解析5min →吸掉余酸→印染转移（教材p48）或以镊子轻轻刮涂毛囊于载玻片
A 、用于X 小体的材料（女，男的做对照）
染色-观察：改良品红，2-3min →盖片→压片→LM 镜检。

1．毛球，2.内层毛囊，3.外层毛
②X 、Y 小体实验平行做
B 、用于Y 小体的材料（男，女的做对照）
固定：乙醇-乙醚1:1，20-30min （可达12h ）→95%乙醇
30min →晾干。

（周二两组上课时间做到此暂停）染色：Macllvaine’s 缓冲液pH6，5min →0.2%二盐酸喹吖
因，10min →换新Macllvai ne’s 缓冲液pH6，5min ×2（分色）→盖盖玻片、暗处平放
·周一、四、五组上课时到此暂停
·周二上午组晚上9点染色、下午组晚上9点半染色
观察：染色12-17h 内，荧光显微镜观察
周一组周二上午8-10点观察
周二上午组周三下午1点、下午组周三下午3点观察周四组周五上午10点观察周五组周六上午9点观察
Barr 氏小体染色图
Barr 氏小体染色图
讲完课后一个同学先为全班配制：
Macllvaine's 缓冲液（pH6）
A 液（0.1M 柠檬酸溶液）：
柠檬酸（C 6H 5O 7·H 2O) 21g, 蒸馏水1000mL 溶解。

B 液(0.2M 磷酸氢二钠溶液):
磷酸氢二钠（Na 2HPO 4·12H 2O ）71.6g ，蒸馏水1000mL 溶解。

pH6的缓冲液：A 液73.7mL，B 液126.3mL混合（以200mL 计）。