木犀草素与白藜芦醇联合应用对人肝癌细胞凋亡的影响及机制

( Ｐ < ０. ０５) ꎮ 经 ２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ、２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ 处理后ꎬＨｅｐＧ２ 细胞逐渐固缩ꎬ膜局
部破损ꎬ死亡细胞多ꎮ ＤＡＰＩ 染色发现ꎬＨｅｐＧ２ 细胞核出现不同程度的核固缩和染色体片段化ꎬ经 ２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋
ＨｅｐＧ２ ａｎｄ ＬＯ２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｏｕｔｉｎｅｌｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ
ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｐｈａｓｅ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｕｔꎬ Ｒｅｓ ｏｒ ｔｈｅｉｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ (５ꎬ １０ꎬ ２０ μｍｏｌ /
均 < ０. ０５) ꎻ２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ 处理后 ＨｅｐＧ２ 细胞相对存活率最低( Ｐ 均 < ０. ０５) ꎮ 各浓度 Ｌｕｔ、Ｒｅｓ 及
二者联合处理 ２４ ｈ 对 ＬＯ２ 细胞相对存活率无影响( Ｐ 均 > ０. ０５) ꎻ而索拉非尼处理 ２４ ｈ 后 ＬＯ２ 细胞相对存活率低
山东医药 ２０２０ 年第 ６０ 卷第 １ 期
基础研究
木犀草素与白藜芦醇联合应用对人肝癌
细胞凋亡的影响及机制
乐炜ꎬ王超ꎬ邓波ꎬ章永
咸宁市中心医院ꎬ湖北咸宁 ４３７０００
摘要:目的 探讨木犀草素( Ｒｅｓ) 与白藜芦醇( Ｌｕｔ) 联合应用对人肝癌细胞( ＨｅｐＧ２) 凋亡的影响及机制ꎮ 方法
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｕｔｅｏｌｉｎ ( Ｌｕｔ) ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ( Ｒｅｓ) ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａ￣
ｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ. Ｍｅｔｈｏｄｓ
μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ５０ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、１０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ １２. ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、１０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、１０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ５０
μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ １２. ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ５０ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、１０
ＨｅｐＧ２ 细胞内 ＮＦ￣κＢ 入核被明显抑制ꎮ 经 Ｌｕｔ ２０ μｍｏｌ / Ｌ ＋ Ｒｅｓ ２５ μｍｏｌ / Ｌ 处理后 ＨｅｐＧ２ 细胞内 Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ￣３ 表
达最高ꎬＢｃｌ￣２ 表达最低( Ｐ 均 < ０. ０５) ꎮ 结论 Ｌｕｔ 与 Ｒｅｓ 联合应用可促进 ＨｅｐＧ２ 细胞凋亡ꎻ其作用机制可能与抑
常规培养 ＨｅｐＧ２、人正常肝细胞( ＬＯ２) ꎬ将部分对数生长期的 ＨｅｐＧ２、ＬＯ２ 细胞分别用 ( 终浓度为 ０、５、１０、２０
μｍｏｌ / Ｌ) Ｒｅｓ 及 ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ １２. ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、５ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ、５
μｍｏｌ / Ｌ 索拉非尼的无血清 ＤＭＥＭ 培养基培养 ２４ ｈꎮ 用 ＭＴＴ 实验检测细胞活力ꎻ倒置显微镜下观察细胞的生长及
形态变化ꎬ用 ＤＡＰＩ 染色法检测细胞凋亡ꎻ采用免疫荧光实验观察核因子 κＢ( ＮＦ￣κＢ) 的入核情况ꎻ用 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ￣
ｔｉｎｇ 法检测细胞内 ＮＦ￣κＢ 及凋亡相关蛋白( Ｂｃｌ￣２、Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ￣３) 的表达ꎻ用 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 技术检测细胞内凋亡相关蛋
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｕｔｅｏｌｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ
ＬＥ Ｗｅｉꎬ ＷＡＮＧ Ｃｈａｏꎬ ＤＥＮＧ Ｂｏꎬ ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇ
Ｘｉａｎｎｉｎｇ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌꎬ Ｘｉａｎｎｉｎｇ ４３７０００ꎬ Ｃｈｉｎａ
Ｌ Ｌｕｔꎻ １２. ５ꎬ ２５ꎬ ５０ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎻ ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ １２. ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎬ ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎬ ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋
５０ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎬ １０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ １２. ５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎬ １０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓꎬ １０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ ＋ ５０ μｍｏｌ / Ｌ
白( Ｂｃｌ￣２、Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ￣３) ｍＲＮＡ 表达ꎮ 结果 与未经药物处理的细胞相比ꎬ经 １０、２０ μｍｏｌ / Ｌ Ｌｕｔ 及 ２５、５０ μｍｏｌ / Ｌ
Ｒｅｓ 单独处理后 ＨｅｐＧ２ 细胞相对存活率低( Ｐ 均 < ０. ０５) ꎻＬｕｔ 与 Ｒｅｓ 联合处理 ２４ ｈ 后 ＨｅｐＧ２ 细胞相对存活率低( Ｐ
２５ μｍｏｌ / Ｌ Ｒｅｓ 处理后的 ＨｅｐＧ２ 细胞变化更明显ꎮ 同时ꎬ药物处理对 ＬＯ２ 的细胞形态和 ＤＡＰＩ 染色后核形态均无
明显影响ꎮ 经 Ｌｕｔ ２０ μｍｏｌ / Ｌ ＋ Ｒｅｓ ２５ μｍｏｌ / Ｌ 处理后 ＨｅｐＧ２ 细胞内 ｐ￣ＮＦ￣κＢ 蛋白相对表达量最低( Ｐ 均 < ０. ０５) ꎬ
制 ＮＦ￣κＢ 激活ꎬ调控凋亡相关蛋白表达有关ꎮ
关键词:肝癌ꎻ木犀草素ꎻ白藜芦醇ꎻ细胞凋亡
ｄｏｉ:１０. ３９６９ / ｊ. ｉｓｓｎ. １００２￣２６６Ｘ. ２０２０. ０１. ００９
中图分类号:Ｒ７３５. ７ 文献标志码:Ａ 文章编号:１００２￣２６６Ｘ(２０２０)０１￣００３５￣０５