HPLC法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷的含量_叶晶晶

第29卷 第1期2011年1月
中 华 中 医 药 学 刊
CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NE
Vo.l 29No .1Jan.2011
206 中华中医药学刊
HPLC 法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷的含量
叶晶晶
(浙江中医药大学,浙江杭州310053)
摘 要:目的:建立不同产地桃仁中苦杏仁苷含量的高效液相测定方法,测定不同产地桃仁药材中苦杏仁苷的
含量。

方法:色谱柱Hype rsil B D S C 18(250mm @4.6mm,5L m),流动相为乙腈-水(17B 83)。

结果:苦杏仁苷在4.94~80L g /mL 范围内线性关系良好,r=0.9996,平均回收率为99.87%,RSD =1.01%。

含量测定结果表明,不同产地桃仁药材中苦杏仁苷含量存在差异。

结论:该方法简便快捷,准确灵敏,重复性好,可用于桃仁药材的质量控制。

关键词:桃仁;苦杏仁苷;HPLC 法;含量测定
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2011)01-0206-02
D eter m i n ati o n of Am ygdal i n P runus p ersica l (L .)Batsch Pr oduced i n
D iffer ent A r eas by HPLC
YE Ji ng-ji ng
(Zhejiang C h i nes e M edica lUnivers it y ,H angz hou 310053,Zhejiang ,Ch i na)
A bstrac t :O b jecti ve :To de t e r m ine quan tita tively the conten t of a m ygda lin i n P runus pers ica l fo r m t hree differen t a reas (Y unnan ,Shanx ,i Shandong).M et hod:Chro m a t og rap colu mn H ype rsil BD S C 18(250mm @4.6mm,5L m )w as used ,
mobil e pha se w as A ce t onitrile :w a t e r(17:83).R esult :The linea r range of amygda lin w as 4.94-80L g /m L ,r =0.9996.T he average recove ry o f sa m ple w as 99.87%,RSD =1.01%.The conten ts o f Amygdali n w ere differen t obv i ousl y i n sa mp l e s from d iffe rent areas .Concl usion :This me t hod is si mp l e ,separated com plete l y and rep roducibility ,and can be used a s quantity contro l standard .
K ey w ords :P runu s pers ica (L .)Ba tsch ;Am ygda lin ;HPLC ;de ter m inati on 收稿日期:2010-08-27
作者简介:叶晶晶(1984-),女,宁波宁海人,药师,硕士研究生,研
究方向:质量控制与临床研究。

桃仁为蔷薇科植物桃P runus persica (L .)Bats eh 或山桃P.davidiana (Carr .)F ranch .的干燥成熟种子。

其味苦、甘,
性平,具有活血化瘀、润肠通便等功效,主治经闭、痛经、腹部肿块、跌打损伤、肺痈、肠痈等症。

现代研究表明,其主要有效成分为苦杏仁苷[1],具有抗肿瘤、抗溃疡、调节免疫和抗脑缺血等作用[2-5]。

本文采用HPLC 法,对不同产地的桃仁药材中苦杏仁苷的含量进行测定,旨在比较不同产地桃仁药材的品质差异,为筛选优质桃仁种质资源提供参考。

1 仪器和试药
岛津LC -10AD 液相色谱仪,LC -10A DV P 泵,SPD -10A 紫外检测器,KQ -5200型超声波清洗器(40k H z ,200W,昆山超声仪器有限公司),AB135-S 电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品检定所产品,供含量测定用,批号:110820-200403)。

本实验桃仁经本校资源鉴定教研室俞冰副教授鉴定为桃仁Prunus pers ica (L .)Batseh 。

乙腈(色谱纯,天津四友精细化学品有限公司),其它试剂均为分析纯。

2 方法和结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱:Hypersil BD S
C 18(250mm @4.6mm ,5L m );流动相:乙腈-水(17B 83);流速:1.0m L #m i n -1,检测波长为210n m;柱温:25e ;进样量:10L L 。

在此色谱条件下,测定对照品溶液、供试品溶液的色谱图,结果见图1。

理论塔板数以苦杏仁苷峰计均在3000以上。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁苷对照品4.0
m g ,置25mL 量瓶中,加甲醇溶液稀释至刻度,定容,混匀,即得苦杏仁苷含量为0.16m g /m L 的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取桃仁粗粉0.5g,置索氏提取器中,用乙醚提取2h ,弃去乙醚,再用甲醇提取6h ,提取液转移至50m L 量瓶中,用50%的甲醇溶液稀释至制度,摇匀,超声提取15m in ,放至室温后,0.45L m 微膜滤过[6-7],得供试品溶液。

2.4
标准曲线的绘制 精密称取苦杏仁苷对照品溶液,对半稀释,用50%的甲醇稀释至刻度,取10L L 进样,测定峰面积。

以苦杏仁苷浓度为横坐标(X ),峰面积值(Y )为纵坐标,得回归方程Y =6.9504X +0.4711,r =0.9996,结果表明苦杏仁苷在4.94~80L g /mL 范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10L L ,平行进样6次,按/2.10项色谱条件测定苦杏仁苷峰面积,结果RSD 为0.72%,表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一桃仁样品适量,按照/2.30项方法制备供试品溶液5份,按上述色谱条件测定峰面积,结果
DOI ：10.13193/j.archtcm.2011.01.208.yejj.046
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RSD 为2127%。

图1苦杏仁苷对照品(A )和
桃仁样品(B )的HPL C 色谱图
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液,依次在0、2、4、8、12、24h 进样10L L ,按上述色谱条件测定峰面积,得RSD 为
2.51%,表明供试品溶液在24h 内稳定。

2.8加样回收试验 精密称取已知含量的同一桃仁粗粉6份,每份约0.1g,分别加入等量的苦杏仁苷对照品溶液,按/2.30项制备供试品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,计算加样回收率,结果平均回收率为99.87%,RSD 为1.01%。

2.9 样品的测定 分别精密称取不同产地的桃仁药材各0.5g ,按/2.30项方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,计算苦杏仁苷的含量,结果见表1。

表1
不同产地桃仁中苦杏仁苷的含量测定结果(n =3)
产地苦杏仁苷含量(%)
RSD (%)云南0.791.12河北11.060.96河北20.821.36河北30.880.61安徽1.281.97山东10.691.62山东20.631.11陕西11.380.86陕西2
1.65
1.33
3 讨 论
(1)本实验研究结果表明,不同产地桃仁药材中苦杏仁苷的含量具有一定差异,陕西产桃仁药材中苦杏仁苷含量普遍较高,为山东产桃仁的2倍多,而同一产地的药材则在含量差异上较小,这可能与其生长环境和栽培技术有关。

(2)苦杏仁苷的含量测定方法有多种,如薄层扫描法、气相色谱法、电化学分析法、高效液相色谱法等。

采用薄层扫描法测定苦杏仁苷含量,操作繁琐、稳定性和重复性均相
对较差;采用硝酸银滴定法间接测定苦杏仁苷含量,样品前
处理条件较为困难,且滴定条件影响因素较多,重复性较差;而分光光度法等,同样存在中药多组分干扰等问题,适用性亦差[8-10]。

而高效液相色谱法具有适应范围广、分离效能高、重复性良好等优点,是目前含量测定的主要方法之一,已经在中药研究中得到了广泛的应用。

本实验根据苦杏仁苷的结构特点及性质,结合HPLC 法对苦杏仁苷的研究基础,采用HPLC 法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷含量,为开发利用桃仁、苦杏仁苷及评价桃仁质量、临床合理用药提供科学依据。

参考文献
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[J ].华西药学杂志,2007,22(5):589-590.
两种与皮肤基细胞癌
相关的遗传变异被发现
冰岛研究人员日前宣布,他们新发现两种遗传变异,体内同时存在这两种变异的人患皮肤基细胞癌的风险比常人要高出近3倍。

冰岛/遗传解码0公司的研究人员在新一期英国5自然遗传学6杂志上介绍说,他们对3万多人的基因进行分析后获得了以上发现,这些研究对象都具有欧洲人血统。

研究结果表明,位于人体1号染色体上的这两种遗传变异除了与基细胞癌发病相关外,对人的皮肤颜色没有什么影响。

基细胞癌是最常见的一种皮肤癌,多数病例都与长时间接受日光紫外线照射有一定关系。

如果发现较早,大多数基细胞癌病例能够得到有效治疗。

研究人员此前已发现3种与基细胞癌发病风险相关的遗传变异。

冰岛研究人员的研究结果显示,加上新发现的两种遗传变异,同时携带这5种遗传变异的人患基细胞癌的风险比常人高出约12倍。