DB1301_T283-2018水产品中呋喃西林代谢物的快速检测荧光免疫层析法

ICS67.050
B 50 DB1301 石家庄市地方标准
DB 1301/T 283—2018
水产品中呋喃西林代谢物的快速检测
荧光免疫层析法
Determination of nitrofurazone metabolites in aquatic products—
Fluorescence immunochromatography
2018-05-18发布2018-07-20实施
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由石家庄市农业畜牧局提出。

本标准起草单位：石家庄市畜产品质量监测中心。

本标准主要起草人: 肖妙、赵义良、李云、崔荣飞、张蕾、王志恒、高景报、房灿。

水产品中呋喃西林代谢物的快速检测荧光免疫层析法
1 范围
本标准规定了水产品中呋喃西林代谢物（Nitrofurazone metabolite，SEM）的荧光免疫层析快速检测方法。

本标准适用于水产品中呋喃西林代谢物的快速筛选检测，本方法的检出限为0.5μg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
本法应用竞争抑制免疫层析原理。

样品中残留的呋喃西林代谢物在酸性条件下衍生，碱性条件下经乙酸乙酯萃取、正己烷去脂净化后，样品溶液中的呋喃西林代谢物的衍生物与铕乳胶标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上呋喃西林代谢物-BSA偶联物的结合。

使检测线荧光强度低于控制线荧光强度或检测线无荧光。

4 试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1 浓盐酸(HCl)。

4.2 氢氧化钠（NaOH）。

4.3 磷酸氢二钾（K2HPO4•3H2O）。

4.4 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。

4.5 磷酸二氢钾（KH2PO4）。

4.6 氯化钠（NaCl）。

4.7 氯化钾（KCl）。

4.8 邻硝基苯甲醛（C7H5NO3）。

4.9 乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.10 正己烷（C6H14）。

4.11 甲醇（CH4O）。

4.12 吐温-20（C58H114O26）。

4.13 1 mol/L盐酸溶液：量取8.3 mL浓盐酸（4.1），加水定容至100 mL，室温保存。

4.14 1 mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0 g 氢氧化钠（4.2），加水定容至100 mL，室温保存。

4.15 0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液：称22.8 g 磷酸氢二钾（4.4），加水定容至1 L，室温保存。

DB1301/T 283—2018
4.16 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（含0.5 %吐温-20，pH 7.4）：取8.0 g氯化钠（4.6）、0.2 g氯化钾（4.7）、1.44 g磷酸氢二钠（4.4）、0.24 g磷酸二氢钾（4.5）、0.5 mL吐温-20（4.12）加水定容至1 L，用盐酸溶液（4.13）调整pH至7.4，经121 ℃灭菌15 min，4 ℃下避光保存。

4.17 衍生化试剂：称取0.15 g邻硝基苯甲醛（4.8），加甲醇（4.11）100 mL溶解，4 ℃下避光保存。

4.18 呋喃西林代谢物标准物质。

4.19 呋喃西林代谢物标准储备液（100 mg/L）：准确称取呋喃西林代谢物标准物质（4.18）适量，用甲醇（4.11）配制成100 mg/L的标准储备液，-18 ℃冰箱中保存，有效期6个月。

4.20 呋喃西林代谢物标准中间液（100 μg/L）：将呋喃西林代谢物标准储备液（4.19）甲醇（4.11）逐级稀释成100 μg/L的标准中间液，4 ℃冷藏避光保存，有效期1个月。

5 仪器和设备
5.1 电子天平：感量0.01 g。

5.2 均质机：转速不小于8 000 r/min。

5.3 离心机：转速不小于4 000 r/min。

5.4 氮吹仪：加热温度不小于60 ℃。

5.5 移液器：10μL，100μL，1 000μL。

5.6 恒温振荡水浴锅：加热温度不小于60 ℃。

5.7 荧光检测仪。

6 分析步骤
6.1 试样制备
取鱼、虾等水产样品的肌肉组织，用均质机（5.2）均质。

6.2 提取
称取均质后样品2 g（精确到0.01 g)于50 mL离心管中，并加入4.0 mL去离子水，0.5 mL盐酸溶液（4.13），0.1 mL衍生化试剂（4.17），充分混合3 min。

60 ℃水浴条件下振荡孵育1 h，取出加入5.0 mL磷酸氢二钾溶液（4.15）、0.4 mL氢氧化钠溶液（4.2）及6.0 mL乙酸乙酯（4.9），充分混合1 min，4 000 r/min离心5 min；移取上层溶液3.0 mL于5 mL离心管中，60 ℃下氮气吹干。

向吹干的试管中加入1.0 mL正己烷（4.10），加盖振荡1 min，然后加入0.5 mL磷酸盐缓冲液（4.16），充分混匀（对于脂肪含量高的样品，为防止乳化可将步骤改为轻轻上下颠倒混匀20下），4 000 r/min离心1 min，吸取下层溶液，待测。

6.3 测定
取出呋喃西林代谢物荧光免疫层析快速检测试剂板，吸取6.2中待测液100μL于加样孔中，反应3min～5 min，将试剂板放入荧光检测仪（5.7），在激发波长340 nm，发射波长613 nm条件下读取结果。

6.4 质控试验
每一批次试验时，必须同时进行阴性质控和阳性质控样品试验，按6.1、6.2和6.3步骤进行。

注：不同试剂盒制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。

7 结果判定
DB1301/T 283—2018
检测线荧光强度低于控制线荧光强度或检测线无荧光，结果为阳性；反之，检测线荧光强度大于或等于控制线荧光强度，结果为阴性。

8 结果确认
被检测样中呋喃西林代谢物检测结果为阳性时，应进行确证检测。