紫外-可见分光光度计的性能检验
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
二、实验原理
黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐 类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分 析。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯；
实验一
紫外－可见分光光度计 的性能检验
一、实验目的
1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸 蒸馏水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液
测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μ l，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。
五、思考题
1．外标一点法的主要误差来源是什么？ 2．紫外检测器的优缺点是什么？
实验八、气相色谱仪的使用
一、实验目的 1. 掌握气相色谱仪的使用方法 2. 了解气相色谱仪的结构
四、实验内容及操作步骤
仪器条件 聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m、内 径0.25mm、膜厚度0.25 μm），柱温160℃。
313nm、350nm
分别测定 K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数
与下表规定的 吸收系数比较
若相对偏差在1%以内
说明
仪器符合使用要求
波长/nm
235
吸收系数
123.0～126.0
257
142.8～146.2
313
47.0～50.3
350
105.5～108.5
五、思考题
1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？
三、实验内容及操作步骤
1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后 放置在干净、平整的台面上，阴干备用。
2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和 水3份在研钵中向同一方向研磨混合 均匀。
3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的 一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震 动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。
二、实验原理
气相色谱法是采用气体作流动相（载气） 流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由 气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、 检测器和数据处理系统组成。
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器） 樟脑对照品溶液 试剂均为A.R纯
四、实验内容及操作步骤
（一）启动GC-2014气相色谱仪 （二）参数的设定 （三）打开N2000色谱工作站 （四）运行GC-2014气相色谱仪 （五）进样
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。
实验四、薄层板的制备
一、实验目的
掌握薄层板的制板方法。
二、仪器与试剂
天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 （3‰） 蒸馏水 薄 洋层 化层 工析 厂用）硅胶GF254（青岛海
时的吸光度。
即
E1% 1cm
A C 1
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度计 石英比色皿（一对） 95%乙醇（A.R） 0.005%丹皮酚对照品溶液
四、实验内容及操作步骤
丹皮酚对照品 95％乙醇溶解 摇匀 精密吸取5ml
10mg
定容至10ml
置
95％乙醇定容
100ml量瓶
作为母液备用
A
0.4
0.2
0
500
800
λ (nm)
3、重复性的检查
以0.02mol/L的H2SO4为空白
在257nm处 测定
同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次 求出极差
若极差<0.5%
仪器的重复性符合 使用要求
4.吸收值准确度的检查
以0.02mol/L的H2SO4为空白 λ＝235nm、257nm
(T＝100%）
2.采用外标一点法进行含量测定。
三、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯
四、实验内容及操作步骤
色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液 （40∶65）； 检测波长为230nm。
（二）安装色谱柱
按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。
（三）液相色谱仪的使用方法
1.启动液相色谱仪
2.排除管道内空气 3.泵流速的设定 4.检测器波长的设定 5.打开T2000P色谱工作站
6.色谱柱预平衡 7．进样
8.数据采集完毕后，点击停止进样
9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处 理，出报告图
10.实验完毕后冲洗色谱柱
11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、 关闭仪器电源
练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和 进样量
色谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）； 固定相:C18反相键合色谱柱；
检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为
0 0.00
0.05
0.10
浓度（mg/ml）
0.15
3、供试品溶液的制备
槐花粗粉1g 置 索氏提取器中 加 乙醚 加热回流至
精密称定
提取液无色
放冷 加 甲醇90ml 加热回流至 移至 100ml量瓶中
弃乙醚液
提取液无色
甲醇少量多次洗涤容器 加甲醇至刻度 摇匀
洗液并入量瓶中
精密吸取 10ml
置 100ml量瓶中 加水至刻度，摇匀 即得
对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷
对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的 溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。
四、实验内容及操作步骤
1、比色皿的配对性
蒸馏水
分别 注入
两个比色皿 λ＝440nm
以一个比色皿
测定
为空白（T1＝100％）
另一个比色皿的T2
ΔT=T1-T2
ΔT<0.5% 两个比色皿配对 ΔT>0.5% 两个比色不配对，应进行校正
2、波长精度的检查
测定
以蒸馏水为空白
KMnO4溶液的吸收曲线
若测得的最大吸收波长在525±1nm以内 说明 仪器波长精度符合使用要求
（六）待数据采集完毕后，点击停止采集； （七）待样品分析结束后，在离线处理数 据，察看数据报告，打印报告。 （八）关机
附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品 溶液和进样量
色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管 柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度 0.25µm）；柱温为160℃。
至5ml
加 5% NaNO2 摇匀 加 10% Al(NO3)3 摇匀 加
1ml
放置6min
1ml
放置6min
NaOH试液 加水至刻度 10ml 摇匀，放置15min
λ=500nm
测定吸光度（A）
以相应试剂为空白
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线
1.2
吸
光
0.8
度
0.4
y = 8.8x - 0.0098 r = 0.9996
4．活化 将阴干的薄层板至于110℃ 烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中 备用。
四、思考题
1．薄层板的铺制过程中应 注意哪些问题？
实验五 薄层色谱定性分 析
（五味子的定性鉴别）
一、实验目的
1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。
2. 熟悉薄层板的点样方法。
二、实验原理
中药五味子中，五味子甲素为其主要有 效成分之一，为了更好的进行定性鉴别， 选用五味子甲素对照品和五味子对照药 材进行对照，根据相同的组分在相同的 条件下，应该有相同的颜色和比移值来 作为定性鉴别的依据。
1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。
四、思考题
流动相在洗脱前为何要进行脱气？
实验七、高效液相色谱定性及定量分 析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和
含量测定
一、实验目的
1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。
2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。
二、实验原理
1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。
◆利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法 进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造 成的误差。
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID）； 10μl 微量进样器； 内标物：萘； 樟脑对照品； 混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）； 其余试剂均为A.R纯；
五、思考题
1．如何克服薄层展开过程中的边 缘效应？引起边缘效应的因素有 哪些？
实验六、高效液相色谱仪 的使用
一、实验目的
掌握高效液相色谱仪的使用方法 了解高效液相色谱仪的结构
高效液相流程图
1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶
2.对照药材溶液的制备：取五味子 对照药材1g，同法制成对照药材 溶液。
3.对照品溶液的制备：取五味子甲 素对照品，加三氯甲烷制成每ml
4. 吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶
GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃） －甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯（254nm）下检视。供试品色谱中， 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
二、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 过滤器（0.45μm）及脱气装置 苯、甲苯、萘 甲醇（色谱纯） 重蒸馏水
三、实验内容与步骤
（一）流动相的预处理
1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
母液中丹皮酚的含量为0.005%
1、吸收曲线的测绘
精密吸取母液1ml 置 10ml量瓶 95％乙醇定容 以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。
2、吸收曲线的测绘
利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算 百分吸收系数。
实验三
分光光度法测定槐花中 总黄酮的含量
一、实验目的
－可见分光光度计的操作方法
样品溶液 樟脑对照品溶液。
进样量 ：1μl。
五、 思考题 使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？
实验九、气相色谱法定性及定量分析——樟脑、冰 片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定
一、实验目的
掌握采用内标法进行定量分析的方法 熟悉利用气相色谱仪进行定性分析
二、实验原理
◆实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的 气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留 值进行定性。
四、实验内容及操作步骤
1、对照品溶液的制备
芦丁对照品 置 25ml量瓶中 加甲醇，水浴使溶解
50mg
放冷，加甲醇至刻度，摇匀
精密吸取 置 100ml量瓶中 加水至刻度，摇匀 10ml
即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）
2、标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 分别置 0、1、2、3、4、5ml
25ml量瓶中 各加H2O
4、样品的测定
置
精密吸取供试品溶液3ml
25ml量瓶中
照标准曲线制备项下的方法
自“加水至5ml” 起
依法测定吸光度
从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。
五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
五味子植株
五味子药材
三、仪器与试剂
定量毛细管 已制备好的薄层板（硅胶GF254 ） 展开缸 所用试剂均为分析纯 五味子粉末
对照品
定量毛细管
双槽展开缸
四、实验内容及操作步骤
1.供试品液的制备：取五味子粉末 1g，加三氯甲烷20ml，加热回 流30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为 供试品液。
实验二
吸收曲线的测绘及 吸收系数的测定
一、实验目的
1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数
二、实验原理
1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、 λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提 供了有力的证据。
2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm
黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐 类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分 析。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯；
实验一
紫外－可见分光光度计 的性能检验
一、实验目的
1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法
二、实验原理
对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸 蒸馏水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液
测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10μ l，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。
五、思考题
1．外标一点法的主要误差来源是什么？ 2．紫外检测器的优缺点是什么？
实验八、气相色谱仪的使用
一、实验目的 1. 掌握气相色谱仪的使用方法 2. 了解气相色谱仪的结构
四、实验内容及操作步骤
仪器条件 聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m、内 径0.25mm、膜厚度0.25 μm），柱温160℃。
313nm、350nm
分别测定 K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数
与下表规定的 吸收系数比较
若相对偏差在1%以内
说明
仪器符合使用要求
波长/nm
235
吸收系数
123.0～126.0
257
142.8～146.2
313
47.0～50.3
350
105.5～108.5
五、思考题
1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？
三、实验内容及操作步骤
1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后 放置在干净、平整的台面上，阴干备用。
2．匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和 水3份在研钵中向同一方向研磨混合 均匀。
3．铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的 一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震 动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。
二、实验原理
气相色谱法是采用气体作流动相（载气） 流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由 气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、 检测器和数据处理系统组成。
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器） 樟脑对照品溶液 试剂均为A.R纯
四、实验内容及操作步骤
（一）启动GC-2014气相色谱仪 （二）参数的设定 （三）打开N2000色谱工作站 （四）运行GC-2014气相色谱仪 （五）进样
六、思考题
1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。
实验四、薄层板的制备
一、实验目的
掌握薄层板的制板方法。
二、仪器与试剂
天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 （3‰） 蒸馏水 薄 洋层 化层 工析 厂用）硅胶GF254（青岛海
时的吸光度。
即
E1% 1cm
A C 1
三、仪器与试剂
UV－1100型紫外－可见分光光度计 石英比色皿（一对） 95%乙醇（A.R） 0.005%丹皮酚对照品溶液
四、实验内容及操作步骤
丹皮酚对照品 95％乙醇溶解 摇匀 精密吸取5ml
10mg
定容至10ml
置
95％乙醇定容
100ml量瓶
作为母液备用
A
0.4
0.2
0
500
800
λ (nm)
3、重复性的检查
以0.02mol/L的H2SO4为空白
在257nm处 测定
同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次 求出极差
若极差<0.5%
仪器的重复性符合 使用要求
4.吸收值准确度的检查
以0.02mol/L的H2SO4为空白 λ＝235nm、257nm
(T＝100%）
2.采用外标一点法进行含量测定。
三、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯
四、实验内容及操作步骤
色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液 （40∶65）； 检测波长为230nm。
（二）安装色谱柱
按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。
（三）液相色谱仪的使用方法
1.启动液相色谱仪
2.排除管道内空气 3.泵流速的设定 4.检测器波长的设定 5.打开T2000P色谱工作站
6.色谱柱预平衡 7．进样
8.数据采集完毕后，点击停止进样
9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处 理，出报告图
10.实验完毕后冲洗色谱柱
11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、 关闭仪器电源
练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和 进样量
色谱条件 流动相为甲醇∶水（80∶20）； 固定相:C18反相键合色谱柱；
检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为
0 0.00
0.05
0.10
浓度（mg/ml）
0.15
3、供试品溶液的制备
槐花粗粉1g 置 索氏提取器中 加 乙醚 加热回流至
精密称定
提取液无色
放冷 加 甲醇90ml 加热回流至 移至 100ml量瓶中
弃乙醚液
提取液无色
甲醇少量多次洗涤容器 加甲醇至刻度 摇匀
洗液并入量瓶中
精密吸取 10ml
置 100ml量瓶中 加水至刻度，摇匀 即得
对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷
对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的 溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。
四、实验内容及操作步骤
1、比色皿的配对性
蒸馏水
分别 注入
两个比色皿 λ＝440nm
以一个比色皿
测定
为空白（T1＝100％）
另一个比色皿的T2
ΔT=T1-T2
ΔT<0.5% 两个比色皿配对 ΔT>0.5% 两个比色不配对，应进行校正
2、波长精度的检查
测定
以蒸馏水为空白
KMnO4溶液的吸收曲线
若测得的最大吸收波长在525±1nm以内 说明 仪器波长精度符合使用要求
（六）待数据采集完毕后，点击停止采集； （七）待样品分析结束后，在离线处理数 据，察看数据报告，打印报告。 （八）关机
附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品 溶液和进样量
色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管 柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度 0.25µm）；柱温为160℃。
至5ml
加 5% NaNO2 摇匀 加 10% Al(NO3)3 摇匀 加
1ml
放置6min
1ml
放置6min
NaOH试液 加水至刻度 10ml 摇匀，放置15min
λ=500nm
测定吸光度（A）
以相应试剂为空白
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线
1.2
吸
光
0.8
度
0.4
y = 8.8x - 0.0098 r = 0.9996
4．活化 将阴干的薄层板至于110℃ 烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中 备用。
四、思考题
1．薄层板的铺制过程中应 注意哪些问题？
实验五 薄层色谱定性分 析
（五味子的定性鉴别）
一、实验目的
1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。
2. 熟悉薄层板的点样方法。
二、实验原理
中药五味子中，五味子甲素为其主要有 效成分之一，为了更好的进行定性鉴别， 选用五味子甲素对照品和五味子对照药 材进行对照，根据相同的组分在相同的 条件下，应该有相同的颜色和比移值来 作为定性鉴别的依据。
1μg/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10μl。
四、思考题
流动相在洗脱前为何要进行脱气？
实验七、高效液相色谱定性及定量分 析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和
含量测定
一、实验目的
1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。
2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。
二、实验原理
1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。
◆利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法 进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造 成的误差。
三、仪器与试剂
岛津GC-2014气相色谱仪（FID）； 10μl 微量进样器； 内标物：萘； 樟脑对照品； 混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）； 其余试剂均为A.R纯；
五、思考题
1．如何克服薄层展开过程中的边 缘效应？引起边缘效应的因素有 哪些？
实验六、高效液相色谱仪 的使用
一、实验目的
掌握高效液相色谱仪的使用方法 了解高效液相色谱仪的结构
高效液相流程图
1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶
2.对照药材溶液的制备：取五味子 对照药材1g，同法制成对照药材 溶液。
3.对照品溶液的制备：取五味子甲 素对照品，加三氯甲烷制成每ml
4. 吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶
GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃） －甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外 光灯（254nm）下检视。供试品色谱中， 在与对照药材和对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
二、仪器与试剂
L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm） 微量进样器（25μl） 过滤器（0.45μm）及脱气装置 苯、甲苯、萘 甲醇（色谱纯） 重蒸馏水
三、实验内容与步骤
（一）流动相的预处理
1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
母液中丹皮酚的含量为0.005%
1、吸收曲线的测绘
精密吸取母液1ml 置 10ml量瓶 95％乙醇定容 以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。
2、吸收曲线的测绘
利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算 百分吸收系数。
实验三
分光光度法测定槐花中 总黄酮的含量
一、实验目的
－可见分光光度计的操作方法
样品溶液 樟脑对照品溶液。
进样量 ：1μl。
五、 思考题 使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？
实验九、气相色谱法定性及定量分析——樟脑、冰 片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定
一、实验目的
掌握采用内标法进行定量分析的方法 熟悉利用气相色谱仪进行定性分析
二、实验原理
◆实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的 气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留 值进行定性。
四、实验内容及操作步骤
1、对照品溶液的制备
芦丁对照品 置 25ml量瓶中 加甲醇，水浴使溶解
50mg
放冷，加甲醇至刻度，摇匀
精密吸取 置 100ml量瓶中 加水至刻度，摇匀 10ml
即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）
2、标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 分别置 0、1、2、3、4、5ml
25ml量瓶中 各加H2O
4、样品的测定
置
精密吸取供试品溶液3ml
25ml量瓶中
照标准曲线制备项下的方法
自“加水至5ml” 起
依法测定吸光度
从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得
槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。
五、注意事项
1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确
五味子植株
五味子药材
三、仪器与试剂
定量毛细管 已制备好的薄层板（硅胶GF254 ） 展开缸 所用试剂均为分析纯 五味子粉末
对照品
定量毛细管
双槽展开缸
四、实验内容及操作步骤
1.供试品液的制备：取五味子粉末 1g，加三氯甲烷20ml，加热回 流30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为 供试品液。
实验二
吸收曲线的测绘及 吸收系数的测定
一、实验目的
1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数
二、实验原理
1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、 λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提 供了有力的证据。
2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm