人雌激素相关受体α配体结合域的原核表达载体构建·表达及鉴定

摘要 ［ 目的］ 建舍人雌 激素相 关受体 ｑ配体结合 域 区段 的原核 表 达载 体 ， 在 大肠 杆 茵表 达 系统 中表 达 。［ 构 并 方法 ］ Ｔｉ ｌ 剂提 用 ｒｏ 试 ｚ 取人肺腺 癌 Ａ ４ ５ ９细胞 总 Ｒ Ａ， 转录 为 ｃ Ｎ 应 用 Ｐ Ｒ扩增人 Ｅ Ｒ — Ｂ Ｎ 逆 Ｄ Ａ； Ｃ Ｅ ａ Ｌ Ｄ基 因片段 ， 插入 表达载 体 ｐ Ｔ Ｏ ￣ Ｅ ￣ ａ （＋） 转化 大肠 杆 茵 中； Ｂ２ （ Ｅ ）Ｌ ｓ， Ｉ Ｇ诱 导后 表达 并鉴定 。［ Ｉ １Ｄ ３ Ｐ ｙ 经 Ｐ Ｓ Ｔ 结果 ］ 用 Ｐ Ｒ方法扩 增 出约 ６７ ｐ的基 因片段 ， 应 Ｃ ８ ｂ 酶切 、 纯化 、 接至载 体后 ， 连 经测序与 Ｇｎ ａｋ中的一致 ， 达蛋 白相 对分子质 量约 ３ Ｄ 纯化后用 生物 大分子相 互作用 系统鉴定 为 目的蛋 白。 ［ ｅＢ ｎ 表 ２ｋ ， 结论 ］ 已成功获 得人 Ｅ Ｒ Ｅ ａ－
ｌ ｄ． ｄ ｉ ｓ ｑ ｎ ｅｗａ ｄ ｎ ｉａ ｏ ｔａ ｅ ｏ ｄ ｉ ｎ ｎ Ｔｈ ｏｅｎ ｗｉｈ ａｒ ｌｔ ｌｃ ｌｒｗｅｇ ｔｏ ２ ｋＤ ｗａ ｘ ｒ ｓｅ ｎ ｓ ｆｅ Ａｎ ｔ ｅ ｕｅ ｃ ｓｉｅ ｔｃ ｌｔ ｈ ｔｒｐ ｒｅ ｎ Ｇｅ Ｂａ ｋ． ｅｐｒｔｉ ｔ ｅａｉｅ ｍｏｅ ｕａ ｉｈ ｆ３ ｓｅ ｐ ｅ ｓｄ ａ ｄ ｗａ ｓ ｔ ｖ
ｐ Ｔ－ ａｃ Ｅ ３ ．（＋ ） ｎ ｒｎｆｒ ｄｔ ｃｌ Ｂ ｌ（ ３ ）ｆｒｅｐｅｓ ｎ ｔ ｒ ｎｕ ｔ ｎｗ ｔ Ｏ ａ ｄｔ ｓｏｍｅ Ｅ ｏｉ ａ ｏ ＤＥ １ ｏ ｘ ｒｓｉ ．Ａ ｅ ｄ ｃｉ ｉ Ｉ ｏ ｉ ｉ ｏ ｈ眦
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Ｌ Ｄ融合 蛋 白， Ｂ 为进一步 的研 究和应 用奠定 了基础 。 关键 词 雌 激素相 关受体 配体 ； 因克隆 ； 基 原核 表达
中图分类 号
Ｑ８ ７
文献标 识码
Ａ
文章编 号 ｏ １ — ６ １２０ ）３ ０９２ ０ ５７ ６ １（０８ ２ — ９ １ — ２
Ｃｏ ｓｒ ｔｏ Ｅｘｐ ｅ ｓｏ ａ ｄ Ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏ ｏ ｏ ｒ ｔｅＥｘ ｅ ｓｏｎ Ｖｅ ｔ ｒ ｏ ｎ ｔｕｅｉｎ． ｒ ｓｉｎ ｎ ｄ ｎ ｉ ａ ｉｎ ｆＰｒ ｋａ ｙｏ ｉ ｐｒ ｓｉ ｃｏ ｆＨｕｍ ａ ｉ ｎ ＥＲＲｏ－ ｔ ＬＢＤ
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径 ， 节 能量代谢 ， 调 并且 与癌 症的发 生也 有 密切 关 系 ， 至今 未 能在体 内发 现其 天然 配体 。下文采 用 ｐ Ｔ３ ａｃ 但 Ｅ － －（＋） ０
这种操 作 简便 、 本较 低 的原核表 达 系统 ， 达含 有 Ｈｓ 签 的 Ｅ ＲＬ Ｄ融 合 蛋 白 ， 用 与 Ｈｓ 签 具 有 亲和 力 的 成 表 ｉ标 Ｒ － Ｂ 应 ｉ标
Ｎ －Ｔ ｇ ｓ ｉ Ａ ａ ｒ ｅ介质 填 充的层 析柱 ， Ｎ ｏ 能够较 容 易的纯化 、 收集 融合蛋 白 ， 且蛋 白具 有相应 的 活性 ， 立 了一 套 简便 易 并 建 行 的表 达 、 纯化 方法 。 为进 一 步的 功能研 究奠 定 了 良好的 基础 。
人 雌 激 素 相 关 受 体 ０配 体 结 合 域 的 原 核 表 达 载 体 构 建 ・ 达 及 鉴 定 【 表
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安徽农 业科学 ， ｍａ ｆ ｈｉ ．Ｓ ｉ ０ ８，６ ２ ）９ １ ￣ｕ ｌ Ａｎｕ ｏ Ａ ｃ． ０ ３ （ ３ ：９ ２—９ １ ９ ２ ２ ９３。９ ０
责任编辑
刘月娟
责任校对
况玲玲
编 者按
雌激 素相 关 受体的 功 能极为 广 泛 ， 够调 节 骨桥 蛋 白的 表 达、 制 骨 的生 成 ， 与 乳腺 组 织 的 Ｅ 能 控 参 Ｒ信 号 途
Ｗ ＿ＮＧ ａ ｆｉｅ ｌ （ ｏ ｔ ｈｎ ｏａｉａ ｒｅ ，Ｃ ｉｅｅＡｃｄ ｍｙｏ ｃｅ ｃｓ Ｇｕ ｎｚ ｏ Ａ Ｙ ｎ－ ｔａ Ｓ ｕｈＣ ｉａＢ ｔｎｃｌ ｄ ｎ ｈｎｓ ａ ｅ ｆＳ ｉｎｅ ， ａ ｇｈｕ，Ｇ ａ ｇ ｏ ｇ５ ０ ５ ） ｅ Ｇａ ｕ ｎ ｄ ｎ １６ ０ Ａｂｔａ ｔ 『 ｂｅｔ ｅ Ｉ ｅｒｓａｃ ｉ ｄ ｔ ｃｏｅｈ ｍａ ＲＲ Ｌ Ｄ ａ ｄｐ ｒｙ ｉ ｕｉｎｐｏｅｎ ｔｏ Ｔ ｅｇ ｎ ｎ ｏ ｉｇＥ ｄ． ｓ ｃ ０ ｊｃｉ ］ ’ ｅｅｒｈａｍｅ ｏ ｌｎ ｕ ｎＥ ｑ．Ｂ ｎ ｕｌ ｔ ｆｓ ｒｔｉ．１ ｈ ｄｌ ｈ ｅ ｅｅ ｃ ｄｎ ＲＲ ｒ ｖ ｈ ｆ ｓ ｏ Ｍｅ
王燕飞 ’ ， 黄志伟 （ 中 科 院 南 物 ，￣－Ｉｏｏ．国 学 广 生 医 与 康 究 ，东 卅５６ ； １ 国 学 华 植 园Ｆ，＇５６ ；３ １
中国科学院研 究生院 ， 京 １０ ４ ） 北 ００ ９
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