激素在治疗肺间质纤维化中的作用

激素在治疗肺间质纤维化中的作用
赵丽丽;王颖;孙丽岩;张丽
【摘要】目的:研究激素在大鼠肺纤维化治疗中的作用.方法:将健康Wistar大鼠随机分为对照组20只和模型组30只,分别于实验的第7天、14天将对照组、模型组大鼠随机各处死5只,观察实验第7、14、21、28天各组大鼠取肺组织行HE染色和Mallory三色染色.结果:造模后首先出现肺泡炎,随着时间的延长,炎性反应逐渐减轻,肺纤维化程度逐渐加重；地塞组纤维化程度较模型组明显减轻.结论:地塞米松可以有效的拮抗肺纤维化的形成.
【期刊名称】《牡丹江医学院学报》
【年(卷),期】2011(032)004
【总页数】2页(P42-43)
【关键词】地塞米松;肺间质;纤维化
【作者】赵丽丽;王颖;孙丽岩;张丽
【作者单位】牡丹江医学院红旗医院呼吸内科黑龙江牡丹江 157003;牡丹江天利医药连锁有限公司黑龙江牡丹江 157000;牡丹江医学院红旗医院呼吸内科黑龙江牡丹江 157003;牡丹江医学院红旗医院呼吸内科黑龙江牡丹江 157003
【正文语种】中文
肺纤维化(pulmonary fibrosis，PF)是以慢性进行性弥漫性肺间质纤维化和肺生理功能障碍为特点的肺间质性疾病，肺纤维化是危害当代人类健康的重要疾病之一，
其发病率逐年增高，但发病机制尚不清楚，且目前国内外并无特效药物治疗。

1 材料与方法
1.1 材料佳木斯大学动物实验中心提供健康Wistar大鼠50只，博莱霉素(BLM－
A5)购于黑龙江省哈尔滨博莱制药有限公司，尼康全自动显微照相系统。

1.2 方法 (1)实验分组:佳木斯大学动物实验中心提供健康Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重170～200g，先随机分为对照组20只和模型组30只。

分别于实验的第7d、14d对照组、模型组各处死5只，对大鼠肺组织进行形态学、病理学观察，评价模型是否成功，若成功进一步将模型组剩余的20只大鼠分为模型组(单纯肺
纤维化组)10只、地塞米松治疗肺纤维化组(简称地塞组)10只，分别于实验的第21、28d对照组、模型组、地塞组每组各处死5只大鼠。

(1)模型制备:(1)大鼠肺
纤维化模型制备，模型建立参见文献［1］稍修改，使用速眠新II(0.8～1.2mL/kg)肌肉注射将大鼠麻醉后将其仰卧固定于鼠板上，剪去颈部毛，常规消毒皮肤后无菌操作下作长约1cm的颈中切口，逐层分离暴露气管，并用弯尖眼科钳经气管下方
穿过，轻微抬起气管，但不影响气道通气，在直视下用27G针头穿刺两软骨环间，抬高鼠板头端，使与桌面成30～35°。

保持针头与气道方向相同，并尽可能在气
道中央，一次性快速推注推注博莱霉素(5mg/kg体重)注射液0.2～0.3mL注入气管。

立即拔出针头，竖立鼠板，保持大鼠直立体位，左右来回旋转1～2min，使
药液尽可能到达两侧肺部。

手术后，然后缝合皮肤，置其于动物室喂养。

(2)地塞
米松治疗肺纤维化组模型制备，在肺纤维化模型基础上第15日开始每日肌肉注射地塞米松注射液3mg/kg。

(3)对照组，按照大鼠肺纤维化模型制备方法气管内注
射0.9%生理盐水注射液0.2～0.3mL。

第15日开始每日肌肉注射0.9%生理盐水
3mg/kg。

(3)病理学观察:将各组处死的大鼠分离肺脏，注入10%(体积分数)福尔
马林液1.5mL保持30min后，投入Bouins液固定24h，常规脱水，石蜡包埋后，切片(3μm)，行苏木精－伊红(HE)和三色染色。

光镜下观察有无炎症及纤维化发生。

以Szapiel等［2］的半定量法进行评价。

2 结果
2.1 大鼠肺组织大体形态学观察对照组:肺组织呈粉红色，表面光滑，质地柔软，
未见出血点，第7、14、21、28天均无明显变化。

模型组:造模后第7天，双肺呈暗红色，充血水肿，表面有散在出血点;第14天，双肺出血水肿增多，部分融合成片;第21天，双肺体积略缩小，颜色苍白，硬度增加;第28天，双肺体积缩小，少见陈旧性出血点，表面凸凹不平，可见斑片状，结节状实变，颜色苍白，硬度增加。

地塞组:造模后第21天，双肺充血水肿略减少，少量融合成片;第28天，双肺体积略缩小，较正常肺组织硬度略增加，双肺充血水肿明显减少，肺组织形态及色泽略苍白。

2.2 光镜观察对照组:造模后第7天，仅有部分出现轻度充血水肿，肺组织含有少
量胶原纤维，为细胞外基质的主要组成部分，其他时相未出现明显病理学变化(图
片1)。

模型组:造模后第7天，肺泡缩小，肺泡壁增厚，毛细血管充血，肺泡腔内
出现炎症细胞侵润，肺泡间隔增宽;第14天，肺泡腔内仍有大量炎症细胞渗出，形成严重的肺泡炎，纤维组织合成增加(图片2);第21天，肺泡腔内炎症细胞略减少，肺泡壁增厚，纤维组织合成明显增加(图片3);第28天，肺泡壁明显增厚，肺纤维
化程度加重，肺泡结构破坏，肺泡腔消失(图片4)。

地塞组:第21天，肺泡腔内炎
症细胞较模型组减少(图片5);第28天，肺泡腔内仍有炎性细胞，肺泡结构破坏较
模型组21天时轻，少量肺纤维化形成(图片6)。

图1 对照组肺泡结构完整，肺泡腔内无炎症细胞渗出HE×200
图2 模型组14天肺泡炎性细胞侵润，肺泡间隔增宽，肺泡炎加重HE×200
图3 模型组21天肺泡炎不明显，肺泡结构破坏HE×200
图4 模型组28天肺泡结构完全破坏，肺泡腔消失HE×200
图5 地塞组21天肺泡结构明显破坏较模型组21天轻HE×200
图6 地塞组28天肺泡结构破坏较模型组28天时轻HE×200
3 讨论
肺纤维化是一种慢性炎症性间质性肺疾病，其主要病理特点是:早期弥漫性肺泡炎，后期大量成纤维细胞病理性增生及基质胶原进行性积聚，最终导致正常的肺组织结构改变和功能丧失的一类疾病。

从起始症状到病情逐渐恶化，进而导致呼吸功能不全而死亡一般在5年左右，病因尚不清楚，其发病机制复杂，治疗困难。

本试验
对博来霉素导致大鼠肺纤维化进行了28d的动态观察，包括整体病情、精神、饮食、活动能力、一般反应、体重的变化以及肺组织病理学观察。

发现博来霉素注入气管后从第2天开始，大鼠精神状态、饮食、活动能力开始下降，从第7天开始
出现呼吸困难，脱毛，体重增长缓慢，随着时间的延长出现体重减轻，呼吸困难逐渐加重，活动能力逐渐下降。

第15天给予药物后，地塞组大鼠呼吸困难症状较模型组逐渐增强，体重减轻明显。

日本学者报道［3］，BLM可诱导肺纤维化大鼠发生过多的支气管和肺泡上皮细胞凋亡，从而破坏肺组织结构，导致肺纤维化。

曾有报道皮质激素抑制中性粒细胞凋亡。

皮质激素可能通过诱导巨噬细胞和中性粒细胞等肺内炎症细胞凋亡而抑制IPF肺泡炎的发生发展，但糖皮质激素长期应用有一定的副作用。

通过本实验的研究发现，与对照组相比，BLM可引起肺内大量细胞增殖，尤其在
肺泡炎阶段，以各种炎症细胞浸润和增殖为主。

BLM同时可诱导肺内多种细胞凋亡，包括肺组织结构细胞和浸润的炎症细胞。

与模型组相比，地塞组可以诱导更多的细胞凋亡，尤其在炎症的早期阶段，由于大量炎症细胞的凋亡，使得肺内炎症得到一定的控制，而且炎性细胞凋亡越明显，肺泡炎和肺纤维化越轻。

本实验表明地塞米松确实可以通过诱导肺内炎性细胞的凋亡而达到减轻肺泡炎症，减少纤维组织形成的作用。

参考文献
［1］ Szapiel SV，Elson NA，Fulmur JD，et al.Bleomycin－inducedinterstitial pulmonary disease in the nude，athymic mouse ［J］.Am Rev Respir Dis，1979，120:893 －897.
［2］ Koh YI，Choi IS，KimWY，et a.lEffects ofBCG infection onSchultzDale reaction，allergenspecific IgE levels，andTh2immune response in sensitized rats.Korean J InternMed，2001，16(2):180－186. ［3］ Kuwano K，Hagimoto N，Kawasaki M，et al.Essential roles of the Fas－ Fas ligand pathway in the development of pulmonary fibrosis.The Journal of Clinical Investigation，1999，104(1):13.。