牛羊无形体病检测技术的研究进展

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2019 年第 11 期 兽医实验室
应用到无形体的检测中。主要的血 清学检测方法包括酶联免疫吸附试 验（ELISA）、补体结合试验（CF）、 卡 片 凝 集 实 验（CAT） 等。 主 要 的 核酸分子诊断方法有聚合酶链反应 （PCR）、实时荧光定量 PCR（Real-time PCR）、环介导等温扩增（LAMP）等。
3）病畜治疗。血虫净，每千克 体 重 3.5 ～ 3.8mg， 配 成 5% ～ 7% 溶液深部肌肉注射，每日 1 次，连 注 2 ～ 3 次；黄色素，每头牛 2g 配 成 0.5% ～ 1% 的灭菌溶液，静脉注 射，病情严重牛，3d 后再注射一次； 在选用药物治疗的同时，配合使用 VB12 治疗贫血。治疗应采用体内外 联合给药驱虫，对症疗法，才能收到 更好的效果。
基金项目：锡林郭勒职业学院科研课题资助项目 (YB2016-32) * 作者简介：牛泽（1983-），男，讲师，执业兽医师，从事牛羊蜱传播疾病的临床和科研工作，E-mail：niuze1983@
份， 病 变 肝 脏、 肺 脏、 心 脏 组 织 3×3×3mL 各 1 份，肝门淋巴一份， 血液涂片 4 份，肝脏、肺脏、心脏病 变切口触片各 2 份病料涂片染色镜 检。血液涂片干燥后甲醇固定，用姬 姆萨染色法染色，镜检可见红细胞内 有梨形虫体呈石榴体分布，形似泰勒 焦虫。另做好病料备份保存。
无形体是一类严格细胞内寄生 的革兰氏阴性菌，以蜱虫为媒介进行 传播。无形体主要寄生在人及牛、羊 动物的血细胞中，引起的人畜共患病
被称为无形体病。无形体可引起牛 羊流产，产奶量下降，甚至死亡，造 成严重的经济损失。对于无形体病 的诊断，除了根据流行病 原学、血清学和分子生物学检测方法 进 行 确 诊。 最 近 几 年， 随 着 单 细 胞 测序技术的快速发展，该技术也已
二、血清学检测方法
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）。 酶联免疫吸附试验法是目前使用较 为普遍的一项免疫诊断技术。由于 ELISA 具有快速、特异、灵敏及易于 操作等特点，现已广泛应用于各种病 原微生物感染所导致疾病的免疫诊 断。其诊断的基本原理是将抗原（或 抗体）吸附于固相载体，在载体上进 行免疫酶的反应，与底物作用显色 后可以用肉眼或者酶标仪判定结果。 针对无形体的诊断，同样可以采用酶 联免疫吸附试验。常用的包括抗原 捕捉 ELISA、斑点酶联免疫吸附试 验（Dot-ELISA）、竞争 ELISA、间接 ELISA。由于 MSP5 基因编码的蛋白 在无形体中具有高度的保守性，因此 利用 MSP5 蛋白作为抗原建立的这 些 ELISA 方法也可以用来检测其他 无形体。同时由于 MSP5 这种保守性， 使 得 基 于 MSP5 蛋 白 建 立 的 ELISA 方法不能将无形体区分开而进行鉴 别诊断。即使在一些经过验证的商 品试剂盒中，也存在交叉反应的可 能性。
六、疫情综合分析及确诊
西某村和先某村都是沿山村庄， 部分散养户牛羊采用季节性放牧的 饲养方式，根据实验室检验结果以及 临床症状、流行病学特点初步诊断为 牛泰勒焦虫病。为了确诊，我中心邀 请兰州兽医研究所寄生虫病研究中 心蜱传专家现场诊断、实验室染色镜 检、病料样品分子生物学鉴定后，确 诊该疫情是牛泰勒焦虫病。家畜是 由长角血蜱叮咬造成疫情传播和感 染的，这类疫病多发生在每年的 4-11 月，6-7 月份为发病高峰期，10 月底 以后很少发病，由蜱虫传播，家畜身 上有蜱虫爬行或叮咬就有可能感染 焦虫病。焦虫病是家畜的一种血液 寄生虫病，寄生在红细胞和网状内皮 系统的细胞中，牛羊焦虫病发病率高
3. 疫情处理 1）对放牧牛羊圈舍环境进行全 面彻底消毒灭虫，驱除所有放牧牛羊 体表蜱虫。 2）发病区域内牛、羊停止放牧。 3）病牛、病羊用三氮脒、血虫 净类药物治疗，同群放牧牛羊血虫净 注射预防。 通过 10 余天消毒、驱虫、对症 治疗等措施，该养殖区域没有新的病 例发生，病畜也逐渐恢复健康，疫情 得到了有效控制。
2. 治疗方法 1）牛体灭蜱。春秋两季（即放 牧期开始和放牧结束时）和放牧期间 蜱大量活动时，每 7d 驱虫 1 次，给 牛羊药浴或畜体喷洒 1％敌百虫液， 环境圈舍也要灭虫，可用酒精喷灯高 温处理，牛舍地面、墙壁、食槽等缝
隙中的蜱虫，然后用水泥抹上缝隙。 2）化学药品预防。在畜群发病
开始时，每隔 15d 用血虫净每千克体 重 0.002g 配成 7％的水溶液，肌肉注 射 1 次。
而病死率也比较高。
七、防治
1. 治疗原则：要始终做到“预 防为主，防重于治”的原则，切断疫 病传播途径，如果有家畜已经感染焦 虫病，就要做到“全群驱虫，分群隔 离，联合给药，对症治疗”的原则。
养殖户在放牧期间，牛羊尽量 少去寒冷阴湿、蜱虫出入比较多的地 方放牧，平时应留意观察牛羊身体上 有无蜱虫寄生和叮咬现象，一旦发现 畜体有蜱虫寄生，就要及时用外用灭 寄生虫药物消灭蜱虫，防止焦虫病。 如果有家畜已经感染焦虫病，就要 及时隔离，对全群放牧家畜药浴或畜 体喷药灭除体外寄生虫，定期消毒圈 舍。 病 畜 及 时 隔 离 饲 养 并 迅 速 进 行 体内外联合驱虫等对症治疗方法，综 合性防制措施。
一、病原学检测
病原学检测是以血液涂片和淋 巴结穿刺涂片染色镜检为主。采集 病畜的血液或淋巴穿刺液后涂片，待 血膜或淋巴液膜自然晾干后，用瑞 氏 - 吉姆萨染色液进行染色，染色结 束后水洗、晾干，然后置于油镜下观 察。该方法简单可靠，但对操作的熟 练程度有要求，而且在染虫率较低或 病原早期感染的情况下，在显微镜下 看到病原较为困难，容易发生漏检。
兽医实验室 2019 年第 11 期

牛羊无形体病检测技术的研究进展
牛泽 1* 张勇 1 尉超 2 任殿玉 3 刘丽霞 1 梁薇 1 1. 内蒙古锡林郭勒职业学院草原生态与畜牧兽医学院 2. 北京大学生命科学学院生物动态光学成像中心 3. 内蒙古锡林浩特市动物疾病预防控制中心