猪传染性胃肠炎（tge）病毒在组织细胞上增殖及其抗体的鉴定研究

不稳定，３天后接种猪４头，只有两头发病；１０天后接种，未检测到瘸毒（Ｂａｙ
嘲１：负染电镜下的冠状病毒毒粒形态嘲
（Ｐｉｇｕｒ。

ｌ：Ｔｈ。

ｍｏｆｐｈｏｌｏｇｙｏｆｃ。

ｒｏｎｏＶｉｆｕｓｉｎｎｅｇ拽ｔｉＶｅ
ｅｌ尊ｅｔ芏ｏｎｉｃ—越ｉｅｆｏｓｅｏｐｅ）
图２：冠状病毒毒粒结构示意图
（Ｆｉｇｕｒｅ２：ＴｈｅｍｏｄｅｌｏｆｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｃｏｒｏｎｏＶｉｒｕｓ）
８
图３：负染电镜下的ＴＧＥ病毒毒粒形态图
（Ｆｉｇｕｒｅ３：ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＴＧＢＶｉｒｕｓｉｎｎｅｇａｔｉＶｅ
ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ—ｍｉｃｒｏｓｃｏ曲ｅ）
等，１９５２）。

置于３７℃时，每２４ｈ病毒滴度下降一个１０９１ｏ。

细胞培养瘸毒分男ｌ存放予一２０℃、～４０℃、～８§℃，３６５天后漓菠无戮显下降，霄｜ｉ存放子３７℃４天，感染性全部消失。

（３）化学稳定性：ＴＧＥＶ可被０．０３％福尔马林、１％Ｌｙｓｏｖａｔ（苯酚和醚）、Ｏ．０１％丙内酯、次氯酸钠、氢氧化钠、碘、季胺盐化合物、隧和氯仿灭活。

（《）竞稳定性：病毒对光穰敏感，鞋ａｅｌｔｅｆｍａｎ（１９６３）掇道，将含有ｌ０５感染测量（ＰｉＤ）猪粪便样品放在隧光下６ｈ翅痰毒被灭淫。

（５）体内特征：如其它肠道瘸毒那样，ＴＧＢＶ野毒株可抵抗胰酶，对ｏ．５％胰酶能抵孛亢７ｈ，在猪胆汁中比较稳定，在ｐ｝ｌ３条件下稳定。

由于这嫂特性，病毒在嚣和小躲中煞够存活。

２。

与其它冠状病毒关系
冠状病毒宿主范围广泛，不同种动物（禽、火鸡、猪等）分离株又有众
颂士研究生学位论文猪传染性胃肠炎（ＴＧ舯病毒在组织细胞上增殖及其执体的鉴定研究
毒有十余种，涉及猪、禽、牛、犬、猫、鼠等多种动物。

已报道４种冠状瘸毒能感染猪，即猪血凝性脑脊髓炎病毒（｝ＩＢＶ）、猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥｖ）、猪流行陡羧泻瘸毒（擎ｌｉ转Ｖ）及猪呼吸遭惹状病毒（ｐ嚣ｃＶ）。

３。

“爿暑典”（ｓＡＲｓ）病毒与动物冠状瘸毒的亲缘关系
中圈军事医学科学院在对“非典”病毒分离鉴定的基础上，通过ＲＴ—ＰｃＲ方法扩增出病毒的ｃＤＭ片殿，进行了克隆测序。

经与Ｇｅｎｅｂａｎｋ登记的目前滔蠢冠袄病毒基霞廖到院较，采爝ｊｏｔｕｎ｝｝ｅｉｎ法绘秘系统发生褥，表鹱所分离的病毒无论楚与现有入冠状病毒还是与动物冠状病毒的亲缘关系均较远，其同源性均不超过７０％。

因此，所分离的病毒可能是一种新的、已发生变弊的冠状病毒（见图４）。

美瀚穗翔拿太的病毒学家将“｛｝典”瘸毒分麓接释小鼠、太鼠、豚鼠和兔，结聚均未表现出致病性。

我国军事医学科学院用“墨Ｅ典”病毒接种乳小鼠，可从肺脏检出病毒，感染小鼠的临床表现和瘸理学检查表明，无规律性。

图４：ｓ＾Ｒｓ病毒负染电镜形态
（Ｆｉｇｕｒｅ４：ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆＳＡＲＳｖｉｒｕｓｉｎ
ｎｅ９８ｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏⅡｉｃ—ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）
图５：９６孔板内ｓＴ细胞
（Ｆｉｇｕ化５：ｓＴｃｅｕｓｉｎ９６－ｗｅｎｍｉｃｍｐｌａｔｅ）（１０ｘ４０）
图６：ｓＴ细胞单层
（Ｆｉｇｕｒｅ６：ＳＴｃｄＩｍｏｎｏｌａｙｅｒ）（１０Ｘ４０）
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圈７：ＰＫｌ５细胞单层
（Ｆｉｇｕｒｅ６：ｐｋｌ５ｃｅｕｍｏｎｏＩａｙｅｒ）（１０ｘ４０）
２．毒价测定
将保存于一７０℃超低温冰柜病毒液作１０倍梯度稀释，每稀释度用６孔。

每孔加稀释液２５ｕｌ，该稀释度病毒液２５ｕ１，细胞悬液５０ｕｌ（８～１０·１０５／ｍ１）。

细胞对照孔加５０ｕｌ稀释液、５０ｕｌ细胞悬液５０ｕｌ（８～１０·１０５／ｍ１）。

置３７℃、５％ｃｏｔ培养箱培养，记录ｃＰＥ出现孔（三天为期），按Ｒｅｅｄ和Ｍｕｅｎｃｈ法计算毒价（表１、表２）。

表ｌ：毒价检测
（Ｔａｂｌｅ１：ｖｉｒｕｓｔｉｔｒａｔｉｏｎ）
细胞对照（ｃｅｌｌｃｏｎｔｒ０１）毒价检测（ｖｉｒｕｓｔｉｔｒａｔｉｏｎ）
ＣｃＣｃＣｃＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔ
ＣｃＣｃＣｃＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔ
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ＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔＶｔ麟谶罐※※黼繁黼
顼士再Ｉｆ巍生学位论文猪传染性鬻肠炎ｆＴＧＢ）病毒在组织细胞上增殖及其抗体的鉴定研究
用ＳＴ、ｐｋｌ５细胞增殖的０９０４批次ＴＧＥ病毒用ｐｋｌ５细胞检测毒价，分别为４｛１０５ＴＣＩＤ５。

／ｍ１和４ｍ１０３６ＴｅｌＤ５。

／ｍ１．
这说鹱无论是焉细耱增蹙瘸毒，还是溅毒徐，ｓＴ缁骢均较馥ｊ５缨施潜ＴＧＥ￥敏感且增建效暴好。

在癍毒增殖时Ｓ罩细胞较馥ｌ５缨胞意２个漓度左右（４ｓ１０５６／４ｍ１０３。

ｏ，４＊１０４６／４ｍ１０１４，４ｓ１０５＇４／４￥１０１６）而在检测毒价时ｓＴ细胞较ｐｋｌ５细胞高１个滴度左右（４＋１０５６／４＊１０４５，４＋１０３‘。

／４ｍ１旷４）。

４．ＴＧＢ毒株在细胞单层上ｃＰＢ表现
ＴＧＥｖ在ｐｋｌ５细胞单层上的ｃＰＥ表现（９６孔培养板）：局部８～１２个细胞圆缩聚集成病灶，逐渐与细胞面脱离，悬浮于培养液中（图８）。

早期表现ｃＰＥ有时会与吸附在细胞面上的细胞（未死亡但也不生长）相混淆，判定结果时应结合血清对照孔，细胞对照孔及工作抗原对照孔细胞生长状况进行比较判定（见图９）。

因此，建议尽可能用ｓＴ细胞进行ＴＧＥ病毒的增殖和抗体检测。

在用细胞进行病毒增殖时（培养瓶），未表现病变的细胞相互牵引，形成一薄薄细胞单层，细胞很少出现空斑。

图８：ＴＧＥ病毒在ｐｋｌ５细胞上细胞病变
（Ｆｉｇｕｒ＿ｅ８：ＴＧＥｖｉｒｕｓｃＰＥｉｎｐｋｌ５ｍｏｎｏＩａｙｅｒ）（１０ｘ４０）
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图９：ＴＧＥ病毒在ｐｋｌ５细胞上早期细胞病变
（Ｆｉｇｕｒｅ９：ＴＧＥｖｉｒｕｓＣＰＥｉｎｐｋｌ５ｍｏｎｏｌａｙｅｒｉｎｅａｒｌｙｐｅＩ喧ｏｄ）（１０ｘ４０）
ＴＧＥＶＰｕｒｄｕｅ毒株在ｓＴ细胞单层上的ｃＰＥ表现：细胞圆缩、裂解为主细胞面很快被破坏。

病灶早期散在分布，后期整个细胞面脱落（图１ｏ）。

在细胞培养瓶中与细胞培养孔上表现一致。

图ｌｏ：ＴＧＥ病毒在ｓＴ细胞上细胞病变
（Ｆｉｇｕｌ℃ｌｏ：ＴＧＥｖｉｒｕｓｃＰＥｉｎｓＴｍｏｎｏｌａｙｅｒ）（１０ｘ４０）。