发酵罐灭菌——精选推荐

发酵罐灭菌
发酵罐操作与灭菌技术
常⽤的灭菌技术⼀般分为；物理灭菌和化学灭菌。

物理灭菌⼜包括湿热灭菌、⼲热灭菌、射线灭菌法和过滤灭菌等。

⽽化学灭菌主要是使⽤化学试剂（如甲醛、苯酚、新洁尔灭、过氧⼄酸、⾼锰酸钾等）进⾏某些容器或物料以及⽆菌区域的灭菌。

在⽣物发酵⽅⾯，常⽤的设备是机械搅拌式发酵，其杀菌效果的好坏直接影响到发酵是否能正常进⾏。

由于⼯业操作的特点，发酵罐灭
菌普遍采⽤湿热灭菌法。

⼀．⼩型发酵罐操作和酵母菌培养
实验室所使⽤的⼩型通⽓搅拌发酵罐具有体积⼩，耗电少，不宜染菌，单位时间、单位体积的⽣产⼒⾼，代谢放出热量易于移去，操作控制和维修⽅便等特点，因此能较好的满⾜微⽣物的⽣长和代谢的需要。

1.设备和材料
1L发酵罐、5L发酵罐、50L发酵罐、⼀套空⽓除菌系统、供检查⽆菌⽤的⾁汤培养基和装置。

2.发酵罐操作步骤
2.1发酵罐的清洗
发酵罐使⽤前后都应认真清洗，特别是前后两次培养采⽤不同的菌株时，更应注意清洗和杀菌⼯作。

发酵罐内可进⾏清洗的任何部分都应认真清洗，否则都可能成为杂菌的滋⽣地。

易被忽略⽽不能充分清洗的地⽅有喷嘴⾓内部与取样管内以及罐顶等处。

2.2 种⼦培养基及培养条件
蛋⽩胨10g，葡萄糖40g，蒸馏⽔100ml，pH⾃然。

500ml三⾓瓶装液量100ml，115℃，灭菌20min。

培养条件：⽤接种环从保存斜⾯中接⼀环⾄三⾓瓶中，150r/min，28℃，摇瓶培养48h。

2.3 发酵罐的组装⼯作
①连接好冷却⽔管。

若采⽤⾃来⽔冷却，连接部要充分牢固，并且注意连接管管径与⾃来⽔管管径⼀致，尽可能采⽤耐压管。

②由于通⼊的空⽓有⼀定压⼒，应注意连接压缩空⽓的管⼦应能承受⼀定压⼒。

③安装pH及溶解氧等检测装置，注意各接线⼝不要出现差错。

由于操作过程要和⽔打交道，故线路连接⼀定要注意安全，要特别注意防⽌漏电。

2.4 发酵罐灭菌
①排⽓管为玻璃管，内装有棉花，以保证蒸汽能⾃由出⼊发酵罐，同时不会出现染菌现象。

②取样⼝上连接⼀段硅胶管，在硅胶管上安装节流夹，以防⽌培养基在灭菌是流出。

③装⼊发酵罐溶积60%的培养基（成分同种⼦培养基）后，将发酵罐放⼊灭菌釜内，在115℃下，灭菌20min。

当灭菌完成后，温度降到60℃以下时，打开灭菌釜，确认发酵罐上所连接的管路完好后，将罐去除。

尽快将通⽓管接好，确认排⽓⼝正常后，以0.3-0.5L/min通⼊空⽓。

接通冷却⽔管路，开搅拌在低速下进⾏培养基的冷却。

2.5 取样与分析⽅法
⾃培养操作开始起，每3h取⼀次样。

取样时，将取样管⼝流出的最初15ml左右
下测定吸光度。

所得数值培养液作为废液，取随后流出的培养液10ml，在OD
505
基于已制得的菌体量与吸光度之间的曲线，换算出菌体浓度。

⼆发酵菌的空消技术
1 发酵罐的清洗
打开罐底排污阀，⽤冷⽔冲洗罐壁，如壁内壁有沉积物，操作⼈员必须下罐进⾏⼈⼯铲除，否则易包藏杂菌成为污染源。

进罐清洗必须两⼈进⾏，⼀⼈进罐清洗，⼀⼈在外监护。

同时与罐体相连的取样管道，进料管道，排污管道及有关阀门都要通⽔冲洗⼲净，最好通以沸⽔，以提⾼洗涤效率，洗完后盖上⼊孔盖。

①发酵罐空消操作
②打开罐顶各排汽阀，开三路进汽（罐底、风管、取样管）。

③开始时，蒸汽以下进上出为主，蒸汽由罐底和风管进⼊，由罐顶所有排汽阀排出冷空⽓。

在蒸汽排出时，即关闭各阀门，稍开排汽阀，当罐压上升到
1.5-
2.5kgf/cm2(1kgf/cm2=98.0665kpa)时，开罐顶各排汽阀，排汽历时
15-20min，蒸汽改为上进下出为主，即关闭底部蒸汽阀，关⼩进风管汽阀，蒸汽主要从取样管进，连消进料管进⼊，空消过程中蒸汽应将两只⼤罐间倒种管道、压料进风管道、接种管道以及各排汽阀打开，排汽消毒（两个冲视镜阀开启短暂时间即可）。

①待蒸汽压⼒上升到1kgf/cm2以后，温度115℃，调节进汽阀和排汽阀⼤⼩，维持罐压1kgf/cm2，60min；1.2-
1.51kgf/cm2，45min;1.5-
2.01kgf/cm2,30min。

②保压时间到，关蒸汽阀，排汽到罐压为0kgf/cm2，，待进料。

③分过滤器灭菌
开启使⽤时，⽤从空⽓压站出来的常温空⽓对分过滤器吹风24h左右，检查⽆菌，即可使⽤。

以后如果不使⽤，也必须保持分过滤器通常温空⽓，以免染菌。

三发酵罐的实消技术
1 进料
空消完毕，开始进料，进料约2/3体积时，开搅拌。

由于加热时物料糊化膨胀，故先不定容。

当温度达到70℃时定容。

2 液化
底路直接进蒸汽加热⾄75℃左右，关蒸汽，加⼊⽤50℃⽔调匀的α-淀粉酶，严防酶结块，根据⽣产需要，调整加⼊量，从进风管通⼊少量空⽓，翻腾
10-15min，关闭进⽓。

3 实消
⽤⽔冲洗⼊孔盖，盖好盖⼦进⾏实消，先将蒸汽管道内的残存⽔放完，然后通三路蒸汽，⼀路罐底，⼀路进风管，⼀路取样管，同时打开罐顶所有排汽阀门，⼩旋塞及压⼒表下的排汽旋塞，让蒸汽排出，先⼤后⼩，待罐压上升到1.2 kgf/cm2，温度121℃时，逐步关⼩各排汽阀门，保温保压25-30min。

保压时间到，关蒸汽，此时应即从分过滤器进⽆菌空⽓，开排⽓阀，关闭罐顶的所有阀门，开冷却⽔对发酵罐进⾏降温，待温度冷⾄35℃左右进⾏接种。