基础知识和7180的应用

T2 S+R1 T1 T
分析方法续

速率A
加R2
A
S+R1 S R1
T1
T2
T
分析方法续

A R2
2点速率法
S+R1
T1
T2
T
分析方法续
1. 2. 3.
双项同测法 3 point Rate B 、1point﹠rate 什么是双项同测 三种方法的应用 种方法的应用
测光点的选择

与分析方法有关 与试剂的加入时间有关 举例： 以7180为例
生化分析仪( (Chemistry y Analyzer y ）
是临床检验中经常使用的重要分析仪器之一。它通 是临床检验中经常使用的重要分析仪器之一 它通 过对血液或者其他体液的分析，来测定各种生化指标 : 如转氨酶 血红蛋白 白蛋白 总蛋白 胆固醇 肌肝 如转氨酶、血红蛋白、白蛋白、总蛋白、胆固醇、肌肝、 葡萄糖、无机磷、淀粉酶、钙等。结合其他临床资诊 断 进行综合分析 可以帮助诊断疾病 对器官功能做 断，进行综合分析，可以帮助诊断疾病，对器官功能做 出评价，鉴别并发因子，以及决定今后治疗的基准等。
生化仪原理
郎伯一比尔 郎伯 比尔( Lambert-Beer) Lambert Beer) 定律
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：摩尔吸收系数： ：摩尔吸收系数： 表示物质对某一波长的辐射的吸收 特性。e 愈大，表示物质对某波长辐 射的吸收力愈强，因而分光光度法测 定的灵敏度就愈高。 定的灵敏度就愈高 C：溶液浓度 b：溶液的厚度
基础知识和7180应用
关于7180

基本概念 酶的生物学特性 生化仪简介 日立7180简介 参数输入介绍
基本概念

准确度 灵敏度 精密度 溯源性
基本概念


准确度：测定值和真值之间的符合程度。用回收试验来检查 准确度：测定值和真值之间的符合程度 用回收试验来检查 精确度：指同一标本用同样的方法在相同的条件下连续多次重复 测定所得到的各次结果之间或各次结果和均值之间的符合程度。 主要用重复性试验来检查 （SD或CV） 主要用重复性试验来检查。（ 灵敏度：化学反应中的最小检出量。越小越灵敏。不一定反应的 灵敏度越小越好。要由医学决定水平来决定。 特异性 专 性 只和待测物质起反应 对其它物质毫无或基本 特异性：专一性，只和待测物质起反应，对其它物质毫无或基本 无影响。 误差：测定值与真值之间的差异。分系统误差和偶然误差。


零级反应期： 零级反应期 在酶反应的最初阶段，底物过量的 情况下，单位时间内产物或底物的 变化量或反应速度是恒定的。 变化量或反应速度是恒定的 反应速度与酶活性成正比。 一级反应期： 随着反应时间的不断延长，底物不 断被消耗，使酶不能被饱和，产物 或底物变化曲线会逐渐平坦，即反 应速度下降。 反应速度与底物浓度成正比。 反应速度与底物浓度成正比
用复色光通过反应体系后，再通过单色器对吸收后的复色光分 成单色光测定。
（一）样品系统 （ ）样品系统(Sample)
1、样品盘或进样轨道 样 盘或进样轨道 2、样品针 样品针 3、样品条码识别系统
二）、试剂系统 试剂系统( (Reagent) g )
1、试剂舱 2、试剂针 试剂针 3、试剂条码识别系统
它表示一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成 正比。
影响因素

单色光的纯度 溶液的浓度、PH、溶剂和温度等 适用于稀溶液，要求吸光度在0.2-0.7之间
前分光与后分光
特定波长的单色光通过溶液，其吸收强度与溶质浓度和光通过的距离 （即光径）成正比。 （即光径）成正比
酶学常识
血清酶学测定是临床化学检验的重要组成部分,在 肝脏功能评价 心肌损伤判断 胰腺炎鉴别诊断以及 肝脏功能评价、心肌损伤判断、胰腺炎鉴别诊断以及 在其他方面的应用中起着重要的作用,是现代临床化学 中最频繁测定的项目之一。
酶的特性
1 1. 2. 3. 4.
高效催化性 没有副反应 高度专一性 催化作用受调控
ɑ-同戊二酸+L-丙氨酸 → LDH 丙酮酸 + NADH + H+ → L-谷氨酸+丙酮酸 L-乳酸+NAD+
NADH偶联的LDH
指示反应
指示反应

使单一的色素原显色：无色色素原过氧化物酶 （POD）存在下被H2O2氧化后可生成有色的色素。 氧化后可生成有色的色素 使成对的色素原显色：必须要两个色素原共同存在， 再在指示酶POD的催化下生成色素 如T i d 反应 再在指示酶POD的催化下生成色素。如Trinder反应
（六）、程序控制系统
1、程序控制 程序控制 2、数据处理
分析方法
常用分析方法 1 Point 2 Point End Rate A 2 Point & Rate
分析方法续

A
1point
S+R
T1
T
分析方法续

A
1point
S+R
T1
T
分析方法续

2点终点法
加第二 试剂 A

酶活力

酶活力国际单位：一个国际单位为在实验条件 酶活力国际单位 个国际单位为在实验条件 下（如温度为25度、最适PH、最适地物浓度 时） 每分钟催化 微摩尔底物变化所需要的 时），每分钟催化一微摩尔底物变化所需要的 酶量。可用IU/L或IU/ml表示。 酶活性是通过测定酶促反应过程中单位时间内 底物的减少量或产物的生成量，即测定酶促反 应的速率来获得的。
（三）、反应系统 反应系统
1、反应杯 反应杯 石英或硬质玻璃、无紫外光吸收的丙烯酸塑料 一次性 2、搅拌系统 搅拌棒：扁平棒状或扁平螺旋状 超生搅拌
（四）、清洗系统 四 清洗系统

清洗机构
（五）、比色系统 系统
1、光源：卤素钨丝灯，波长为325～800nm 2、单色器： 滤光片：价格便宜，但易变潮霉变，从而影响检测结果的准确性， 半自动生化分析仪多采用此种滤光片。 半自动生化分析仪多采用此种滤光片 3、光栅： 全息反射式光栅：是在玻璃上覆盖 层金属膜后制成，有 定程度 全息反射式光栅：是在玻璃上覆盖一层金属膜后制成，有一定程度 的相差易被腐蚀； 蚀刻式凹面光栅：是将所选波长固定地刻制在凹面玻璃上，耐磨损、 抗腐蚀 无相差 全自动生化分析仪多采用光栅分光 抗腐蚀、无相差。全自动生化分析仪多采用光栅分光。 4、检测器：由光敏二极管及放大电路组成
常用 具酶 常用工具酶
1. ①
NADH 或NADPH偶联的脱氢酶 NADH+或NADPH 乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 NADH或NADPH在340nm有特征性光吸收，而它 或 在 有特征性光吸收，而它 们的氧化型NAD+或NADP+则没有这个吸收峰， 340nm波长处的吸光度与NAD（P）H的浓度成 波长处的吸光度与 （ ） 的浓度成 正比。
常用 具酶 表 常用工具酶（表二）
工具酶 具酶 虫荧光酶 己糖激酶 甘油激酶 丙酮酸激酶 肌酸激酶 脂肪酶 乙酰胆碱酯酶 胆固醇酯酶 a-葡萄糖苷酶 葡萄糖苷酶 尿素酶 肌酐酶 磷酸葡萄糖变位酶 PGluM G u HK GLyK y PK CK LIP AchE CHE 英文缩写 用途（被测定的化合物） 用 被测定的化合物 ATP（三磷酸腺苷） 葡萄糖、果糖、ATP 甘油 丙酮酸、ADP 肌酸、磷酸肌酸、ATP、ADP 甘油三酯 甘油 酯 乙酰胆碱 胆固醇酯 a-葡萄糖苷 葡萄糖苷 尿素 肌酐 1-磷酸葡萄糖 磷酸葡萄糖
H 2O 2
+
色素原
显色物质 +H2O 色原氧化
指示反应 例 指示反应（例二）
使成对的色素元显色。必要的两个色素原共同存在再指示 使成对的色素元显色 必要的两个色素原共同存在再指示POD的催化生成色 素。如Trinder反应色素原酚和AAP作用生成红色色素有较宽的吸收峰在500nm 处的摩尔消光系数为13×103。

二、比色分析法 色分析法

比色法：
用可见光作光源，比较溶液的颜色深浅以测定所含 物质的浓度的方法。

紫外分光光度法：
用紫外光源测定无色物质的方法 用紫外光源测定无色物质的方法。


比浊法和散射比浊法：
（透射）比浊法：在光源的光路方向上测量透射光与 透射 浊法 在光源的光路方向 测量透射光与 入射光强度的比值和胶体溶液中质点的关系。 散射比浊法：在光路的5-90度方向上测量
②
常用 具酶 例 常用工具酶（例一）
一、MDH偶联NADH
L-天门冬氨酸 + a-酮戊二酸 AST --------- L-谷氨酸 + 草酰乙酸
草酰乙酸
+ NADH + H+
MDH -----------
L-苹果酸 + NAD+
MDH偶联NADH
常用 具酶 例 常用工具酶（例二）
NADH偶联的LDH ALT
18秒转动一圈， 秒转动 圈 10分钟转34圈。 圈 R1：加完样品后直接加入。 R2：1.5 1 5分钟左右加入，在 分钟左右加入 在5、6圈之间加入。 圈之间加入 R3：5分钟左右加入，在16、17圈之间加入。 R4：10分钟左右加入，在33、34点间加入
测光点选择
速率法公式
IF : S+R1<90s 第一测光点 第 测光点6+3T1 第二测光点6+3（T1+T2） IF：90s<S+R1<300s 第一测光点18+3T1 第二测光点18+3（T1+T2） Note: T1和T2分别是加入R2 后的延迟时间和检测时间 后的 迟时间和检测时间 下面举例说明
葡萄糖 +O2 +H2O
GOD POD
葡萄糖酸 +H2O2
2 H2O2 + APP + 酚
醌 + 4 H2O
指示反应
生成色素为红 色或者粉红色
硝基苯衍 物 硝基苯衍生物

芳香酯酶、磷酸酯酶和硫酸酯酶：对-硝基酚和有机 芳香酯酶 磷酸酯酶和硫酸酯酶 对 硝基酚和有机 酸或无机酸形成的酯类 糖苷酶：对硝基酚和糖苷衍生物 γ-谷氨酰转肽酶、芳香酰胺酶和胰蛋白酶：对-硝基 苯胺的氨基酰衍生物 故硝基苯酚或硝基苯胺作为底物的结合型化合物均无 色，而 旦水解或游离型产物在p 大于 的碱性条件 色，而一旦水解或游离型产物在pH大于8的碱性条件 下能生成黄色的醌类离子型化合物，在400nm～410nm 有光吸收峰，其吸光度与浓度成正比。
指示反应 例 指示反应（例一）

使单 色素原显色 使单一色素原显色 色素元是一种无色的色素前身，在指示酶过氧化物酶（POD）存在下被 H2O2氧化后生成有色色素。联苯胺色素元（TMB）是常用色素元，生成 亚胺型色素和偶氮苯化合物 以GSP(糖化血清蛋白)为例： 亚胺型色素和偶氮苯化合物。以
酮胺氧化酶 糖化蛋白 蛋白酶K 糖化蛋白碎片 过氧化物酶 KAO 氨基酸+H2O2

酶活力的影响因素
1. 样品处理的影响 1 a 溶血 b 抗凝剂 c 样品的稳定性 d 样品稀释 2 . 测定条件的影响 a 温度 b PH 3. 缓冲液
工具酶 具酶
1. 2. ① ②
作为 剂 作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶。 测 物浓度或酶 的酶 分两种方式： 借助酶来测定某一化合物的浓度 借助酶来测定另一种酶的活力
常用 具酶 表 常用工具酶（表一）
工具酶 甘油脱氢酶 3-磷酸甘油脱氢酶 L-乳酸脱氢酶 苹果酸脱氢酶 葡萄糖脱氢酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 葡萄糖氧化酶 胆固醇氧化酶 3-磷酸甘油醛脱氢酶 谷氨酸脱氢酶 尿酸酶 过氧化氢酶（触媒） 过氧化物酶 Cat POD 英文缩写 ADH GLyDH LDH MDH GLuDH G6PD GOD CHOD GAPDH GLDH 用途（被测定的化合物） 甘油 3-磷酸甘油 丙酮酸、乳酸 草酰乙酸、苹果酸 葡萄糖 6-磷酸葡萄 葡萄糖 胆固醇 3-磷酸甘油醛 谷氨酸、氨 尿酸 过氧化氢 过氧化氢
一、生化仪的发展史 生化仪的发展史

第一代自动生化分析仪：流动式 第 代自动生化分析仪：流动式
指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流 动的过程中完成。


20世纪70年代以后
分立式( discrete):占主流 2、离心式( centrifuge)：每个待测样品都是在离心力的作用下，在 各自的反应槽内与试剂混合，完成化学反应并测定。 3、干化学式 干化学式(drying (d i )：是将试剂固相于胶片或滤纸片等载体上，每个 是将试剂固相于胶片或滤纸片等载体上 每个 待测样品滴加在相应试纸条上进行反应及测定。操作快捷、便于携带 是它的优点。多用于急诊。