无创产前筛查采血操作规范

⽆创产前筛查采⾎操作规范
附件3
胎⼉染⾊体⾮整倍体（T21、T18、T13）检
测样本采集⼿册
⼀、受检者准备
1．检测对象：孕周范围为孕12-24周的孕妇。

2．采样体位：坐位取⾎，且在采⾎前患者需要有10分钟时间稳定⾃⼰的体位。

【注意事项】
要求受检孕妇先进⾏B超检测，确认胎⼉为单活胎。

采⾎前24⼩时内避免运动和饮酒，不宜改变饮⾷习惯和睡眠习惯。

⼆、样本采集前准备
1、知情同意书签署：送检医⽣与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性、临床意义及潜在的风险，并指导受检者签署知情同意书。

对于孕周⼤于24周并坚持要求进⾏该检测的受检者，由送检医⽣指导其签署知情同意书补充条款。

2、送检单填写：要求⽤钢笔或签字笔填写，并使⽤正楷字体，字迹清晰，填写完整。

3、送检单必填信息：送检单位、送检医⽣、采⾎⽇期、受检者姓名、年龄、孕周、B超检查结果、⾝份证号码、联系电话。

4、信息核对：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保⼀致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作⽬的以取得配合。

5、样本标识：在采集管、知情同意书、送检单上贴上样本唯⼀条码，并注明受检者姓名、年龄、孕周、检验项⽬等信息，确保与送检单⼀致。

【注意事项】
1．粘贴条码标签时，应使条码与采集管的管长平⾏，字母朝管⼝⽅向，避免以环绕管壁粘贴的⽅式使管周被遮挡，⽽⽆法清晰看到管内样本情况。

（条码7个，分配：患者⼀个、采⾎机构⼀个、保健所3个、保健院⼀个、检测中⼼⼀个）
2. 样本采集后使⽤的条码必须为抗冻条码，并且粘贴牢固，确保在运输、检测、储存过程中不会脱落或字迹模糊不清。

三、样本采集
1、采样器：医⽤⼀次性采⾎针、10 mL EDTA抗凝管、灭菌棉签、⽌⾎带、消毒液。

2、采集操作：
全⾎标本的采集—使⽤普通的10mlEDTA采⾎管：
严格按照《实验室操作技术规范》的要求采取10 mL孕妇外周⾎，采⾎后请⽴即缓慢颠倒6次使⾎液与管内成分混匀（如图1），拖延颠倒混匀时间可能会造成检测失败。

混匀后⽴即放直⽴于4℃冰箱内，并在6个⼩时内进⾏⾎浆分离。

按照⽆创产前检测⾎浆分离要求操作（见附件），分离后样本放⼊-20℃冰箱储存。

⾎浆样本需在0℃以下冷冻运输，不应超过72⼩时
图1. 颠倒混匀⽰意图
【注意事项】
1.不可使⽤肝素抗凝的采⾎管进⾏取样.。

2.颠倒混匀时动作应轻柔，防⽌溶⾎，影响检测结果的准确性。

3.禁⽌将普通EDTA抗凝样本和⾎浆样本在室温状态下放置。

4.全⾎离体后必须在6⼩时进⾏⾎浆分离，防⽌母体有核细胞破裂，增加检测背景，影响检测结果的准确性
5.未采⾎的Streck Cell-Free DNA BCT储存温度为18-25℃，禁⽌将已采⾎的Streck Cell-Free DNA BCT 存放于4℃或以下。

四、标本递送
1．甲⽅采集⾎标本后，4⼩时内连同送检单、知情同意书、知情同意书补充条款（如适⽤），该部分资料医院均需留有备，⼀同送到旗县区约定的标本收集机构（有能⼒分离⾎浆的医疗机构）进⾏⾎浆分离及保存。

（⾎浆分离操作见附件）
2．⾎浆样本应保存于标准的2mL EP 管，并⽤封⼝膜密封管⼝，以防⽌样本溢出；
3．寄送包装箱应为壁厚6cm 以上的硬质泡沫箱，泡沫箱内容量视样本量可适当调整；
4．⾎浆样本寄送采⽤⼲冰运输，寄送所⽤的⼲冰量为10 公⽄/2-3 天，15 公⽄/4-5天，可根据运输时间长短适当增加⽤量。

保证样本到达⽣产地，⼲冰有剩余。

5．将复核后需寄送的⾎浆样本及收集的⽩细胞管放⼊冻存盒内，并⽤保鲜袋将冻存盒封好，所有将纸质送检单、知情同意书装⼊⾃封袋中封好，置于泡沫箱内最上层
6．⼄⽅按规定的时间到旗县约定的标本收集机构收取标本
附件
⾎浆分离步骤
⼀、低温离⼼
⾎样离⼼（15min）：将采⾎管按编号顺序放⼊离⼼桶中，⽤托盘天平严格配平，将配平好的离⼼桶放在位置相对的吊篮中，设置离⼼机“xg：1600xg，tem：4℃time：10 min ，ACC：5。

按“star”开始第⼀次离⼼，并在⾎浆制备中“第⼀次离⼼”下
打“√”。

在离⼼10分钟内做其他准备⼯作：清洁超净台，给垃圾桶套上黄⾊医疗垃圾袋、准备2ml⽆菌EP管，根据每份⾎样3个2mlEP 管准备，将EP管的开⼝朝内放到双⾯板上，同⼀⾎样标记相同的标号1、1、1、2、2、2……20、20、20。

同样标号的管⼦并排放置，根据标号顺序依次排列。

分离⾎浆：离⼼完成后从离⼼机中取出样本，此时样本分为三层，下层为红细胞层，中间为⽩细胞和⾎⼩板，上层为我们所需要的⾎浆，将采⾎管按编号从⼩到⼤顺序放到采⾎管架的相应位置。

⽤移液器将上清液移到与采⾎管编号对应的其中2个EP管中，每管2ml共约4ml。

吸取⽩细胞层：⾎浆分离后吸取中间⽩细胞1ml到与采⾎管编号对应的另1ml个EP管中(贴上与申请单⼀致的条形码)。

【注意事项】
⾎样离⼼后已经分层，从离⼼机中取出时要轻拿轻放，不可倾斜采⾎管，避免破坏分层。

吸取⾎浆时吸头要垂直伸⼊采⾎管，从液⾯下3-6mm处吸取，接年⽩细胞层时要缓慢吸取，为确保不吸到⽩细胞层，可留有3mm左右⾎浆不吸。

吸取⽩细胞层时，需将吸头贴近中间层缓慢吸取，避免吸取过多的红细胞和⾎浆。

⼆、⾼速离⼼
⾎浆离⼼（15min）：将EP管中体积接近的⾎浆放在微量台式离⼼机转⼦的相应位置，盖上离⼼机黄⾊内盖，并通过向上提内盖确保盖好，设置离⼼机参数“xg： 6000xg， time：10 min ，按“star”开始第⼆次离⼼，并在⾎浆制备中“第⼆次离⼼”下
打“√”。

在离⼼的10分钟内做其他准备⼯作：根据每份⾎样4个⽆菌2mlEP管准备，将EP管的开⼝朝内放到双⾯板上，同⼀⾎样标记相同的标号1、1、2、2……20、20。

同样标号的管⼦并排放置，根据标号顺序从⼩到⼤依次排列。

提取上清液（30min）：吸取离⼼所得的上清，即得到较为纯净的⾎浆，将⾎浆按每管不少于1ml分装于对应编号的2mlEP管中（EP管上贴上与申请单⼀致的条形码）。

⾎浆QC检测（2min）：审核⾎浆的体积与溶⾎情况，⾎浆体积少于2ml判定为不合格；根据《样本接收规程》中溶⾎标准判断是否溶⾎，如溶⾎则为不合格，需要重新采集样本。

不合格样本需在《⾎浆制备单》的备注栏中注明此样本的不合格信息，并在LIMS系统中填写不合格及不合格理由，然全报告实验室负责⼈，发送重采⾎报告。

【注意事项】
分装⾎浆时，需将同⼀样本的⾎浆分装在具有相同标号的EP管内，切勿弄混。

吸取⾎浆时，可从沉淀物的对⽴⾯缓慢吸取，避免吸头沾到沉淀或吸到沉淀。

三、⾎浆样本保存
⾎浆分离后与⽩细胞管⽴即低温保存，⼀周之内-20 ℃条件下暂存：长期保存需置于-80 ℃冰箱中。

⾎浆不可常温保存。

⾎浆样本避免反复冻融。

送检样本合格标准
1．外观：要求样本保存管完好，⽆裂管、开盖等泄漏或样本外溢情况。

2．样本体积：孕妇外周⾎5 mL，⾎浆样本量要求不少于2 mL。

3．样本质量：⽆污染、溶⾎现象（轻微溶⾎呈淡粉⾊、中度溶⾎呈粉红⾊、重度溶⾎呈红⾊及深红⾊）。

样本信息：要求样本有对应的信息完整填写的送检单，管壁具有样本条码、受检者姓名、年龄、孕周等信息，确保与送检单上⼀致。

结果报告
⼄⽅接到标本后，21个⼯作⽇出具报告。