DNA微量提取

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CTAB法微量提取植物基因组DNA
1.取0.1g左右植物叶片在液态中快速研磨成粉末,适量转移至2ml eppendorf管中,约1/3刻度处。

2.加入600ul预热(65℃)2×CTAB DNA提取缓冲液,然后65℃温浴30分钟。

其间再摇匀2次以上(目的使其充分混匀)。

3.取出eppendorf管,加入600ul氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,室温10分钟,其间充分摇匀一次,静置至下层墨绿色。

然后12000rpm 离心10分钟,取出后吸取上清液到新的eppendorf管中(1.5ml)。

(去掉枪头尖)
4.加入500ul预冷的等体积异丙醇混合均匀,进行DNA沉淀。

6.8000rpm, 10分钟,离心沉淀DNA,倒掉上清液。

风干15~30分钟。

7.加入200ul 70% 乙醇(去除盐类)洗涤,放置3~12小时。

(可省去,仅利用第8步即可)
8.倒掉70% 乙醇,室温下风干DNA,10分钟。

再用无水酒精(去色素等有机物)洗涤一次,再风干15~30分钟后,加入200ul TE buffer,溶解DNA。

药品试剂
2×CTAB
2%CTAB 20g CTAB
75mM Tris.HCl 75ml 1M Tris.HCl PH 8.0
15 mM EDTA 30ml 0.5M EDTA PH 8.0
1.05M NaCl 61.4g
add water to 1000ml
氯仿:异戊醇(24:1)=500ml :20.83ml。

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