DNA微量提取
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
CTAB法微量提取植物基因组DNA
1.取0.1g左右植物叶片在液态中快速研磨成粉末,适量转移至2ml eppendorf管中,约1/3刻度处。
2.加入600ul预热(65℃)2×CTAB DNA提取缓冲液,然后65℃温浴30分钟。
其间再摇匀2次以上(目的使其充分混匀)。
3.取出eppendorf管,加入600ul氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,室温10分钟,其间充分摇匀一次,静置至下层墨绿色。
然后12000rpm 离心10分钟,取出后吸取上清液到新的eppendorf管中(1.5ml)。
(去掉枪头尖)
4.加入500ul预冷的等体积异丙醇混合均匀,进行DNA沉淀。
6.8000rpm, 10分钟,离心沉淀DNA,倒掉上清液。
风干15~30分钟。
7.加入200ul 70% 乙醇(去除盐类)洗涤,放置3~12小时。
(可省去,仅利用第8步即可)
8.倒掉70% 乙醇,室温下风干DNA,10分钟。
再用无水酒精(去色素等有机物)洗涤一次,再风干15~30分钟后,加入200ul TE buffer,溶解DNA。
药品试剂
2×CTAB
2%CTAB 20g CTAB
75mM Tris.HCl 75ml 1M Tris.HCl PH 8.0
15 mM EDTA 30ml 0.5M EDTA PH 8.0
1.05M NaCl 61.4g
add water to 1000ml
氯仿:异戊醇(24:1)=500ml :20.83ml。