芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B 迁移及侵袭的影响

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·药物研究·
芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B 迁移及侵袭
的影响
潘思影，田莉，李伟宏
（郑州澍青医学高等专科学校，河南 郑州 450064）
0　引言
子宫内膜癌为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，约占女性生殖道恶性肿瘤20%-30%[1]。

其发病率在许多国家包括我国呈上升趋势，成为人们研究癌症的重点之一。

目前其病因及发病机制尚不明确，探索并阐明子宫内膜癌的迁移及侵袭机制有助于我们寻找新的治疗途径。

芦荟大黄素是是大黄的抗菌有效成分，可以从芦荟中提取，具有抗肿瘤活性、抗菌活性和免疫抑制作用等。

本次研究旨在研究芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞转移及侵袭的影响。

1　材料与方法
1.1　细胞培养及分组。

HEC-1-B 细胞株购于中国医学科学院。

细胞均培养于含10% FBS 的DMEM 培养基，置于37℃、5% CO 2培养箱中孵育。

将HEC-1-B 细胞随机分成对照组和实验组，对照组未进行任何处理，实验组用30 μmol/L 浓度[2-3]的芦荟大黄素处理。

1.2　划痕实验。

制备细胞悬液，调整细胞浓度为5×105/mL 。

将150 μL 细胞悬液接种到培养皿的Ibidi Culture-Inter 小室内培养，细胞贴壁后，移除Culture-Inter ，加入1 mL 无血清培养基。

对照组不处理，实验组加入30 μmol/L 芦荟大黄素，放置培养箱中孵育。

分别于0 h ，24 h 时取样，倒置显微镜下测量划痕宽度，并拍照。

1.3　Transwell 小室实验。

制备浓度为4×105/mL 细胞悬液。

包被基底膜：用50 mg/L Matrigel 1:8稀释液包被Transwell 小室底部膜的上室面，4℃风干。

取200 μL 细胞悬液加入Transwell 上室，下室加入500 μL 的DMEM 培养液，消除培养液与小室间的气泡。

于24 h 时后取样，吸出小室内液体，无菌镊子取出小室，移至800 μL PBS 溶液内清洗，然后取出小室，待膜晾干后，移至 800 μL 结晶紫中染色 30 min ，后用去离子水轻轻冲洗，棉棒擦去小室上表面的液体。

把Transwell 小室反过来底朝上放在正置显微镜进行观察和拍照，随机取5视野，并计算透膜细胞数。

1.4　统计学分析。

采用SPSS 17.0s 表示，组间差异比较采用单因素方差分析。

2　结果
2.1　细胞划痕实验结果。

细胞划痕结果显示，随着作用时间的延长，对照组细胞的划痕间距逐渐缩小，“伤口”明显变小，24 h 划痕宽度为（282.53±30.91）μm ；实验组划痕间距缩小明显减慢，24 h 划痕宽度为（43
3.98±26.18）μm ，与对照组比较有显著性差异（P<0.01）（图1）。

注：1.对照组0 h 划痕；2.实验组0 h 划痕；3.对照组24 h 划痕；4.实验组24 h 划痕
图1　实验组和对照组划痕实验结果
2.2　细胞Transwell 结果。

Transwell 结果显示，对照组24 h 透膜细胞数为（46.4±2.4）个；芦荟大黄素作用24 h 后透膜细胞数为（19.6±2.9）个，与对照组相比，透膜细胞数明显减少（图2）。

图2　对照组和实验组Transwell 实验结果
3　讨论
子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，是导致女
性死亡的主要肿瘤之一[4]。

目前子宫内膜癌的病因及其发病
（下转第110页）
摘要：目的 探讨芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B 迁移和侵袭的影响。

方法 HEC-1-B 细胞培养后分
对照组及实验组，对照组细胞不进行任何处理，实验组用芦荟大黄素（30 μmol/L ）作用24 h 。

应用细胞划痕实验测芦荟大黄素对HEC-1-B 细胞迁移的影响；应用Transwell 小室实验检测芦荟大黄素对HEC-1-B 细胞侵袭的影响。

结果 与对照组相比，实验组24 h 后划痕宽度明显大于对照组的划痕宽度。

实验组24 h 后的透膜细胞数明显减少。

结论 芦荟大黄素可抑制人子宫内膜癌细胞的迁移与侵袭。

关键词：芦荟大黄素；子宫内膜癌；迁移；侵袭
中图分类号：R711.74 文献标识码：B DOI ：10.19613/ki.1671-3141.2019.24.077
本文引用格式：潘思影,田莉,李伟宏.芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B 迁移及侵袭的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(24):108+110.
基金项目：
本文系河南省高等学校重点科研项目（16B320028）
作者简介： 潘思影（1984-），女，大学，研究方向：妇科肿瘤。

2.2　16S rDNA测序菌株鉴定。

如表1，8株细菌经16S rDNA测序及同源性比对鉴定，其中6株均为芽孢杆菌属，另有“1-4”号菌株为变胞杆菌，“1-5”号为未分类细菌。

2.3　抑菌、抗肿瘤活性评价。

如表1，经纸片法筛查，“1-5”号菌株表现出较好的抑菌和抗肿瘤活性，对金黄色葡萄球菌、荧光假单孢菌和白假丝酵母等三株指示菌均具有较好的拮抗作用；“1-6”号菌株除抑制金黄色葡萄球菌效果不佳外，其余活性也较好；“1-2”、“1-3”和“1-4”均仅表现出较好的金黄色葡萄球菌抑制活性，且“1-4”还显示较好的抗肿瘤活性；其余“1-1”、“1-7”和“1-8”号菌株均未显示抑菌抗肿瘤活性。

3　讨论
为应对严酷的生存环境，海绵演化出丰富的共附生微生物以产生大量的活性成分，且占已利用海洋功能分子的1/3以上[6]。

海绵共附生微生物及其次级代谢产物已是海洋创新药物研发的热点[1-3]。

海绵种类繁多，分布广泛，本论文从厦门近海采集到喷喘苔海绵，经分离、纯化、鉴定了8株共附生细菌，经初步评价其中两株兼具较好的抑菌与抗肿瘤活性，下一步拟综合色谱和光谱技术对其菌株发酵物的成分进行分离和鉴定[7]，以挖掘应用价值和潜力。

参考文献
[1]　韦荣编,闫斌伦,李富超,等.海绵Hymeniacidoncorticata
共附生微生物代谢产物生物活性的初步研究[J].中国海洋药物,2008,27(2):29-32.
[2]　官颖颖,于雪,张海雷,等.南极普里兹湾海绵共附生放线菌的分
离及其次级代谢潜力评估[J].中国海洋药物,2017,36(5):1-8. [3]　冯鹭,孟繁超.海绵附生放线菌抗结核分枝杆菌活性物质的筛选
及分离[J].山东大学学报(医学版),2016,54(5):29-33.
[4]　鲍海燕,谷朋娟,张翼,等.海洋真菌提取物损伤大肠杆菌DNA活
性的筛选及活性菌株研究[J].生物技术通报,2015,31(8):132-139.
[5]　李根,陈瑞川,林昱.具抗肿瘤活性的海洋微生物菌株的初步筛
选[J].台湾海峡,2002,21(1):18-22.
[6]　于豪冰.海洋共生生物海绵次生代谢产物结构与功能研究[A].中
国化学会第十届全国天然有机化学学术会议论文集,广州:2014.
[7]　张岗,陈军,许莉,等.养殖叶片山海绵(Mycalephyllophila)次生
代谢产物的研究[J].中国海洋药物,2018,37(4):17-22
.
（上接第108页）
机制极其复杂，尚不确定，探索并阐明子宫内膜癌的迁移及侵袭机制迫在眉睫，有利于寻找新的治疗途径。

芦荟大黄素是一类蒽醌类化合物，可从芦荟和大黄中提取，具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、免疫抑制等药理作用[5-7]。

本次研究显示，芦荟大黄素作用于HEC-1-B细胞24 h后，对照组划痕宽度明显变小，明显小于芦荟大黄素组；而芦荟大黄素组的透膜细胞量明显少于对照组，表明芦荟大黄素作用24 h后，HEC-1-B 细胞转移与侵袭能力明显下降。

本次研究揭示了芦荟大黄素抗肿瘤转移与侵袭的药理作用，但其作用机制需进一步研究。

参考文献
[1]　谢幸,苟文丽.妇产科学[M].第八版.北京:人民卫生出版
社,2013:313-314.
[2]　宋吉宁,董锦忠,陈文礼.芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞株钙
联蛋白/钙网蛋白循环及内质网应激凋亡的影响[J].中国临床研究,2018,31(6):725-729.[3]　董锦忠,宋吉宁,刘浩明.芦荟大黄素对肺癌A549细胞生长、迁
移及F-actin的作用[J].广西医科大学学报,2017,34(12):1706-1709.
[4]　Siegel R,Miller KD,Jemal A.Cancer Statistics,2017[J].CA
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[5] F r e a g M S,E l n a g g a r Y S,A b d e l m o n s i f D A,e t
al.Stealth,biocompatible monoolein-based lyotropic liquid crystalline nanoparticles for enhanced aloe-emodin delivery to breast cancer cells:in vitro and in vivo studies[J].Int J Nanomedicine,2016,(11):4799-4818.
[6]　Divya G,Panonnummal R,Gupta S,et al.Acitretin and aloe-
emodin loaded chitin nanogel for the treatment of psoriasis[J].Eur J Pharm Biopharm,2016,(107):97-109.
[7]　Alshatwi AA,Subash-Babu P.Aloe-Emodin Protects RIN-5F
(Pancreatic β-cell) cell from Glucotoxicity via Regulation of Pro-inflammatory Cytokine and Downregulation of Bax and Caspase 3[J].Biomol Ther (Seoul),2016,24(1):49-56.
投稿邮箱：zuixinyixue@。