水产品中三种糖肽类抗生素检测方法的优化

分析检测
水产品中三种糖肽类抗生素检测方法的优化
高丽娜，李春青，时文博，马　丹，韩现芹，陈永平，李 艳
（天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心，天津 300221）
摘 要：对水产品中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁进行高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法中的提取液配比、固相萃取柱、流动相及质谱条件优化，得到较好的样品回收率，可用于水产品中3种糖肽类抗生素的检测。

关键词：水产品；糖肽类抗生素；检测方法；优化
糖肽类抗生素常用于治疗耐药革兰氏阳性菌的感染[1]，近年来，成为研制和开发热点，其临床地位得到充分的肯定。

但过量食用含有该药物的动物源食品，在人体内会产生耐药细菌，危害人们健康[2]。

在已有的国内外研究中，糖肽类抗生素的主要检测方法有FPIA荧光偏振免疫法、EMIT酶免疫法、HPLC高效液相色谱法以及高效液相色谱串联质谱法[3-4]。

研究对象大多集中在医药卫生领域，涉及动物源食品基质的相关研究相对较少[5]。

本研究对高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/ MS）检测方法进行优化，得到较好的样品回收率，可用于水产品中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁3种糖肽类抗生素的检测。

1 前处理方法的优化
1.1 不同提取液配比对提取效果的比较
在预处理方法中其他提取和净化方式不变的条件下，考察了0.1%甲酸水溶液比例为20%、30%、40%、50%、70%、90%和100%时，提取液对样本的提取效果见图1。

结果表明，当0.1%甲酸水溶液比例为50%和100%时，回收率较高，均达到80%以上，从经济及环保的角度出发，该实验选择0.1%甲酸水溶液作为提取液。

1.2 净化固相萃取柱的筛选
本实验选取了Bond Elut Plexa PCX柱、Oasis MCX Catridge、Oasis HLB、Agilent Si-SCX这4种混合阳离子交换固相萃取柱进行样本净化，对比了样本的提取效果，试验结果如图2所示。

结果表明，选择Oasis HLB混合阳离子交换固相萃取柱，可以得到较高的样品回收率，满足试验需要。

2 流动相的选择
试验选取0.1%甲酸水-乙腈、0.1%甲酸水-甲醇作为流动相对万古霉素、去甲万古霉素以及替考拉宁标准工作液进行分析，发现0.1%甲酸水-乙腈作为流动相时较0.1%甲酸水-甲醇峰展窄且对称性较好。

对流动相甲酸水溶液的浓度进行试验对比，分别选择0.1%甲酸水-乙腈、0.2%甲酸水-乙腈、0.5%甲酸水-乙腈作为流动相，三者的响应值、出峰时间及峰形无明显差异。

最终确定选用0.1%甲酸水-
图1 不同比例提取液的提取回收率
基金项目：天津市农产品质量安全检测专项。

作者简介：高丽娜（1982—），女，天津人，硕士，工程师。

研究方向：水产品中兽药残留检测分析。

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88食品安全导刊 2021年7月
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乙腈作为流动相。

3 质谱条件的选择
万古霉素、去甲万古霉素以及替考拉宁3种化合物都属于大分子、高极性化合物，可选择电喷雾离子源（ESI）。

3种化合物呈弱碱性，可选择正离子扫描模式。

根据3种化合物的分子量，设置扫描起止质荷比（m/z）为50～1 500，3种化合物进入一级质谱后，与两个氢离子结合，产生带正电的双电荷离子[M+H]2+,由此得到万古霉素、去甲万古霉素以及替考拉宁3种化合物的母离子依次为m/z725.5、m/z718.5、m/z940.4。

通过碎片离子扫描（Product Ion MS2）
725.5 718.5 940.4
6.0
7.0
8.0
9.0
m/ z 100 300 500 700 900
m/ z
800 1 100 1 400 1 700 2 000
m/ z
（a）万古霉素 (b)去甲万古霉素 (c)替考拉宁
图3 母离子扫描质谱图
模式经二级质谱碰撞选择，万古霉素母离子产生了显著丰度的子离子m/z144.2、m/z100.1，去甲万古霉素母离子产生了显著丰度的子离子m/z144.0、m/z100.1，替考拉宁母离子产生了显著丰度的子离子m/z316.2、m/z203.8。

最终选择m/z144.2、m/z144.0、m/z316.2分别为万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁的定量离子。

4 结论
本研究对水产品中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁3种糖肽类抗生素的高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/ MS）检测方法进行优化。

样品采用0.1%甲酸水溶液提取，选择Oasis HLB混合阳离子交换固相萃取柱，0.1%甲酸水-乙腈作为流动相，m/z144.2、m/z144.0、m/z316.2分别为万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的定量离子，优化后的方法得到较好的样品回收率，可用于水产品中3种糖肽类抗生素的检测。

参考文献
[1]PARENTI F,CA V ALLERI B.Novel glycopeptide antibiotics of the dalbaheptide group[J].Drugs of the Future,1990,15(1): 57-72.
[2]崔艳丽,武峰.HPLC法同时快速测定万古霉素和去甲万古霉素的血药浓度[J].中国医院用药评价与分析,2011,11(10):920-922.
[3]林秀丽,朱金平,费燕.HPLC法快速测定万古霉素和去甲万古霉素的血药浓度[J].中国临床药学杂志,2011,20(4):231-234.
[4]李红宇,徐小燕,张莉,等.HPLC法测定万古霉素和去甲万古霉素血清药物浓度[J].湖北民族学院学报,2010,27(2):25-27.
[5]彭斯维,陈永刚,邹吉利.酶放大免疫法测定去甲万古霉素的血药浓度[J].广东药学院学报,2014,30(5):553-558.
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Jul. 2021 CHINA FOOD SAFETY 89。