hrp显色技术的基本流程
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HRP显色技术基本流程。
1. 样品制备,将待检测的样品用适当的溶剂稀释或处理,以达到检测要求的浓度范围。
2. 酶促反应,将样品与标记有辣根过氧化物酶(HRP)的抗体孵育,HRP 会特异性地与目标抗原结合。
3. 清洗,用清洗缓冲液清洗样品,去除未结合的抗体和其他干扰物质。
4. 底物加入,将显色底物加入样品中。
HRP可以催化显色底物与过氧化氢反应,产生有色产物。
5. 显色,在适当的温度和时间条件下进行显色反应,有色产物逐渐积累,产生可见颜色。
6. 停止反应,通过加入终止剂或降低pH值等方式停止显色反应,防止过度的底物消耗和背景信号。
7. 检测信号,使用酶联免疫分析仪等仪器检测有色产物的吸光度或荧光强度,获取количественная信号。
注意事项:
每个步骤的孵育时间、温度和缓冲液选择都会影响检测灵敏度和特异性。
背景干扰会导致假阳性结果,因此需要优化清洗和底物浓度等条件。
显色底物种类和浓度会影响显色产物的颜色强度和检测范围。
终止反应的时机需要根据具体底物和检测要求确定,过早或过晚都会影响检测结果准确性。
使用 HRP 显色技术时,应严格按照具体试剂盒或文库规程操作,以确保获得可靠的结果。