某大学生物工程学院《普通生物化学》考试试卷(5218)

某大学生物工程学院《普通生物化学》
课程试卷（含答案）
__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试
考试时间：90 分钟年级专业_____________
学号_____________ 姓名_____________
1、判断题（140分，每题5分）
1. 尿素在肝脏的线粒体内生成。

（）[山东大学2016研]
答案：错误
解析：尿素的生成过程在肝脏的多个场所进行，并不仅限于线粒体。

2. 脑昏迷是过多动用氨基酸氧化供能而需解除氨毒性的代谢造成的后果。

（）[复旦大学2007研]
答案：错误
解析：
3. 胆固醇虽然不是生物膜的主要成分，但却具有调节生物膜流动性的作用。

（）
答案：正确
解析：
4. 纤维素中葡萄糖分子以β1,4糖苷键连接，而直链淀粉中葡萄糖分子则是以α1,4糖苷键相连。

（）[中山大学2018研]
答案：正确
解析：
5. 联合脱氨基作用是氨基酸脱去氨基的主要方式。

（）
答案：正确
解析：
6. 蛋白质分子由α蛋氨基酸组成，这些氨基酸α碳是一个手性碳原子，因此均具有光学活性。

（）[中山大学2018研]
答案：错误
解析：常见的20种蛋白质氨基酸中除Pro是α亚氨基酸外，其余的都是由α氨基酸组成，除Gly外其余氨基酸都具有一个手性碳原子，因此均具有光学活性。

7. 蛋白质降解在热力学上是有利的，因此细胞质发生的蛋白质水解不需要ATP。

（）
解析：
8. DNA复制是在起始阶段进行控制的，一旦复制开始，它即进行下去，直到整个复制子完成复制。

（）
答案：正确
解析：
9. 琥珀酸脱氢酶的辅基FAD与酶蛋白之间与共价键结合。

（）
答案：正确
解析：琥珀酸脱氢酶的辅基FAD与酶蛋白的一个组氨酸以共价键结合。

10. 原核生物的起始氨基酸与起始tRNA形成MettRNA后被甲酰化，
甲酰化是原核生物所有蛋白质合成起始所必需的。

（）
答案：错误
解析：MettRNAfMet的甲酰化对原核生物的蛋白质合成非常重要，
不能甲酰化的突变体有严重的生长缺陷，但是甲酰化并不是原核生物
所有蛋白质合成起始所必需的。

11. 磷脂一般不溶于丙酮，根据这个特点可将磷脂和其他脂类化合
物分开。

（）
解析：
12. 胆固醇在体内不能转化生成胆色素。

（）[中山大学2018研]
答案：正确
解析：胆固醇在体内不能分解，但可以转化成胆汁酸、类固醇激素（肾上腺皮质激素、性激素等）及维生素D等活性物质，胆固醇中在肝内转化成胆汁酸是主要代谢途径，胆色素是由血红素在肝中代谢生成。

13. 胆管阻塞、胆结石及动脉粥样硬化等都与胆固醇密切相关，如能一方面完全禁食胆固醇，另一方面完全抑制胆固醇的生物合成，对人体健康将是有百利而无一害。

（）[复旦大学研]
答案：错误
解析：胆固醇在脊椎动物组织和肾上腺中含量很丰富，是细胞膜的重要组成部分，人体内存在的“胆石”几乎全部由胆固醇构成。

胆固醇在肝中合成，是胆酸和许多甾体激素的前体，是人体必需的物质，但血液中胆固醇浓度不能超标，否则会引起心脑血管病。

14. 变性蛋白质溶解度降低是由蛋白质分子的电荷被中和去除了蛋白质外面的水化层所引起的。

（）[山东大学2016研]
答案：错误
解析：蛋白质变性是由于维持蛋白质构象稳定的作用力（次级键和二硫键）被破坏从而使蛋白质空间结构被破坏并使个体丧失生物活性的现象，次级键破坏之后，蛋白质结构松散，原来聚集在分子内部的疏水性氨基酸侧链伸向外部，减弱了蛋白质分子与水分子之间的相互作用，因此溶解度降低。

15. 温和碱性条件下，RNA容易水解，DNA则否。

（）[厦门大学2014研]
答案：正确
解析：
16. 嘧啶核苷酸从头合成途径不涉及天冬酰胺。

（）[浙江大学2018研]
答案：正确
解析：嘧啶核苷酸的从头合成途径中嘧啶环上的各个原子分别来自于CO2、谷氨酰胺和天冬氨酸。

17. 作为膜脂的鞘糖脂的功能主要与能量代谢有关。

（）[中国科学院研]
答案：错误
解析：鞘糖脂为单糖、双糖或寡糖通过D糖苷键与神经酰胺形成。

鞘糖脂与细胞识别及组织、器官的特异性有关，而与能量代谢无关。

18. 所有的酶都含有辅基或辅酶。

（）[中山大学2018研]
解析：不是所有的酶都含有辅基或辅酶，只有蛋白质，不含有辅因子的酶称为单纯酶，如脲酶、淀粉酶和一些消化酶等。

19. 肽聚糖以含有N乙酰氨基葡萄糖为特点。

（）
答案：错误
解析：肽聚糖即胞壁质，是一种构建细菌胞壁结构的杂多糖：由N乙酰葡糖胺和乙酰胞壁酸经由β（1→4）糖苷键交替连接形成多聚体，这种多聚体再作为重复构件通过短肽链交联连接。

20. 类固醇激素首先与细胞质膜表面的受体结合，然后导致腺苷酸环化酶的激活及其他一系列生化反应。

（）
答案：错误
解析：类固醇激素是疏水的脂溶性分子，因此，可以通过质膜进入细胞内，所以特异性受体不在表面上。

21. 各种物质甲基化修饰的甲基直接来源于N5甲基四氢叶酸。

（）
答案：错误
解析：
22. 帽子结构是绝大多数真核生物细胞核mRNA所特有的结构。

（）
解析：某些snRNA的5′端也有帽子结构。

23. 一般说来，真核生物的mRNA与它的DNA模板是等长的。

（）[厦门大学2014研]
答案：错误
解析：mRNA在翻译完毕后会进行加工，切除内含子，修饰等，所以
与模板DNA不等长。

24. 参与蛋白质组成的氨基酸中Trp、Tyr和Phe在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。

（）[中山大学2018研]
答案：正确
解析：
25. 嘌呤类化合物的分解代谢可以在核苷酸、核苷和碱基三个水平
上进行。

（）
答案：正确
解析：
26. 淀粉和糖原的生物合成都需要有引物的存在。

（）
答案：正确
解析：多糖合成时末端需要葡萄糖残基引物存在，以利于多糖链的延长，糖原的合成需要带有寡糖链的多肽作为引物，一般情况下引物是
至少含4个葡萄糖残基的α1,4葡聚糖。

27. 大多数真核生物的mRNA和它的DNA模板是等长的。

（）
答案：错误
解析：真核生物DNA模板中存在大量非编码序列，因此比mRNA长。

28. 真核细胞的DNA全部定位于细胞核。

（）
答案：错误
解析：真核细胞中DNA主要存在于细胞核，还有少部分存在于线粒体或叶绿体中。

2、名词解释题（65分，每题5分）
1. 酸值（acid number）
答案：酸值又称酸价，是中和1g脂质的游离脂酸所需的KOH毫克数，它表示酸败程度的大小。

解析：空
2. 硫胺素焦磷酸（thiamine phosphate）
答案：硫氨酸焦磷酸是维生素B1的活性形式，由维生素B1磷酸化而成。

主要参与酰基转移和α酮酸脱羧作用。

涉及糖代谢中羰基碳合成
与裂解反应的辅酶，特别是α酮酸的脱羧基作用。

解析：空
3. 终止子
答案：终止子是指提供转录停止信号的DNA序列。

解析：空
4. 断裂基因[华中科技大学2007研]
答案：断裂基因是指含有内含子的基因，又称不连续基因。

它最早在
腺病毒中发现。

绝大多数真核基因是断裂基因。

断裂基因表达时先生
成初级转录产物，经转录后加工，主要是去除内含子和连接外显子，
才能成为成熟的转录产物
解析：空
5. 高能键（highenergy bond）
答案：高能键是指随着水解反应或基团转移反应可放出大量自由能的键。

主要指ATPADP中的焦磷酸键。

各种化合物的化学键水解时释放的化学能量大于或近于ATP水解时释放的能量者均属高能键，如乙酰辅酶A的酯键。

解析：空
6. 碱基对转换
答案：碱基对转换是指两种嘧啶碱基或两种嘌呤碱基之间的相互转变。

解析：空
7. 缺口（gap）
答案：缺口是指双链DNA分子一条链中缺失了一段核苷酸的断裂处。

解析：空
8. 反式作用因子[武汉科技大学2015研]
答案：反式作用因子是指能够直接或间接识别或结合在顺式作用元件
上调控基因表达的蛋白质或RNA。

绝大多数真核转录调节因子由某一基因表达后，通过与特异的顺式作用元件相互作用（直接或间接识别
和结合转录上游区段DNA），影响另一基因的转录。

解析：空
9. 蛋白质的定向与分拣
答案：蛋白质的定向与分拣是指蛋白质在细胞质中合成，但是合成以
后不同蛋白质在细胞中的最终定位由多肽链本身所具有的特定氨基酸
序列决定，蛋白质合成以后所经历的转移和定位的过程。

解析：空
10. 等电点（pI）
答案：氨基酸和蛋白质是两性带电物质，在某一pH的溶液中，氨基
酸或蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，自身呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸或蛋白质的等电点。

解析：空
11. 糖胺聚糖[华中科技大学2007研]
答案：糖胺聚糖是指由重复的二糖单位构成的长链多糖，其二糖单位之一是氨基己糖（氨基葡萄糖或氨基半乳糖），故称为糖胺聚糖；另一个是糖醛酸。

解析：空
12. Chargaff规则（Chargaffrule）
答案：Chargaff规则是指DNA双螺旋中A与T的含量相同，G与C 的含量相同的规则。

解析：空
13. 信号识别颗粒（SRP）
答案：信号识别颗粒是指由小分子RNA和多种蛋白质组成的复合体，能够识别并结合刚从游离核糖体上合成出来的信号肽，暂时中止新生肽的合成，又能与其在内质网上的受体（即停靠蛋白质）结合而将新生肽转移入内质网腔，防止蛋白水解酶对其损害。

解析：空
3、填空题（150分，每题5分）
1. 是脂肪酸全程合成中，延伸步骤中二碳单位的直接供体。

答案：丙二酸单酰CoA
解析：
2. 多酶复合体具有自身调节的机制，第一步反应一般是限速步骤，可被其他反应物，这种作用称之为，催化这步反应的酶往往是。

答案：抑制|反馈抑制|限速酶
解析：
3. 生物膜的膜脂只是和。

[华中农业大学2008研]
答案：磷脂|糖脂
解析：
4. 维生素B12在体内的辅酶形式有5脱氧腺苷钴胺素、氰钴胺素、
羟钴胺素、甲钴胺素，其中是维生素B12在体内的主要存在形式，作
为的辅酶在代谢中起作用。

答案：5′脱氧腺苷钴胺素|（几种）变位酶
解析：
5. Western印迹法的原理是用鉴定蛋白质的一种方法。

答案：抗原抗体的免疫反应
解析：
6. 转录因子通常具有两个独立的结构域：、。

[电子科技大学2012、2013、2015研]
答案：DNA结合结构域|转录激活结构域
解析：
7. 细胞膜的膜脂主要有三种：、和。

[中南大学2012研]
答案：磷脂|鞘脂|固醇
解析：膜脂是生物膜的基本组成成分，约占膜的50，主要有3大类：磷脂、鞘脂、固醇。

8. 真核RNA聚合酶Ⅰ主要位于细胞中，合成大分子核糖体RNA前体。

答案：核仁
解析：
9. 糖类除了作为能源之外，它还与生物大分子间的有关，也是合成、、等的碳骨架的供体。

[天津大学研]
答案：识别|蛋白质|核酸|脂肪
解析：
10. 在嘌呤核苷酸从头合成途径中，经多步反应首先合成，再转化为。

答案：次黄嘌呤核苷酸（IMP）|AMP和GMP核苷二磷酸（dNDP）
解析：
11. 维生素B12是，它是酶的辅基，其作用是。

[南京师范大学2008研]
答案：钴胺素|变位|参与分子内重排、核糖核苷酸还原成脱氧核苷酸、甲基转移
解析：
12. 一个碳原子数为n（n为偶数）的脂肪酸在β氧化中需经次β
氧化循环，生成个乙酰CoA，个FADH2和个NADH＋H＋。

答案：0.5n1|0.5n|0.5n1|0.5n1
解析：
13. 天门冬氨酸转氨甲酰酶由组成，故其活性形式可写为：。

答案：三个调节亚基和两个催化亚基|3γ2＋2C3→C6γ6
解析：
14. 在糖、脂、和蛋白质代谢的互变过程中，和是关键物质。

答案：丙酮酸|乙酰CoA
解析：
15. 自然界较重要的乙酰氨基糖有、和。

答案：N乙酰葡糖胺|N乙酰胞壁酸|N乙酰神经氨酸
解析：
16. 基因工程需要的最常用的工具酶包括、和等。

答案：限制性内切核酸酶|DNA连接酶|DNA聚合酶
解析：
17. 单糖的构型是指离羰基碳最远的那个的构型，如果与D甘油醛
构型相同，则属D系列糖，反之属L系列糖，大多数天然糖是系列糖。

答案：手性C|D
解析：
18. 乳糜微粒的主要生理功能是。

答案：转运外源性脂肪
解析：
19. 典型的呼吸链包括和两种，这是根据接受代谢物脱下的氢的不同而区别的。

答案：NADH|FADH2|初始受体
解析：
20. L谷氨酸脱氢酶的别构抑制剂为和。

答案：ATP|GTP
解析：
21. 水溶性激素的作用通常最后激活了一些特殊的蛋白质激酶，已发现的蛋白质激酶主要包括、、、、和等几种。

根据激酶所催化的磷酸根的受体是哪一种氨基酸，蛋白质激酶可分为和两类。

答案：PKA|PKB|PKC|PKG|TPK|依赖于CaM的蛋白质激酶|Ser或Thr蛋白质激酶|Tyr 蛋白质激酶
解析：
22. 真核生物细胞的加工过程需要有拼接体参加。

[南开大学研]
答案：RNA
解析：真核生物由于存在细胞核结构，转录与翻译在时间上和空间上都被分隔开来，其mRNA前体的加工极为复杂。

而且真核生物的大多数基因都被居间序列即内含子所分隔而成为断裂基因，在转录后需通
过拼接使编码区成为连续序列。

在真核生物中还能通过不同的加工方式，表达出不同的信息。

因此，对于真核生物来讲，RNA的加工尤为重要。

23. 天冬氨酸转氨甲酰酶（ATCase）的别构激活剂是，别构抑制剂是。

答案：黄嘌呤氧化酶|次黄嘌呤和黄嘌呤
解析：
24. 参与皮质激素合成的酶类主要有四类，即需氧的、和不需氧的、；需氧的两类酶需要辅助因子和参与反应。

答案：裂解酶|羟化酶|脱氢酶|异构酶|NADPH|细胞色素P450
解析：
25. 柠檬酸循环途径中的限速酶是、和。

[南开大学2008研]
答案：柠檬酸合酶|异柠檬酸脱氢酶|α酮戊二酸脱氢酶
解析：
26. 每个冈崎片段是借助于连在它的末端上的一小段为引物而合成的。

答案：5′|RNA
解析：
27. 原核细胞DNA的甲基化位点主要是在序列上，真核细胞核DNA 的甲基化位点则主要是在序列上。

答案：GATC|GC
解析：
28. NADH呼吸链中氧化磷酸化的偶联部位是、、。

答案：复合物Ⅰ|复合物Ⅲ|复合物Ⅳ
解析：
29. DNA二级结构的维系力有、和，其中主要的维系力是。

答案：氢键|碱基堆积力|与正电荷结合|碱基堆积力
解析：
30. 每轮脂肪酸氧化均包括步反应，与饱和脂肪酸降解相比较，不
饱和脂肪酸的氧化还需另外两个酶：和。

奇数C的脂肪酸通过β氧化
途径产生和一个分子的。

[中国科技大学2007研]
答案：4|烯脂酰CoA异构酶|β羟脂酰CoA差向异构酶|乙酰CoA|丙酰CoA
解析：
4、简答题（50分，每题5分）
1. 在生物合成中往往需要不同的三磷酸核苷酸参与不同物质的合成，写出四种三磷酸核苷酸分别参与哪些物质的生化合成？[山东大学2016研]
答案：四种三磷酸核苷酸分别参与以下物质的生化合成：（1）ATP参与生物体内能量代谢过程以及是第二信使的前体；
（2）GTP参与蛋白质和腺嘌呤的生物合成；
（3）CTP参与磷脂的生物合成；
（4）UTP参与多糖合成糖原的过程。

解析：空
2. 比较脂溶性维生素和水溶性维生素的异同点。

答案：（1）脂溶性维生素和水溶性维生素的相同点
①机体需求量很少。

②不作为能源物质。

③不能作为构成组织的物质。

④以辅酶成分参与调节机体代谢。

⑤有些生物能够合成部分，但大多数通过食物获得。

⑥长期缺乏一种维生素会导致相应的疾病。

⑦过多摄入会有毒害作用。

（2）脂溶性维生素和水溶性维生素的不同点
①脂溶性维生素易溶于脂质，水溶性维生素易溶于水溶液；
②脂溶性维生素经胆汁乳化后经小肠吸收可以储存在肝脏中，所以脂溶性维生素需要较长时间才会表现出缺乏症；水溶性维生素可以通过小肠直接吸收，多余的通过尿液排出，因此比较容易在短时间内缺乏。

③脂溶性维生素主要是以功能或前体类化合物的身份参与机体的代谢活动；水溶性维生素主要是以辅酶的形式参与机体的代谢活动。

解析：空
3. 试解释蛋白聚糖和糖蛋白之间的差异。

答案：蛋白聚糖和糖蛋白均由蛋白质和多糖所构建，但蛋白聚糖是以
糖链成分为主，一般占其总量的95甚至更多，而糖蛋白是以蛋白质成分为主的，通常含有50或更多的蛋白质。

解析：空
4. 与G蛋白偶联的受体相比，通过固醇类激素受体或与离子通道偶
联的受体作用的信号转导系统要简单，其下游的成分也少。

试问这样
的系统也会产生放大效应吗？
答案：通过固醇类激素受体或与离子通道偶联的受体作用的信号转导
系统也会产生放大效应。

就通过固醇类激素受体作用的信号转导系统
来说，一个固醇类激素分子与其受体结合后，直接与DNA上的相应
的HRE结合，而启动某个特定基因的表达，然而一个基因并不是只转录一次，而是可转录多个拷贝，同样一个转录物可翻译成多个蛋白质
分子，这实际上就是一种放大效应；一个离子通道开放后，可允许多
个离子进出细胞内外，这也是一种放大效应。

解析：空
5. 指出下列物质分别是哪种维生素的前体？（1）β胡萝卜素；（2）麦角固醇；（3）7脱氢胆钙化醇；（4）色氨酸
答案：（1）β胡萝卜素是维生素A的前体；
（2）麦角固醇是维生素D2的前体；
（3）7脱氢胆钙化醇是维生素D3的前体；
（4）色氨酸是维生素B5的前体。

解析：空
6. 物质跨膜运输的方式有哪些？试分析影响物质跨膜运输速率的因素。

答案：（1）物质跨膜运输的方式分为主动运输和被动运输，其中根据是否需要载体蛋白，被动运输又分为简单扩散和易化扩散。

（2）影响物质跨膜运输速率的因素如下：
①影响简单扩散的因素：细胞膜内外物质的浓度差。

②影响易化扩散的因素：a．细胞膜内外物质的浓度差；b．细胞膜上相应载体数量。

③影响主动运输的因素：a．载体的种类和数量；b．能量。

解析：空
7. 氨基酸分解产生的氨是如何排出体外的？[南开大学2016研]
答案：（1）直接排氨
排氨动物将氨以Gln形式运至排泄部位，经Gln酶分解，直接释放NH3；游离的NH3借助扩散作用直接排出体外。

（2）排尿素
排尿素动物在肝脏中合成尿素，然后尿素随尿液排出体外。

（3）排尿酸
鸟类及爬行动物（如龟）是将氨转变成尿酸排出体外。

解析：空
8. RNA和DNA在化学组成上有什么差异？为什么没有生物体具有大
的RNA基因组？为什么蛋白质不能序列特异性识别双链RNA？[中国科
学技术大学2016研]
答案：（1）DNA与RNA在化学组成上的区别：
①DNA中的五碳糖是脱氧核糖，而RNA是核糖；
②构成他们的四种碱基略有差别，RNA中是以尿嘧啶U代替了DNA中的胸腺嘧啶T；
③DNA是双链分子，而RNA是单链分子；
（2）生物体不具有大的RNA基因组的原因如下：
①从结构上来说，RNA是单链，不稳定，而DNA是双螺旋结构，能够稳定的存在和复制。

②转录时，DNA是以其中的一条链为模板，称模板链，另一条不转录的链就称为编码链，这样的转录形式能保证遗传信息地准确传递，而RNA要先逆转录为cDNA，然后经复制才能形成双链，这样不仅
会导致某些遗传信息的缺失，而且人体内也不普遍存在逆转录酶，因
此以RNA为遗传物质的大的基因组并不能使遗传信息得以表达。

解析：空
9. 纯的酶制品对水透析时会失去活性。

有的人认为透析除去了必要
的辅助因子；而有的人认为在低离子强度溶液中酶去折叠了。

请通过
实验来确认他们的观点正确与否。

答案：（1）将透析袋外的溶液通过冷冻干燥浓缩，然后取一部分放回酶溶液中，如果酶的活性恢复，则表明透析除去了必要的辅助因子；
（2）将无活性的酶溶液对含有高浓度的怀疑的辅助因子的溶液透析，如果随着透析进行，酶的活性在增加，则表明酶活性与透析掉的辅助因子有关；
（3）测定活性和无活性酶的光学活性（螺旋含量），如果具有同样的光学活性，则表明酶分子没有去折叠。

解析：空
10. cDNA文库的构建一般分为哪四步？
答案：cDNA文库的构建一般分为以下四步：
（1）细胞总RNA的提取和mRNA的分离；
（2）cDNA第一条链的合成；
（3）cDNA第二条链的合成；
（4）双链DNA克隆进质粒或噬菌体载体，并导入宿主中繁殖。

解析：空
5、计算题（5分，每题5分）
1. 假设浓度为2×104molL的抑制剂（I）可使酶活力被抑制75，求这个非竞争性抑制剂的Ki值。

注：非竞争性抑制的动力学公式为
答案：没有抑制剂时，酶反应满足米氏方程
加入非竞争性抑制剂后满足式子
设未加入非竞争抑制剂时酶促反应速率为v1，加入非竞争抑制剂
后酶促反应速率为v2。

根据题意，可知v2＝0.25v1。

方程①与方程②相比，即可得：10.25＝1＋[I]Ki
带入数值[I]＝2×104molL，得Ki≈6.67×105molL。

所以此非竞争抑制剂的Ki为6.67×105molL。

解析：空
6、论述题（25分，每题5分）
1. 列举并阐述五种研究蛋白质和DNA相互作用的方法。

[华中科技大学2016研]
答案：研究蛋白质和DNA相互作用的方法主要有以下几种：（1）凝胶阻滞实验
凝胶阻滞实验又称DNA迁移率变动试验或条带阻滞实验，是在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。

原理：在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA分子向正电极移动距离的大小是同其分子量的对数成反比。

如果某种DNA分子结合上一种特殊的蛋白质，那么由于分子量的加大它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，于是朝正极移动的距离也就相应的缩短，因而在凝胶中出现滞后的条带。

（2）甲基化干扰实验
原理：是根据DMS（硫酸二甲酯）能够使DNA分子中裸露的鸟嘌呤（G）残基甲基化，而六氢吡啶又会对甲基化的G残基作特异性的化学切割，然后再进行凝胶电泳，最后作放射自显影，读片并分析
结果。

（3）DNA pull down
DNA pull downMS是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。

该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与细胞核蛋白孵育，纯化出与DNA片段互作的蛋白，洗涤洗脱得到的蛋白产物，做westernblot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合；做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息（如具体某个或某些转录因子组蛋白等）。

原理：DNA pull down实验首先针对靶标区域设计DNA探针，探针经过脱硫生物素标记，跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合；细胞核提取物与磁珠DNA探针孵育，纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体，洗脱得到DNA片段的结合蛋白质。

（4）足迹实验
足迹实验是一种用来检测被特定转录因子蛋白质特异性结合的DNA序列的位置及其核苷酸序列结构的专门实验方法。

原理：当DNA分子中的某一区段同特异的转录因子结合之后便可以得到保护而免受DNaseI酶的切割作用，而不会产生出相应的切割分子，结果在凝胶电泳放射性自显影图片上便出现了一个空白区，称为“足迹”。

（5）DNA竞争实验
原理：在DNA蛋白质结合的反应体系中加入了超量的非标记的竞争DNA，如果它同探针DNA结合的是同一种转录因子蛋白质，那么由于竞争DNA与探针DNA相比是极大超量的，这样绝大部分转录
因子蛋白质都会被竞争结合掉，而使探针DNA仍然处于自由的非结
合状态，可以在电泳凝胶的放射自显影图片上就不会出现阻滞的条带；如果反应体系中加入的竞争DNA并不能同探针DNA竞争结合同一种转录因子，结果在电泳凝胶中的放射自显影图片上就会出现阻滞的条带。

解析：空
2. 测定蛋白质一级结构的基本策略是什么？
答案：蛋白质的一级结构特指肽链中的氨基酸排序。

多肽链的氨
基酸序列测定主要根据Sanger实验室提出的方法进行，一般策略可
包括如下步骤。

（1）测定蛋白质中多肽链的数目。

根据蛋白质N末端或C末端
残基的物质的量和蛋白质的相对分子质量可确定蛋白质分子中的多肽
链数目。

（2）拆分蛋白质分子中的多条肽链。

以非共价方式相互缔合的寡聚蛋白质中的多肽链（亚基），可用变性剂如8molL尿素、6molL
盐酸胍或高浓度盐处理，拆开亚基。

（3）断裂肽链内部的二硫键。

在测定肽链的氨基酸组成之前必须断开一条肽链内半胱氨酸残基之间的SS桥。

（4）测定每一肽链的氨基酸组成。

分离、纯化得到的多肽链样品的一部分用于完全水解以测定其氨基酸组成，计算各种氨基酸的分子
比或各种残基的数目。

（5）鉴定肽链的N末端和C末端残基。

将得到的多肽链样品的。