蛋白质组学-LDH
乳酸脱氢酶245
乳酸脱氢酶245乳酸脱氢酶245（Lactate dehydrogenase 245，简称LDH-245）是一种酶类蛋白质，广泛存在于人体的多种组织和细胞中。
LDH-245起着重要的生理作用，参与糖代谢途径中的乳酸酶反应，并在临床上被用作一种生物标志物。
乳酸脱氢酶245是一种酶类蛋白质，它由四个亚基组成，通常分为两种亚基类型：M亚基和H亚基，分别代表乳酸脱氢酶的肌肉型和心脏型。
LDH-245的结构和功能在不同组织和细胞中可能存在差异，这种差异在临床上有着重要的意义。
乳酸脱氢酶245在糖代谢途径中发挥着重要的作用。
在无氧条件下，乳酸脱氢酶245能够将糖分解产生的乳酸转化为丙酮酸，从而维持细胞内糖酵解的平衡。
这一过程对于肌肉组织和心脏组织等高能消耗组织来说尤为重要，可以提供细胞所需的能量。
乳酸脱氢酶245在临床上被广泛应用作为一种生物标志物，用来评估细胞损伤和炎症反应等疾病状态。
由于乳酸脱氢酶245在不同组织中的表达水平不同，因此通过检测其活性或测定其浓度可以对特定组织或器官的损伤程度进行评估。
在临床诊断中，乳酸脱氢酶245的测定常用于心肌梗死、肝脏疾病、肌肉损伤等疾病的辅助诊断。
乳酸脱氢酶245的活性和浓度受到多种因素的影响。
例如，肌肉疾病或肌肉损伤会导致LDH-245释放到血液中，从而引起血液中LDH-245活性的升高。
另外，炎症反应也会导致乳酸脱氢酶245的升高，因为炎症反应会引起细胞膜的破坏，从而释放细胞内的酶类蛋白质。
虽然乳酸脱氢酶245在临床诊断中有一定的应用价值，但它并不是特异性的指标。
因此，在进行乳酸脱氢酶245检测时，需要结合临床症状、其他相关检测指标以及影像学等综合分析，以确定疾病的诊断和治疗方案。
乳酸脱氢酶245是一种重要的酶类蛋白质，参与了糖代谢途径中的乳酸酶反应，并在临床上被广泛应用作为一种生物标志物。
通过对乳酸脱氢酶245的检测，可以评估细胞损伤和炎症反应等疾病的状态，为临床诊断和治疗提供参考依据。
乳酸脱氢酶 1200-概述说明以及解释
乳酸脱氢酶1200-概述说明以及解释1.引言1.1 概述乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种在生物体内广泛存在的酶类蛋白质，其在细胞的能量代谢中发挥着重要的作用。
乳酸脱氢酶主要参与乳酸代谢途径中的关键步骤，将乳酸转化为丙酮酸。
这个过程不仅能够提供细胞所需的能量，还与乳酸堆积和产生酸中毒等病理情况密切相关。
乳酸脱氢酶也参与氧化糖分解途径中的其他关键步骤，如葡萄糖代谢和糖异生等。
因此，乳酸脱氢酶在维持细胞内能量代谢平衡方面具有重要的功能。
乳酸脱氢酶在不同类型的细胞和组织中表达量和同工酶组成存在差异，这可能与其在不同细胞类型中的特定生理功能相关。
例如，在肌肉组织中，乳酸脱氢酶主要参与乳酸的产生和清除，从而维持肌肉的正常功能。
而在肝脏中，乳酸脱氢酶主要参与糖异生途径和糖酵解途径，对血糖水平的调节起着至关重要的作用。
除了其在正常生理过程中的重要性外，乳酸脱氢酶在许多疾病的发生和发展中也扮演着重要的角色。
研究表明，乳酸脱氢酶的异常表达与肿瘤、心血管疾病、糖尿病等疾病的发生密切相关。
因此，对乳酸脱氢酶的研究不仅有助于揭示细胞能量代谢的调控机制，还为疾病的治疗和预防提供了新的思路和靶点。
本文将主要介绍乳酸脱氢酶的定义、功能和作用机制，探讨乳酸脱氢酶在生物体中的重要性，并综述乳酸脱氢酶的研究进展及其在未来的应用前景。
通过对乳酸脱氢酶的深入了解，我们可以更好地认识细胞的能量代谢调控机制，并为疾病的防治提供新的思路和药物靶点。
1.2 文章结构文章结构部分的内容如下：文章结构部分旨在给读者提供对本文的整体框架和内容的预览。
本文将按照以下结构组织：1. 引言：在本节中，将对乳酸脱氢酶的重要性进行概述，并介绍本文的结构和目的。
2. 正文：本节将重点介绍乳酸脱氢酶的定义、功能和作用机制。
我们将首先简要介绍乳酸脱氢酶的定义和基本功能，然后详细探讨其在生物体内的作用机制，并提供相关实例进行说明。
外文翻译---在酪干乳杆菌BL23的LDH基因分析：乳酸生产上的作用
英语外文翻译作业外文资料翻译译文：在酪干乳杆菌BL23的LDH基因分析：乳酸生产上的作用Juan Rico · María Jesús Yebra ·Gaspar Pérez-Martínez · Josef Deutscher ·Vicente Monedero收稿日期：2007年12月21日/接受日期：2008年1月13日/发表时间：2008年1月30日©学会工业微生物2008摘要：干酪乳杆菌是一种通过通过L-乳酸脱氢酶（LDH1）的作用促使糖发酵主要生产L-乳酸的乳酸菌。
此外，D-乳酸的异构体的少量产生一个D-hydroxycaproate脱氢酶（HicD）的活动。
LDH1是主要的L-乳酸生产酶，但突变它的基因并没有消除L-乳酸的合成。
一项称作“干酪乳杆菌基本法第二十三条草案的基因组序列”的调查揭示了相关的另外三个基因编码乳酸脱氢酶旁系。
为了研究这些基因对全球的这种微生物的贡献，个体乳酸以及双突变体（LDH1 LDH2，LDH1 LDH3，LDH1，LDH4和LDH1hicD）的生产，构建了乳酸生产的上清培养评估。
LDH2，LDH3和LDH4基因乳酸生产中发挥的作用不大，因为他们的单一突变或在组合与LDH1缺失突变对L-乳酸合成的影响很小。
ΔLDH1突变体显示D-乳酸产量增加，这是可能通过活动HicD合成，因为它是在取消ΔLDH1 hicD的双突变。
相反，可能是HicD，在没有LDH1，LDH2，LDH3或LDH4活动的情况下通过酶谱分析检测。
此外，这些检测发现存在额外的频段表现出D-/L-lactate脱氢酶活性，这不能归咎于任何所描述的基因。
这些结果表明，L-BL23具有一个复杂的酶系统，能够减少乳酸丙酮酸。
关键词：干酪乳杆菌、乳酸菌、Hydroxycaproate脱氢酶、乳酸脱氢酶、代谢工程简介：糖代谢乳酸菌（LAB）的特点是通过乳酸脱氢酶的作用主要发酵生产乳酸产品，从而降低丙酮酸，乳酸。
乳酸脱氢酶同工酶的分离
LDH
CH3-CHOH-COOH+NAD+
CH3-CO-COOH+NADH+H+
2.同工酶 能催化同一化学反应，但其酶蛋白的分子组成不同
的一组酶
例如：LDH就是由2种亚基L和M以不同比例组成的四 聚体，即H4、H3M、H2M2、HM3、M4共5种同工酶。
二、实验内容
用聚丙烯酰胺电泳法分离LDH的同工酶，用活性染色法呈现同 工酶的区带。
七、思考与讨论
1.LDH活性染色法能否用于定量测定，能否用于比色 法测定其他生化反应？
此法可以用于溶液的比色定量测定，也可用于其 他生化的氧化还原反应。但由于NBTH2不溶于水，在 琥珀酸脱氢酶测定中，可使PMSH2与溶于水的2，6-二 氯酚定酚相偶联而进行比色测定。
2.同工酶能否用SDS-聚丙烯酰胺电泳分离？为什么？
SDS是解离剂，而许多同工酶是由2种亚基以不同 比例组成的全酶，被解离后进行电泳，获得的是亚基 的条带，无法显示同工酶的条带，故不能用此法分离。
谢谢！
单体：丙烯酰胺(Acr)
交联剂：N,N’- 甲叉双丙烯酰胺(Bis)
聚合反应 AP-TEMED催化体系：
过硫酸铵 (AP)
催化剂
四甲基乙二胺 (TEMED)
加速剂
结构
三维网状结构的凝胶
三、实验原理
4、蛋白质、核酸在常规聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分离原理
净电荷聚丙烯酰胺凝胶电泳是对天然状态生物大 分子进行的电泳，目的是为了保持蛋白质的天然构象、 其亚基之间的相互作用及其生物学活性。利用蛋白质 分子中所带净电荷、分子质量、形状的差异，在电场 中泳动的速度和方向不同，从而达到分离的目的。多 数蛋白质的pI在中性偏酸性范围，通常是将样品在碱 性缓冲系统中进行电泳，蛋白质分子带负电荷，以不 同速度向阳极迁移，称为阳极电泳；对于一些碱性蛋 白，使用酸性缓冲系统进行电泳，蛋白质分子带正电 荷而向阴极迁移，称为阴极电泳。
乳酸脱氢酶_990_概述及解释说明
乳酸脱氢酶990 概述及解释说明1. 引言1.1 概述乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）是一种重要的酶类蛋白质，在人体和其他生物体内广泛存在。
该酶参与了细胞内的糖代谢过程，在乳酸产生和清除中发挥着关键作用。
近年来，随着对乳酸代谢的深入研究，人们对乳酸脱氢酶进行了广泛的关注和探索。
1.2 文章结构本文将围绕乳酸脱氢酶展开全面而深入的讨论。
首先，我们将介绍乳酸脱氢酶的概述，包括其定义、功能以及分类和分布等方面内容。
然后，我们将详细阐述乳酸脱氢酶在人体生理作用中的角色，并分析其在疾病发展过程中所表现出的异常表达与调控相关性。
接下来，我们将探讨乳酸脱氢酶在医学领域中的应用与意义，包括其作为诊断疾病标志物以及肿瘤治疗和运动生理学领域中的重要性和应用前景等方面。
最后，我们将对乳酸脱氢酶的重要性和作用机制等主要观点进行总结，并展望未来相关研究的发展方向。
1.3 目的本文的目的在于全面概述乳酸脱氢酶的相关知识，深入解释其功能、生理作用以及在医学领域中的应用与意义。
通过系统地整合已有研究成果，并提供对未来乳酸脱氢酶相关研究发展趋势的展望，旨在加深人们对乳酸脱氢酶这一重要生物分子的认识并促进相关领域的进一步探索和应用。
2. 乳酸脱氢酶概述:2.1 定义和功能:乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）是一种广泛存在于细胞内的酶类，它在许多生物体中都起着重要的功能。
乳酸脱氢酶能够催化乳酸与双瓣糖转换为丙酮酸和NADH，同时在反向反应中也起到同样作用。
这种双向催化反应使得乳酸脱氢酶在能量代谢过程中起到了关键的角色。
2.2 类型和分布:乳酸脱氢酶可以根据其组成亚基的类型进行分类，常见的有两种主要类型：LDH-1和LDH-5。
LDH-1由四个M亚基组成，主要分布在心肌和红血球等组织中；而LDH-5则由四个H亚基组成，主要存在于肝脏、肾脏和肌肉等组织中。
此外，在不同动物物种和人类身体各部位也会有不同类型的乳酸脱氢酶的存在。
医学检验学 关节液生化的参考范围-概述说明以及解释
医学检验学关节液生化的参考范围-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述近年来，在医学领域发展的推动下，关节液生化检测逐渐成为了研究和诊断关节疾病的重要手段之一。
关节液生化指标的检测对于早期发现和评估关节疾病、指导治疗方案的制定以及疾病的预后判断具有重要的临床意义。
然而，要准确地判断关节液生化指标的异常与否，我们需要了解其参考范围。
关节液生化的参考范围是指在正常情况下，关节液中各种生化指标的正常范围。
这些参考范围是通过大量的临床样本统计分析得出的，具有重要的临床参考价值。
了解关节液生化的参考范围有助于临床医师判断患者关节液检测结果的异常程度，从而更好地指导治疗和预后判断。
关节液生化的参考范围涵盖了多个指标，如白细胞计数、红细胞计数、葡萄糖浓度、蛋白质含量等。
这些指标的正常范围是根据大量健康人群的关节液检测结果进行统计分析得出的。
特定的性别、年龄、地域等因素也会对参考范围产生影响，因此，在进行关节液生化检测时，需要根据不同人群的特点进行综合考虑。
了解关节液生化的参考范围不仅可以帮助医生更好地判断关节液检测结果的异常情况，还可以提供线索用于疾病的鉴别诊断。
以关节液中白细胞计数为例，如果检测结果高于参考范围，可能提示关节炎或感染的存在；如果检测结果低于参考范围，则可能存在类风湿性关节炎等免疫性疾病。
因此，准确判断关节液检测结果的正常与异常，对于明确诊断和治疗方案的选择具有重要意义。
综上所述，了解关节液生化的参考范围及其临床意义对于相关疾病的研究和诊断具有重要的价值。
通过本文所述的关节液生化参考范围的概述，我们将深入了解关节液生化指标的正常范围，并对于相关疾病的发展和治疗提供更加科学、准确的依据。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要包括以下几个部分：第一部分：引言在这一部分，我们将对关节液生化的重要性和研究意义进行概述，并阐述本文的目的。
第二部分：正文2.1 关节液生化概述本节将介绍关节液生化的基本概念和意义。
脑脊液LDH、AST、ADA活性和蛋白含量对脑膜炎的诊断意义
Ｓｉｎｉｉａ ｃ ｆ ｒ ｌｔｏ ｅ ｗｅ ｎ ｄ ｔｃ ｉｎ ｆｅ ｚ ｇ ｆｃ ｎ ｅｏ ｅａ ｉ ｎ ｂ ｔ ｅ ｅｅ ｔｏ ｏ ｎ ｙｍ ｅａｃｉ ｔ ｎｄ ｐｒ ｔ ｉ ｌｖ ｌｉ ＣＳＦ ｎｄ ｍ ｅ ｎ ｉｉ ｔｖｉｙ ａ ｏ ｅｎ ｅ ｅ ｎ ａ ｎｉ ｇ ｔｓ
Ａｂ ｔａ ｔｏｂｅｔ ｅ Ｔｏ ｓｕ ｙ ｔ ｅｖ ｒ ｔ ｎｏ ｎ ｙ ｃｉｉ ｎ ｒｔｉ ｖ ｌ ｆｔｒｅｔ ｐ ｎｎ ｉ ｓ Ｍｅｈ ｄ Ｃｏｌｃ Ｆ ｓｒｃ ： ｊｃｉ ｖ ｔ ｄ ｈ ａｉ ｉ ｆ ｚ ｍｅａ ｔ ｔ ａ ｄｐ ｏ ｅｎｌ ｅ ｏ ｈ ｅ ｙ ｅｍｅ ｉｇｔ ． ｔ ｏ ｓ ａｏ ｅ ｖｙ ｅ ｉ ｌ ｔＣＳ ｅ
摘 要： 的 目 探 讨 不 同类 型 脑 膜 炎 时 脑 脊 液 酶 活性 与 蛋 白含 量 变化 。方 法 对６ ２例 脑 膜 炎 患者 脑 脊 液 （ Ｓ ） ＤＨ、 Ｔ、 ＣＦ Ｌ ＡＳ
ＡＤ 活 性 和 蛋 白含 量进 行 测 定 组 ） 化脓 性 脑 膜 炎组 （ 简称 化 脑 组 ） 病 毒 性 脑 膜 炎 组 （ 称 和 简 病 脑 组 ） Ｓ Ｄ Ａ Ｔ、 Ａ 活 性 和 总蛋 白含 量 较 正 常 对 照 组 明显 升 高（ Ｃ ＦＬ Ｈ、 Ｓ ＡＤ Ｐ＜ Ｏ ０ ） 结 脑 组 Ｃ ＦＡＤ 活性 升 高 程 度 较 化 脑 组 ．５ 。 Ｓ Ａ 和病脑组高（ Ｐ＜Ｏ ０ ） ． １ 。结 脑 组 和 化 脑 组 Ｃ ＦＡＳ Ｌ Ｓ Ｔ、 ＤＨ 活性 升 高程 度 较 病 脑组 高（ Ｐ＜ Ｏ ０ ） Ｃ Ｆ蛋 白质 含 量 升 高程 度 化 脑 ． ５。 Ｓ 组 ＞ 结 脑 组＞ 病 脑 组 。结 脑 组 、 脑 组 和 病 脑 组 Ｃ Ｆ ２ＭＧ 和 Ｃ Ｐ较 正 常 对 照 组 均 有 明 显 升 高 ， 以 病 脑 组 升 高 最 为 显 著 。结 化 Ｓ Ｉ－ ３ Ｒ 且
蛋白质分离纯化
实验一乳酸脱氢酶粗提液的制备及活力测定一实验原理：生物大分子分析研究中的一个限速步骤就是从最初的生物来源中获得并处理充足的目标物质，其分离纯化主要是根据大分子间的特异性差异，同时还需要进行相应的含量测定、纯度鉴定及生物活性检测。
乳酸脱氢酶（简称LDH，Ec1.1.2.2，L一乳酸，NAD+氧化还原酶）它能催化丙酮酸和L 一乳酸的可逆转化，是生物体内糖酵解过程中重要的氧化还原酶，广泛存在于动物、植物和各种微生物细胞的胞液内，属于胞内酶，胞内酶的获得需选取含酶丰富的新鲜组织材料，采取温和的分离方法和条件，对组织细胞进行破碎、匀浆，使之在水或低盐溶液中以溶解状态释放，同时保持天然活性。
LDH的初步提取一般选用4℃预冷、pH6.5、10mmol/l的PB与含LDH的组织细胞混合匀浆。
4℃预冷的目的是低温操作，尽量避免酶变性；pH6.5接近中性，LDH溶解度比较大且稳定性高；10mmol/l的浓度属于低盐溶液，低渗环境有助于细胞破裂、LDH溶解。
组织匀浆经浸泡、离心，其上清液即为含LDH的组织提取液。
LDH的分离纯化过程中，还需不断监测提取液中的总蛋白含量和LDH活力。
LDH属于蛋白质，根据蛋白质在λ260nm和λ280nm下的光吸收度值（A260和A280）的经验公式可求出蛋白质的浓度：蛋白质的浓度（mg/ml）=(1.45A280-0.74 A260)×稀释倍数，然后即可求出蛋白质总含量=蛋白质的浓度（mg/ml）)×粗提液体积（ml）。
酶活力一般用一定条件下所催化的化学反应速度来表示，催化的反应速度越快表明酶的活力越高，反之酶活力越低。
所以，测定酶活力实际上就是测定酶促反应的速度，可以用反应初始单位时间底物的消耗量或产物生成量来表示。
LDH催化可逆反应：丙酮酸+NADH+H+ 乳酸+NAD+NADH和NAD+作为LDH的辅酶参与反应，鉴于NADH在λ340nm处有最大吸收峰，而NAD+的最大吸收峰则在λ260nm，通过监测最大吸收峰处吸收值（A）的变化即可指示反应进行的方向。
乳酸脱氢酶检测意义
乳酸脱氢酶检测意义1.引言1.1 概述乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种重要的酶类蛋白质，在细胞内广泛存在，并参与多种生物化学反应。
LDH主要在细胞质和线粒体中发挥作用，参与葡萄糖代谢过程中乳酸的生成和氧化。
乳酸脱氢酶检测是临床常用的一种生化指标，通过检测体内乳酸脱氢酶活性的改变，我们可以了解到人体细胞和组织的代谢状态以及某些疾病的情况。
乳酸脱氢酶检测在临床上应用广泛，特别是在心肌梗死、肝脏疾病和恶性肿瘤等疾病的早期诊断和治疗过程中起到了重要的作用。
乳酸脱氢酶活性的改变可以作为判断心肌梗死程度的重要指标之一，其升高与心肌梗死相关酶的释放密切相关。
此外，肝脏疾病也是乳酸脱氢酶活性异常的常见原因之一，乳酸脱氢酶检测可以帮助早期发现肝功能异常，并进行治疗。
此外，某些恶性肿瘤患者体内乳酸脱氢酶活性也会显著升高，因此乳酸脱氢酶检测也可作为恶性肿瘤的辅助诊断指标。
总之，乳酸脱氢酶检测在临床诊断和治疗中具有重要的意义。
通过监测乳酸脱氢酶活性的变化，我们可以及早发现和诊断一些疾病，提高治疗效果，降低患者的风险。
未来，随着科学技术的进步和研究的不断深入，乳酸脱氢酶检测在临床应用中的价值还将不断被发掘和扩大。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以从以下角度进行撰写：文章结构的设计是为了使得读者能够清晰地理解整篇文章的内容，同时也是为了保证文章的逻辑性和连贯性。
本篇文章的结构包括引言、正文和结论三个部分。
引言部分是整篇文章的开端，主要介绍了乳酸脱氢酶检测的背景和意义，引起读者的兴趣，使其了解为什么乳酸脱氢酶检测是一个重要的话题。
在引言的最后，也可以提出一些问题或者预告一下后续的内容，引导读者进入正文部分。
正文部分是本文的核心部分，展开了乳酸脱氢酶的作用和乳酸脱氢酶检测的意义。
在2.1节中，可以详细介绍乳酸脱氢酶的作用机制和在生物体内的分布情况，以及其对于乳酸代谢和能量供应的重要性。
蛋白质组学概论
蛋白质数据库
表达蛋白质组学研究的基本流程
蛋白样品的制备及定量
总蛋白的双向凝胶电泳（染色） 凝胶分析软件分析 胶内酶解（胰肽酶） 质谱分析（肽质量指纹图谱） 数据库搜索鉴定蛋白性质
样品制备的原则
1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的 总蛋白，减少蛋白质的损失； 2）减少对蛋白质的人为修饰； 3）破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作用，并使 蛋白质处于完全变性状态。
还原剂（reducing agents），最常用的是二硫苏糖醇（DTT），主要作用 是破坏蛋白质分子间的二硫键，以利于肽链的分离； 蛋白酶抑制剂，如EDTA、PMSF or Protease inhibitor cocktails，主要作用 是防止蛋白的降解。
蛋白质样品中核酸等大离，导致明显的纵向拖尾。
2-D Western blotting差异反应图谱
基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（matrixassisted laser desorption /ionization time of flightmass spectrometry，MALDI-TOP-MS）
MALDI-TOP-MS工作原理
双向电泳与质谱技术的联合应用成为蛋白 质组学研究的基本技术平台。
目前应用于临床的肿瘤标志物可分为以下几类: (1)肿瘤胚胎性抗原,如CEA ( carcinoembryonic antigen)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)； (2)异位激素,如绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)、 前促胃液素释放肽(Pro-gastrin-releasing peptide, ProGRP)； (3)酶和同工酶,如神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、 乳酸脱氢酶(lactate dehydyogenase,LDH)、前列腺酸性磷酸酶(prostate gland acidity phosphatase,PAP)； (4)血浆蛋白,如β2-巨球蛋白； (5)细胞代谢产物,如细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA)、 脂质相关涎酸； (6)肿瘤抗原,如癌抗原1-29、癌抗原-125； (7)癌基因和抑癌基因蛋白产物,如C-myc 基因蛋白、Ras基因蛋白、P53抑 癌基因蛋白； (8)微量元素,如砷、铜、铁、硒、锌。
血清LDH同工酶测定
同工酶的应用
是否人种间在差异呢？这个答案不 得而知，但有一点是明确的，那就是LDH同
工酶在人体不同器官和组织间是有差异的，
从医学角度来讲，利用这种特异性临床上对
LDH同工酶的检测可作为某些疾病诊断的依据
之一。
南昌大学医学院
同工酶的应用
在临床检验方面，通过观测病人血清中LDH同
工酶的电泳图谱，辅助诊断哪些器官组织发生病变 ，远较单纯测定血清LDH总活性的方法敏感。例 如，心肌受损病人血清LDH1含量上升，肝细胞受 损者血清LDH5含量增高。
南昌大学医学院
6、图谱分析-1
南昌大学医学院
6、图谱分析-1
正常： LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5
参考值(琼脂糖电泳法)：
LDH1（28.4〒5.3）%； LDH2（41.0〒5.0）%； LDH3（19.0〒4.0）%； LDH4（6.6〒3.5）%； LDH5（4.6〒3.0）%。
LDH4活性极高时，常示预后不良；原发性肝癌以血清LDH4＞LDH5较为常见
，阻塞性黄疸时LDH4 与LDH5 均增高，但以LDH4 尤为明显。
南昌大学医学院
6、图谱分析-3
文献：血清乳酸脱氢酶同工酶在肝脏疾病中的检测及意义 摘要:目的 探讨血清乳酸脱氢酶同工酶检测在肝脏疾病中的临床意义。方法 LDH 同工酶测定采用琼脂糖电泳法，统计学处理采用t检验。结果 LDH1在急性肝炎
LDH同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物
各组织中LDH同工酶各组分含量不同，具有明显
的物种间差异可作为动物分类的生化依据。
南昌大学医学院
同工酶的应用
文献：鲿科四种鱼LDH同工酶谱的研究 【摘要】：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对鲿科四种 鱼血清中LDH同工酶进行电泳分析,结果表明:四种鱼 血清LDH同工酶图谱的区带分布具有种的特异性;四 种鱼血清LDH同工酶A、B亚基比例关系反映的各品种 间亲缘的关系与形态学特征分析结果吻合,为鲿科四 种鱼分类提供进一步的理论依据.
乳酸脱氢酶酶活力测定
实验六乳酸脱氢酶酶活力测定及紫外吸收法测定蛋白质含量目的要求(1) 掌握LDH活性测定原理；(2) 学习用比色法测定酶活性的方法。
实验原理乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH，EC.1.1.1.27, L－乳酸：NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。
LDH可溶于水或稀盐溶液。
组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为简单、快速。
鉴于NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。
本实验测定LDH活力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。
其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。
可定量测定每克湿重组织中LDH单位。
定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。
利用上述原理，改变不同第五则可测定相应脱氢酶反应过程中A340nm的改变，定量测定酶活力，如苹果酸脱氢酶、醇脱氢酶、醛脱氢酶、甘油－3－3磷酸脱氢酶等，适用范围很广。
试剂和器材一、试剂50m mol/L pH6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液母液：A: 50 m mol/L K2HPO4: 称K2HPO41.74g加蒸馏水溶解后定容至200ml。
B: 50 m mol/L KH2PO4: 称KH2PO43.40g加蒸馏水溶解后定容至500ml。
取溶液A 31.5ml ＋溶液B 68.5ml, 调节pH至6.5。
置4℃冰箱备用。
10m mol/L pH 6.5磷酸氢二钾－磷酸二氢钾缓冲液用上述母液稀释得到。
现用现配。
0.1mol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液, 用上述母液稀释得到。
现用现配。
NADH溶液：称3.5mg纯NADH置试管中，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液1ml 摇匀。
血清ADA、LDH、CRP、PCT等在呼吸疾病中的诊治应用
内障晶状体 蛋 白质组学的差异分析 ． 中华实验 眼科 杂志 ， ２ ０ １ ２ ，
３ ０ （ ６ ） ： ５ ４ ８ － ５ ５ ２ ．
Ｗｈ ｉ ｔ ｉ ｎ ｇ ＤＲ，Ｇｕａ ｒ ｉ ｕａ ｇ ｔ ａ Ｌ，Ｗ ｅ ｉ ｌ Ｃ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｉ ＤＦ ｄ ｉ ａ ｂ ｅ ｔ ｅ ｓ ａ ｔ ｌ ａ ｓ ： ｇ ｌ ｏ ｂ ａ ｌ ｅ ｓ ｔ ｉ ｍａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｐ ｒ ｅ ｖ ａ ｌ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｄ ｉ ａ ｂ ｅ ｔ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ２ ０１ １ ａ ｎ ｄ ２ ０ ３ ０．
９ ］ Ｂ ｉ ｔ ｉ ｒ ｇ ｅ ｎ Ｇ ， Ｏ ｚ ｋ ａ ｇ ｎ ｉ ｃ ｉ Ａ ， Ｍａ ｌ ｉ ｋ Ｒ Ａ ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｃ ｏ ｒ ｎ ｅ ｌ ａ ｎ ｅ ｒ ｖ ｅ ｉ ｆ ｂ ｒ ｅ 手术 也是安 全可行 的 ， 除此 之外 ， 术前还要 充分评估该 患者 ［
ｄ ｉ ａ ｂｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｃ ｏ ｎ ｆ ｏ ｅ ａ ｌ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ． Ｃｈ ｉ ｎ Ｏｐ ｈ ｔ ｈ ａ ｌ Ｒｅ ｓ ，
Ｋ０ ｂ ａ ｙ ａ ｓ ｈ ｉ Ａ， Ｙｏ ｓ ｈ ｉ ｔ ａ Ｔ， Ｓ ｕ ｇ ｉ ｙ ａ ｍａ Ｋ． Ｗｈ ｉ ｔ ｅ — ｌ ｉ ｇ ｈ ｔ ａ ｎ ｄ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｃ ｏ ｎ ｆ ｏ ｃ ａ ｌ
［ １ １ ］王玲 ， 陈惠 ， 邓洪 ， 等． 糖 尿病病 程与 白内障囊外 摘除及人 工
禹倩 倩 ， 姚勇 ， 储兆东 ， 等． 糖尿病性 白内障 和年龄相关性 白 晶体 植 入术 预 后 的关 系 ． 实 用 医 学杂 志 ， ２ ０ ０ ６ ， ２ ２ （ ２ ０ ） ： ２ ４ ０ ３ —
乳酸脱氢a氨基酸序列
乳酸脱氢a氨基酸序列
乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种重要
的酶类蛋白质，它在细胞内负责乳酸的代谢。
LDH存在于多种生物
体中，包括哺乳动物、植物和微生物。
LDH的氨基酸序列是其蛋白
质结构的基本组成部分，其序列会影响LDH的功能和稳定性。
LDH的氨基酸序列由数百个氨基酸组成，其中包括丝氨酸、赖
氨酸、谷氨酸等。
这些氨基酸按照特定的顺序排列，形成了LDH的
蛋白质结构。
LDH的氨基酸序列对于其在细胞中的定位、与其他蛋
白质的相互作用以及催化乳酸代谢等功能都具有重要意义。
从结构角度来看，LDH的氨基酸序列决定了其蛋白质的三维结构，包括α-螺旋、β-折叠等结构特征。
这些结构特征直接影响了LDH的催化活性和底物特异性。
此外，LDH的氨基酸序列还决定了其在进化过程中的变化和多
态性。
不同物种、不同个体甚至不同组织中的LDH氨基酸序列可能
会有所不同，这种差异可能与其在不同生理条件下的功能需求有关。
总的来说，LDH的氨基酸序列对于其在细胞中的功能和结构具
有重要影响，研究氨基酸序列可以帮助我们更好地理解LDH的生物学功能和生物化学特性。
蛋白质组与蛋白质组学简介-1
蛋白质组与蛋白质组学简介-1一、蛋白质组概念：一个细胞、一个组织或一个机体全部基因所表达的全部蛋白质。
二、蛋白质组学研究范畴1.蛋白质和蛋白质间2.蛋白质和核酸之间3.蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定4.蛋白质结构分析5.生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表达差异6.蛋白质信息库三、蛋白质-蛋白质1 蛋白质亚基聚合：构像改变；四级结构2 交叉聚合：同工酶（LDH）3 分子识别：（如抗原-抗体）生物大分子间特异性、专一性的识别和结合；构像互补或构像变化产生互补的结构域；化学基团相互间存在足够的结合力。
4 分子自我装配：大分子的相互识别和结合5 多酶复合体：多种酶相互结合形成一种新的结构。
如丙酮酸脱氢酶四、蛋白质间的相互作用力蛋白质内部：肽键蛋白质间：非共价键、氢键、范德华力、疏水键、离子键五、蛋白质相互作用研究方法1.酵母双杂交系统：灵敏度较高的蛋白质间相互作用的方法。
酵母杂交系统包括：转录调控区、报告基因和一对反式作用因子。
N端：报告基因转录因子特异DNA结合区；C端：调控目的基因转录的反式作用因子proteinXN端：报告基因转录因子转录活化区； C端：调控目的基因转录的反式作用因子proteinYprotein X+protein Y 报告基因转录2.噬菌体展示：研究基因工程蛋白质间相互作用的方法。
抗体基因文库和随机多肽构建，用于筛选基因工程抗体和多肽药物。
也可以使用于体内蛋白质的相互作用的研究。
3 生物传感芯片质谱定性和定量检测蛋白质间相互作用的方法。
以表面等离子激原共振为基础的生物分子相互作用的分析技术与质谱技术的结合。
１×１cm２芯片，以玻璃为支持物，上面固定羧甲基葡聚糖聚合物，将一些蛋白质（肽）固定在上面。
蛋白质或肽样品流过固相支持物，从而将发生相互作用的蛋白质滞留在聚合物上。
蛋白质量的增加，使入射光折光率改变，引起共振角改变。
蛋白质量与共振角呈线性关系。
该法快速、灵敏、特异，需要的蛋白质样品量１-１０μg ，检测水平可达到非摩尔，精确度可达０.１％，检测时间只需要１０分钟。
乳酸脱氢酶282
乳酸脱氢酶282乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，简称LDH）是一种重要的酶类蛋白质，广泛存在于多种生物体内，包括动物、植物和微生物等。
它在体内发挥着重要的生物学功能，特别是在能量代谢和乳酸酸化过程中起着关键的作用。
乳酸脱氢酶的结构和功能已经被广泛研究。
它是一种四聚体，由两种亚基组成，分别是M亚基和H亚基。
这两种亚基的组合方式决定了乳酸脱氢酶的类型，包括LDH-1、LDH-2、LDH-3、LDH-4和LDH-5等。
不同类型的乳酸脱氢酶在组织和器官中的分布也有所不同，反映了其在不同生理和病理状态下的调节和功能。
乳酸脱氢酶是催化乳酸和NAD+之间的相互转化的重要酶。
在有氧条件下，乳酸脱氢酶促使乳酸氧化生成丙酮酸，同时还还原了NAD+为NADH。
这个过程是细胞内乳酸酸化产生的重要途径之一。
乳酸脱氢酶的活性水平可以反映细胞内乳酸代谢的状态，进而对细胞的能量供应和氧化还原平衡等方面产生影响。
乳酸脱氢酶的活性受到多种因素的调控。
首先，乳酸脱氢酶的表达水平受到基因转录和翻译的调节。
其次，乳酸脱氢酶的催化活性受到多种离子和分子的影响，例如金属离子、酸碱度、温度等。
此外，乳酸脱氢酶的活性还可以通过磷酸化、乙酰化等后修饰过程进行调节。
乳酸脱氢酶在临床诊断中也具有一定的意义。
乳酸脱氢酶是一种非特异性标志物，其活性水平的改变可以反映多种疾病的发生和进展。
例如，心肌梗死、肝病、肺病等都会导致乳酸脱氢酶的活性升高。
因此，测定血清乳酸脱氢酶活性可以作为一种辅助诊断指标，对于疾病的早期诊断和监测具有一定的临床意义。
总结起来，乳酸脱氢酶作为一种重要的酶类蛋白质，在细胞内能量代谢和乳酸酸化过程中发挥着关键的作用。
其结构和功能已经被广泛研究，但仍有待深入探索。
乳酸脱氢酶的活性受到多种因素的调控，其活性水平的改变可以反映多种疾病的发生和进展。
因此，进一步研究乳酸脱氢酶的调控机制和功能，对于揭示细胞代谢和疾病发生机制具有重要的意义。
台盼蓝排斥试验和LDH
台盼蓝排斥试验和LDH试验表明，没有明显的毒性作用在浓度水平（0–0.5毫克/毫升）使用的研究。
这些的调查结果提高的可能性，可能代表了一种新的PFD为预防术后的治疗剂。
PFD是一种抗炎和抗纤维化剂，展品范围内许多类型的细胞的抑制作用浓度0.2至2毫克/毫升，没有或很少的毒性作用TGF-β（转化生长因子-β）信号通路在调控干细胞活性和器官形成中发挥着重要的作用，当TGF-β信号通路各成员活性未激活时，体内会自发性发生多种癌症，这表明TGF-β定向调节干细胞对癌症形成也具有不可或缺的功能。
TGF-β超家族包含接近30个生长和分化因子，其中有TGF-β s，活化素(activin)，inhibins 和骨形态发生蛋白(BMPs) 。
下游的跨膜TGF-β受体是多个SMAD蛋白，这些蛋白是TGF-β超家族信号传递的重要调控分子，并在不同层面上受多种多样精确的调控。
TGF-β与TGF-βII型受体（TGF-βRII）结合后，再激活募集TGF-β I型受体（TGF-β RI）组合后形成二聚体形式的受体复合物。
TGF-β RII磷酸化TGF-β RI的甘氨酸-丝氨酸富集区域（GS序列）并活化TGF-β RI的丝氨酸/苏氨酸活性。
活化的TGF-β RI反过来又磷酸化受体相关smad蛋白。
脊椎动物中目前发现的smad蛋白至少有9种，分别是(a)受体调节的Smads （R-Smads）：Smad 1, Smad 2, Smad 3, Smad 5, and Smad 8; (b)共调节Smads: Smad 4 and Smad 10;（c）抑制性Smads(I-Smads): Smad 6 and Smad 7。
Smad 2,和Smad 3参与TGF-β和活化素信号通路，而Smad 1、Smad 5和Smad 8调节BMP信号通路。
R-Smads和Smad 4 主要位于细胞质中，它们的活性主要受衔接蛋白调节，如Smad锚定受体激活蛋白（SARA）和ELF。
几种重要的调节酶
（二）别 构 酶
Vmax 100%
A 50%
[S]90%V [S]10%V
=81
B
[S]90%V [S]10%V
=3
1 2 3 4 5 6 7 8 [S]
别构酶动力学曲线 A.为非调节酶的曲线 B.为别构酶的S形曲线
别构酶的调节作用：
别构酶的活性中心负责酶对底物的结合与催化别构 中心则负责调节酶反应的速度。
不同的别构酶的调节物分子不同。有的别构酶具有 同促效应，有的别构酶具ห้องสมุดไป่ตู้异促效应，更多的别构 酶酶是既具有同促效应又具有异促效应。
几种重要的调节酶
（一） 同工酶（Isoenzyme）
1.概念 同工酶是指能催化相同的化学反应，但酶蛋白的分子结构、 组成却有所不同的一组酶,存在于生物的同一种属或同一个体的不 同组织中，甚至是同一组织或细胞中。一般为寡聚蛋白。 2.同工酶举例：1959年，Marker首先用电泳分离法发现动物的乳 酸脱氢酶（LDH）具有多种分子形式。 LDH5(M4) LDH4(M3H) LDH3(M2H2) LDH2(MH3) LDH1(H4)
诱导酶 induced enzyme
诱导酶(induced enzyme)是在环境中有诱导物（通常是酶的底物）存在 的情况下，由诱导物诱导而生成的酶。例如，大肠杆菌分解乳糖的半乳糖 苷酶就属于诱导酶。又如，催化淀粉分解为糊精、麦芽糖等的α-淀粉酶也 是一种诱导酶，多种微生物都能产生这种酶。如果将能合成α-淀粉酶的菌 种培养在不含淀粉的葡萄糖溶液中，它就直接利用葡萄糖而不产生α-淀粉 酶；如果将它培养在含淀粉的培养基中，它就会产生活性很高的α-淀粉酶。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
基因组告诉你，理论上能够发生什么？ mRNA告诉你，可能发生什么？ 蛋白质组告诉你，正在发生什么？
3.1.2 蛋白质组
• 蛋白质组（proteome） ： 1994年，由Marc Wilkins首次提出，指由 一个基因组(genOME)，或一个细胞、组 织表达的所有蛋白质(PROTein)。
3.1.3 蛋白质组学
3.2 蛋白质组学的研究
• 多样----蛋白质数目大大超过基因数目。 • 可变----蛋白质随时间与空间变化。
3.2.1 蛋白质组学研究的基本流程
• 基于凝胶的工作流程是目前使用的较为广 泛的、发展最为成熟的工作流程
2-DE & MS
样品制备
• 样品来源：细胞、组织、体液等。 • 可采用全蛋白；
• ESI MS: 电喷雾质谱（ electrospray ionisation mass spectrometry ）
MALDI
利用固体基质分子均匀包埋样品分子，在激光照射下，基 质分子吸收激光能量而蒸发，携带样品分子进入气相，进一 步将能量传递给样品分子，从而实现样品分子离子化。
MALDI 最大的特点是离子电荷通常为1-2个， 而不象ESI中为多电荷离子，对分子质量较大的样 品而言，不会形成复杂的多电荷图谱，因而对图 谱的解析比较清楚。
蛋白质组学 Proteomics
刘丹慧 温州医学院检验医学与生命科学学院
前言与背景
蛋白质是一种复杂的有机生物大分子，它们是生 命活动的实际执行者。
几乎所有的生物催化剂--酶，都是蛋白质。构成 细胞骨架和动物大部分结构的纤维物质也是蛋白 质；胶原蛋白和角蛋白组成了皮肤，毛发和软骨； 肌肉大部分也是由蛋白质组成。
蛋白质由一个一个的氨基酸首尾相接形成肽链， 肽链再折叠形成一定空间结构。
3 billion bases
~28,000 genes > 100,000 proteins
人类基因组中绝大部分基因及其功能有 待于在蛋白质水平上加以揭示与阐述。
基因组
转录组
蛋白质组
The era of ‘omics’-based science （组学时代） – Genomics （基因组学） – Post-genomic science （后基因组时代） • Functional genomics （功能基因组学） –Transcriptomics（ 转录组学） –Proteomics （蛋白质组学） –Metabonomics/metabolomics （代谢组学） • Structural genomics （结构基因组学） –Aim - 3D structures of all protein folds !
或进行预分级（线粒体、高尔基体、叶绿体、 膜蛋白、核蛋白等）---- 提高低丰度蛋白质的上 样量及检测灵敏度。 尽可能扩大蛋白质的溶解度和解聚，以提高分 辨率。
样品分离
• 双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）：利用蛋白质的 等电点与分子量差异分离之。
• 缺点：过程缓慢，消耗大，试剂昂贵。
质谱分析（Mass spectrometry）
• 基本原理：样品分子离子化后，根据离子 间质荷比（m/z）差异来分离并确定样品分 子量。
Ionization
Ion Source
Form ions (charged molecules)
Mass Sorting (filtering)
Mass Analyzer
Sort Ions by Mass (m/z)
Detection
Ion Detector
Detect ions
Inlet
• Solid • Liquid • Vapor
100 75 50 25
0 1330
1340
1350
Mass Spectrum
主要质谱类型
• MALDI-TOF MS: 基质辅助激光解吸/电离飞行时 间质谱 (Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry)
• 第一向：等电聚焦 IEF 第二向：SDS-PAGE
第一向 等电聚焦IEF
第二向 SDS-PAGE
染色方法
• 考马斯亮蓝染色 • 银染（不含戊二醛） • 荧光染色（Cy3, Cy5），放射性同位素标
记等
2-DE 的缺点
• 难以有效分离极酸、极碱性蛋白质，极大、极 小蛋白质，及低丰度蛋白质。
• 胶内酶解过程费时、费力，难以与质谱实现自 动化联用。
新型非凝胶技术
• 液相色谱法（liquid chromatography, LC） LC-MS/MS：液质联用技术
• 对在双向电泳中难以分离鉴定的高分子量、 低分子量、极酸性、极碱性和疏水性强的蛋 白进行有效的分学（proteomics）： 以蛋白质组为研究对象，分析细胞内动态 变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰 状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系， 在整体水平上研究蛋白质的组成与调控的 活动规律。
• 功能蛋白质组：细胞在某一阶段或与某一 生理现象相关的所有蛋白质。
• 差异蛋白质组：不同种类或状态下各种样 本之间蛋白质组的区别与变化。
2-DE
Protein extraction
Image analysis
staining
Scanning
微量测序（microsequencing）
• N-末端 Edman 降解：经凝胶分离的蛋白质直接 印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上 → N末端氨基酸 残基经苯异硫氰酸酯修饰 → 从多肽链上切下修饰 的残基 → 再经层析鉴定 → 余下的多肽链被回收 再进行下一轮降解循环。
ESI
待测分子溶解在溶剂中，以液相方式通过毛细管到达喷口。 在高电压作用下形成带电荷的雾滴，随着雾滴中溶剂的蒸发， 其表面电场随半径减少而增加，电荷密度不断变大，到达某一 临界点时，样品以离子方式蒸发进入气相，从而实现离子化。
➢ 电喷雾源(ESI)的特点
没有直接的外界能量作用于分子，因此对分子结构破坏较 少，是一种典型的“软电离”方式。 可形成多电荷离子，因此在较小的m/z范围内可以检测到大 分子质量的分子。采用电喷雾质谱目前可测定分子质