《支原体清除试剂》使用说明书

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支原体指导书

文件名称微生物标准染色方法版本文件编号状态编写日期编写审核日期审核发布日期签字【检验目的】检验样本中是否含有抗酸杆菌，为临床提供诊断依据。

【原理】结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。

利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。

【试剂】试剂名称：结核菌染色液试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司包装规格：250ml*4试剂组成：1、石碳酸复红溶液2、酸性酒精溶液3、亚甲基蓝溶液储存条件及有效期：原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【标本要求】（1）标本类型：病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等。

（2）标本采集：见标本采集手册（一般须得深咳痰，其它无特殊要求。

）（3）标本储存和运输：可室温保存、室温运送。

病人标本须密封运送以避免污染环境。

【检验方法】1、痰液标本取干酪样、脓样或可疑部分约0.05毫升，其他体液标本取离心后沉淀0.05毫升，于玻片正面均匀涂抹成10*20毫米卵圆形菌膜，自然干燥。

染色前加热固定。

2、放置在染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离；火焰固定。

3、滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色10分钟或更久。

4、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。

5、自菌膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟；如有必要，需流水洗去酸性酒精溶液后，再次脱色至菌膜无可视红色为止。

6、流水自玻片一端轻缓冲洗10-20秒，冲去酸性酒精溶液，沥去玻片上剩余的水。

7、滴加亚甲基蓝溶液，染色30秒钟。

8、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去亚甲基蓝溶液，然后沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检。

9、一张染色合格的玻片，菌膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块。

支原体清除实验

支原体清除实验支原体污染是细胞培养过程中的常见现象。

细胞被支原体污染之后，在显微镜下无法直接观察到，生长状态可能发生或不发生改变，因此一般不易被察觉。

但是支原体会改变细胞的很多生长参数，因而极易对后续实验造成影响，所以对支原体污染的检测和清除非常重要。

以下为一次支原体检测和清除的实例。

材料：细胞系：SH-SY5Y支原体PCR检测试剂盒：Myco-P-20 (上海炎熙生物 )支原体清除剂：Myco-E-1 (上海炎熙生物 )方法与结果：1，将已检测出有支原体污染的SH-SY5Y细胞以正常传代密度铺到6孔板中，一个孔加清除剂，作为测试孔，另一孔不加清除剂，作为阴性对照孔。

两孔之间间隔一个孔，以免互相污染。

2，在清除支原体的过程中细胞以常规方法传代培养，并使细胞在培养过程中一直处于清除剂的作用下。

在加清除剂后第4、8、9、11天各取1毫升培养上清。

每份上清与细胞已共培养48小时，除第9天的上清只共培养了24小时。

3，将这些培养上清在16000g离心5分钟，小心去除离心上清，将沉淀用无菌PBS洗三次，每次以16000g离心5分钟。

最后获得的沉淀用100微升纯水重悬，在100℃水浴中孵育5分钟，然后用于PCR反应。

4，按照支原体检测试剂盒Myco-P-20的说明书进行PCR检测操作，结果如下：4.1，与对照样品共同反应，用这种方式可以判断是否出现了假阴性结果。

在加清除剂后第4天的样品中仍可见到支原体阳性条带（约440bp），在第8、9、11天的样品中，已看不到支原体阳性条带。

4.2，不加对照样品，检测样品单独反应，用这种方式可以提高测试灵敏度。

可见在第8天和第9天的样品中，支原体阳性条带仍然出现，但是弱于第4天的样品。

在第11天的样品中，有明显的200bp以下的非特异的条带，且亮度高于阳性条带，所以判断此时的PCR产物是非特异反应的产物，样品中已没有支原体DNA。

注释：由于PCR是一种非常灵敏的检测方法，所以很容易出现假阳性条带。

支原体 PCR 检测试剂盒使用说明书

支原体 PCR 检测试剂盒使用说明书Product Name: Mycoplasma PCR Detection KitIntended Use:The Mycoplasma PCR Detection Kit is intended for the qualitative detection of Mycoplasma spp. in cell cultures and other biological samples by PCR amplification.Kit Components:- PCR amplification reaction mix and enzyme mix- Positive control DNA template- Negative control DNA template- PCR tubes and caps- User manualStorage:The kit should be stored at -20°C. Thaw the kit components at room temperature before use.Sample Preparation:1. Collect the cell culture sample or other biological sample.2. Extract the DNA from the sample using a DNA extraction kit of your choice.3. Dilute the DNA extract as necessary in molecular grade water or buffer to achieve the optimal concentration for PCR amplification (typically between 10-100 ng/µL).PCR Amplification:1. Prepare the PCR reaction mix (in a sterile tube or plate) by adding the PCR amplification reaction mix, enzyme mix, andtemplate DNA to the appropriate volumes as specified in the table below.Component Volume per Reaction (20 µL)PCR amplification reaction mix 10 µLEnzyme mix 1 µLTemplate DNA 1-5 µLMolecular grade water/buffer To 20 µL2. Close the PCR tubes with the caps provided and mix the contents well by vortexing or pipetting.3. Place the tubes in a thermal cycler and perform PCR amplification according to the following conditions:Initial denaturation: 95°C for 5 minutesDenaturation: 95°C for 30 secondsAnnealing: 55°C for 30 secondsExtension: 72°C for 1 minuteFinal extension: 72°C for 5 minutesHold at 4°C4. Analyze the PCR products by gel electrophoresis or other methods as appropriate.Interpretation of Results:- Positive Result: A distinct band is observed in the gel at the expected size for Mycoplasma spp. This indicates the presence of Mycoplasma DNA in the sample.- Negative Result: No band or only faint bands are observed in thegel. This indicates the absence of Mycoplasma DNA in the sample. - Invalid Result: No bands or smear are observed in the gel or the band size is incorrect. Repeat the experiment with fresh controls and follow the instructions carefully.Limitations:1. This assay is designed for research use only and is not intended for diagnostic purposes.2. False negative results may occur due to low level or degraded Mycoplasma DNA in the sample, PCR inhibitors, or other factors.3. The presence of PCR inhibitors in the DNA extraction and amplification process may affect the sensitivity and reproducibility of the assay.4. The kit components must not be used beyond the expiry date.5. The Mycoplasma PCR Detection Kit may only be used by trained personnel.。

支原体污染的检测方法

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
细胞被支原体污染后，不论从外观上有无变化，均会严重的影响各种实验的结果。被支原体感染的细胞其正常的生长和代谢会受到影响。部分细胞虽然表面变化不十分明显，实际上潜伏着多方面的危险。而细胞重组表达的蛋白质，其活性也会受到影响，甚至完全失去活性。支原体可以通过消耗培养基中的精氨酸，抑制细胞 DNA、RNA 的合成，降低细胞的抵抗力。支原体感染会对细胞造成的影响是多方面的：包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、酶的作用途径、细胞膜的组成、染色体结构、转染效率、以及细胞存活等多方面的改变。因此，支原体污染会对培养细胞的分子水平研究带来偏差或假阳性的实验结果。

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电话：021-33921235 邮箱：bestbio@ 传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
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产品说明书
菌群）、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体。
贝博支原体检测试剂盒为预防或清除细胞培养过程中支原体污染而精心研发的一个高效的支原体检测产品。该产品能快速检测细胞是否有支原体污染。本产品可以为科研、生产中的细胞培养工作提供有力的安全保障，防止和解决细胞污染带来的各种成本浪费。

支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)

支原体检测试剂盒使用说明书1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。

2.实验方法:巢式PCR的方法检测支原体污染：A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内B.95o C孵育5分钟C.短暂高速离心15秒钟左右D.试剂盒里的组份：引物混合物(Primer Mix) 20 µL阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。

(1)第一轮PCR:PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。

E.热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。

PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。

F. 热循环程序：将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。

试验结果：2％琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。

电泳结果见下图：图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。

阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。

支原体检测说明书

SaveIt系列产品——支原体检测试剂盒说明书一、产品简介支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。

支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。

由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。

针对细胞、培养基以及动物血清的支原体检测，我们推出了Myco-PCR-TEST快速支原体检测试剂盒。

本试剂盒基于PCR检测原理，根据支原体高度保守的16和23SrRNA区域设计的特异性引物，经过简单快速的PCR，从而迅速准确判断支原体污染是否被清除。

汉恒生物（）推出的SaveIt TM抗支原体试剂能够在不影响细胞状态的前提下能够有效的清除支原体污染，从而使一些珍贵的细胞受到支原体污染之后能够得到挽救。

二、产品包装产品规格见标签三、使用说明使用Trizol 法抽提待检测细胞的RNA，反转录为CDNA 后，加入支原体检测引物，进行PCR 检测细胞支原体污染情况。

四、操作步骤4.1样品处理1、A：培养贴壁细胞：不须胰酶消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml 比例加入。

B：悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。

2、细胞加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。

注：此时可放入-70℃长期保持。

3、12,000rpm 离心5min，弃沉淀。

4、按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。

注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。

5、4℃ 12,000g离心15min。

6、吸取上层水相，至另一离心管中。

注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。

7、按0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min 。

支原体清除剂说明书

支原体清除剂说明书货号：CA1090规格：200μL保存：-20℃，一年（避免反复冻融，建议分装保存。

）注意：1.请在收到货后，将试剂管瞬时离心。

2.产品出现沉淀属正常现象，在分装或使用前须在室温下震荡溶解至澄清透明状，不影响产品的使用效果。

产品说明：支原体是一种大小仅为0.2~0.3μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22~0.45μm）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。

多篇文献研究表明：当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。

支原体清除剂用于解决因支原体污染而导致细胞污染或状态下降的问题，同时其对于常见的革兰氏阴性和阳性菌也有一定的清除作用，从而确保研究人员的研究结果真实、可信。

使用说明：1．建议现配现用，并保持细胞密度在50～60%。

2．推荐稀释比例为1:1000。

例如10mL的培养基加入10μL支原体清除剂混匀。

3．弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入含有支原体清除剂的新鲜培养基，1天1次，连续处理3天；或者2天1次，连续处理5～6天。

若细胞污染非常严重时，需延长处理时间。

4．若细胞对支原体清除剂敏感，或生长明显被抑制时，可调整稀释比例，如：1:2000或1:30005．处理完毕后，加入新鲜培养基，培养基中可添加支原体预防剂预防支原体再次污染。

6．因支原体清除剂本身具有广谱抑菌性，为了降低对细胞的影响，强烈建议不要和其它抗生素同时使用。

产品优势：1．特异性清除培养基中的支原体；2．只需要处理3天左右，便可以有效清除支原体；3．活性成分为多肽类，不会产生耐药性；4．对细胞几乎无毒性，在100多种细胞上进行过验证，包括但不限于HEK293、Hela、MCF-7、MRC-5、NIH-3T3、CCC-ESF、CHO-S、CHO-K1、CHO-DG44、H295R、HL-60、K562、MDA-MB-231、SP2/0、T47D、BM和BV2等；5．广谱性，可替代双抗，可以清除常见的革兰氏阴性和阳性菌；6．可直接加入血清、培养基中，用于清除支原体污染；。

NocardTreatment说明书

Nocard Treatment说明书（支原体清除剂）产品简介：Nocard Treatment是第三代支原体清除剂，主要用于清除细胞、血清、培养基中的支原体，同时对常见的细菌也有一定的清除作用。

新一代配方技术，只需3天就可以清除细胞内外的支原体。

主要成分为抗菌肽（AMPs）+穿膜肽（CPPs）。

作用原理Nocard Treatment中的AMPs可以有效杀灭细胞外面的支原体和常见细菌，而CPPs可以携带AMPs进入细胞，清除细胞体内的支原体，让细胞彻底摆脱支原体污染的困扰，确保研究人员实验结果的可信度。

产品规格：货号产品名称规格C8001 Nocard Treatment 200μLC8002 Nocard Treatment 200μL×5储存条件及有效期：4℃，6个月；-20℃，18个月。

使用说明：1. 请在收到货后，将试剂管瞬时离心（3000 rpm，3～5 s）后保存；2. 使用Nocard Treatment处理时，建议保持细胞密度在50～60%；3. 推荐Nocard Treatment的稀释比例为1:1000，例如：1 mL培养基加入1 μL的Nocard Treatment；4. 弃去旧的培养基，用PBS将细胞清洗干净，再加入新鲜的含有Nocard Treatment的培养基，1天1次，连续处理3-6天。

注意事项：1.分装储存，务必现配现用；2.因本品与抗生素有拮抗作用，因此不得与抗生素混用；3.若细胞污染非常严重，细胞状态不佳，建议以1:500的比例使用，并适当延长处理时间；4.因本产品属于蛋白类产品，若部分细胞对本产品敏感，建议使用本品处理2天，然后换用无本品的培养基处理1-2天，重复此步骤处理3-4个周期即可；5.本试剂仅供研究使用。

※注：Nocard Treatment能够清除大部分种类的支原体，而对细胞本身无毒，已经在上百种的细胞上做过验证，如：小鼠胚胎干细胞或iPS细胞、人胚胎干细胞或iPS细胞、HEK293、Hela、HepG2、HCT116、COS-7、Vero、Huh-7、MDCK、PANC-1、SW620、U2OS、MCF-7、MRC-5、NIH-3T3、CCC-ESF、CHO-S、CHO-K1、CHO-DG44、H295R、HL60、K562、MDA-MB-231、SP20、T47D、BM 和BV2等。

细胞产品支原体检测标准操作流程(1)

细胞产品支原体检测标准操作流程1 目的与范围：1.1目的：规范细胞产品支原体检测流程，保证细胞产品支原体检测的稳定性、均一性和准确性。

1.2范围：适用于本实验室细胞培养技术员对细胞产品支原体检测的全过程。

2 文件：2.1 细胞产品支原体检测标准操作流程3 记录：3.1 细胞产品支原体检测记录、超净工作台使用记录、恒温水浴锅使用记录、实验室清场记录。

4 试剂、耗材和仪器设备4.1 试剂：（一部恒温法）支原体检测试剂盒。

4.2 耗材：EP管（2ml）、200ul移液枪头、20ul移液枪头。

4.3 仪器设备：超净工作台、恒温水浴锅、200ul移液枪、25ul移液枪、试管架。

5 工作程序：5.1 实验前准备：5.1.1 洁净区需经紫外线照射，连续照射时间≥30min，实验室在工作过程中风机始终保持开启运行状态。

5.1.2 超净工作台需经过开机紫外线照射，照射时间≥30min，开机风机运行≥10min。

开启超净工作台玻璃防护窗，待超净工作台内部气流稳定后才可使用。

5.1.3 将实验室所需的器械、耗材放于物料传递窗进行紫外线照射≥30min（器械与各规格的移液枪头必须经过高温高压灭菌锅消毒灭菌，且在合格期内），照射完毕后将器械包与所需耗材用75%酒精纱布擦拭外包装消毒后放入超净工作台内备用。

5.1.4 将（一部恒温法）支原体检测试剂盒中的溶液2和溶液三提前30min从-20℃冰箱中取出，用75%酒精纱布擦拭后放入超净工作台内，恢复至室温备用。

6 样本检测程序：6.1 待测样品的准备：6.1.1 从培养箱中取出待检细胞的培养瓶（皿），酒精擦拭后放入超净工作台，用1ml移液枪从细胞培养上清中吸取1ml加入2ml的EP管中，放入离心机中1000rpm、5min.6.1.2 离心完毕后取出，经酒精擦拭后放入超净工作台，此时上清为所需待检的样品液。

6.1.3注意事项注：1）这里的细胞培养上清不是指细胞经胰酶消化后的离心上清，而是指至少培养2 天后的贴壁细胞培养液上清（不需要胰酶消化，也不能取经胰酶消化后的离心上清进行检测）。

肺炎支原体IgM说明书

防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，2.0毫升肺炎支原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐
剂的 0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3b.临界值对照品，2.0毫升肺炎支原体 IgM 抗体处于临界值的稀释后人血清，
含有作为防腐剂的 0.05％Bronidox 和红色显色剂。 3c.阳性对照品，2.0毫升含有0.05％Bronidox®作为防腐剂和红色显色试剂的人稀释血清。 4.酶结合物，30毫升缓冲盐溶液，含有专利商品添加剂、红色显色剂、与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（羊）和作为防腐剂的0.1％N‐甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升含有专用商品添加剂和0.01％凯松作为防腐剂的 3,3',5,5'‐四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲液。 6.终止液，25毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，100毫升浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防腐剂的0.05％Bronidox®。微孔板贴膜 2个试剂槽 6 个注：试剂应保存在+2℃~+8℃下。每个组分的标签及包装上均印有效期。
012
A BLK S1
B BLK S2
C NC S3
D NC S4
E CO S5
F CO S6
G PC S7
H PC S8
图例：BLK＝空白 NC＝阴性对照 PC＝阳性对照
CO=临界值对照
S＝样品
C.检测方法步骤
(一) 试验准备：
1.试剂盒取出后在室温下放置 20-30 分钟，使其恢
复到室温。
2.配制洗涤液：浓缩洗液（WASHING SOLUTION
避免不必要的光照，主要是预防试剂受光影响，因
为酶结合物及 TMB 底物溶液都是光敏感试剂。不同试剂盒中的以下成分可以通用：

支原体去除方法

细胞被支原体污染后，不论从外观上有无变化，均会严重的影响各种实验的结果。被支原体感染的细胞其正常的生长和代谢会受到影响。部分细胞虽然表面变化不十分明显，实际上潜伏着多方面的危险。而细胞重组表达的蛋白质，其活性也会受到影响，甚至完全失去活性。支原体可以通过消耗培养基中的精氨酸，抑制细胞 DNA、RNA 的合成，降低细胞的抵抗力。支原体感染会对细胞造成的影响是多方面的：包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、酶的作用途径、细胞膜的组成、染色体结构、转染效率、以及细胞存活等多方面的改变。因此，支原体污染会对培养细胞的分子水平研究带来偏差或假阳性的实验结果。
产品说明书
支原体去除试剂
产品组成：
产品组成支原体清除剂（500-2000×）
BB-4311-1 5ml
BB-4311-2 10ml
储存条件： 2-8℃保存。
有效期：一年。
产品简介：支原体是一种大小仅为 0.2~0.3 μm，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 μm）的
原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到 63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的 DNA、 RNA 及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉，严重时会导致细胞生长缓慢，状态不好。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
细胞被感染细胞释放的支原体再次污染，可以有效避免除支原体后细胞反复感染。
使用方法：按 1：500-1：2000 加入培养基后过滤使用。

PCR支原体检测说明书

支原体PCR检测及治疗试剂盒PCR Mycoplasma Test Kit可用于各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。

应用聚合酶链式反应技术（PCR）对支原体16s-rRNA基因保守区域的特异性片段进行扩增检测。

该方法可以在数小时内得到结果,与传统的选择性培养基培养检测方法相比较，本方法更快速，灵敏度和特异性更高，不会出现由于培养法检测时大量培养支原体而可能带来的次级污染的问题。

国内外研究表明，细胞培养的支原体污染中，有98％以上是由以下五种支原体引起的：M.orale、M.arginini、M.hyorhinis 和idlawii，M.Fermentans。

本试剂盒能检测包括以上五种常见支原体在内的40种支原体。

注：本试剂盒仅用于研究，不能用于临床诊断。

【试剂盒组成】1PCR反应液400ul（20ul/次，20次反应）2Taq酶20ul（1ul/次，20次反应）3DNA阳性对照1管4使用说明书1份5支原体治疗试剂1份（详细说明见说明书第三页）【原理】PCR检测试剂盒中含有PCR反应所需要各种试剂组分，如：引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶、稳定剂等。

PCR 反应液中加入检测样品和Taq酶，即可进行PCR扩增反应。

PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断，阳性样本将在290bp处出现特异性条带。

【使用方法】1实验所需器材与试剂1.1器材1）PCR仪2）PCR反应管3）电泳仪及水平电泳槽4）高速离心机5）微量移液器及移液器吸头1.2试剂1）琼脂糖2）EB（溴化乙锭）3）去离子水或双蒸水2实验操作步骤注：当细胞生长至80-90％时可以取样进行检测，培养液中的青霉素和链霉素不会影响检测效果。

1.收取待检样品（贴壁细胞：细胞生长至80％左右即可，送检细胞不能用消化液消化细胞，可以使用细胞刮刀刮取细胞；悬浮细胞：细胞生长至80％左右即可），取150ul（约1～3×105细胞数）至离心管，沸水浴10min。

SaveIt支原体试剂中文说明书

汉恒生物SaveIt TM抗支原体试剂说明书产品简介：支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。

支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。

在细胞培养过程中应当定期做支原体检测，万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。

但是若受污染的细胞比较珍贵，必须去除支原体污染，则可以通过混合使用抗生素以达到目的。

支原体没有细胞壁的，传统的抗生素一般对其无效。

汉恒生物推出的SaveIt TM支原体试剂能够在不影响细胞状态的前提下能够有效的清除支原体污染，从而使一些珍贵的细胞受到支原体污染之后能够得到挽救。

试剂包装清单以及储层条件：试剂名货号储存及运输条件规格有效期汉恒生物SaveIt TM抗支原体试剂-20°C保存，常温运输0.2ml 2年汉恒生物SaveIt TM抗支原体试剂-20°C保存，常温运输1ml 2年使用方法：汉恒生物SaveIt TM 抗支原体试剂在使用前确保瓶盖密封，解冻之室温，轻轻旋动混匀后用消毒酒精擦拭盖子后放入超净台。

按照1:1000的比例将SaveIt TM加入受污染的细胞的培养液中，轻轻晃动混匀后放入二氧化碳培养箱继续正常培养（注意尽量不要和其他正常的细胞一起操作，以免殃及其他细胞）。

注意事项：1. 如发现细胞状态变差，颗粒感增多，细胞表面不光滑，可使用汉恒生物SaveIt TM抗支原体试剂进行细胞抗支原体处理，处理后应进行支原体检测；2. 使用前请仔细阅读本试剂说明书，按照说明进行操作；3. 为了您的健康，实验操作请穿实验服和一次性手套；4. 汉恒生物SaveIt TM抗支原体试剂是汉恒生物自主研发产品，汉恒生物对SaveIt TM拥有专利知识产权。

江门市凯林贸易支原体试剂组合（ ID2+ST ）说明书

支原体试剂组合支原体试剂组合（（ID2+ST ID2+ST））使用说明书使用说明书【产品名称】支原体试剂组合（培养法）【组成、型号规格】组成：本产品由支原体ID2试剂盒（以下简称ID2试剂盒）和支原体药敏试剂盒（以下简称ST 试剂盒）组成。

型号规格：S2401。

【预期用途】本产品供临床诊断泌尿生殖道支原体用，并可进行药敏试验。

【检验原理】ID2为鉴定、计数用培养基。

其肉汤提供了支原体生长的最理想环境（酸碱度、底物和一些生长因子）。

肉汤中的特殊底物（用于解脲脲原体U. urealyticum 的尿素，用于人型支原体M. hominis 的精氨酸）和指示剂（苯酚红）显示由於pH 值提高而产生颜色变化的阳性反应。

三种抗生素和一种抗真菌药物的组合提供了选择性，确保标本中出现的污染菌群不会影响试验。

ST 为药敏试验用试剂。

试剂条里的反应孔将抗生素按高、低浓度设置，分别接种一定量的支原体培养物，经培养后，根据支原体在高低浓度生长与否，将支原体分为敏感、中度敏感和耐药。

试验时，将标本接种到复溶的肉汤后，再分配到试剂条中培养。

【主要组成成份】1.支原体ID2试剂盒 1）试剂（R1）每一个瓶内含有3.1ml 肉汤，混有用于泌尿生殖道支原体诊断的样品制剂所需的稳定的营养成分。

它可抑制大多数革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的生长，并且可用于R2试剂的复溶。

2）试剂（R2）每一个瓶内含有1ml 冻干的尿素－精氨酸肉汤。

3）鉴定、计数试剂条每个支原体鉴定计数试剂条含有3人份的测试，每个测试有5个反应孔，见表1：表12．支原体药敏试剂盒1）药敏试验试剂条含有20个反应孔，分上下两行各10个反应孔，上行（H）为高浓度药敏试验，下行（L）为低浓度药敏试验。

反应孔决定10种抗生素药敏试验结果。

见表2。

表2注：1、药敏试验试剂条会不断更新改进，试验板上的标识如行号、孔号等或会发生改变，以当时试验板上的标识、并结合产品说明书的指引为准； 2、没有被注明的孔为空白孔。

『支原体清除计划』,为细胞培养保驾护航

『支原体清除计划』，为细胞培养保驾护航支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基部分培养增殖的，原核细胞型微生物。

支原体也是造成生物学实验室中，细胞污染的“主力选手”之一。

在普通光学显微镜下，几乎看不到支原体的身影，因此如果细胞被支原体污染，前期很难被发现，而支原体污染，又会对细胞实验产生严重的影响，包括但不限于以下几点：1、支原体感染细胞株会导致细胞失去正常生长和功能，影响实验结果的可靠性和准确性。

它可以导致细胞形态的改变、细胞增殖的异常以及细胞功能的异常。

2、支原体在细胞培养中传播非常迅速，很容易通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径传播到其他细胞培养中，进一步污染更多的细胞株。

3、支原体感染可能导致实验结果的误解，因为实验结果中的观察结果可能不再是由所研究的细胞本身导致的，而是由支原体感染导致的变化。

因此，要通过有效、安全、高效的手段，预防/清除支原体污染。

关于与支原体的“大战”，我们总结了以下几个关键点，希望本期“支原体清除计划”可以为大家的细胞实验带来帮助。

Round 1：实验室环境的清洁细胞实验，需要在严格无菌的环境下进行。

因此，维持实验室的无菌环境十分重要。

实验环境包括实验空间、实验室内的仪器设备、实验人员。

可采用甲醛高锰酸钾熏蒸消毒的方法对实验室内部空间进行消毒，消毒期间需人员撤离，密闭消毒空间24h以上，该方法虽然能有效对实验空间进行清洁消毒，但甲醛有刺激气味，对人和细胞都有毒性作用。

细胞间1-2周无法使用，因此更推荐用紫外线灯进行照射灭菌。

在每次实验开始前，打开紫外线灯，设置好安全标识，照射实验室内部空间30分钟以上，也能达到不错的灭菌效果。

对于实验室内的仪器设备，可采用消毒液、75%酒精擦拭等方法进行消毒。

该方法中所使用的消毒试剂，多数也都有挥发性，对操作人员有毒性作用，且对部分微生物无效。

因此，推荐使用更为专业的微生物祛除试剂：Mycoplasma-off支原体祛除喷雾剂（即用型），含有支原体杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。