抗体人源化思路 - 360文档中心

抗体人源化是什么？

抗体人源化是什么？
抗体人源化，是重组抗体（单克隆抗体）生产制备实验研究的重要组成部分。

所谓抗体人源化，为从鼠源性抗体往人源性抗体发展的过程。

百余年前，抗体与抗原特异性结合、抗体被动免疫特性等原理的揭示，开辟了疾病诊断的新途径。

而1975年单克隆抗体技术的问世，加快了这一方法的广泛应用。

初期，临床上使用的单抗多数为鼠源性单抗，由于人和小鼠的种属特异性，鼠源性抗体的使用存在种种限制。

鼠抗体虽然对靶抗原是特异的，可以与靶抗原特异性结合，但它不能激活相应的人体效应系统，如抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)、补体依赖的细胞毒作用(CDC)等，从而无法正常的发生抗原-抗体反应；此外，鼠抗体作为外源蛋白进入人体，会使人体免疫系统产生应答，产生以鼠抗体作为抗原的特异性抗体，即产生人抗鼠抗体(human anti．mouse antibody，HAMA)，通常异源蛋白在人体内会很快得到清除，半衰期很短。

由于鼠源性抗体在临床应用上存在种种限制，人们利用重组DNA技术对鼠源抗体进行人源化改造，使抗体人源化。

人源化抗体的制备策略

转基因小鼠制备的人抗体, 其功效优于其他技术生产的抗正常人体蛋白单抗。小鼠识别抗原和动员抗原的抗体系统仍保持完整, 容易把人体蛋白识别为异物。此外, 由于抗体是体内产生的, 经历了正常装配和成熟过程, 从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。但转基因小鼠也存在一些缺陷, 即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列, 导致不完整的人序列; 而且, 由于抗体是在小鼠体内装配, 因而产生的单抗具有鼠糖基化的模式,所以这些单抗最终并不是全人源化的。
三、完全人源化抗体
1. 抗体库技术噬菌体抗体库技术的产生依赖于 3 项实验技术的发展: 一是 PCR 技术的发展使人们可以用一组引物 ( 免疫球蛋白可变区中骨架部分的保守序列) , 通过 RT- PCR 直接从 B 淋巴细胞总RNA 克隆出全套免疫球蛋白可变区基因, 从而使抗体库的构建简单易行; 二是噬菌体展示技术( 即将抗体通过与噬菌体外壳蛋白融合表达在噬菌体的表面, 进而经亲和富集法筛选表达有特异活性的抗体) 的建立, 实现了基因型和表型的统一, 提供了高效率的筛选系统, 这是噬菌体抗体库技术的核心; 三是从大肠杆菌分泌表达有结合功能的免疫球蛋白分子片段。
二、 CDR 移植的人源化抗体
鼠源性抗体 V 区中的 FR 仍残留一定的免疫原性, 这种抗体还远非真正的人源化抗体, 有些还能产生很强的抗独特型反应。为减少鼠源成分, 人们进一步用人的 FR 替代鼠 FR, 形成更为完全的人源化抗体, 即除了 3 个 CDR 是鼠源的外 , 其余全部是人源结构, 又称 CDR 移植抗体( CDR- grafted antibody) 或改型抗体 ( reshaped antibody) 。
人源化抗体的制备策略有哪些
目录一、嵌ຫໍສະໝຸດ 抗体二、CDR 移植的人源化抗体

什么是抗体人源化

什么是抗体人源化目前，用细胞工程制备人单抗在技术上和伦理上都存在一些难题，治疗性抗体的开发就集中在具有治疗前景的鼠源单抗上。

但是鼠源单抗对人体具有异源性反应，可诱发人抗鼠抗体效应（Human anti-mouse antibodies, HAMA反应），使得单抗的治疗效果明显滞后。

随着基因重组技术的发展和人们对抗体结构认识的深入，研究者们尝试对鼠源性抗体进行改造，致力于在保留与抗原结合的高亲和力的基础上，减少异源性抗体的免疫原性，推动抗体人源化研发的进程。

人源化抗体主要指以用基因克隆及DNA重组技术对鼠源单克隆抗体改造，重新表达产生的抗体。

其大部分氨基酸序列被人源序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性，有利应用于人体。

嵌合抗体和CDR移植抗体根据人源化程度不同，单抗又可分为嵌合抗体（60%-70%人源化氨基酸序列）和CDR(complementarity-determining region)移植抗体（90%-95%人源化氨基酸序列）。

1、人-鼠嵌合抗体人-鼠嵌合抗体（chimeric antibody）：第一代人源化抗体。

其是在基因水平上将鼠源单克隆抗体的V区和人抗体的C区(variable region, 可变区)连接，在合适的宿主细胞内表达可得到人-鼠嵌合抗体。

嵌合抗体用于人体所产生的HAMA反应比鼠源单抗明显减弱；另外，人源C区(constant region，恒定区)可更有效地介导人体一些免疫反应，如CDC（complement-dependent cytotoxicity, CDC, 依赖补体的细胞毒性作用），ADCC（antibody dependent cell mediated cytotoxicity, 抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用）。

2、CDR移植抗体嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题，但由于其还含有鼠源V区，依然有可能会诱发HAMA反应，干扰抗体疗效，诱发超敏反应，在临床上其应用会受到一定限制。

抗体人源化的主要原理

抗体人源化的主要原理抗体人源化是指将动物来源的抗体（如小鼠抗体）转化为人源化的抗体，以增强其在人体内的稳定性和效力。

这一技术的研发和应用，为人类在治疗疾病方面带来了革命性的变革。

本文将介绍抗体人源化的主要原理，从基因工程的角度解释其实现方法。

抗体人源化的主要原理基于两个关键概念：可变区和框架区。

可变区决定了抗体的特异性，而框架区则决定了抗体的稳定性和结构。

在动物来源的抗体中，可变区和框架区通常相互关联，难以分离。

为了实现抗体人源化，需要对这两个区域进行调整和优化。

人源化抗体的设计通常涉及到克隆和表达人类免疫球蛋白基因。

其中，免疫球蛋白基因是一种编码抗体的基因，包括了可变区和框架区。

通过克隆和表达人类免疫球蛋白基因，可以获得人类免疫球蛋白。

为了使人源化抗体具有与动物来源抗体相似的特异性和效力，需要将动物来源抗体的可变区与人类免疫球蛋白基因的框架区进行重组。

这一步骤需要利用基因工程技术，将动物来源抗体的可变区和人类免疫球蛋白基因的框架区进行融合。

通过这种方式，可以将动物来源抗体的特异性与人类免疫球蛋白的结构相结合，实现抗体人源化。

在抗体人源化的过程中，还需要考虑到抗体的亲和力和稳定性。

亲和力是指抗体与靶标结合的紧密程度，而稳定性则是指抗体在人体内的耐受性和长期效果。

为了增强抗体的亲和力和稳定性，可以通过点突变和序列优化的方法进行改良。

点突变是指通过人工改变抗体分子中的一个或多个氨基酸残基，以增强其与靶标的结合能力。

序列优化则是指通过人工改变抗体分子的氨基酸序列，以增强其稳定性和生物活性。

抗体人源化的主要原理可以总结为：克隆和表达人类免疫球蛋白基因，重组动物来源抗体的可变区和人类免疫球蛋白基因的框架区，通过点突变和序列优化的方法进行改良，以获得具有高亲和力和稳定性的人源化抗体。

抗体人源化技术的发展和应用，为药物研发和临床治疗提供了新的途径。

相比于动物来源的抗体，人源化抗体在人体内的稳定性和效力更高，副作用更少。

抗体人源化技术进阶之路

抗体人源化技术进阶之路在过去的十几年中，FDA已经批准了近100种抗体用于人类的疾病治疗。

抗体药物经历了最初的多克隆抗体到单抗，并最终到基因工程的三个阶段。

20世纪80年代初，随着鼠单抗在临床的大量应用，人们发现异源的鼠单抗所具有的免疫原性会引起强烈的抗抗体反应（HAMA），从而使患者发生严重的过敏反应和毒副作用，使其药物失去其应有的疗效。

这使得之后的研究者致力于进行人源化改造，从而避免其在人体中免疫反应。

经过多年的努力，目前人们已经可以使用嵌合抗体技术、人源化抗体技术、全人抗体技术来大大降低抗体药物的HAMA反应，以满足临床的要求（图1）。

虽然嵌合抗体成功地保留了亲本小鼠抗体的特异性，降低了其免疫原性，但是V区的FR区和CDR区仍有可能诱导强烈的HAMA反应。

因此V区的人源化甚至全人源势在必行。

在过去的几十年中，人源化方法已经多样化，目前人们已经创建了以重构抗体、表面重塑抗体、链替换抗体为代表的多种人源化抗体技术。

图1. 抗体人源化重构抗体技术是英国剑桥大学Winter研究小组在1986年首先发明的，经过进一步完善，目前成熟的重构抗体技术路线是分析亲本鼠单抗的V区，确定CDR区和FR区，进而通过数据库检索比对和计算机同源建模，寻找出具有最大同源性的人的FR区模板，综合考虑确定FR区需要进行回复突变的关键残基，最终获得高亲和的人源化抗体（图2）。

目前在GeneBank 和IMGT等公用数据库中收录了大量的抗体的可变区基因共寻找最佳匹配的亲本鼠单抗的人FR序列。

确定需要保留和改变的关键残基目前仍然是重构抗体人源化抗体最关键也是最困难的一步，它要求我们对于抗体抗原复合物的空间结构要具有足够的知识积累。

当然目前人们已经总结出了一些需要保留的重要残基的规律，包括CDR两侧保守序列，有可能直接参与抗原结合位点以及对空间结构有重要影响的残基。

目前已被批准的上市的人源抗体中，基本全采用的重构抗体技术。

图2. 重构抗体技术CDR移植产生的人源化抗体对人类的免疫原性通常比小鼠或嵌合抗体低；但是，由于CDR不是人类的，它们仍然具有免疫原性。

抗体人源化的主要原理

抗体人源化的主要原理抗体人源化是一种生物技术手段，用于将动物源性抗体转化为人源性抗体，以提高其在临床应用中的效果和安全性。

这一技术的主要原理是通过基因工程方法将动物免疫系统中产生抗体的基因导入到人体细胞中，使其能够产生与动物源性抗体具有相同抗原特异性的人源性抗体。

抗体是人体免疫系统中的重要组成部分，其能够识别并结合到入侵体内的病原体或异常细胞，从而触发免疫反应，清除这些病原体或异常细胞。

然而，由于动物源性抗体与人体内抗原的差异，使用动物源性抗体在临床应用中存在一些问题，如免疫原性反应、抗体产量低、抗体结构与功能的不稳定等。

为克服这些问题，科学家们开展了抗体人源化的研究。

首先，需要从动物中提取抗体基因，通常是通过免疫动物模型来获得。

然后，利用基因克隆技术将这些抗体基因导入到人源细胞中，使其能够产生与动物源性抗体具有相同抗原特异性的抗体。

这一过程主要包括以下几个步骤：1. 抗体基因的选择和克隆：从动物的淋巴细胞中提取抗体基因，通常是通过PCR技术扩增目标基因。

然后，将扩增的基因序列进行纯化和克隆，得到抗体基因的克隆片段。

2. 基因导入和表达：将抗体基因导入到人源细胞中，通常是通过转染等技术实现。

导入后，细胞会利用其自身的机制进行基因的表达和蛋白质的合成，从而产生人源性抗体。

3. 抗体的筛选和优化：通过筛选和优化的方法，从转染的细胞中筛选出产生目标抗体的细胞株。

同时，可以通过基因工程方法对抗体的结构和功能进行优化，以提高抗体的亲和力和稳定性。

4. 抗体的大规模生产：一旦获得了产生目标抗体的细胞株，就可以进行大规模的抗体生产。

通常采用的方法是利用细胞培养技术，将产生目标抗体的细胞株培养在培养基中，通过细胞的分裂和增殖，大量产生目标抗体。

抗体人源化的主要原理是通过基因工程方法将动物免疫系统中产生抗体的基因导入到人体细胞中，使其能够产生与动物源性抗体具有相同抗原特异性的人源性抗体。

这一技术的应用广泛，不仅可以用于治疗各种疾病，如肿瘤、感染性疾病等，还可以用于研究和诊断。

抗体人源化的主要原理

抗体人源化的主要原理抗体人源化是一种重要的生物技术，它可以将动物源性抗体转化为人源性抗体，从而提高抗体的稳定性和效力。

抗体人源化的主要原理是通过基因工程技术将动物源性抗体的变异区域与人源性抗体的框架区域进行重组，从而得到具有人源性的抗体。

抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质分子，它们在人体的免疫系统中起着重要的作用。

传统上，抗体是从动物体内提取的，如小鼠、兔子等。

然而，这些动物源性抗体在临床应用中存在一些问题，如免疫原性反应、免疫复合物形成等。

因此，研究人员开始探索将动物源性抗体转化为人源性抗体的方法。

抗体人源化的主要原理是通过基因工程技术将动物源性抗体的变异区域与人源性抗体的框架区域进行重组，从而得到具有人源性的抗体。

具体来说，抗体人源化的过程包括以下几个步骤：1. 克隆动物源性抗体的基因序列。

这一步骤通常通过PCR技术从动物体内提取的抗体细胞中扩增出抗体基因序列。

2. 选择人源性抗体的框架区域。

人源性抗体的框架区域是指抗体分子中不参与抗原结合的区域，它们具有较高的稳定性和低的免疫原性。

因此，选择人源性抗体的框架区域可以提高抗体的稳定性和降低免疫原性。

3. 将动物源性抗体的变异区域与人源性抗体的框架区域进行重组。

这一步骤通常通过PCR技术将动物源性抗体的变异区域与人源性抗体的框架区域进行连接，从而得到具有人源性的抗体。

4. 通过表达和纯化技术得到抗体。

将重组后的抗体基因序列导入表达系统中，通过表达和纯化技术得到具有人源性的抗体。

抗体人源化的主要优点是可以提高抗体的稳定性和效力，降低免疫原性反应和免疫复合物形成等问题。

此外，抗体人源化还可以减少动物实验的使用，从而降低动物伦理问题和成本。

总之，抗体人源化是一种重要的生物技术，它可以将动物源性抗体转化为具有人源性的抗体，从而提高抗体的稳定性和效力。

抗体人源化的主要原理是通过基因工程技术将动物源性抗体的变异区域与人源性抗体的框架区域进行重组。

随着生物技术的不断发展，抗体人源化技术将在临床应用中发挥越来越重要的作用。

抗体人源化的主要原理

抗体人源化的主要原理抗体人源化是一种重要的生物工程技术，通过对抗体进行基因工程改造，使其具备与人类抗体相似的结构和功能，从而增强其在治疗和诊断领域的应用。

抗体人源化的主要原理包括人源化基因设计、基因克隆、表达和纯化等步骤。

人源化基因设计是抗体人源化的关键步骤之一。

一般来说，人源化的抗体是通过将小鼠源抗体的可变区与人源抗体的框架区（FR）进行重组来实现的。

在设计人源化基因时，需要选择与小鼠源抗体可变区高度同源的人源抗体可变区作为替代。

这样，可以保留小鼠源抗体的结构和功能，同时减少人体免疫系统对抗体的排斥反应。

基因克隆是将人源化基因插入真核表达载体的过程。

首先，需要设计引物，引物的选择应根据人源化基因的序列设计，确保引物与目标基因的特异性和互补性。

然后，通过PCR反应扩增人源化基因，并经过酶切和连接等步骤，将目标基因插入真核表达载体。

最后，将重组的质粒转化到大肠杆菌中，经过筛选和测序，得到正确的克隆。

接下来，表达是指将基因在宿主细胞中转录和翻译成蛋白质的过程。

通常使用哺乳动物细胞作为表达宿主，如CHO细胞或HEK293细胞。

将重组的真核表达载体导入到宿主细胞中，通过细胞培养和优化培养条件，促使基因在细胞中进行表达。

随着基因的表达，抗体蛋白质会被合成和折叠成稳定的三维结构。

纯化是将表达的抗体蛋白质从细胞培养上清中提取和纯化的过程。

通常采用亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤等技术，根据抗体的特性和目的，选择合适的纯化方法。

通过这些纯化步骤，可以去除杂质和其他蛋白质，最终得到高纯度的抗体。

抗体人源化技术的主要原理是通过基因工程手段将小鼠源抗体改造成人源化抗体，使其在结构和功能上更接近人类抗体。

这样做的目的是为了减少抗体治疗中的免疫反应和排斥反应，提高抗体的治疗效果和安全性。

抗体人源化技术的发展为临床医学带来了革命性的突破，为疾病的治疗和诊断提供了更多选择和可能性。

总结起来，抗体人源化的主要原理包括人源化基因设计、基因克隆、表达和纯化等步骤。

抗体的人源化

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抗体导向酶-前药疗法为了解决对恶性肿瘤化疗特异性差易对正常组织造成破坏的问题而提出。选用单抗导向原理，与前药专一性活化酶交联并选择性地结合于肿瘤部位，使前药可区域特异性地在肿瘤组织内转化为活性细胞毒分子，有效增加肿瘤部位浓度降低正常组织中浓度。
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抗体治疗药物
目前的客观现实是：研究进展迅速，但未达到常规治疗的应用阶段障碍（原因）：抗体相对分子质量大，穿透力低，不能达到靶部位或摄取量低。鼠源性抗体的排斥反应
一，放射性同位素标记的抗体治疗药物
二，抗癌药物偶联的抗体药物
三，毒素偶联的抗体药物
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抗体诊断试剂
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一、血清学鉴定用的抗体试剂
血清学鉴定是指用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主要用于疾病病原菌诊断和血型鉴定。包括：鉴定病原菌的抗体试剂乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)的反向被动血凝诊断试剂妊娠诊断试剂
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一、放射性同位素标记的抗体治疗药物
优点：操作简便，用量少，能观察到药物在体内的分布和药物动力学。放射性同位素标记抗体杀伤范围较大，相对分子质量又小，更容易穿透到达肿瘤部位。
缺点：有些同位素来源困难，需放射线保护和污物处理。
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二、抗癌药物偶联的抗体药物
常用的抗癌药物：氨甲喋呤（methotrexate, MTX）、阿霉素(adriamycin,ADM) 丝裂霉素 (mitomycin, MMC)、环磷酰胺 (cyclophosphamide, CTX) 、新抑癌蛋白 (neocarzinostatin, NCS) 、正定霉素 (doxorubicin, DOX)等。

人源化单克隆抗体的制备方法

人源化单克隆抗体的制备方法人源化单克隆抗体的制备方法1. 引言人源化单克隆抗体作为一种重要的生物药物，在医学诊断和治疗上发挥着重要的作用。

它们能够通过特异性结合目标物质，如病毒、癌细胞等，以识别、中和或破坏它们，具有广泛的应用前景。

人源化单克隆抗体通过将小鼠源的初始抗体进行改造和人源化，弥补了小鼠抗体在人体内产生反应的缺陷，进而提高了其临床应用的安全性和有效性。

2. 人源化单克隆抗体的制备方法2.1 选择目标抗原在制备人源化单克隆抗体之前，首先需要明确目标抗原。

这是指研究人员要制备对特定疾病或病原体具有高度特异性的抗体。

目标抗原的选择对于后续的实验设计和结果分析至关重要。

2.2 制备小鼠源的初始抗体为了制备人源化单克隆抗体，通常需要使用小鼠或其他动物作为初步制备抗体的源头。

研究人员通过免疫注射小鼠来激发其免疫系统产生特定抗原的抗体。

之后，从小鼠体内提取抗体进行初步鉴定和筛选。

2.3 克隆筛选通过克隆和筛选的过程，选择那些对目标抗原具有高度特异性的抗体克隆。

这一步骤的目的是从小鼠源的初始抗体中挑选出性能最佳的抗体克隆，为后续的人源化操作打下基础。

2.4 人源化改造人源化改造是将小鼠源的初始抗体转化为具有人源特性的抗体。

在这一步骤中，研究人员会通过基因工程技术将小鼠源抗体的大部分小鼠特异性区域替换为人源的同源区域，以减少人体对外源蛋白的免疫反应。

这可以通过重组DNA技术，将人源抗体的DNA序列嵌入到小鼠源抗体的DNA序列中，使其具有人源性。

2.5 生产和纯化经过人源化改造的抗体需要进行大规模的生产和纯化。

这通常通过基因工程的方法，在合适的细胞系中表达和生产抗体。

随后，使用各种纯化技术，如亲和层析、离子交换层析等，将抗体从混合物中纯化出来，以获得高纯度的人源化单克隆抗体。

3. 个人观点和理解人源化单克隆抗体的制备方法是一项复杂的过程，其中涉及到多个关键步骤和技术。

通过人源化改造，可以将小鼠源的初始抗体转化为具有人源特性的抗体，从而提高其在人体内的安全性和有效性。

人源化单克隆抗体技术路线

人源化单克隆抗体技术路线
人源化单克隆抗体技术是一种用于制备治疗性抗体的方法，其基本技术路线如下：
1. 抗原选择：选择目标抗原，即希望产生抗体针对的特定蛋白质或分子。

2. 免疫动物：给动物（通常是小鼠）注射目标抗原，以诱导免疫反应。

3. 杂交瘤技术：从免疫动物的脾脏中分离出 B 淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

4. 抗体筛选：对杂交瘤细胞进行筛选，以找到能够产生针对目标抗原的特异性抗体的细胞株。

5. 抗体人源化：通过基因工程技术，将鼠源抗体的互补决定区（CDR）移植到人源抗体的框架区，从而构建出人源化抗体。

6. 表达和纯化：将人源化抗体基因导入适当的表达系统（如哺乳动物细胞、酵母或细菌）中进行表达，并通过纯化步骤获得高纯度的人源化单克隆抗体。

7. 功能和质量评估：对人源化单克隆抗体进行生物学活性、亲和力、特异性等方面的评估，以及进行质量控制和安全性测试。

8. 临床试验和批准：经过临床前研究后，将人源化单克隆抗体进行临床试验，以评估其安全性和有效性。

如果试验结果良好，该抗体可能获得监管机构的批准，用于临床治疗。

人源化单克隆抗体技术的发展使得治疗性抗体能够更好地应用于人类疾病的治疗，减少了免疫原性反应的风险，并提高了抗体的治疗效果。

这一技术在肿瘤治疗、自身免疫疾病治疗等领域具有重要的应用价值。

人源化抗体的制备

验证了人源化抗体的功能和活性
通过细胞实验和动物实验，验证了人源化抗体能够特异性地识别并结合目标抗原，从而发挥相应的生物学功能。
探讨了人源化抗体的应用前景
人源化抗体在疾病治疗、诊断和预防等领域具有广泛的应用前景，如肿瘤免疫治疗、自身免疫性疾病治疗、抗感染治疗等。
对未来研究的建议
深入研究人源化抗体的作用机制
稳定性与安全性评价
稳定性评价
在不同温度、pH值及缓冲液条件下，测定抗体的稳定性及半衰期，以评估抗体的储存及应用稳定性。
安全性评价
通过体内外毒性试验、免疫原性试验等，评估抗体的安全性及潜在毒性。
数据统计与分析方法
数据统计
采用描述性统计方法，对实验数据进行整理、归纳和可视化展示，如平均数、标准差、箱线图等。
抗体。
B
C
D
体外重组技术
利用体外重组技术将抗体基因片段进行拼接、优化和表达，制备出具有特定功能的人源化抗体。
B细胞永生化技术
从人类B细胞中提取抗体基因，将其转入永生化细胞系中表达，获得人源化抗体。
02 人源化抗体的基本原理
抗体结构与功能
抗体的基本结构
抗体是由两条重链和两条轻链组成的 Y字形蛋白质，具有识别和结合抗原的能力。
完全人源化抗体阶段
03
利用噬菌体展示技术、转基因小鼠等技术制备出完全人源化抗
体，实现了抗体的全人源化。
制备技术概述
转基因小鼠技术
通过基因工程手段将人类抗体基因转入小鼠基因组中，使小鼠能够产生人源化抗体。
A 噬菌体展示技术
将抗体基因片段插入噬菌体外壳蛋白基因中，使抗体片段展示在噬菌体表面，通过筛选获得高亲和力的
人源化抗体的制备

抗体人源化介绍

抗体人源化介绍一．什么是抗体人源化？人源化抗体主要指鼠源单克隆抗体以基因克隆及DNA重组技术改造，重新表达的抗体，其大部分氨基酸序列为人源序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性，有利于抗体应用于人体。

人源化抗体就是指抗体的恒定区部分（即CH和CL区）或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。

人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。

人源化抗体包括嵌合抗体、改型抗体和全人源化抗体等几类。

二．抗体人源化原理1. 嵌合抗体：嵌合抗体是利用DNA重组技术，将异源单抗的轻、重链可变区基因插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞表达出嵌合抗体，这样表达的抗体分子中轻重链的V区是异源的，而C区是人源的，这样整个抗体分子的近2/3部分都是人源的。

这样产生的抗体，减少了异源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。

2. 改型抗体：改型抗体也称CDR植入抗体（CDR graftingantibody），抗体可变区的CDR是抗体识别和结合抗原的区域，直接决定抗体的特异性。

将鼠源单抗的CDR移植至人源抗体可变区，替代人源抗体CDR，使人源抗体获得鼠源单抗的抗原结合特异性，同时减少其异源性。

3. 表面重塑抗体：表面重塑抗体是指对异源抗体表面氨基酸残基进行人源化改造。

该方法的原则是仅替换与人抗体SAR差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换；另外，所替换的区段不应过多，对于影响侧链大小、电荷、疏水性，或可能形成氢键从而影响到抗体互补决定区（CDR）构象的残基尽量不替换。

4. 全人源化抗体：全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。

三．抗体人源化应用：1. 在肿瘤治疗方面：单抗肿瘤药物能有效地降低传统肿瘤药物治疗的不良反应。

人源化抗体：构建的核心原则与策略

人源化抗体：构建的核心原则与策略第一代人源化抗体是通过将鼠源McAb的可变区与人抗体的恒定区相结合，形成了一种嵌合抗体。

尽管这两部分在空间结构上相对独立，使得其独特的抗原亲和力得以保持，但由于嵌合抗体中仍然包含鼠源McAb的可变区，因此在应用时仍可能引发强烈的HAMA反应。

为了克服这一问题，科学家们进一步进行了改进，将鼠源McAb可变区中的相对保守的骨架区（Framework region,FR）替换为人的FR，而仅保留抗原结合部位的互补决定区（Complementarity-Determining region,CDR）。

这种改进使得抗体真正实现了人源化。

然而，FR作为抗体的脚手架，不仅为CDR提供了空间构象环境，有时还参与抗体结合位点正确构象的形成，甚至与抗原的结合。

因此，简单的CDR移植往往会导致原抗体亲和力的丧失或降低。

为了解决这一问题，目前科学家们已经探索出了四种策略，旨在优化FR和CDR之间的相互作用，以恢复或提高人源化抗体的亲和力。

这些策略的实施将有助于进一步提升抗体人源化的效果，为医学研究和治疗提供更多的可能性。

人源化抗体构建原则与策略1.模板替换在使用与鼠对应部分有较大同源性的人抗体FR替换鼠FR时，通常有两种途径可供选择。

第一种途径是采用同一个（或少数几个）具有已知晶体结构数据的人源抗体可变区框架（如VH中的NEW、KOL，VL中的REI等）作为基本模板，通过序列比较与分子模建，确定人、鼠间存在种源差异的氨基酸残基，特别是与鼠CDR密切作用的氨基酸残基，在替换过程中予以保留。

为了确保CDR的空间构象得以维持，需要特别关注原来抗体CDR下方的堆积残基以及周围的残基。

这种方法的优势在于，已知的人源FR晶体结构为残基替换提供了明确的信息。

然而，其不足之处在于可能难以保持鼠CDR的天然构象，从而可能导致抗体亲和力的降低或丧失。

第二条途径是在已有的抗体序列库中搜索与鼠McAb FR具有最大同源性的人源FR进行替换。

人源化抗体研究历程及发展趋势

人源化抗体研究历程及发展趋势
人源化抗体是指通过基因工程技术将小鼠或其他动物的抗体框架序列与人类抗体的可变区域序列结合，使其具有更好的免疫原性和稳定性，从而广泛应用于生物医学领域。

以下是人源化抗体研究历程及发展趋势：
1.起源：20世纪70年代，人们开始利用小鼠制备单克隆抗体。

但小鼠抗体与人体免疫系统存在较大差异，因此使用小鼠单克隆抗体会出现免疫排斥反应，且抗原易受到抗体的攻击。

2.人源化抗体的出现：20世纪90年代初，基因工程技术的发展为制备人源化抗体提供了可能。

利用重组DNA技术，将人类抗体的可变区域序列嵌入到小鼠抗体框架序列中，生成了人源化抗体。

3.趋势一：多抗体疗法：随着人源化抗体技术的不断发展，人们开始利用多种抗体组合进行治疗，这种方法被称为多抗体疗法。

与单一抗体相比，多抗体疗法可以同时攻击多个不同的受体或肿瘤细胞，且不易出现耐药性。

4.趋势二：个性化治疗：由于人源化抗体可以针对不同的肿瘤抗原，因此可以被用于个性化治疗。

与传统的化疗和放疗相比，个性化治疗可以更加精准地攻击肿瘤细胞，减少对正常细胞的伤害。

5.趋势三：新型载体：为了提高人源化抗体的稳定性和免疫原性，研究人员开始探索新型载体的应用。

例如，利用病毒载体可以将人源化抗体有效地送达到靶细胞内部，从而增强其治疗效果。

综上所述，人源化抗体技术的不断发展为医学领域的治疗提供
了新的选择和可能。

未来，人源化抗体技术将不断完善和发展，为各种疾病的治疗带来更加广阔的前景。

抗体人源化的主要原理

抗体人源化的主要原理一、介绍在生物医药领域中，抗体疗法已成为一种重要的治疗方法。

然而，由于传统抗体来自于小鼠、兔子等动物，其在人体内会引发免疫反应，限制了其临床应用。

为了解决这个问题，科学家们开发了抗体人源化的技术，使得抗体可以更好地适应人体环境，降低免疫反应，提高治疗效果。

二、抗体人源化的原理抗体人源化的主要原理是通过基因工程技术将动物源性抗体的大部分结构转化为人源结构。

其主要包括以下几个步骤：2.1 选择合适的母体抗体首先，需要选择一个合适的动物源性抗体作为母体抗体。

母体抗体应具有良好的抗体效果和特异性，为后续的人源化工作提供基础。

2.2 基因克隆与测序将抗体的DNA序列进行克隆并进行测序，以得到完整的抗体基因信息。

这一步骤可以通过PCR（聚合酶链式反应）和测序技术来实现。

2.3 序列比对与分析利用计算生物学工具将母体抗体的DNA序列与人源抗体库中的序列进行比对和分析，找出相似性最高的人源抗体序列。

2.4 重新设计抗体基因根据序列比对的结果，重新设计抗体基因，将人源抗体的DNA序列与母体抗体的DNA序列进行重组。

这一步骤可以通过PCR技术和基因克隆来实现。

2.5 表达与纯化将重组后的人源抗体基因导入到表达宿主中，让宿主表达人源抗体。

之后，通过一系列的纯化步骤，如亲和层析、离子交换层析等，获得纯净的人源抗体。

三、抗体人源化的优势抗体人源化技术具有许多优势，使之成为抗体疗法的主流：3.1 降低免疫反应人源化的抗体与人体自身产生的抗体更为相似，因此在体内的抗原识别和结合过程中，不容易引起免疫反应。

相比之下，动物源性抗体容易被人体免疫系统识别为外源物质，并产生抗体反应。

3.2 增加抗体的半衰期人源化的抗体在人体内的半衰期较长，可以延长抗体在体内的作用时间，提高治疗效果。

3.3 提高抗体的稳定性人源化的抗体结构更为稳定，不容易受到蛋白酶的降解和其他外界条件的影响，增加了抗体的存储和运输稳定性。

3.4 提高抗体的亲和力通过人源化的技术，可以对抗体进行亲和力的改造，使之更好地与特定的抗原结合，提高抗体的治疗效果。

AntibodyTherapeutics综述抗体人源化因素的综合考量

AntibodyTherapeutics综述抗体⼈源化因素的综合考量近⽇，华⼈抗体协会旗下期刊、⽜津⼤学出版社出版的Antibody Therapeutics发表了新加坡A∗STAR研究院 Samuel Ken-En Gan教授课题组关于抗体⼈源化需要考虑的要素和各要素作⽤的综述，原⽂标题为‘Sagacity in antibody humanization for therapeutics, diagnostics andresearch purposes: considerations of antibody elements and their roles’。

随着抗体药物在治疗⾃⾝免疫病、癌症等⽅⾯的突破，治疗性抗体的市场正稳步快速的增长。

然⽽，基于单克隆抗体的药物发过程仍然很昂贵，且候选药物可能会因临床试验中的不良反应，⽐如强免疫原性引起的过敏反应⽽失败。

尽管在药物开发的早期阶段通常很难预测到这⼀点，但随着对抗体功能和活性的深⼊了解，通过合理设计可以在抗体⼈源化步骤中减轻或避免此类不良反应。

在这篇综述中，作者讨论了关于抗体各个要素的最新发现，即重链和轻链的可变（V-）和恒定（C-）区域，以及它们在抗体⼈源化过程中的作⽤，以及如何利⽤它们来研发更好⽤于治疗、诊断和研究的抗体。

摘要和亮点治疗性抗体的⼈源化步骤是决定抗体药物开发成功与否的关键。

然⽽当前⼈源化的过程由于缺乏系统的科学理论指导，导致不同实验室采⽤截然不同的⽅法。

资⾦雄厚的实验室可以使⽤⾃动化的⾼通量筛选⽅法，通过使⽤昂贵的仪器设备来获得最佳的⼈源化抗体。

通常在这些⾼通量过程中，也仅仅分析标准关键参数，例如抗体产量，亲和⼒和是否聚集沉淀等。

由于缺乏合适的临床前动物模型，只能在临床试验中，根据FDA指南，来检测治疗性抗体是否引起免疫原性和过敏性等不良反应。

尽管可以通过附加的脱敏⽅案来缓解某些不良反应，但此类不良反应可以在⼈源化步骤中提前防⽌。