三聚氰胺检测方法
检测奶粉三聚氰胺方法
检测奶粉三聚氰胺方法
奶粉中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. HPLC-UV法：利用高效液相色谱技术结合紫外检测器，通过样品中三聚氰胺的特征吸收峰进行定量分析。
2. LC-MS/MS法：利用液相色谱联用串联质谱仪的方法，对样品中的三聚氰胺进行定量分析，具有较高的灵敏度和准确性。
3. 免疫法：通过制备抗三聚氰胺抗体或利用商用的抗体盒，然后利用抗体与三聚氰胺结合形成特定复合物，并通过免疫反应进行检测和定量。
4. 酶法：利用三聚氰胺酶催化三聚氰胺分解产生氨气，然后利用氨气检测仪器进行定量分析。
需要注意的是，以上方法在检测奶粉中三聚氰胺时，通常需要先进行样品的预处理步骤，如提取、净化、富集等，以提高检测的灵敏度和准确性。
此外，不同的方法对样品的处理和仪器设备要求也有所不同，具体操作还需要参考相关的检测标准和方法说明。
食品三聚氰胺检测方法
食品三聚氰胺检测方法
食品中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. 高效液相色谱-质谱联用法：利用高效液相色谱将样品中的三聚氰胺分离出来，然后使用质谱进行定性和定量分析。
2. 气相色谱-质谱联用法：将样品中的三聚氰胺通过气相色谱分离，再利用质谱进行定性和定量分析。
3. 酶联免疫吸附测定法：利用酶联免疫吸附技术，制备专门的三聚氰胺抗体，将样品与抗体结合，在检测中利用酶的催化作用来定量分析三聚氰胺的含量。
4. 端子法：将含有三聚氰胺的食品样品与二甲腈反应生成蓝色复合物，然后通过分光光度法测定蓝色复合物的吸光度，从而计算出三聚氰胺的含量。
5. 电化学法：利用电化学传感器或电极来检测食品中的三聚氰胺，根据电化学信号的变化来定量分析。
需要注意的是，不同的检测方法在准确度、灵敏度、样品处理等方面可能存在差异，选择合适的方法需要综合考虑实际需求和条件。
而且在实际应用中，常常采用多种方法进行交叉验证，以提高检测的可靠性和准确性。
三聚氰胺的检测方法
三聚氰胺的检测方法工业上测定三聚氰胺的纯度通常采用苦味酸法和升华法。
苦味酸法方法原理: 将水加入试样, 加热溶解后, 加人苦味酸溶液, 称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量, 即测得三聚氰胺纯度含量。
分析步骤: 称取试样, 置于500 ml 锥形瓶中, 同时加入水, 加热溶解; 冷却后, 加入酚酞指示液3 滴, 若显色, 加入硫酸溶液, 直至溶液颜色消失, 若有不溶物, 需过滤, 水洗; 把滤液和洗液合并, 移人500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔细振摇混合后, 准确吸取100 ml 置于500 ml 烧杯里; 将此溶液加热至80℃, 另加入已加热至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷却至室温后, 保持在15℃以下约8 小时; 用已恒重的玻砂过滤器过滤, 之后,先用约100 ml 苦味酸三聚氰胺的饱和溶液洗涤, 再用水洗; 烘干玻砂过滤器, 置于干燥器中冷却后, 称量求得沉淀物质量。
升华法测定原理: 在升华装置中将试样在负压下进行加热, 让三聚氰胺完全升华后, 称其残渣量, 即测得三聚氰胺纯度。
分析步骤: 称取试样, 置于预先干燥了的且已知质量的试样容器里; 将试样容器置入减压升华装置内,待完全密闭后, 开启真空装置缓缓吸引, 并调节装置内的温度, 经2 小时升华结束; 取出试样容器, 冷至室温后,称量试样容器的质量。
上述两种测定方法准确度均较高, 但操作繁琐, 分析时间太长,有人推荐采用电位滴定法。
具体测定方法, 首先测定三聚氰胺溶液中总固体的含量, 称取样品于200 ml烧杯中, 加入100 ml 蒸馏水, 放于石棉网的电炉上加热,在沸腾的情况下搅拌溶液, 使试样完全溶解。
在电磁搅拌状态下, 用硫酸标准溶液滴定热溶液至pH 值为5 左右。
流水冷却溶液至室温, 滴定, 每次准确加入0.1 ml 硫酸标液,并记下相应的pH 值, 直至pH 值约为3。
计算出等当量点时消耗硫酸标液的体积。
结果计算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 为溶液中三聚氰胺的含量, %; S 为溶液中总固体的含量, %; V 为等当量点时消耗硫酸标液的体积, ml; F 为0.5 mol /L 硫酸标液的校正系数; m 为滴定时所标取总固体的质量;6.307 为换算系数) 。
三聚氰胺的检测液相法
03
三聚氰胺的液相色谱检测方 法
样品前处理
样品收集
衍生化处理
采集具有代表性的样品，如奶粉、牛 奶等。
对于某些不易检测的物质，需要进行 衍生化处理，以提高检测灵敏度。
样品制备
将样品进行稀释、过滤、离心等操作， 以去除杂质并获得清澈的溶液。
色谱柱的选择
选择合适的色谱柱
根据三聚氰胺的性质，选择适合的色 谱柱，如C18准溶液和样品溶液， 进行高效液相色谱分析。
1. 样品处理
将样品进行预处理，提取出三 聚氰胺。
3. 色谱条件设置
设置流动相比例、流速、检测 波长等参数。
5. 记录数据
记录色谱图和峰面积数据。
结果分析
数据处理
将峰面积数据与标准曲线进行对比，计算出 样品中三聚氰胺的含量。
结果判断
需要专业操作人员
液相色谱法需要专业的操作人员，以确保检测结果的 准确性和可靠性。
三聚氰胺的液相色谱检测法的未来发展
联用技术
将液相色谱法与其他技术如质谱 法联用，可以实现更快速、准确 的三聚氰胺检测。
自动化和智能化
随着技术的发展，未来液相色谱 法可能会实现更高程度的自动化 和智能化，提高检测效率。
新技术的应用
三聚氰胺的检测液相法
目录
• 引言 • 液相色谱法基础 • 三聚氰胺的液相色谱检测方法 • 实验过程与结果分析 • 结论
01
引言
目的和背景
目的
液相色谱法是一种高效、高分辨率的分离技术，用于检测复杂样品中的三聚氰胺 。该方法旨在提供准确、可靠的测定结果，以满足食品安全和质量控制的要求。
背景
三聚氰胺是一种有毒的工业化学品，被非法添加到食品中以增加其蛋白含量。由 于其对人类健康的严重危害，检测食品中三聚氰胺的存在变得至关重要。液相色 谱法因其高灵敏度和特异性而被广泛应用于三聚氰胺的检测。
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺检测方法检测方法利用酶联免疫吸附测定法用食品及饲料中三聚氰胺的定量测定。
检测原理酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。
利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。
先将三聚氰胺酶标记物，样品萃取物及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。
在30分钟的孵育过程中，样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体，孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。
在用去离子水清洗结束后，每孔中加入清澈的底物溶液，结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。
孵育30分钟后停止此反应，根据各孔颜色深浅进行数据读取。
依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。
实验所需设备及材料三聚氰胺检测试剂盒（目前常用进口试剂有美国Abraxis公司和美国Beacon公司的）酶标仪一台（配有450nm滤光片）1－5ml可调移液器100－1000ul可调移液器.20－200ul可调移液器.蒸馏水或去离子水..可吸取50ul的移液器及吸头.可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸头.吸水纸或相当的吸水材料.450nm的酶标仪.计时器.洗瓶混旋器.20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸馏水定容至1000ml.注意事项最好配套使用试剂，不要同其它公司的产品混用，不要将不同批次的产品混用。
样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。
不要使用过期的产品。
使用之前将所有试剂回升至室温，但不要放置超过24小时。
三聚氰胺属于有毒性的化学品，请小心处理。
停止液是1N盐酸，避免接触皮肤。
样品制备（以美国Beacon试剂为例）湿的宠物食品萃取方法（稀释倍数：100）均质样品至布丁状。
称取2g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
超声萃取1分钟。
漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层。
三聚氰胺检测方法
创新点
• 目前测定三聚氰胺 的方法已有高效液相法和气相-质谱法， 目前也有液相色谱-质谱法的报道。这些方法，存在试验需要衍 生、操 作繁琐、过程冗长、试剂用量较大及灵敏度低等缺 点。 本研究中采用萃取柱净化，离子色谱-电导法 和离子色谱-紫外法 分别检测化肥中阴离子和三聚 氰胺的含量，无需衍生，操作简单， 一次进样即可测 试多种离子，方法实用可靠，可满足化肥生产和 使用 安全检测的需要
流程
• 2.1色谱条件 离子色谱-电导检测器测阴离子 条件：SH-AP-1 阴离子色 谱柱（250 mm×4.0 mm）为 亲水性阴离子色谱柱；淋洗液为淋洗液 发生器产生 的高纯氢氧化钾溶液，梯度洗脱及浓度见表 1，流量 0.8 mL/min，进样量 25 μL，柱温和检测器池温均为 35 ℃，SHY-6型抑制 器，抑制电流 120 mA，系统压力 10.2 MPa。以保留时间定性，峰面 积定量。
特点
• (1）高压。检测中流动相由于是液体，经过色谱柱阻力较大。为了可 以顺利通过色谱柱，对载液要高压处理。
• （2）高效。实施分离过程的高效能。可以采用固定相与流 动相以保 证分离效果处于最佳，分离效能可以提高出许多倍。
• （3）高灵敏度。采用紫外检测器的应用，精度达到了0.01ng, 检测中 进样量可以达到μL数量级的精度。
• 4.2 提取溶液 对于 3 份加入了 1.0μg/g 三聚氰胺的样品依次用高氯酸 0.2mol/L（A 方法）、三氯乙酸 1%+乙腈（B 方法）、三氯乙酸 1% （依据标准 GB/T22388－2008）提取。根据三种试验结果表明， 回收 率依次为 71.5%，64.7% 和 99.3%。实验提取溶液使用 1% 三氯乙酸。
称取 7 g 三氯乙 酸，用超纯水定
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法如下：
1. 离子色谱法：该方法基于三聚氰胺在水中形成氢氧化铵和靛酚蓝络合物的反应，在离子色谱柱中用硫酸为流动相进行分离，再通过紫外检测器进行检测。
2. 高效液相色谱法：该方法使用高效液相色谱柱进行分离，以甲醇和水为流动相，以紫外检测器和荧光检测器进行检测三聚氰胺。
3. 液质联用法：该方法是高效液相色谱法和质谱法的结合，可以同时分离和定量三聚氰胺及其代谢产物。
4. 岛式红外光谱法：该方法利用不同样品的红外光谱图谱的差异性来鉴别含三聚氰胺的奶粉。
5. 快速检测法：该方法使用荧光和拉曼光谱等技术，可以在几秒钟内快速、准确地检测奶粉中的三聚氰胺。
以上是常用的几种三聚氰胺奶粉检测方法。
不同的方法具有不同的优点和适用范围，可以根据实际需求选择合适的检测方法。
三聚氰胺的检测方法
重量法、电位滴定法、高效液相色谱法、气相色谱－质谱联用法、液相色谱－质谱联用法、毛细管电泳法、近红外线吸收法、比色法、免疫学法1.1重量法：苦味酸法和升华法。
苦味酸法的原理是将三聚氰胺样品用水溶解，再向该溶液中加入苦味酸使其与三聚氰胺生成沉淀，根据生成沉淀的量计算出样品中三聚氰胺的含量。
升华法的原理是将样品置于升华装置中，使样品中三聚氰胺受热升华，准确称取剩余固体的质量。
这两种方法用于工业上检测三聚氰胺的含量准确度相对较高，但分析时间都比较长，操作繁琐，不适合高效快速检测。
1.2电位滴定法电位滴定法在工业中检测三聚氰胺较重量法简单，实验时间较短，但准确度不高。
其实验原理：以硫酸标准溶液滴定含有三聚氰胺的溶液，通过公式用等当量点时消耗硫酸标准溶液的体积计算出三聚氰胺的含量。
不用于食品。
1. 3 高效液相色谱法（HPLC）用HPLC 检测三聚氰胺含量，检出限低，准确度相对较高，可用于食品中三聚氰胺的检测。
实验的一般操作步骤是：用沉淀法先将奶粉中的蛋白质沉淀，然后提取奶粉中的三聚氰胺，将提取液用阳离子交换固相萃取柱净化，最后用高效液相色谱进行检测，外标法定量。
1. 4气相色谱法和质谱联用法（GC-MS）与HPLC 法比较，GC-MS 具有准确度高、检出限低（0.05 mg/kg），更适合食品中三聚氰胺的微量检测。
该方法样品经蛋白沉淀离心后过MCX 固相萃取柱净化、氮气吹干、硅烷化衍生, 再由气相色谱－质谱联用仪检测。
由于三聚氰胺为强极性化合物，难汽化，直接对其进行GC-MS 测定不但灵敏度低且峰拖尾严重，为此王征采用N，O- 双三甲基硅基三氟乙酰胺衍生化，极性的减弱使其容易进行汽化，有利于待测物和基质的分离,降低了背景化学噪音的影响。
王立媛等用GC-MS 方法检测奶粉和鲜奶中三聚氰胺的加标回收率在82.3%～110.0%之间，相对标准偏差（RSD）＜10%，方法净化效果好、准确度高、灵敏度好。
但是GC- MS 法需要进行衍生化, 样品处理步骤复杂,不适用于多杂质生物检材中三聚氰胺的快速筛查和定量分析。
三聚氰胺的检测技术一
● 以目标物测定浓度为横坐标，目标物与对应同位素内标峰面积比为纵坐标，绘制三聚氰胺标准曲 线，在2.5～100.0 ng/mL线性关系良好，回归方程为y=0.998 266x+0.041 23，相关系数r为 0.999 3，符合检验对标准曲线的要求。
回收率实验
● 分别向空白样本中添加标准工作液、同位素内标工作液，按照1.3.1步骤处理并检测。添加水平为 0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.10 mg/kg 3个水平，每个浓度6份平行样本，检测结果见表2。方 法回收率为82.8%～102.3%，相对标准偏差为3.2%～5.6%，回收率和精密度良好，符合检测方 法要求，适合液体乳中三聚氰胺的检测
● 检出限测定以空白牛奶样品为基质，一个阳性添加浓度C(10.0µg/g)，按照上述优化过的方法来 前处理和上机，所得信噪比S/N=19.49，可计算检出限为0.001 5µg/g。计算公式如下
● 检出限(method detection limit,MDL)(μg/g)=3C/(S/N)
● 回收率和精密度的确定以空白牛奶作为基质，进行相应的加标回收试验，加标浓度为 10µg/kg、 5 0 µg / k g 、 2 0 0 µg / k g 。 每 个 加 标 浓 度 分 别 做 6 个 相 同 浓 度 的 平 行 试 样
结论
● 本研究探索优化了一种基于高效液相色谱-串联质谱法的内标法测定液态奶 中三聚氰胺的分析方法。该方法通过用含10%二乙胺的乙腈水溶液充分提 取，取上清液进行氮吹浓缩后，定容上机测定，最后，该方法的检出限达 到了0.001 5μg/g，能灵敏的检测低含量基质，同时，液态奶试样在按 10μg/kg、50μg/kg、200μg/kg 3个浓度添加情况下根据该试验方法进行 前处理和仪器检测，结果回收率为87.79%～104.54%，相对标准偏差为 2.39%～5.07%。该方法具有前处理简单便捷、检出结果精密度高定量结 果准确且重复测试较为稳定等特点，大大提高了液态奶中三聚氰胺的检测 效率，方便对此类药物的监督管控对有效的倒逼生产养殖端按规定使用该 类药物起到积极推动作用
三聚氰胺试验方法
三聚氰胺试验方法三聚氰胺是一种无机化合物，可以用于合成氰酸甲酰胺树脂和三聚氰胺甲醛树脂等多种化合物。
然而，三聚氰胺也因其毒性而广泛被人们关注。
特别是在2024年，中国发生了一起涉及三聚氰胺的食品安全事件，引发了全球范围内的关注和讨论。
因此，为了确保食品的安全性和消费者的健康，需要对食品中的三聚氰胺进行检测。
以下是一种常用的三聚氰胺试验方法。
1.样品准备：将待测食品样品收集，并进行样品预处理。
根据样品的不同性质，可采用研磨、过筛、稀释等方法，将样品制备成均匀可测的状态。
2.样品提取：将经过预处理的食品样品提取出三聚氰胺。
可采用水提取、酸提取、有机溶剂提取等方法，根据样品特点和所需检测的目的选择合适的提取方法。
3.样品清洗：对提取液进行净化和去除干扰物。
根据不同的提取方法和所需的净化程度，可采用固相萃取、液液分配等方法进行样品清洗。
4.样品测定：采用高效液相色谱（HPLC）联用质谱（MS）技术进行三聚氰胺的定量测定。
首先，通过HPLC方法对样品进行分离，然后利用质谱对样品中的三聚氰胺进行定量分析。
5.数据处理：根据样品的测定结果，计算出样品中三聚氰胺的浓度。
可以选择使用专门的数据处理软件进行结果的统计和分析。
需要注意的是，三聚氰胺的检测方法可能因样品性质和检测目的而有所不同。
另外，三聚氰胺的检测也需要专业的实验室设备和操作技术，确保数据的准确性和可靠性。
总而言之，三聚氰胺的检测是食品安全监管的重要环节。
通过合适的样品准备、提取、清洗和测定方法，可以准确快速地检测出食品中的三聚氰胺，保障消费者的健康和食品的安全。
三聚氰胺检测步骤
三聚氰胺检测步骤注：所有进入液相的试剂必须过滤，并且经过超生此实验步骤按实验先后顺序所做可做适当调整甲醇及乙腈先过滤后使用1.离子对试剂缓冲液（称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入980ml水溶解，调PH至3.0，定容至1L，过滤备用）2.流动相的配制（流动相50：50 离子对试剂缓冲液-乙腈50:50体积比，混匀。
流动相85:15 离子对试剂缓冲液-乙腈85:15体积比，混匀。
）3.三氯乙酸溶液：称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解定容至刻度，混匀备用。
4.甲醇水溶液：50:50 体积比的甲醇和水，混匀后用来稀释三聚氰胺标准溶液。
5.三聚氰胺标准储备液：准确称取100mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品于100ml容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。
6.三聚氰胺标准工作液的稀释：用流动相将三聚氰胺标准液逐步稀释得到7.氨化甲醇溶液：体积比为5:95的氨水和甲醇混合后，混匀后备用8.样品的处理：取2g奶样→至50ml具塞塑料离心管中→加入15ml三氯乙酸5ml乙腈→超生提取10min→震荡10min→4000r/min离心10min→上清液过滤（用三氯乙酸提前湿润滤纸）→用三氯乙酸定容到25ml→移取5ml滤液加入5ml水混匀后做待净化液。
9.固相萃取柱的活化：依次用3ml甲醇、5ml水活化。
10.净化：将待净化转移至固相萃取柱中，依次用3ml水和3ml甲醇洗涤，抽至近干。
11.洗脱：用6ml氨化甲醇溶液洗脱，整个固相萃取过程的流速不超过1ml/min。
洗脱液于50℃下氮气吹干，用1ml流动相定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，待检查。
三聚氰胺的测定—液相色谱法
C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混合。
流速：1.0 mL/min
柱温：40℃
波长：240 nm
进样量:20 μL
五、高效液相色谱测定
高
效 液
标准曲线的绘制
相
用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、
色 谱
40、80 μg/ml的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度
效 液
甲醇：色谱纯
相
乙腈：色谱纯
色 谱 法
氨水：含量为25％～28％ 三氯乙酸
柠檬酸
辛烷磺酸钠：色谱纯
甲醇水溶液：准确量取50 mL甲醇和50 mL水，混匀后备用。
三氯乙酸溶液（1％）：准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中，用水溶解并定容 至刻度，混匀后备用。
二、试剂和材料
高
效
氨气：纯度大于等于99.999％
三、仪器和设备
高
效
高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外线检测器或二极管阵列检测器
液 相
分析天平：感量为0.000 1 g和0.01 g
色 谱
离心机：转速不低于4 000 r/min
法
超声波水域
固相萃取装置
氨气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管：50 mL
研体
四、分析步骤
氨化甲醇溶液（5％）：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇，混匀后备用。
液
离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL
相
水溶解，调节PH至3.0后，定容至1 L备用。
色
三聚氰胺标品：CAS08-78-01，纯度大于99.0％
三聚氰胺检测技术 (2)
实验结果：
y=12.95 + 164.70x（R2=0.982）
• 将不同浓度三聚氰胺标准溶液（0， 0 .05，0 .1，0 .2，0 .4，0 .6，0 .8， 1 .0，2 .0，4 .0，6.0，10 μM）分别加 入到巯基苯硼酸修饰的金纳米簇溶液中， 反应30min
结语:
• 拉曼光谱法：一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定 量检测方法_杨龙坤
实验结果：
利用上述方法进行实验，以峰面积为纵坐标，质量浓度 （μg/m L）为横坐标绘制标准曲 线。
y=61.304 179 9x-36.316 309 R2=0.99989
精密度试验: 取三聚氰胺标准溶液，各进样 6 次，计算精密度，见表 1。实验结果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 相对标准偏差分别为 5.15%、8.87%、4.04%、2.56% 及 2.53%，均小于 10%，实验重现性好，精密度符 合要求。
加标回收率试验 取空白样品，加入已知浓度的三聚氰胺标准溶液，测3 次，结果如表2。由表2 可知，三聚氰胺标准溶液的平均回收率为 87.974%，准确度好。
如图2 所示，三聚氰胺的标准品保留时间为 20.963 min。 随机选取部分市售含乳饮料样品6 种，按照上述 的实验方法进行。 图3 是该6 种市售含乳饮料样品其中一种三聚氰 胺色谱图，在20.963 min 时，没有任何峰出现， 说明该样品不含三聚氰胺。其他5个样品图和图 3 相似，都没有在20.963 min 出现峰。 结果表明，这6 种含乳饮料样品均没有非法添加 剂三聚氰胺检出，符合国家标准要求。 该方法简单方便，可以用于含乳饮料中非法添 加剂三聚氰胺的检测。
三聚氰胺的检测方法 PPT
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四、注意事项
1. 试剂盒选用不同，操作过程不同，请按购买试剂盒 说明操作；
2. 室温低于20℃或试剂及样本未回到室温20-25℃， 会导致OD偏低；
3. 每加一种试剂前要将其摇匀； 4. 不同批号试剂盒不要混用；
三聚氰胺的检测方法
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5. 试剂盒2-8℃保存； 6. 0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质； 7. 加入底物液A、B后，一般显色10min，若颜色较浅
三聚氰胺的检测方法
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4. 洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液250µl，洗涤4-5次， 最后用吸水纸拍干；
5. 显色：加显色液A、B各50µl，混匀，盖板避光反应10min; 6. 测定：加终止液50µl，混匀，在酶标仪450nm读OD值。 7. 结果判定：标准品、样品输入软件计算
三聚氰胺的检测方法
• 检测方法：①气相色谱质谱法（GC-MS） ②液相色谱串联质谱法（LC-MS-MS） ③高效液相色谱法(HPLC) 准确；成本高、操作复杂 ④ELISA——试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度高
三聚氰胺的检测方法
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二、原 理
• 采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺 抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚 氰胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与 其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应 的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。
可延长反应时间到15min，但不可超过20min，反 之则减短反应时间； 8.每种液体加入速度尽量一致、快。
三聚氰胺的检测方法
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• 1ppm=1000ppb • 1ppb=1000ppt • ppm即：mg/L（毫克/升） • ppb即：ug/L（微克/升） • ppt即：ng/L（纳克/升）
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺检测方法
三聚氰胺是一种有毒有害化学物质，常被用作动物饲料和奶粉等食品的添加剂。
以下是三种检测三聚氰胺的方法：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常用的方法，适用于对液态样品或溶解后的固态样品进行检测。
该方法的基本原理是将三聚氰胺从样品中分离出来，然后使用高效液相色谱仪进行检测。
2. 毛细管电泳法（CE）：这种方法是另一种常用的检测方法，通常用于奶粉、饲料和其他类似样品的检测。
该方法基于样品的分离和电泳移动性，可以快速准确地测量样品中三聚氰胺的含量。
3. 免疫学检测法：这种方法是通过检测样品中的三聚氰胺对特定抗体的反应来进行检测。
该方法具有快速、准确、简便等特点，并且适用于大批量的样品分析。
三聚氰胺的检测方法
三聚氰胺的检测方法工业上测定三聚氰胺的纯度通常采用苦味酸法和升华法。
苦味酸法方法原理: 将水加入试样, 加热溶解后, 加人苦味酸溶液, 称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量, 即测得三聚氰胺纯度含量。
分析步骤: 称取试样, 置于500 ml 锥形瓶中, 同时加入水, 加热溶解; 冷却后, 加入酚酞指示液3 滴, 若显色, 加入硫酸溶液, 直至溶液颜色消失, 若有不溶物, 需过滤, 水洗; 把滤液和洗液合并, 移人500 ml 容量瓶中, 加水至刻度, 仔细振摇混合后, 准确吸取100 ml 置于500 ml 烧杯里; 将此溶液加热至80℃, 另加入已加热至80℃的100 ml 苦味酸溶液, 冷却至室温后, 保持在15℃以下约8 小时; 用已恒重的玻砂过滤器过滤, 之后,先用约100 ml 苦味酸三聚氰胺的饱和溶液洗涤, 再用水洗; 烘干玻砂过滤器, 置于干燥器中冷却后, 称量求得沉淀物质量。
升华法测定原理: 在升华装置中将试样在负压下进行加热, 让三聚氰胺完全升华后, 称其残渣量, 即测得三聚氰胺纯度。
分析步骤: 称取试样, 置于预先干燥了的且已知质量的试样容器里; 将试样容器置入减压升华装置内,待完全密闭后, 开启真空装置缓缓吸引, 并调节装置内的温度, 经2 小时升华结束; 取出试样容器, 冷至室温后,称量试样容器的质量。
上述两种测定方法准确度均较高, 但操作繁琐, 分析时间太长,有人推荐采用电位滴定法。
具体测定方法, 首先测定三聚氰胺溶液中总固体的含量, 称取样品于200 ml烧杯中, 加入100 ml 蒸馏水, 放于石棉网的电炉上加热,在沸腾的情况下搅拌溶液, 使试样完全溶解。
在电磁搅拌状态下, 用硫酸标准溶液滴定热溶液至pH 值为5 左右。
流水冷却溶液至室温, 滴定, 每次准确加入0.1 ml 硫酸标液,并记下相应的pH 值, 直至pH 值约为3。
计算出等当量点时消耗硫酸标液的体积。
结果计算按公式Me=S×6.307×V×F /m ( 其中式中:Me 为溶液中三聚氰胺的含量, %; S 为溶液中总固体的含量, %; V 为等当量点时消耗硫酸标液的体积, ml; F 为0.5 mol /L 硫酸标液的校正系数; m 为滴定时所标取总固体的质量;6.307 为换算系数) 。
非法添加三聚氰胺检测方法
非法添加三聚氰胺检测方法三聚氰胺是一种重要的有机化工中间产品，三聚氰胺的亚慢性毒性试验结果推断三聚氰胺长期饲喂可能引起肾衰竭[1]。
近年来非法添加三聚氰胺检测方法成为非常热门的研究课题。
现把近几年的三聚氰胺检测方法汇总如下：1 试剂盒检测法（ELISA）方法原理：利用萃取液通过均质及震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定[2]。
（1）样品处理称取1.0g均质过的饲料样品于离心管中,加入10mL甲醇充分混合，15000r／min离心10min，取上清液lmL于小试管中用氮气吹于；加入2.5mL10%甲醇/20mM PBS溶液充分溶解，移取100μL进行分析。
（2）ELISA检测步骤将所有试剂及样品提取液回升温度至室温(20～28℃)；用前按试剂盒的要求稀释所用试剂，取相应数量的微孔条，插入框架，吸取100μL标样或样品提取液到相应的微孔；每孔加入50μL三聚氰胺 HRP酶标记物，轻轻混合60s，孵育30min(20～28℃)；孵育完后，将微空中的溶液倒入水槽中，用250μL洗液洗板5次；在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干；每孔加入100μL底物溶液，孵育30min(20～28℃)；每孔加入100μL终止液；用酶标仪读取在450nm下的吸光值。
(3)作图以所获得的标准和样品吸光值的平均值除以0标准的吸光值再乘以100为纵坐标，以三聚氰胺浓度半对数为横坐标作标准曲线，确定被测样品的浓度。
2 升华法利用三聚氰胺加热升华的特点进行测定。
优点：检测仪器简单、便宜，检测费用低。
缺点：当样品里含有三聚氰酸、尿素等杂质时，用升华法测定三聚氰胺的结果会明显偏高，方法的专属性较差[3]。
3 重量法利用三聚氰胺与苦味酸定量生成苦味酸三聚氰胺沉淀物，烘干后，沉淀质量换算成三聚氰胺质量[4]。
优点：检测仪器简单、检测费用低。
缺点：实验耗时长（需要十多小时），方法专属性较差。
4 衍生化－气相法美国FDA的方法是：取样品0.5g加二乙胺－水－乙腈（10：40：50）20ml，超声处理30min后，以5000r／min离心10min，取1ml置于GC进样瓶中，于70℃水浴中氮气吹干，残渣中加入200μL含1％TMCS的BSTFA衍生剂及200μL吡啶，充分涡旋混合后，置70℃烘箱中，衍生反应45min。
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食品中三聚氰胺检测仪器配置及分析介绍
第一部分：关于三聚氰胺
三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。
分子式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分子量：126.12
物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m3 ；熔点：在常压下，354℃分解；升华温度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性
化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。
固相萃取(SPE)方法
1 固相萃取(SPE)柱的选择：
三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。
混
合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/ 二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样
品更干净，提高检测的灵敏度。
2) 批次重复性好。
3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
2 样品前处理步骤：
2.1标准样品配制：
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标
准溶液，使用时，以提取液(1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。
2.2提取：
称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10ml)，加入50ml 1%三氯乙酸提取液，充
分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。
然后取部分溶液转移至10mL
离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)。
2.3净化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
2) 上样：加入提取液3mL
3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。
4) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。
(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL
甲醇)。
5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2mL。
2.4检测：
HPLC-UV检测方法
三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有
良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法和中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用亲水色谱柱，均能得到良好的结果，三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
色谱柱： C18 4.6×250mm
缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15
进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL
流速：1.0mL/min
柱温：40℃
波长：240nm
第二部分：检测仪器
仪器配置及报价
二、甲方按产品出厂标准提供乙方，产品保修期为贰年，终身维护。
三、随机免费赠送备件清单如下:
1:平头注射针两个. 2:10μl过滤器1个.3:标准接线板1个.4:可调反压器1个.5:润滑油1瓶.6:柱塞密封组件一套. 7:不锈钢压环及螺钉各两个.8:维修工具一套. 9:进样阀维修工具一套.10:不锈钢钢管半米.11:PEEK压环2个.12:保险丝5A及3A各6个.13:四氟压环2个.14:进样阀支架一个.15:全套说明书及仪器检验合格文件CMC标识.
四、仪器技术服务承诺：
1. 厂家免费为用户仪器安装、启动、培训。
培训为现场结合用户样品培训.
直至通过用户验收。
2. 售后服务承诺：厂家按产品出厂标准提供给用户，仪器一月内包退，一
年内包换，保修期为两年终身维护。
产品保修期内的修理免费（人为造
成以及自然灾害造成的损坏除外）,接到维修通知后在24小时内响应；
需要在现场进行维修的，在48小时内到达仪器现场；重大问题或其它
无法迅速解决的问题在一周内解决或提出明确解决方案。
3. 厂家每年度举办的技术培训班（已成功举办了七届），为用户提供两人免学费培训。
仪器售出一年内,用户随时可到厂家免费培训
附：技术指标
1）P98Ⅱ型等梯度高压输液泵
流量范围：0.01ml/min~10ml/min
流量精度：<3μl (0.01ml/min~0.1ml/min),<1.5%(0.5ml/min~10ml/min)
流量稳定度：≤±0.3%
压力范围：0.00MPa～42MPa(420Kgf/cm2)
进口马达，进口驱动器，细分两万步，无机械噪音；确保精度。
进口密封系统，耐高压能力强。
进口高效脉动阻尼器，缓冲能力强，使脉动最小。
全进口液路管.
显示方式：液晶屏幕显示。
显示模式：实际压力，流量设定，压力上下限设定。
安全控制：压力上下限控制，蜂鸣报警，自动停机。
卧式机箱，轻触面板。
2）UV98Ⅱ可变波长紫外可见检测器
光路系统：进口设计衍射光栅单色仪，进口光电接收器件。
光源：日本滨松L6302氘灯
波长范围：190～700nm
波长精度：±1nm
波长重复性：±0.4nm
噪声：2.5×10-5AU(p-p)(动态指标，流动相甲醇，254nm，接柱) 漂移：1×10-3AU/hr(动态指标，流动相甲醇，254nm，接柱)
衰减范围：0.002～２AU/mV 10档
检测池体积：4.5μl；池体可耐最高压力达120Kgf/cm2(专利设计)
最小检出量：2×10-8g/ml (萘/甲醇溶液)
液晶屏幕显示，微处理器控制，自动停留扫描；波长重复性高
独特的氘灯控制，启辉电压使氘灯使用寿命可达2500小时。
专利的反压器设计，使气泡不易进入流通池。
卧式机箱，轻触面板；简单液路连接。
3)N2000色谱工作站
外联式硬件设计，软件基于windowsXP/2000操作平台下的32位应用程序。
基本功能：双通道数据采集，定性和定量分析；可实现国内外多种品牌液相色谱系统的计算机控制。
符合GMP认证要求。
4)Rheodyne7725i进样阀 (美国原装进口)
耐压可达42MPa, 手感好.
其中专为三聚氰胺检测的方法包
1色谱柱（4.6*250mm,5μm,150.）1支
2混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支
3三聚氰胺标准品1瓶（500mg，≥99.5%）
4三聚氰胺分析方法手册1份赠送
5庚烷磺酸钠（25g/瓶）
第三部分：安装须知
安装三聚氰胺需要准备如下物品
1，离心机（50ml，4000转以上）
2，万分之一天平
3，恒温水浴锅（50度）
4，氮气一瓶，纯度99.999%，带氮气表，软管2米。
（或者氮吹仪）
5，试剂类：甲醇10瓶，乙腈5瓶，要求色谱纯。
氨水，三氯乙酸，柠檬酸，乙酸铅各一瓶。
6，哇哈哈纯净水一箱。
7，试管类：容量瓶1L3个，
100ml，50ml，25ml，10ml，各5个。
大肚移液管10ml，5ml，2ml，1ml，各5根，
烧杯50ml5个，吸耳球1个，100ml，50ml量筒各1个。
8，普通电脑和打印机各1台。
第四部分：我公司具体检测实例
检出的某甲公司奶粉含三聚氰胺
检出的某乙公司液态奶含三聚氰胺
1ppm以下的三聚氰胺标准品
0.1ppm三聚氰胺标准品图。