DNA测序技术发展简史
DNA测序技术发展史一代二代三代测序技术简要原理及比较

DNA测序技术发展史一代二代三代测序技术简要原理及比较一、一代测序技术一代测序技术最早出现于1977年,由Sanger和Gilbert等人开发。
其原理基于DNA链延伸,即通过将DNA链合成过程中加入少量的dideoxy核苷酸(ddNTP),使得DNA链延伸在一些特定位置停止,并通过凝胶电泳分析停止位置来确定每个核苷酸的顺序。
一代测序技术的特点是:1.准确性较高,可以达到99.99%的准确率。
2.读长较短,一般为500至1000个碱基。
3.测序过程复杂,需要进行多次扩增和凝胶电泳分析,耗时较长。
二、二代测序技术二代测序技术的发展始于2005年,它采用大规模并行的方式进行测序,实现了高通量测序。
主要的二代测序技术包括454测序、illumina测序和Ion Torrent测序。
454测序技术采用循环化学法,通过将DNA片段固定在微小的载体上,然后进行多次扩增和测序,最后通过压缩气体冲击来释放碱基,从而实现测序。
illumina测序技术采用桥式扩增法,通过将DNA固定在玻璃芯片上的小孔中,并用荧光标记核苷酸进行扩增和测序,最后通过激光扫描来检测荧光信号。
Ion Torrent测序技术是一种基于半导体芯片原理的测序技术,通过检测氢离子的释放来确定DNA序列。
二代测序技术的特点是:1.高通量:可以同时测序数百万甚至数十亿个片段。
2.快速:通常只需几个小时到几天的时间完成测序。
3.读长较短:大部分二代测序技术的读长在100至1000个碱基之间。
4.相对较低的测序准确率:一般在99%左右。
三、三代测序技术三代测序技术是指第三代测序技术,它的发展始于2024年。
三代测序技术主要包括单分子测序和纳米孔测序。
单分子测序技术(如PacBio和Nanopore)通过将DNA片段转化为单分子,然后通过观察单分子的扩增和测序来获得DNA序列。
纳米孔测序技术则是将DNA分子引入纳米孔中,通过纳米孔内的电信号变化来确定碱基对的序列。
DNA测序技术的发展与应用前景

DNA测序技术的发展与应用前景DNA测序技术被广泛应用于基因组研究、医学诊断、药物开发等领域。
随着技术的快速发展,人们对于DNA测序技术的期望和应用越来越高。
本文将深入探讨DNA测序技术的发展历程以及其应用前景。
一、DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的历史可以追溯到上世纪50年代。
当时,Frederick Sanger等人通过发明链终止法(dideoxynucleotide sequencing)开创了DNA测序技术。
这种方法建立在DNA链扩增技术的基础上,利用缺少3'羟基的二代核苷酸停止链的生长,从而确定DNA的序列。
此后,多种改进版本的链终止法被提出,包括Maxam-Gilbert法和Thermo Sequenase法。
到了1990年代,PCR(聚合酶链式反应)技术的出现,为DNA测序技术带来了新的革命。
PCR技术使得DNA片段得到扩增,从而减少了使用大量DNA的需要,并且加快了测序的速度。
同时,自动测序仪的问世也使得测序速度大大提升。
自动测序仪可以同时进行多个样本的测序,数据可以自动收集和处理,从而大大提高了测序的效率和准确性。
到了21世纪初,基于大规模并行测序(massively parallel sequencing, MPS)技术的第三代DNA测序技术开始涌现。
这些技术包括轮廓组、Roche/454、Illumina、Ion Torrent、PacBio SMRT 等。
第三代DNA测序技术的出现,使得整个测序过程更快速、准确和经济,同时也会产生更多的数据。
这些技术的出现,标志着DNA测序技术进入了新的阶段。
二、DNA测序技术的应用前景1. 基因组学研究DNA测序技术的一个重要应用领域是基因组学研究。
随着第三代DNA测序技术的发展,测序速度和产出数量都得到了大幅提升。
研究人员现在可以使用这种技术更全面地研究基因组变异、基因调控等问题。
这种技术可以帮助科学家更好地理解基因组的组成和功能以及其与疾病之间的关系。
DNA测序技术的发展史

DNA测序技术的发展史DNA测序技术是现代生物科技的一个重要领域,它可以让我们更深入地了解生命的本质和机理。
在这个方面,我们是遥遥领先的,但发展出现代测序技术的过程却注定是漫长而经历了多个复杂的阶段。
人们首先意识到DNA的基本概念是在20世纪初。
当时,人们知道基因是不同样的特征的遗传物质,但不知道它们是由什么构成的。
1928年,费德里克·格里菲斯通过实验证明了细菌遗传的一些基本规律,他向大家证明了DNA是遗传物质。
1953年,詹姆斯·沃森和弗朗西斯·克里克在Nature上发表了重要的论文,推翻了斯特霍默提出的“蛋白质在DNA和RNA之前”模型,提出了“双螺旋模型”。
这种模型被证明是非常先进和准确的,为日后的基因研究奠定了基础。
尽管这种研究启发我们对DNA有更深的理解,但测序本质上还是一种因式分解的过程,需要大量计算和存储资源。
随着计算机技术的进步,人们开始寻找更加高效且自动化的方法来进行基因测序。
1967年,弗雷德里克·桑格在MIT提出了手动测序的方法,这一方法能够分辨不同的核苷酸,并把它们排列在DNA链中。
但是,这种方法非常费时费力,需要大量的人力和技术体力,不适用于大规模的基因测序。
1977年,萨拉和佩耶尔森通过使用可变温度的DNA聚合酶,发明了第一台能够自动测序的机器。
这种机器被命名为Waltz-Sequencer,能够剪下分子并将分子分离成单个碱基。
但是,这种技术仍然存在许多不足之处,例如难以处理大规模的基因数据、噪声干扰和误报等。
1985年,创造了现代的生物技术。
研究人员首次使用克隆克隆DNA,这种克隆克隆DNA可以大幅扩增DNA产物的数量,从而更容易进行测序。
这是现代生物技术的一个重要创新,促进了DNA测序技术的快速发展。
在克隆克隆DNA的基础上,人们开发出了许多更加先进的测序技术,包括基于聚合酶链式反应(PCR)的测序、Sanger测序和pyrophosphate测序等。
DNA测序技术演进历程回顾

DNA测序技术演进历程回顾DNA测序技术是现代生物科学的重要突破之一,它在研究基因组、解析遗传信息以及推动生物医学研究方面具有举足轻重的地位。
本文将回顾DNA测序技术的演进历程,从最早的手工测序方法到现代高通量测序技术的发展,带您一同了解这一领域的进展。
DNA测序的起源可追溯到20世纪50年代,当时的科学家们开始探索DNA结构与序列之间的关系。
1951年,罗斯林德拉克和雷蒙德吉科因率先提出了链终止法,这是一种手工测序方法。
通过合成不完全的DNA链和核酸酶处理,科学家可以确定目标DNA段的序列。
尽管这种方法十分耗时费力,但它为后来的测序技术打下了基础。
进入1960年代,自动测序技术的发展开创了DNA测序的新篇章。
1977年,弗雷德里克桑格和沃尔特吉尔伯格开发出了临时试验板法,成功测序了5位核苷酸。
同年,盖尔西格尔和阿伦香农提出了链特异法,该方法使用放射性标记的短RNA分子来测序DNA。
这两种方法为后来的自动测序技术提供了重要的参考。
1980年代,冈察高和达维德史密斯分别在自己的实验室里发明了两种重要的自动测序技术。
冈察高发明了Sanger测序法,该方法利用了二进制法识别核苷酸的顺序。
史密斯则提出了荧光测序法,利用荧光标记不同核苷酸碱基来测序DNA。
这两种方法都极大提高了测序速度和准确性,被广泛应用于实验室研究。
随着计算机技术和生物信息学的迅速发展,1990年代见证了DNA测序技术的巨大突破。
1990年,国家人类基因组研究院成立,并启动了人类基因组计划。
这一计划的目标是测序人类基因组,并让大众受益。
为了实现高通量测序,第一代测序技术也应运而生。
包括454测序、solexa(现在的Illumina)测序、Solid测序等。
这些技术的出现极大推动了大规模基因组测序的进行。
进入21世纪,下一代测序技术蓬勃发展,其中最有代表性的是Illumina测序(也被称为二代测序)。
Illumina采用无模板PCR和桥式扩增的方法,大大提高了测序速度和准确性。
DNA测序技术的发展及新型方法开发

DNA测序技术的发展及新型方法开发DNA测序技术是现代分子生物学和遗传学的重要手段之一,也是生命科学研究的基础。
自第一次人类基因组测序项目启动以来,DNA测序技术发展迅速,诞生了多种新型测序方法,如二代测序、三代测序和纳米孔测序等。
本文将介绍DNA测序技术的发展历程和新型方法的开发。
一、DNA测序技术的发展1960年,克里克与沃森提出了DNA结构模型,标志着分子生物学和遗传学进入了DNA时代。
此后,人们开始寻找一种可行的方法来测序DNA。
1977年,萨格测序方法被发明,这标志着DNA测序技术正式启动。
萨格测序方法是一种基于化学的测序技术,它利用了DNA合成时核苷酸特异的骨架酯键水解性质。
该方法需要将DNA模板分成多份,并分别加入四种可以特异性终止合成的核苷酸,通过逐个加入这四种核苷酸并测定终止点的方法来确定DNA序列。
1990年,人类基因组计划启动,在更快、更准确、更高效的DNA测序技术的背景下,二代测序技术应运而生。
与萨格测序方法相比,二代测序技术更加高效,能够在短时间内测定大量样本的DNA序列。
二代测序技术主要包括Illumina(Solexa)测序技术、ABI/SOLiD测序技术和454测序技术等。
这些测序技术都是基于PCR扩增技术,它们的共同特点是速度快、通量大并且适用范围广。
1995年,第一款商用二代测序仪器“ABI的Prism DNA Analyzer”上市,标志着这一领域的商业化开始。
此后,二代测序技术快速发展,TCGA(人类癌症基因组图谱)和1000多个人类基因组计划等一系列大型基因组项目的启动,使得二代测序技术得到了广泛应用。
而在2007年之后,第三代测序技术开始崭露头角,它的特点是相对于二代测序,更能克服样品复杂性、GC含量、引物引导偏差等技术瓶颈,同时还实现了单分子测序。
三代测序技术是一种直接测序技术,适用于复杂基因组等长链DNA的建库和测序,可以揭示许多与二代测序不同的基因标记。
DNA测序技术发展的历程

DNA测序技术发展的历程随着科技的不断发展,人类对于自身的认知也得到了前所未有的提升,特别是在基因方面。
DNA测序技术作为基因研究中的重要工具,其发展历程既丰富又曲折。
本文将从发明初期到现今的新技术,探讨DNA测序技术的历程。
一、Sanger测序法的诞生Sanger测序法是DNA测序技术的开创之作,其得名自诺贝尔奖获得者Frederick Sanger。
1958年,Sanger的团队成功地使用放射性同位素示踪技术,确定了蛋白质的氨基酸序列。
几年之后,他们尝试将这种技术应用于DNA的核苷酸序列的测定中,最终提出了Sanger测序法。
Sanger测序法的核心思想是利用DNA聚合酶进行DNA复制,向其中添加外来的ddNTP,ddNTP会在添加后停止复制的过程。
而ddNTP具有特殊性质,比正常的dNTP多了一个氧,使得其不能作为新的复制单位,从而使复制过程停留在某个位置,最终产生一系列截止于ddNTP的DNA碎片。
通过分离这些碎片,并与一段已知基因的DNA碎片混杂,再进行读取即可得到目标DNA 的序列。
Sanger测序法的发明,使得基因科学中关于DNA的研究进展飞速,并为其后的DNA测序技术的发展奠定了思想基础。
二、改进与提高效率的尝试自Sanger测序法提出之后,科学家们渐渐发现它的效率与应用领域也存在很多限制与不足。
在1960-1970年代,不少改进性的尝试都在进行。
比如,Gilbert和Maxam提出了各自的测序方法,相较于Sanger的方法,它们使用的是化学分解的原理,而非添加有毒物质的特殊ddNTP,最终实现了碱基读取的目的。
但在1990年之前,DNA测序的效率还不能满足科学家对于更加全面的基因研究的要求。
而直到1977年,一位名叫Sanger(和发明Sanger测序法的Sanger一点关系都没有)的科学家提出了一项新颖的测序方法——“二代”测序法。
“二代”测序法的核心思想与Sanger测序法相同,但用了不同的原理。
DNA测序技术发展

DNA测序技术发展DNA测序技术是近年来发展最为迅速的生物技术之一,它在基因检测、医学诊断、生态研究等领域都发挥了巨大的作用。
DNA测序技术的发展历程漫长,但却充满了奇迹和意外。
下面就让我们来探究DNA测序技术的历史和发展。
一、DNA测序技术的历史DNA测序技术的探索可以追溯到20世纪初。
当时,人们对DNA的理解还很有限,DNA只被认为是生命的分子基础,而未被应用于实际生产和生活中。
1960年代末,弗雷德里克·桑格和沃尔特·吉尔伯特成功地发现了DNA的重复性序列,从此开启了DNA的探索之路。
1977年,两个独立的团队,弗雷德里克·桑格和沙利文实验室,分别发明了面向DNA序列的化学法,并且实现了第一个重要的测序实验。
这个实验将一个病毒DNA的完整序列测定了出来,打开了DNA测序技术的研究之门。
1985年到2000年,DNA测序技术经历了一个突飞猛进的时期。
在这一时期,追求DNA测序技术的完美和高效性成为了科学界的主旋律。
人们开始采用自动化的方法进行DNA测序,不仅大大提高了测序速度,而且降低了操作难度和人力成本。
同时,生物信息学的发展也让DNA序列分析变得更加简单。
21世纪以来,DNA测序技术进一步迈向了高通量的阶段。
新一代测序技术的发展,使得DNA测序速度和准确度都得到了极大的改善。
目前最先进的新一代测序技术能够单次测序数百万条DNA序列,大大缩短了测序时间,降低了成本。
这种技术对生命科学研究的贡献是巨大的。
二、DNA测序技术的分类根据测序方法和技术的不同,DNA测序技术被分为了Sanger测序、二代测序和三代测序三种类型。
1、Sanger测序Sanger测序,也称为链终止法测序。
它是一种基于化学原理进行的分子生物学技术,是第一代测序技术。
Sanger测序技术是一种革命性的技术,不仅揭示了许多基因的结构和功能,还推动了人类基因组计划的启动。
Sanger测序原理是利用DNA聚合酶进行DNA合成,遇到ddNTP时会停止聚合,并导致DNA链终止。
DNA测序

DNA测序一、DNA测序发展史:DNA测序可以分为四个阶段:DNA的出现、第一代DNA测序技术、第二代DNA测序技术、第三代DNA测序技术1、DNA测序的出现:1975年Sanger和Coulson发明了加减法测定DNA序列。
1977年在引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)后,形成了双脱氧链终止法,使得DNA序列测定的效率和准确性大大提高。
Maxam和Gilbert在1977年报道了化学降解法测定DNA的序列。
2、第一代DNA测序技术:传统的化学降解法、双脱氧链终止法以及在它们的基础上发展来的各种DNA测序技术统称为第一代DNA测序技术。
人类基因组计划(human genome projec,tHGP)主要基于第一代DNA测序技术。
包括:化学降解法、双脱氧链终止法、荧光自动测序技术、杂交测序技术3、第二代DNA测序技术:新一代测序技术也称为第二代测序技术,主要包括罗氏454公司的GS FLX测序平台、Illumina公司的SolexaGenomeAnalyzer测序平台和ABI公司的SOL-iD测序平台。
4、第三代DNA测序技术:如生物科学公司(BioScienceCorporation)的HeliScope单分子测序仪(HeliScopeSingleMolecular Sequencer)以及正在研制的太平洋生物科学公司(Pacific Biosciences)的单分子实时DNA测技术[SingleMolecule RealTime (SMRT)DNA sequencingtechnology]和牛津纳米孔技术公司(OxfordNanopore TechnologiesLtd)的纳米孔单分子测序技术等二、Sanger双脱氧链终止法核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时,如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基,只要双脱氧碱基掺入链端,该链就停止延长,链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。
DNA测序技术发展历程分析

DNA测序技术发展历程分析自人类基因组计划于2001年成功完成以来,人们对DNA测序技术的需求不断上升。
随着计算机技术的快速发展和基因组学的迅猛发展,现在我们可以更好地理解基因序列和相关的遗传学信息,这为基于DNA的科学研究和医疗保健提供了更好的手段。
通过DNA测序技术,我们可以对每个基因的序列进行确定并了解它的功能。
下面对DNA测序技术的发展历程进行分析,以便更好地了解它在科学领域的重要性。
1.第一代测序技术第一代测序技术是最早的DNA测序技术,于1977年由Frederick Sanger发明并在之后十年的时间内得到广泛应用。
该技术使用放射性标记来测序,通过检测离子辐射测量DNA测序结果,并用计算机将结果进行排列。
该技术虽然已经过时,但它打下了DNA测序技术的基础。
2.第二代测序技术第二代测序技术于2005年由454 Life Sciences首次提出。
这是一种基于合成二核苷酸来测序的技术,它使用的是非放射性标记物,内部通过可扫描的流式单元检测DNA片段。
这种技术具有速度、准确性和成本效益的优势。
此外,这种技术使测序变得便宜和快捷。
它在生物应用和医学应用中得到了广泛的应用。
3.第三代测序技术随着科技的不断发展,第三代DNA测序技术得以诞生。
这种技术使用第三代单分子测序技术,对DNA进行无需扩增的直接测序,可以避免扩增引入偏差和错误。
第三代测序技术可以为密集覆盖序列的大型基因组提供高质量的序列结果。
此外,它还可以检测基因表达和编码的RNA,以及进行单细胞测序。
通过比较第一代、第二代和第三代测序技术,我们可以发现DNA测序技术在成本、速度、准确性等方面不断得到改进。
这为我们更好地了解DNA序列和研究基因功能提供了更好的机会。
总结DNA测序技术的发展历程是一个不断变革和发展的过程。
自第一代DNA测序技术的发明以来,随着计算机技术和基因组学的迅猛发展,DNA测序技术不断迭代,进行了多次革新。
可以预见,随着科技和生命科学的不断发展,DNA测序技术将得到更进一步的发展。
DNA测序技术的发展和其最新进展

DNA测序技术的发展和其最新进展DNA测序技术是指对DNA分子的序列进行分析和研究的技术手段。
随着科技的不断发展,DNA测序技术也在不断进步和演变。
以下是DNA测序技术的发展历程和最新进展:1. 第一代测序技术(Sanger测序):20世纪70年代发展起来的Sanger测序技术是第一代DNA测序技术。
该技术基于DNA合成链终止原理,通过引入一种特殊的二进制核苷酸(ddNTP)来阻止DNA链延伸,从而确定DNA的序列。
虽然Sanger测序技术准确可靠,但是速度较慢且昂贵。
2. 第二代测序技术(高通量测序):2005年以后,高通量测序技术的发展使DNA测序速度大幅提升,成本显著降低。
高通量测序技术包括454、Illumina、Ion Torrent等多种技术平台。
这些技术利用多个并行反应来进行快速大规模测序,数据生成速度快,适用于基因组学研究和临床检测。
3. 第三代测序技术(单分子测序):第三代测序技术突破了传统测序技术的限制,实现了对单个DNA分子的直接测序。
这些技术包括SMRT(Single-Molecule Real-Time)测序、Nanopore测序等。
第三代测序技术具有高通量、长读长、快速和低成本的特点,可用于对复杂基因组结构、基因突变和转录组的研究。
最新进展:1. 快速测序:DNA测序速度不断提升,目前已经可以在短时间内完成耗时较长的全基因组测序和全外显子组测序。
这样快速测序技术的应用使得大规模人群的基因组信息获取成为可能。
2. 单细胞测序:单细胞测序技术可以对个体细胞进行测序,揭示人体各个细胞类型的基因表达和遗传变异情况。
这种技术的应用有助于揭示疾病发生和发展的机制,并为个体化医疗提供依据。
3. 元基因组学测序:元基因组学是指对微生物群落中所有基因组的研究。
元基因组学测序技术能够高通量地对微生物群落进行测序,帮助研究人员深入了解微生物的多样性和功能。
4. CRISPR技术在测序中的应用:CRISPR基因编辑技术不仅可以用于基因修饰,还可以用于DNA测序和基因组编辑。
一代、二代、三代基因测序技术的发展历史及应用

备注:数据来源于罗氏官网和网络
二代测序的技术平台——Thermo Fisher
ABI/SOLiD技术原理: SOLiD测序技术也是采用油包水的方式进行Emulsion PCR。
不同之处在于SOLiD形成的小水滴要比454系统小得多, 只有1μm大小,用连接酶替代了常用的DNA聚合酶。
二代测序的技术平台——Thermo Fisher
① Ion Torrent测序芯片,是一块半导体芯片; ② 孔即是测序微珠的容器,又同时是一个微型的PH计。 ③ 4种dNTP依次流过Ion芯片; ④ 发生聚合反应产生H+引起PH变化,被传感器记录下来。 每个碱基的检测只需要几秒钟。
二代测序的技术平台——Thermo Fisher
读长
2x150bp 2x150bp 2x300bp
台式测序 2x150bp
台式测序/大规 模
2x150bp
大规模 测序
2x250bp
大规模 测序
2x150bp
测序通量 1.2Gb 7.5Gb
15Gb
120Gb
330Gb
6000Gb
16Tb
最大reads数 4M
25M
25M+
运行时间 9.5-19h 4-24h
4-55h
400M 12-30h
1.1B+ 11-48h
200亿 13-44h
260亿(单) 520亿(双)
13-48h
二代测序的技术平台——华大智造
华大基因先推出了BGISEQ-500桌面化测序系统, 之后又推出: BGISEQ-50、 MGISEQ-200、 MGISEQ-2000均取得了NMPA(原CFDA)认证, 还推出了MGISEQ-T7, 2022年10月推出DNBSEQ-T10x4、DNBSEQ-T7高通量测 序仪。
人类DNA测序的历史与进展

人类DNA测序的历史与进展DNA是每个人细胞中的遗传信息库,由四种不同的碱基组成,分别是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。
随着科技的不断进步,人类对DNA的认知也越来越深入,从而建立了人类DNA测序。
DNA测序是一种技术,通过对DNA序列进行解析,获取人类身体内的遗传信息。
本文将介绍人类DNA测序的历史与进展。
一、DNA测序的历史20世纪初,人们开始研究遗传学,但是要想准确测序DNA是一项极其困难的任务。
1953年,英国科学家沃森和克里克终于找到了DNA的双螺旋结构。
这一发现打开了研究DNA序列的某些途径。
研究人员发现,其实每个基因都可以通过特定的编码转录成蛋白质,而最终形成的蛋白质就可以决定生物的性状。
为了更好地理解生物基因的变异和人类疾病与遗传因子之间的关系,科学家们不断努力探索DNA测序技术。
1964年,美国生化学家哈默尔姆隆成功测定了DNA中的一段序列,实现了人类DNA第一次的测序。
随着实验室技术和生物技术的多次突破和革新,越来越多的实验室能够进行手动测序,而且直到1977年,美国洛斯阿拉莫斯能源公司(The Los Alamos National Laboratory)首次公开了一些基因测序的数据库。
这标志着人类DNA测序领域的第一次进步。
但是,手动测序技术效率低、成本高且容易出错,无法满足大规模的基因研究需求。
幸运的是,随着时间的推移,自动化技术和计算机技术的进步,完全自动化的DNA测序机器于1987年进入实验室。
这促使人类基因测序的工作量和效率得以大大提高,人类DNA测序进入了一个新时代。
二、DNA测序的进展近年来,人类DNA测序的进展快速。
在1987年之后,DNA 测序技术被迅速的发展起来,成为了基因组学研究的核心技术。
在不同的测序技术中,Sanger法被广泛应用,在此基础上发展出了第二代测序技术(Next Generation Sequencing, NGS)。
基因测序的前世今生(一代测序,二代测序,三代测序最详原理)

测序技术的前世今生测序技术的发展历程第一代测序技术(Sanger测序)第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格(Sanger)和考尔森(Coulson)开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆(Maxam)和吉尔伯特(Gilbert)发明的化学法(链降解),在2001年,完成的首个人类基因组图谱就是以改进了的Sanger法为其测序基础。
原理:ddNTP的3’无羟基,其在DNA的合成过程中不能形成磷酸二酯键,因此可以用来中断DNA合成反应,在4个DNA合成反应体系中分别加入一定比例带有放射性同位素标记的ddNTP (分为:ddATP,ddCTP,ddGTP和ddTTP),通过凝胶电泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的DNA序列。
第二代测序技术(NGS)第一代测序技术的主要特点是测序读长可达1000bp,准确性高达99.999%,但其测序成本高,通量低等方面的缺点,严重影响了其真正大规模的应用。
经过不断的技术开发和改进,以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa、Hiseq技术和ABI公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。
其大大降低了测序成本的同时,还大幅提高了测序速度,并且保持了高准确性,以前完成一个人类基因组的测序需要3年时间,而使用二代测序技术则仅仅需要1周,但在序列读长方面比起第一代测序技术则要短很多,大多只有100bp-150bp。
1.illuminaIllumina公司的Solexa和Hiseq是目前全球使用量最大的第二代测序机器,占全球75%以上,以HiSeq系列为主,技术核心原理都是边合成边测序的方法,测序过程主要分为以下4步:步:1)构建DNA测序文库测序文库DNA分子用超声波打断成200bp-500bp长的序列片段,并在两端添加上不同的接头。
2)测序流动槽(flowcell)结构:Flowcell是测序的载体,课吸附DNA文库,每个flowcell有8条lane,每个lane有2镜头课捕获荧光信号。
DNA测序技术的进展与应用

DNA测序技术的进展与应用前言自20世纪中期以来,DNA测序技术在基因研究方面发挥着重要作用。
随着技术的进步和数据处理方法的改进,DNA测序技术的应用已经迅速拓宽。
本文将介绍DNA测序技术的进展和应用。
一、DNA测序技术的发展历史1953年,Watson和Crick成功地解析了DNA的结构,从此,DNA的研究领域得到了革命性的进展。
1977年,芝加哥大学的Frederick Sanger发明了第一代DNA测序技术,以酸解法为基础,通过测量脱氧核糖核酸链终止的方法,实现了对DNA序列的测定。
1990年,国际人类基因组计划的启动标志着DNA测序技术进入了全面发展的阶段。
2005年,454生命科学公司推出了第一款商业化的基因测序仪,使DNA测序技术在基因组学领域中得到了广泛应用。
目前,主要DNA测序技术分为第一代(Sanger测序)、第二代(平台测序)和第三代(单分子测序)三种。
二、DNA测序技术的应用领域1、基因组学基因组学是DNA测序的一个重要领域。
人的基因组大小为3G,而且由几十亿个碱基跨度,由于几乎所有的细胞都含有完整的基因组,因此DNA测序技术被广泛用于基因组研究。
通过DNA测序技术,人们可以更好地理解DNA的组成,并研究哪些基因和基因区域与人类疾病有关。
2、药物研发DNA测序技术不仅可以用于生物医学研究,还可用于药物研发。
通过测序技术,研究人员可以确定每个人基因组上特定的基因序列,从而设计更为有效的药物。
药物可以根据基因型进行个性化定制,从而提高治疗效果,降低不必要的不良反应。
因此,DNA测序技术在药物研发领域的应用前景非常广阔。
3、农业DNA测序技术在农业上应用广泛,例如科学家可以通过DNA测序技术确定某个品种的纯度,从而改善传统育种方法。
DNA测序技术也可以被用于快速地识别有害的农业病原体,以帮助农民更好地保护他们的作物免受病害。
4、犯罪学DNA测序技术在犯罪学中的应用是通过对DNA Evidence的分析。
DNA测序技术的发展与应用

DNA测序技术的发展与应用随着科学技术的进步,DNA测序技术得到了极大的发展与应用。
本文将从技术的发展历程、应用领域以及前景展望三个方面进行论述,以全面介绍DNA测序技术的现状与未来。
一、技术的发展历程DNA测序技术的源头可以追溯到20世纪70年代初,当时人们使用化学试剂和放射性同位素对DNA进行标记和分析。
随着科学家不断探索和创新,Sanger法测序技术于1977年问世,被认为是第一代DNA测序技术,该技术通过DNA链延伸的方式进行测序,奠定了现代DNA测序技术的基础。
1996年,随着第一次完整人类基因组的测序完成,DNA测序技术进入了第二代测序时代。
这一时期,高通量测序技术的快速发展使DNA测序的成本大幅度降低,测序速度大幅提升。
近年来,第三代测序技术的出现,如单分子测序技术和纳米孔测序技术,以及人工智能的运用,使得DNA测序技术变得更加高效、精准和经济。
二、应用领域DNA测序技术的发展使得其在各个领域都得到了广泛应用。
以下是几个典型的领域:1. 医学研究:DNA测序技术在医学研究中有着重要的应用,尤其是在个体化医疗领域。
通过测序个体基因组,医生可以根据患者的基因信息制定针对性的治疗方案,提高治疗效果。
此外,DNA测序技术还可以用于疾病的早期诊断和预防,为患者提供更加精准的医疗服务。
2. 农业领域:DNA测序技术在农业领域具有广阔的前景。
通过测序作物的基因组,可以改良和培育优良的品种,提高产量和抗病性。
同时,DNA测序技术还可以用于动物遗传育种,帮助农民提高养殖效益。
3. 犯罪侦破:DNA测序技术在犯罪侦破中发挥着重要的作用。
通过对物证中的DNA进行测序,可以确定嫌疑人的身份,提供可靠的证据,促使案件的侦破和司法公正。
4. 生态学研究:DNA测序技术在生态学研究中也有广泛应用。
通过对环境中的DNA进行测序,可以追踪物种的分布和演化,调查生物多样性,了解生态系统的结构和功能。
三、前景展望随着DNA测序技术的不断创新和改进,其应用前景十分广阔。
DNA测序技术的发展历程

DNA测序技术的发展历程随着科学技术的飞速发展,DNA测序技术也得以不断完善和进步。
DNA测序技术是指通过分析DNA序列来确定DNA分子结构的一种技术。
它在医学、生物学、生态学、农业以及环境研究等领域都有非常广泛的应用。
下面将从DNA测序技术的发展历程、技术原理、应用前景以及挑战等方面来探讨这一领域的发展。
DNA测序技术的发展历程DNA测序技术的发展可以追溯到上世纪60年代。
1967年,Fred Sanger发明了锁定蛋白法(Chain terminator method),并获得了诺贝尔奖。
这一方法通过加入慢镜头荧光染料会导致链终止,从而定量检测不同碱基的含量,实现DNA 序列的测定。
1986年,Jeffery Bonner等人提出了基于聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出来的短碎片或PCR扩增产物,利用还原性末端标记的技术(Southern blotting)来对其进行检测和定序,获得了更多的DNA序列信息。
1987年,Takashi Okazaki 等人在紫色球菌细胞膜上合成了线性序列,这种方法被称为“快速的化学测序”。
到了1990年代,微量凝胶板凝胶电泳技术利用扩增产物,实现了快速、自动化的基因测序。
它有很多的优势,能够测定更多的DNA序列并且消除了传统电泳的限制。
在2000年之后,随着二代测序技术的引入,全基因组测序变得更加便捷和快速。
二代测序以其高通量、极低的测序成本、快速等优势,使得整个基因测序工作快速进入大规模、高效、低价位的时代。
技术原理DNA测序技术主要基于四种不同的原理:锁定蛋白法(Sanger方法)、基于聚合酶链反应PCR 的测序(PYROSEQ、GOLDSEQ 等)、第二代测序(非衬底测序)和第三代测序(实时测序/纳米孔测序/单分子测序)。
其中,最早发明的锁定蛋白法,也是目前广泛使用的测序方法之一。
其基本原理是通过加入四种不同的二茶酰胺标记荧光核苷酸分别对A/T/G/C其他塑料进行标记,并进行扩增、分离和检测。
DNA测序技术的突破与发展

DNA测序技术的突破与发展DNA测序技术是生命科学领域的重要分支,随着技术的不断发展改进,目前已经成为生命科学的基石之一,促进了人类对基因和生命的了解。
在这篇文章中,我们将探讨DNA测序技术的突破与发展。
DNA测序技术的发展历史DNA测序技术的起源可以追溯到20世纪50年代,当时科学家们开始尝试分离DNA,并研究其结构和功能。
1977年,Sanger等人发现DNA序列测定技术,该技术被称为“Sanger测序技术”,是第一种成功测定DNA序列的方法,该方法极大地促进了DNA测序技术的发展。
1986年,Maxam和Gilbert发明了另一种方法,称为“Maxam-Gilbert测序技术”,该技术也称为化学测序方法。
不同于Sanger测序技术,Maxam-Gilbert测序技术依赖于化学反应来识别DNA序列。
1990年代以后,DNA测序技术迎来快速发展。
新的技术启发了计算机、生物医学和其他相关领域的进步,从而促进了我们对基因、遗传和人类健康的了解。
DNA测序技术的技术突破随着技术的不断改进,人们对DNA测序技术的应用也越来越广泛,下面我们来看看一些技术突破。
1. 高通量测序技术高通量测序技术是DNA测序技术领域中最重要的突破之一。
它可以在短时间内测定大量的DNA序列,这让科学家们可以更快速地了解和研究基因、生物进化和人类健康等方面。
高通量测序技术主要包括两种技术:第一种是基于“桥式PCR”的技术,它能够在一次实验中同时测量上百万个初始DNA分子;第二种是基于“单分子测序”的技术,它能够在分子水平上测定DNA序列,从而可以大大减小实验误差。
2. 精准医学DNA测序技术的快速发展让人们可以更加深入地了解基因和人类健康。
现在,人们利用DNA测序技术来研究疾病发病机制,预测患病风险,制定个性化诊疗方案,这被称为精准医学。
例如,肿瘤个性化医疗就是利用DNA测序技术来分析肿瘤组织中的基因变异,从而制定个性化治疗方案。
DNA测序技术的发展和应用

DNA测序技术的发展和应用DNA测序技术是指利用先进的生物技术和化学技术对生物体内的基因组DNA进行高通量的测序和分析。
该技术的快速发展和广泛应用,为基因组学、生物遗传学、医学、农业、环境科学、工业和生产等领域的研究和应用提供了关键的技术支持和手段。
本文将介绍DNA测序技术的发展历程和应用领域。
DNA测序技术的发展DNA测序技术的发展可以追溯到上个世纪五六十年代。
那个时候,科学家们只能手工测序少量的DNA序列。
后来,Sanger发明了一种基于化学法的测序方法,开创了测序技术的新篇章。
1977年,Sanger团队发表了第一个完全基因组测序,标志着DNA测序技术进入了大规模测序的时代。
二十一世纪以来,新一代测序技术的快速发展,使得DNA测序速度和成本都得到了极大的提升,从而在更广泛的领域中得到应用。
新一代测序技术主要包括Illumina、Ion Torrent、PacBio等。
这些技术的实现方式类似,但互有优劣。
其中以Illumina技术为代表,其革命性的特点是高通量、高速度、高精度以及低成本,已成为目前广泛应用的主流DNA测序平台。
DNA测序技术的应用1. 基因组学领域基因组学是生物学研究中一个重要的领域。
基因组测序技术的快速发展,使得基因组学的研究和应用受益匪浅。
通过基因组测序,科学家们可以更深入地了解生物体内的基因组结构和功能,挖掘出更多有价值的基因信息。
同时,基因组测序技术也为新药研发和治疗疾病提供了重要的技术支持。
2. 生物遗传学领域DNA测序技术在生物遗传学领域也有广泛应用。
通过测定个体基因组序列的差异,科学家们可以深入了解物种内部的遗传多样性特征,挖掘出有价值的遗传特征。
同时,基因组测序技术还为诸如遗传病的防治和病毒的追踪和治疗提供了支持。
3. 环境科学和农业领域DNA测序技术在环境科学和农业领域的应用也日益增多。
近年来,环境DNA测序技术被广泛应用于各类环境监测中,如海洋生态、水生态等。
DNA测序发展历程及测序流程

DNA测序发展历程及测序流程1977年,Sanger等人发展建立起来的一种DNA测序方法。
基本原理:双脱氧链末端终止法双脱氧链末端终止法通过使用链终止剂—类似于正常dNTP的2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),将延伸的DNA链特异性地终止。
其反应体系也包括单链模板、引物、4种dNTP 和DNA聚合酶。
共分四组,每组按一定比例加入一种 (ddNTP),它能随机渗入合成的DNA 链,一旦渗入合成即终止,于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸,可以从放射自显影带上直接阅读DNA的核苷酸序列。
双脱氧链末端终止法测序基本原理示意双脱氧链末端终止法特点双脱氧链末端终止法不仅具有化学测序法的优点,而且更适用于大规模的测序。
但它要求有一个纯净的单链DNA模板和一个合成反应所需的特异性的引物。
因此,早期的工作仅局限于单链噬菌体为模板,若干个不同的特定限制性内切酶酶解片段为引物,在模板链的不同部位引导合成,从而确定出噬菌体DNA的核酸序列。
然而,对于大量存在着的天然双链DNA 分子,因没有良好的制备产量和质量高的分离链的技术,而限制了双脱氧链末端终止法的应用程度。
经典的双脱氧链末端终止法测序技术的改进标记物方面的改进:由于放射性同位素对人体的危害,许多实验室开始利用非放射性物质来取代放射性同位素。
如生物素、地高辛、银染法、荧光标记物等化学发光物生物素、地高辛、银染法、荧光标记物等化学发光物。
在双脱氧法测序时,它们作为标记物,示踪测序反应的产物,最后通过酶显色反应或者荧光信号显示出测序的结果。
这些方法比传统的放射性同位素方法检测容易、安全、快速、费用也低。
经典的双脱氧链末端终止法测序技术的改进电泳方法的改进: 电泳方法的改进主要采用毛细管电泳法。
毛细管电泳是被分离物质在毛细管中的电泳。
1992年,Matnies等首先提出陈列毛细管电泳法,采用激光聚焦荧光扫描检测装置。
25只毛细管并列电泳,每只毛细管在1.5小时内可读出350bp。
DNA测序技术发展简史

DNA测序技术发展简史摘要:本文回顾了1965年一来DNA测序技术的发展,重点介绍了双脱氧链终止测序法及Maxam-Gillbert DNA化学降解法的出现,以及其他的一些相关技术的发展,以简练清晰的脉络梳理了DNA测序技术的发展史。
关键词:DNA测序;双脱氧链终止测序法;Maxam-Gillbert DNA化学降解法l953年,Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型以后,人们就开始探索研究DNA 一级结构的方法。
1965年,美国Cornell大学以Rober Holley为首的科学家小组,第一次完成了长度为75个核苦酸的酵母丙氨酸tRNA的全序列测定并将结果发表在Science杂志上。
其办法是利用各种RNA酶把tRNA降解成寡核苷酸,经分离纯化之后,再分别测定这些寡核苷酸短片段的核苷酸顺序掀开了DNA测序技术研究的序幕[1]。
但那时由于没有找到分别降解四种脱氧核糖核酸的专一酶,只能通过测定RNA 的序列来推测DNA的序列,即先将RNA用酸水解或外切酶降解,再经双向电泳同系层析将其分开(小片段重叠法)。
1971年,华裔分子生物学家吴瑞博士(Dr.Ray Wu)在1968年独创性地设计了一种崭新的引物-延伸测序策略,发展出了测定DNA核苷酸序列的第一个方法,提高了DNA序列分析的速度,并于1971年首次成功地测定了λ噬菌体两个粘性末端的完整序列[2]。
l977年,英国剑桥大学分子生物学实验室的Fred Sanger领导的研究小组在吴瑞博士的基础上分别在Nature和PNAS发表文章,提出DNA聚合酶的双脱氧链终止原理测定核苷酸序列的方法,Sanger作为世界上第一个解决DNA测序的科学家,再一次荣获诺贝尔奖(1980年)[3]。
DNA双脱氧链终止测序法,也称酶法或末端终止法,是利用2’,3’-双脱氧三磷酸核苷(2’,3’-ddNTP或简称ddNTP)来终止DNA的复制反应。
ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其5’-磷酸基团掺入到正在增长的DNA链中,但由于ddNTP在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基,它们不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键(由M.R.Atkinson等人于1969年发现),从而中断延伸反应。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
DNA测序技术发展简史
摘要:本文回顾了1965年一来DNA测序技术的发展,重点介绍了双脱氧链终止测序法及Maxam-Gillbert DNA化学降解法的出现,以及其他的一些相关技术的发展,以简练清晰的脉络梳理了DNA测序技术的发展史。
关键词:DNA测序;双脱氧链终止测序法;Maxam-Gillbert DNA化学降解法
l953年,Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型以后,人们就开始探索研究DNA 一级结构的方法。
1965年,美国Cornell大学以Rober Holley为首的科学家小组,第一次完成了长度为75个核苦酸的酵母丙氨酸tRNA的全序列测定并将结果发表在Science杂志上。
其办法是利用各种RNA酶把tRNA降解成寡核苷酸,经分离纯化之后,再分别测定这些寡核苷酸短片段的核苷酸顺序掀开了DNA测序技术研究的序幕[1]。
但那时由于没有找到分别降解四种脱氧核糖核酸的专一酶,只能通过测定RNA 的序列来推测DNA的序列,即先将RNA用酸水解或外切酶降解,再经双向电泳同系层析将其分开(小片段重叠法)。
1971年,华裔分子生物学家吴瑞博士(Dr.Ray Wu)在1968年独创性地设计了一种崭新的引物-延伸测序策略,发展出了测定DNA核苷酸序列的第一个方法,提高了DNA序列分析的速度,并于1971年首次成功地测定了λ噬菌体两个粘性末端的完整序列[2]。
l977年,英国剑桥大学分子生物学实验室的Fred Sanger领导的研究小组在吴瑞博士的基础上分别在Nature和PNAS发表文章,提出DNA聚合酶的双脱氧链终止原理测定核苷酸序列的方法,Sanger作为世界上第一个解决DNA测序的科学家,再一次荣获诺贝尔奖(1980年)[3]。
DNA双脱氧链终止测序法,也称酶法或末端终止法,是利用2’,3’-双脱氧三磷酸核苷(2’,3’-ddNTP或简称ddNTP)来终止DNA的复制反应。
ddNTP可以在DNA聚合酶作用下通过其5’-磷酸基团掺入到正在增长的DNA链中,但由于ddNTP在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基,它们不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键(由M.R.Atkinson等人于1969年发现),从而中断延伸反应。
该法将待测DNA样品分成四组,在每组DNA合成反应混合物的四种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP,这样一来,链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止展开竞争,最终得到反应一系列的核苷酸链,其长度取决于从用以起始DNA合成的引物末端到出现过早链终止的位置之间的距离,由于这四组独立的酶反应中分别采用四种不同的ddNTP,将产生四组分别终止于模板链的每一个A、G、C或T的位置上的寡核苷酸,使用变性测序凝胶电泳分析这四组反应的产物,即可从放射自显影片上直接读出DNA的序列[4]。
而美国哈佛的Alan Maxam和Walter Gilbert领导的研究小组也几乎同时发明出DNA序列测定方法——Maxam-Gillbert DNA化学降解法测序,其基本原理是用特异的化学试剂修饰DNA分子中的不同碱基,然后用哌啶切断反应碱基的多核苷酸链。
该法设计四组特异的反应:①G反应,用硫酸二甲酯使鸟嘌呤上的N7甲基化,加热引起甲基化鸟嘌呤脱落,导致多核苷酸链可在该处断裂;②G+A反应,用甲酸使A和G嘌呤环上的N原子质子化,从而使其糖苷键变得不稳定,再用哌啶使键断裂;③T+C反应,用肼使T和C的嘧啶环断裂,再用哌啶除去碱基;④C反应,在有盐存在时,只有C与肼反应,并被哌啶除去。
这样一来,同一个末端标记的DNA片段在四组互相独立的化学反应中分别得到部分降解,每一组反应特异地针对某一种或某一类碱基,生成四组放射性标记的分子,从共同起点(放射性标记末端)延续到发生化学降解的位点,每组混合物中均含有长短不一的DNA分子,其长度取决于该组反应所针对的碱基在原DNA全片段上的位置。
最后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离此后组产物,再从放射自显影片上即可读出序列[5]。
早期,用引物合成进行DNA序列测都需要将高分子量的DNA分子通过核酸内切限制酶消化降解成一组具一定长度的限制片段后再用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝狡作电泳分离纯化,并从中抽取出DNA片段以供进一步的序列分析使用。
为将这些降解的DNA片段,按其原来的顺序“拼排”起来,至少还需要用一种(有时往往是数种)其它的核酸内切限制酶对同种大分子量的DNA作酶切消化并进行电泳纯化和序列分析。
这无疑既花费大量时间又需要大量金钱(商品提供的核酸内切限制酶的价格十分昂贵),同时为保证能够获得所有的限制片段,必需制备足够数量的DNA,该过程要用不同浓度的凝胶进行电泳并纯化又加剧了DNA的丢失和损伤的可能。
后来采用DNA分子克隆的方法解决了该问题,将不同限制酶消化切割的DNA限制片段随机地克隆到一种M13mp系列载体分子上以获得理想的单链DNA模板。
1891年,J.messing等人该进了其中所使用的寡核苷酸引物,降低了DNA 限制片段与M13mp系列载体分子其他位点的同源性,使采用蓝白斑筛选法对转化菌落的筛选更有效。
1858年,E.Y.Chen和P.H.seebury在DNA双脱氧链终止测序法的基础上发展出Sanger双脱氧链终止-pUC体系DNA序列分析法,首次在体外将待测的DNA片段与pBR332质粒载体或pUC系列的质粒载体分子重组后转化给大肠杆菌JM83菌株,将所得的转化反应物涂布在补加有X-gal及IPTG化学试剂的选择性培养基平板上,采用蓝白斑筛选法选出转化菌落,制备得到含有DNA克隆片段的双链质粒DNA,使用碱变性后可直接作为模板进行序列分析,而无须克隆到M13mp载体分子上,大大地缩短了模板DNA的获得时间[6]。
随着计算机软件技术(特别是计算机图象识别技术)、仪器制造和分子生物学研究的迅速发展,使用了荧光分子标记代替传统的32P或35S同位素标记,测序由手动向自动发展。
1986年,W.anoorge等人在前人工作的基础上,设计出以DNA链末端合成终止法原理的DNA自动荧光测序仪[7],逐渐成为DNA序列分析的主流,它所采用的自动荧光DNA测序技术是对Sanger双脱氧链终止法测序的改进:用四种不同颜色的荧光染料标记四种双脱氧核苷酸,同时进行四种链终止反应,反应产物在变性电泳凝胶的同一个泳道上进行分离。
对凝胶的结果进行分析时,带有不同染料标记的每一种产物将被激发而发出不同波长的光。
发射光经衍射光栅分解后,用电荷偶联仪(a charge coupled device,CCD)检测,然后通过电脑解译[8]。
20世纪90年代后期,以MD公司的Mega BACE和PE公司的ABI 3700为代表的毛细管电泳仪问世,这些集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳后,极大地提高了序列测定的产出率,一天可完成6-8轮序列测定,每轮可测定96-384个样品,自动化的程度也得到了提高[9]。
为提高分析效率,1992年美国的Mathies等人首先提出了阵列毛细管电泳的新方法,采用激光聚焦荧光扫描装置,25只毛细管并列电泳,每只毛细管在1.5小时内可读出350bp,DNA 序列分析效率可达600bp/h。
后来,日本的Kambara(1994年)、美国的Yeung又分别对此进一步完善[10]。
现今,高通量的新一代DNA测序技术进一步发展出来,通过将片断化的基因组DNA 两侧连上接头并运用不同的步骤来产生几百万个空间固定的PCR克隆阵列(每个克隆由单个文库片段的多个拷贝组成),从而能够大规模地平行进行引物杂交、酶延伸反应及荧光标记的成像检测,再经过计算机分析由DNA序列延伸和成像的持续反复确定的测序阅读片段的相邻性就可获得完整DNA序列信息。
目前,市场上新一代测序仪的测序原理主要有四种:使用合成法测序的454(焦磷酸测序)和Solexa,使用连接法测序SOLID和Polonator。
参考书目:
[1]《基因工程原理第二版(上册)》,吴乃虎,64页。
[2]《生物技术原理与实验》,徐小静,张少斌,王俊丽主编,59页。
[3]《高等学校教材生物工程概论》,陶兴无主编,60页。
[4]《生物技术原理与实验》,徐小静,张少斌,王俊丽主编,60页。
[5]《生物技术原理与实验》,徐小静,张少斌,王俊丽主编,64-65页。
[6]《基因工程原理第二版(上册)》,吴乃虎主编,69页。
[7]《基因克隆技术在制药中的应用》,陈汝德编,126页。
[8]《生物技术原理与实验》,徐小静,张少斌,王俊丽主编,65页
[9]《医学分子生物学》,张钦宪何丽娅李平法主编,257页。
[10]《医学分子生物学》,张钦宪何丽娅李平法主编,259页。