miRNA及其inhibitor转染方法

miRNA及其inhibitor转染方法

1 对mimics、mimics control、inhibitor、inhibitor control进行稀释和分装（终浓度为100 nmol/μl）。

（1）Mimics加入250 μl DEPC处理的水；

（2）Mimics control加入125 μl DEPC处理的水；

（3）inhibitor加入250 μl DEPC处理的水；

（4）inhibitor control加入125 μl DEPC处理的水；

对以上进行分装：mimics 20 μl每管，mimics control 10 μl每管，inhibitor 20 μl每管，inhibitor control 10 μl每管。

分装后于－80 ℃保存。

2经过调整，细胞状态较好。晚上铺细胞，4个60 mm培养皿，每皿×105细胞。做好标记，（1）为mimics（2）为mimics control（3）为inhibitor（4）为inhibitor control。

3 上午八点对昨天晚上的细胞进行转染。

（1）a 用500 μl opti-MEM稀释20 μl mimics，作用5 min

b 用500 μl opti-MEM稀释20 μl mimics control，作用5 min

c 用500 μl opti-MEM稀释20 μl inhibitor，作用5 min

d 用500 μl opti-MEM稀释20 μl inhibitor control，作用5 min （2）a 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min

b用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min

c 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min

d 用500 μl opti-MEM稀释10 μl lip 2000，作用5 min

（3）分别将（1）、（2）对应的a、b、c、d混合，轻轻吹打均匀后室温作用20 min。（4）用无血清的DMEM将培养皿中的细胞清晰干净，至少2次

（5）向培养皿中加入3 ml无血清DMEM

（6）向培养皿中加入a和b的混合液（成点状均匀加入）

（7）放入细胞培养箱作用6 h。

4 下午三点对转染细胞进行换液：弃去无血清DMEM后每个60 mm培养皿加入4 ml 含10%血清的DMEM，18 h后接毒。