《疟原虫的镜检技术》PPT课件
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《疟原虫常识与镜检》PPT课件
胀破肝C释放
雌蚊吸血，经皮 速发型子孢子
肤侵入人体
裂殖体
裂殖子
子孢子 移入肝细胞
孢子
迟发型子孢子
某些因素刺激
侵入 血流
进入 RBC
Hale Waihona Puke 增殖卵囊〔约6-12个月 休眠〕 RBC外期P.V 8天 P.f 5天
环状体
穿过 在胃 胃壁 壁下
动合子
合子
配子
自然气温
16℃-30℃ 蚊体内
外 潜
P.V 8-9天 伏
P.f 10天 期
P.m)
卵形疟原虫
卵形疟 48h
(Plasmodium ovale P.o)
温带
普遍感染 流行最广
热带 海南、云 亚热带 南、贵州
热带 少见
热带 罕见
目前，我省只有间日疟和恶性疟。 卫生部要求： 我省应在2021年消除疟疾！
通过按蚊叮咬进入人体
二.疟原虫生活史概述
遗传基因多态性分型 无性裂体生殖
大滋养体(P.v.T)
• 经8～10小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。 • 出现黄褐色的疟色素。 • 红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的
小点，称薛氏小点
成熟裂殖体〔P.v.S〕
红细胞： 胀大，褪色，可见薛氏小点。 大 小： 个体较大。 胞浆和核：裂殖子12~24个平均16个，排
内潜伏期
RBC P.V 48h P.f 3648h
侵
入
内
新
期
的
R
B
裂体 增殖
大滋养体
早期裂殖体
结合
C
雌配子 雌蚊吸血 雌配子体 雄配子 进入蚊胃 雄配子体
经过几次 裂殖子 胀破RBC成熟裂殖体
疟原虫镜检PPT课件
薄血膜疟原虫形态
间 日 疟 未 成 熟 裂 殖 体
第29页/共94页
薄血膜疟原虫形态
恶性疟未成熟裂殖 体
红细胞：大小正常，颜 色较深，可有茂氏小点。
大小： 较小。 胞浆： 规则，圆形或
卵圆形，兰色。 核： 分裂为二个以
上，红色。 色素： 黄褐色颗粒，
常集成黑褐团块。
第30页/共94页
薄血膜中裂殖体前期形态特征
第17页/共94页
薄血膜中常见的血液成分
中 性 白 细 胞
血小板
酸性球
大单核球
淋巴球
第18页/共94页
红血球
薄血膜中被疟原虫寄生 红血球形态特征
• 间日疟原虫被寄生红细胞 • 恶性疟原虫被寄生红细胞
• 胀大色浅，薛氏点鲜红色， • 大小正常，色稍紫；茂氏
细小，数多
点紫红色，粗大，数少
第19页/共94页
的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。有 时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。
第10页/共94页
三、疟原虫形态特征
• ㈡ 细胞浆 • 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育到
大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。三日疟原虫阿米巴活动不显 著。
第8页/共94页
红细胞内期 4
• 间日疟则有长潜伏期与短潜伏期两种，短者11-25天，平均14天；长者6-9个月， 最长者可达15个月。疟原虫在红细胞内按照生长、发育、繁殖的阶段不同而分 为滋养体、裂殖体和配子体3个时期或阶段，各期疟原虫的形态变化很大。
第9页/共94页
三、疟原虫形态特征
疟原虫的基本结构 •㈠ 核 • 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核
疟原虫镜检技术(2012)_PPT课件
6.雌配子体：小于正常红细胞，圆形。一 个核，较小，深红色，位于一侧。胞质 深蓝色，色素深褐色，均匀散在分布。
7.雄配子体：体积小于正常红细胞，圆形。 一个核，较大，淡红色，位于中央。胞 质淡蓝色，色素深褐色，均匀散在分布。
卵形疟原虫
卵形疟原虫红细胞外期发育约 需9天，自感染后最早约第10 天始能在周围血液中查到疟原 虫。
虫体:不超过被寄生红细胞3/4 核:一个，周围无明显不染色带。 浆:边缘不整齐，多有空泡。 色素:颗粒较少较细,分布不均匀。
恶性疟原虫
●恶性疟原虫红细胞外期发育约需要5天，大约感染 后第6天，在周围血液中查见疟原虫。
●恶性疟原虫在红细胞内期发育最初24小时内，一 般能在周围血液中查到环状体，亦可能查到大滋 养体。
●24小时后聚集在肝、脾、脑、骨髓等内脏的毛细 血管内发育进行裂体生殖。恶性疟原虫裂体生殖 周期36～48小时。
●人自然感染恶性疟原虫后，大约经过10天（周围 血液内查到大滋养体3天后）始能在周围血液中查 到配子体。
1.薄血膜恶性疟原虫 环状体
红血球：大小正常,颜 色较深。
大小:约为红细胞直径 1/5~1/6。
薄血膜卵形疟原虫形态
1.被寄生红细胞变化：正常或稍胀大， 卵圆形或边缘呈伞矢状，褪色。薛 氏点粗大、数目较多。
2.环状体:体积中等，一个核，胞质较 粗厚；无疟色素。
3.大滋养体：体积较小，一个核，胞 质卵圆，空泡不显著。色素棕黄色， 较粗大。
薄血膜卵形疟原虫形态
4.未成熟裂殖体：体积较小，核2个以 上，胞质圆形或卵圆形，空泡消失。 色素棕黄色，分布不匀。
薄血膜三日疟原虫形态
4.未成熟裂殖体：体积较小，核2个 以上，包质圆形，空泡消失。色素 深褐色，分布不匀。
7.雄配子体：体积小于正常红细胞，圆形。 一个核，较大，淡红色，位于中央。胞 质淡蓝色，色素深褐色，均匀散在分布。
卵形疟原虫
卵形疟原虫红细胞外期发育约 需9天，自感染后最早约第10 天始能在周围血液中查到疟原 虫。
虫体:不超过被寄生红细胞3/4 核:一个，周围无明显不染色带。 浆:边缘不整齐，多有空泡。 色素:颗粒较少较细,分布不均匀。
恶性疟原虫
●恶性疟原虫红细胞外期发育约需要5天，大约感染 后第6天，在周围血液中查见疟原虫。
●恶性疟原虫在红细胞内期发育最初24小时内，一 般能在周围血液中查到环状体，亦可能查到大滋 养体。
●24小时后聚集在肝、脾、脑、骨髓等内脏的毛细 血管内发育进行裂体生殖。恶性疟原虫裂体生殖 周期36～48小时。
●人自然感染恶性疟原虫后，大约经过10天（周围 血液内查到大滋养体3天后）始能在周围血液中查 到配子体。
1.薄血膜恶性疟原虫 环状体
红血球：大小正常,颜 色较深。
大小:约为红细胞直径 1/5~1/6。
薄血膜卵形疟原虫形态
1.被寄生红细胞变化：正常或稍胀大， 卵圆形或边缘呈伞矢状，褪色。薛 氏点粗大、数目较多。
2.环状体:体积中等，一个核，胞质较 粗厚；无疟色素。
3.大滋养体：体积较小，一个核，胞 质卵圆，空泡不显著。色素棕黄色， 较粗大。
薄血膜卵形疟原虫形态
4.未成熟裂殖体：体积较小，核2个以 上，胞质圆形或卵圆形，空泡消失。 色素棕黄色，分布不匀。
薄血膜三日疟原虫形态
4.未成熟裂殖体：体积较小，核2个 以上，包质圆形，空泡消失。色素 深褐色，分布不匀。
疟原虫镜检技术技术和要求 (王波)_PPT课件
一、镜检疟原虫的重要性
及时发现病人； 开展规范治疗。
高超的镜检能力，不仅对于疟疾防控工作提供 了技术支撑，也为疟疾消除工作提供了科学依据。
二、概述
疟原虫有149种，自然界感染人体的疟原虫只 有四种：即间日疟（Pv）、恶性疟（Pf）、三日 疟（Pm）、卵形疟（Po）四种。
三、疟原虫生活史
1、红细胞外期 2、红细胞内期 3、配子生殖 4、孢子增殖
4、血片需要制作厚、薄血膜。 5、镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型，可及时
联系所在辖区疾控中心，进行血片复核） 6、一的制作（具体方法不做介绍）
制作血片的注意事项
血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细胞沉 在一边，可使厚薄不匀。
制成的血膜须完全干燥后，始可进行固定及染色否 则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色 时脱落，而常现网状的背景；反之，血片搁置过久 则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋白凝固，也不能 使用，不利于镜检。
（二）采血的部位
以耳垂采血为主。 如使用抗凝静脉血，制作的血片容易造成厚血膜
的脱落。
（三）采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成 边缘光滑之圆形，直径约0.8—1.0厘米左右。
薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约 2厘米。
（五）血片的染色
吉氏染液 保存时间长，染色时间长
瑞氏染液 保存时间短，染色时间短
瑞吉氏
六、镜检工作的一些要求
1、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。
2、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、 阳性片保存待复核。
3、每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。
及时发现病人； 开展规范治疗。
高超的镜检能力，不仅对于疟疾防控工作提供 了技术支撑，也为疟疾消除工作提供了科学依据。
二、概述
疟原虫有149种，自然界感染人体的疟原虫只 有四种：即间日疟（Pv）、恶性疟（Pf）、三日 疟（Pm）、卵形疟（Po）四种。
三、疟原虫生活史
1、红细胞外期 2、红细胞内期 3、配子生殖 4、孢子增殖
4、血片需要制作厚、薄血膜。 5、镜检结果需分型。（如果无法确定疟原虫类型，可及时
联系所在辖区疾控中心，进行血片复核） 6、一的制作（具体方法不做介绍）
制作血片的注意事项
血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细胞沉 在一边，可使厚薄不匀。
制成的血膜须完全干燥后，始可进行固定及染色否 则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色 时脱落，而常现网状的背景；反之，血片搁置过久 则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋白凝固，也不能 使用，不利于镜检。
（二）采血的部位
以耳垂采血为主。 如使用抗凝静脉血，制作的血片容易造成厚血膜
的脱落。
（三）采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)，涂成 边缘光滑之圆形，直径约0.8—1.0厘米左右。
薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约 2厘米。
（五）血片的染色
吉氏染液 保存时间长，染色时间长
瑞氏染液 保存时间短，染色时间短
瑞吉氏
六、镜检工作的一些要求
1、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。
2、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、 阳性片保存待复核。
3、每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。
疟疾镜检的实验室技术ppt课件
69、在一条长240米的水渠的一边植树，每隔3米植树一棵，如果两头都植树，共植树 () A.81 B.80 C.79
现代化新城的典范。澳大利亚堪培拉除了总理府保留一道围墙外，整座城市不见第二 道围墙。新加坡法律规定，有花园的住宅不允许筑围墙，让花木供路人欣赏，可予减 缴房地产税。
这段文字意在强调： A.中国与外国围墙的区别 B.中国城市建设的理念落后于外国 C.建筑绿色围墙是世界城市建设的主流趋势 D.国外著名城市都实现了人与环境和谐共存
• 亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻 片面磨毛，以致不堪使用。
疟疾镜检的实验室技术
2
采血的部位和方法
• 以耳垂采血为主。 • 以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧
捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一 滴血不必擦掉，即可应用。（若由指头取血则受检者痛 楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。）
141、小张和小赵从事同样的工作，小张的效率是小赵的1.5倍。某日小张工作几小时 后小赵开始工作，小赵工作了1小时之后，小张已完成的工作量正好是小赵的9倍。再 过几个小时，小张已完成的工作量正好是小赵的4倍? A.1 B.1.5 C.2 D.3
142、诉讼：法庭 A.运动：比赛 B.报告：领导 C.教学：课堂 D.结婚：登记
疟疾镜检的实验室技术
8
血片的制作1
• 玻片的执持方法： 无论在拭擦玻片，制作血片或染色血片时，手指 仅可夹持玻片两侧缘，切匆触及玻片之上下面以免 手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜易 于脱落
疟疾镜检的实验室技术
9
B.1416 C.4720 D.20295
67、事实上，延期偿债不仅无助于真正缓解地方政府债务风险，在大多数情况下反而 是埋下了威力更为巨大的“定时炸弹”。一旦“借新还旧”成为地方政府的常规做法，后果 更是不堪设想。有鉴于此，中央政府应及时采取强硬手段，制止地方政府继续大唱“拖 字诀”；有关部委也应积极考虑借助资本市场消化地方政府公共债务，以债务证券化等 方式引入民间资本，化解债务风险；地方政府也应适当削减其经济建设职能，实现财 权、事权对等，从根本上消除负债过度的生存土壤。
现代化新城的典范。澳大利亚堪培拉除了总理府保留一道围墙外，整座城市不见第二 道围墙。新加坡法律规定，有花园的住宅不允许筑围墙，让花木供路人欣赏，可予减 缴房地产税。
这段文字意在强调： A.中国与外国围墙的区别 B.中国城市建设的理念落后于外国 C.建筑绿色围墙是世界城市建设的主流趋势 D.国外著名城市都实现了人与环境和谐共存
• 亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻 片面磨毛，以致不堪使用。
疟疾镜检的实验室技术
2
采血的部位和方法
• 以耳垂采血为主。 • 以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧
捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一 滴血不必擦掉，即可应用。（若由指头取血则受检者痛 楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。）
141、小张和小赵从事同样的工作，小张的效率是小赵的1.5倍。某日小张工作几小时 后小赵开始工作，小赵工作了1小时之后，小张已完成的工作量正好是小赵的9倍。再 过几个小时，小张已完成的工作量正好是小赵的4倍? A.1 B.1.5 C.2 D.3
142、诉讼：法庭 A.运动：比赛 B.报告：领导 C.教学：课堂 D.结婚：登记
疟疾镜检的实验室技术
8
血片的制作1
• 玻片的执持方法： 无论在拭擦玻片，制作血片或染色血片时，手指 仅可夹持玻片两侧缘，切匆触及玻片之上下面以免 手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜易 于脱落
疟疾镜检的实验室技术
9
B.1416 C.4720 D.20295
67、事实上，延期偿债不仅无助于真正缓解地方政府债务风险，在大多数情况下反而 是埋下了威力更为巨大的“定时炸弹”。一旦“借新还旧”成为地方政府的常规做法，后果 更是不堪设想。有鉴于此，中央政府应及时采取强硬手段，制止地方政府继续大唱“拖 字诀”；有关部委也应积极考虑借助资本市场消化地方政府公共债务，以债务证券化等 方式引入民间资本，化解债务风险；地方政府也应适当削减其经济建设职能，实现财 权、事权对等，从根本上消除负债过度的生存土壤。
疟原虫显微镜镜检技术(共74张PPT)
正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜 用推 片的一角， 从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头 小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向 外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚 血膜，血膜厚薄均匀， 过厚易于脱落，过薄达 不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
定的实验室检查方法（WS259-2006）。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、 临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依 据流行病学史和临床表现即可做出诊断， 而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。 及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类， 以能针对虫种选择正确的治疗方案。
（吉氏染色） 散在呈金黄色，集成团块呈黑褐色
在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色1～2分钟。 单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本上染色30分钟左右； 虫体占红细胞体积的2/3至3/4 虫体较小，圆形，占满胀大的红细胞 涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。 厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。 将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后， 置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加 边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫升带有玻
塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇，洗去甘油浓
疟原虫的镜检技术ppt课件
间日疟原虫雄配子体
恶性疟雌（大）配子体形态
形状：新月形，两 端稍尖。
胞浆：深蓝色。 核：一个，较小，
致密，深红色， 位于中央，核周 可见透明不染色 带。 疟色素：黑褐色， 密布于核的周围。
薄血膜恶性疟雄（小）配子体形态
形状：腊肠形，两端钝 圆。
胞浆：浅蓝色或淡紫红 色。
核：一个，较大，疏松， 位于中央，浅红色， 核周可见不染色带。
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加中 性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片上 的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的 胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的 厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干 镜检。（一般配制5%-10%，染色时间短，一定掌握好时间。）
薄血膜中常见的血液成分
嗜酸性粒细胞
中 性 粒 细 胞
血小板
单核细胞
淋巴细胞
红细胞
薄血膜疟原虫形态
间日疟 环状体
感染的红细胞：胀大 不明显，基本正常。
虫体大小：较大，约 为红细胞直径1/3。
胞浆：环状，浅蓝色。 核：红色，一个，偶
有二个。 疟色素：无。
约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞 寄生2个环状体和一个环状体有2个核。
体积小。 核：一个，红色。 疟色素：较细的黑褐色颗
粒，常集成块。
恶性疟大滋养体
间日疟未成熟裂殖体
红细胞：胀大，褪色， 可有薛氏小点。
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采血详细部位、取血方法有 小技巧。
可编辑课件
血膜的制作
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将 血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂 成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血 膜分载玻片涂制。
发热病人血片
可编辑课件
标本片
血膜的制作（涂片操作）
• 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张 载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴 标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在 第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂 厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
可编辑课件
标准的疟疾厚薄血膜位置
可编辑课件
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片（1人） 门诊发热病人血片（1人）
可编辑课件
居民普查血片（2人）
血膜的制作
血膜编号，以防差错；待薄血膜 干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种 类的代号和受检者的个人编号，依次 顺序插入标本盒内。
疟原虫的镜检技术
可编辑课件
血膜的制作（涂片操作）
• 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在 诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
• 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、 出汗期和间歇期五期。
• 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨 破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴， 加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻 轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原
虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
可编辑课件
吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的 厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干 镜检。（一般配制5%-10%，染色时间短，一定掌握好时间。）
操作2 (慢染)配制3%染液：在染色量筒内量2ml蒸馏 水或新鲜凉开水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀， 滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲 洗，晾干镜检。（一般配制2.5%-3%染液，染色效果稳定。）
可编辑课件
全国疟疾镜检知识与技能竞赛
血片制作和染色质量评价标准
• 好血片制作质量: • 厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍
可编辑课件
血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核对 患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
可编辑课件
取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
• 发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂 殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小 时（h），间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认， 为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次 后，配子体出现较多。
• 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者 退热后常查不到原虫。 末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状 体之后的10天左右。
标签
标本片
可编辑课件
发热病人血片
薄血膜的制作
• 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约 1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血 滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血 液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速 地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时 速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大 小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制 成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之 间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚
偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚薄均匀。 • 薄血膜：血量 1～1.5 ul，位置 玻片1／2～1／
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染液的种类
染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用 最广泛的是瑞氏（Wright stain）和吉氏 染液（Giemsa stain）。这些染液中的主 要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所 成的天青，所以称多色性染剂。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果 稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时 间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量 大的门诊实验室使用。
薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部 分（或第4—6份）】 。
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熟练工作者的推片姿势
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厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个白细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
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姬氏染液的染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血 红蛋白，然后再进行染色。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响 染色效果.
成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染 色缸，倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液 或净水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色 30min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓度）， 然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝 下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。
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血膜的制作
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将 血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂 成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血 膜分载玻片涂制。
发热病人血片
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标本片
血膜的制作（涂片操作）
• 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张 载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴 标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在 第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂 厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
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标准的疟疾厚薄血膜位置
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各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片（1人） 门诊发热病人血片（1人）
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居民普查血片（2人）
血膜的制作
血膜编号，以防差错；待薄血膜 干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种 类的代号和受检者的个人编号，依次 顺序插入标本盒内。
疟原虫的镜检技术
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血膜的制作（涂片操作）
• 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在 诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
• 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、 出汗期和间歇期五期。
• 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨 破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴， 加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻 轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原
虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
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吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的 厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干 镜检。（一般配制5%-10%，染色时间短，一定掌握好时间。）
操作2 (慢染)配制3%染液：在染色量筒内量2ml蒸馏 水或新鲜凉开水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀， 滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲 洗，晾干镜检。（一般配制2.5%-3%染液，染色效果稳定。）
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全国疟疾镜检知识与技能竞赛
血片制作和染色质量评价标准
• 好血片制作质量: • 厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍
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血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核对 患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
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取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
• 发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂 殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小 时（h），间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认， 为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次 后，配子体出现较多。
• 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者 退热后常查不到原虫。 末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状 体之后的10天左右。
标签
标本片
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发热病人血片
薄血膜的制作
• 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约 1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血 滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血 液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速 地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时 速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大 小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制 成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之 间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚
偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚薄均匀。 • 薄血膜：血量 1～1.5 ul，位置 玻片1／2～1／
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染液的种类
染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用 最广泛的是瑞氏（Wright stain）和吉氏 染液（Giemsa stain）。这些染液中的主 要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所 成的天青，所以称多色性染剂。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果 稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时 间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量 大的门诊实验室使用。
薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部 分（或第4—6份）】 。
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熟练工作者的推片姿势
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厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个白细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
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姬氏染液的染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血 红蛋白，然后再进行染色。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响 染色效果.
成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染 色缸，倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液 或净水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色 30min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓度）， 然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝 下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。