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单克隆抗体的制备原理及方法

单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法是通过以下步骤来实现的：
1. 免疫原的选择：选择一个目标抗原，并将其注入到免疫宿主中，例如小鼠。

2. 免疫应答：免疫宿主的免疫系统会识别并产生抗体来应对免疫原的存在。

3. 融合细胞的制备：从免疫宿主中取得抗体产生的细胞，并与癌细胞（如骨髓瘤细胞）融合，形成杂交瘤细胞。

4. 杂交瘤细胞的筛选：采用适当的培养基，筛选出那些能够生存和增殖的杂交瘤细胞。

这些细胞具有与原先抗体产生细胞相同的生长特性。

5. 单克隆抗体的筛选：将培养基中的每个细胞与免疫原进行反应，然后用酶联免疫吸附试验（ELISA）或流式细胞术等方法筛选出特异性抗原结合的细胞。

6. 单克隆抗体的扩增：将特异性抗原结合的细胞分离并培养，使其增殖，形成一个与原始细胞相同的细胞群。

除了以上的制备原理，还可以使用其他的方法来制备单克隆抗体，例如基因工程方法、人源化方法等。

这些方法可以通过人工改造的方式来制备单克隆抗体，以满足特定需求。

单克隆抗体的抗体检测原理

单克隆抗体的抗体检测原理单克隆抗体是由单个克隆细胞分泌的抗体所组成的，具有高度的特异性和亲和性。

抗体检测是一种重要的生物分析技术，它可以用于检测、定量和鉴定特定分子的存在和表达水平。

单克隆抗体的抗体检测原理主要包括特异性识别、抗原结合和信号放大等过程。

首先，单克隆抗体具有高度的特异性，可以识别并结合到特定的抗原分子上。

在抗原与抗体结合时，抗体的可变区域与抗原表面的特定区域形成互补的结合，从而实现抗原的特异性识别。

这种特异性识别可以使得单克隆抗体只与目标分子结合，而不与其他非特异性分子发生交互作用。

接下来，抗原与抗体的结合可以通过多种方式进行检测。

其中，最常用的方法是免疫荧光检测和酶联免疫吸附试验（ELISA）。

在免疫荧光检测中，抗体与荧光染料标记的二抗结合，形成复合物后通过荧光显微镜观察荧光信号的强度和分布情况，从而获得目标分子的定性和定量信息。

而在ELISA中，抗体会与酶标记的二抗结合，通过底物的化学反应产生可测量的信号，例如颜色变化。

通过比较信号的强度和标准曲线，可以确定目标分子的存在和浓度。

此外，为了增强检测信号的灵敏度和准确性，还可以采用信号放大的策略。

常用的信号放大方法有放射性同位素标记、荧光信号放大和报告基因放大等。

放射性同位素标记是将放射性同位素与抗体结合，通过放射性的衰变过程来产生可测量的信号。

荧光信号放大是将荧光染料标记于抗体上，通过扩增荧光信号的强度来提高检测的敏感度。

而报告基因放大是将报告基因与抗体结合，通过报告基因的表达来产生可测量的信号。

这些信号放大的方法可以有效提高抗体检测的灵敏度。

总结起来，单克隆抗体的抗体检测原理主要包括特异性识别、抗原结合和信号放大等过程。

通过这些过程，可以实现对目标分子的高特异性和高敏感性的检测。

抗体检测技术已经在医学诊断、生物学研究、食品安全等领域得到广泛应用，对于人类健康和生命科学研究具有重要意义。

单克隆抗体的发展历程原理及应用

单克隆抗体的发展历程原理及应用1. 单克隆抗体的定义单克隆抗体（Monoclonal antibodies，简称mAb）是由单个重构的白细胞克隆产生的抗体。

它们具有高度特异性和亲和性，并且只与抗原的特定表位结合。

由于这种特性，单克隆抗体在医学、科研和工业领域中得到了广泛的应用。

2. 单克隆抗体的发展历程•1975年：Cesar Milstein 和 Georges Köhler 首次提出单克隆抗体的构想。

他们成功融合了癌细胞和B淋巴细胞，从而得到了第一个单克隆抗体。

•1984年：Cesar Milstein、Georges Köhler 和 Niels Kaj Jerne 因为他们在单克隆抗体研究领域做出的贡献，共同获得诺贝尔生理学或医学奖。

•1986年：通过使用转基因技术，研究人员成功地将人的免疫系统导入小鼠体内，从而生产出人类单克隆抗体。

•1990年代：人类单克隆抗体得到了进一步的发展，研究人员开发出了一种名为“人源化抗体”的技术，使得单克隆抗体可以更好地适应人体。

3. 单克隆抗体的制备原理•免疫原选择和制备：在制备单克隆抗体之前，需要选择合适的免疫原来激发免疫反应。

一般来说，免疫原应该具有高度特异性，易于制备，并且不会引起太强的免疫反应。

常用的免疫原包括蛋白质、多肽、多糖等。

•动物免疫和细胞融合：免疫原注射到动物体内，激发免疫反应，产生抗体。

然后，从动物体内获取淋巴细胞，与癌细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

•筛选和克隆：筛选出具有特异性和亲和性的杂交瘤细胞，以得到单克隆抗体。

常用的筛选方法包括ELISA、流式细胞术等。

•扩繁和生产：经过筛选和克隆后，选取合适的杂交瘤细胞，进行扩繁培养并生产单克隆抗体。

4. 单克隆抗体的应用单克隆抗体在医学、科研和工业领域中有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：•临床应用：单克隆抗体被广泛应用于临床诊断和治疗。

例如，用于癌症的诊断和治疗的单克隆抗体已经获得了FDA的批准。

单克隆抗体的制备过程及原理

单克隆抗体的制备过程及原理单克隆抗体（monoclonal antibody，简称mAb）是指使用浓度较高的、单种类且结构恒定的抗体，它是具有特定抗原性和可重复使用的特殊免疫球蛋白分子。

单克隆抗体由于特异性、可重复使用、界限清晰等具有重要的理论意义和重要的经济意义，在生物分子的研究、疾病的检测和治疗中已经发挥出重要作用。

单克隆抗体制备的方法有奥托尔·米勒法、佩泰法和融合细胞法等。

其制备过程通常包括以下7个步骤：生物反应物的提取、细胞培养，抗体浓度的上升、表达工艺的改进、纯化工艺的筛选、反应物的表达和功能检测。

（1）生物反应物的提取。

抗体制备过程的第一步是提取有用的生物反应物，例如鼠、猴、牛等动物的血液或淋巴液中的B细胞，或者细菌中的免疫球蛋白定量因子（immunoglobulin，Ig）分子等。

（2）细胞培养。

细胞培养就是将这些细胞表现成抗体制备所需的反应物，而培养方法又分为实验室筛选（laboratory selection）和大规模培养（large-scale production）。

（3）抗体浓度的上升。

在细胞培养过程中，抗体浓度也会随着增加，完成这一步后可以得到单克隆抗体。

（4）表达工艺的改进。

表达工艺是抗体分离纯化的关键步骤。

一般来说，可以采用谷氨酸免疫池（Glu-immune pool）、数字筛选技术（digital selection）、高通量测序技术（high-throughput sequencing）和聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）等方法来筛选合适的抗体表达体。

（5）纯化工艺的筛选。

纯化工艺的筛选主要是为了分离抗体的原子或分子结构。

一般采用配体结合、离子交换和溶剂萃取等方法来实现这一步骤。

（6）反应物的表达。

在单克隆抗体表达之前，反应物需要进行细胞系建立和表达调控，以确保抗体的品质和产量。

（7）功能检测。

最后，需要进行单克隆抗体表达体的功能检测，以确定抗体是否具有良好的抗原性和稳定性。

单克隆抗体的原理

单克隆抗体的原理
单克隆抗体（Monoclonal Antibodies）是一类由同一克隆细胞
产生的具有相同特异性的抗体。

其制备的基本原理主要包括以下几个步骤：
1. 免疫原注射：将目标抗原注射到动物体内，如小鼠、大鼠等，以引起免疫反应。

2. 脾细胞收获：收获经过免疫处理的动物的脾脏，以得到免疫细胞。

3. 融合：将脾细胞与肿瘤细胞（如骨髓瘤细胞）进行融合，形成杂交瘤细胞。

4. 杂交瘤筛选：在合适的培养基条件下筛选出能够产生具有特异抗原结合能力的杂交瘤细胞。

5. 单克隆抗体产生：选取单个杂交瘤细胞进行扩增培养，使其成为一个克隆（即单克隆），并能够稳定地产生抗体。

6. 单克隆抗体纯化：采用不同的技术方法，如亲和层析、凝胶过滤等，对单克隆抗体进行纯化。

单克隆抗体通过以上制备步骤，可以得到高度特异性、稳定性强的抗体，可以应用于各种生物医学研究和临床诊断，如免疫组织化学、流式细胞术、酶联免疫吸附实验等。

单克隆抗体制备原理

单克隆抗体制备原理抗体，又称抗血清球蛋白，是一种可以与外界的抗原物质结合的多肽链新颖的天然蛋白质，可以抗原（外源物质）的识别和结合。

抗体是由一个或多个嗜碱性球细胞从各种动物体内分泌和降解出来的蛋白质，有自身抗原特异性，能与外源抗原结合，具有特异性和可变性的抗原特性，一般由二肽链组成。

在免疫原理的基础上，人们研制出了一种利用免疫原理和现代生物技术来制备抗体的技术方法，叫做单克隆抗体技术。

它以载体细胞为基础，利用免疫原理，制备出单克隆抗体，进而实现它们的分离与纯化，用于抗原的检测和药物的研究。

一般来讲，单克隆抗体制备技术包括以下几个步骤：免疫原理、载体细胞、免疫原制备、免疫动物获得免疫细胞、筛选、克隆和纯化。

首先，是免疫原理的利用。

按照特定的原理，将免疫原添加到载体细胞上，触发载体细胞形成抗原特异性的抗体，负责抗原特异性的效应。

同时，载体细胞也携带了抗体的抗原特异性的基因。

其次，是载体细胞的选择。

一般来说，常用的载体细胞有灵长类动物细胞，如核膜细胞、白血病细胞、小鼠淋巴细胞等，一般利用大肠杆菌、嗜热性芽孢杆菌、放线菌。

选择合适的载体细胞，不但可以以此保证抗体产量，而且可降低免疫毒性，减少抗体失活率，从而确保抗体质量。

第三步，是免疫原的制备。

该步骤中要求抗原物质的制备、浓度的控制和质量的检查，以确保免疫原的有效性和品质。

第四步，是通过给定的抗原刺激动物后，获得免疫细胞。

获得的免疫细胞主要包括淋巴细胞和巨噬细胞，其中巨噬细胞能够分泌抗体，而淋巴细胞则能够分泌促抗体物质。

然后，就是筛选阶段。

克隆抗体技术的筛选主要通过竞争免疫的方式实现，利用竞争免疫的原理，可以获得能够特异性结合抗原的抗体。

最后，就是克隆和纯化，即通过基因重组的技术将抗体的特异性的基因克隆到大肠杆菌、嗜热性芽孢杆菌或放线菌中，进行繁殖，从而获得一定量的单克隆抗体，随后经过纯化，即得到纯净的结果。

总之，单克隆抗体制备技术是运用免疫原理和现代生物技术来制备抗体的技术方法，包括免疫原理、载体细胞、免疫原制备、免疫动物获得免疫细胞、筛选、克隆和纯化八个步骤。

单克隆抗体的制备

单克隆抗体的制备一、单克隆抗体技术的原理B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。

B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。

将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。

这种技术即称为单克隆抗体技术。

制备单克隆抗体的方法是用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷酸酶的瘤细胞变异株与脾脏的B细胞融合。

采用HAT选择性培养基（培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T），在这种选择性培养基中，由于变异的瘤细胞不具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶或胸腺嘧啶核苷激酶，所以不能利用培养基中的次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷而合成DNA。

而只能利用谷酰胺与尿核苷酸单磷酸合成DNA，这一途径又被氨基喋呤所阻断，所以未融合的瘤细胞不可避免也要死亡。

融合的杂交瘤细胞由于脾淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基喋呤的阻断，因此杂交瘤细胞大量繁殖而被筛选出来。

B淋巴细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于二周内均死亡。

单克隆抗体与常规抗体相比有如下优点：①单一特异性，与一个抗原决定簇反应；②可重复性，能够提供完全一样的抗体制剂；③一经制出，可无限量地供应；④生产单克隆抗体，不一定需要纯的抗原；⑤能查出混合物中存在的用常规方法查不出的少量成分。

单克隆抗体与常规的血清抗体的性质比较,见下表:性质常规血清抗体单克隆抗体抗体含量少μg/ml 多 mg/ml无关的Ig 多少或几乎无其它血清蛋白有少，培养物上清常有10％胎牛血清Ag-Ab结合免疫原的全部成分的全部抗原决定簇免疫原中的一种成分的一个抗原决定簇特异性亲和力的重复性不同批号间有变化无变化与其它抗原的交叉反应与带有共同抗原决定簇的抗原有部分交叉一般无。

简述单克隆抗体技术的原理及应用

简述单克隆抗体技术的原理及应用
单克隆抗体技术是一种通过克隆并大量复制一种具有特定抗原结合能力的抗体，从而得到大量高质量的抗体产品的技术。

单克隆抗体技术的原理主要分为以下几个步骤：
1. 免疫动物：首先需要将目标抗原注射到实验动物中，以激发其免疫反应。

2. B细胞的融合：从免疫动物的脾脏或淋巴结中提取抗体产生的B细胞，与癌细胞（如骨髓瘤细胞）融合形成杂交瘤细胞（hybridoma）。

3. 杂交瘤筛选：通过培养和筛选，筛选出能够合成目标抗体的杂交瘤细胞。

4. 克隆：将筛选出的单个杂交瘤细胞直接放置于一个单独的培养皿中，进行单克隆培养。

5. 收获单克隆抗体：收集单克隆细胞培养物中培养出的抗体。

单克隆抗体技术的应用非常广泛，包括：
1. 生命科学研究：用于研究特定分子的功能、调控及相互作用。

2. 临床诊断：用于检测和测量某些疾病标志物，如肿瘤标志物、病毒感染标志物等。

3. 生物药物开发：用于生产大规模的、高质量的抗体药物，如单抗、Fc融合蛋白等。

4. 免疫治疗：用于治疗和预防一些疾病，如癌症、自身免疫性疾病等。

单克隆抗体筛选原理

单克隆抗体筛选原理单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性和一致性的抗体。

在生物学研究和医学诊断中，单克隆抗体因其特异性和灵敏度被广泛应用。

本文将介绍单克隆抗体的筛选原理，包括抗原-抗体反应、筛选阳性克隆、克隆扩增、抗体纯化和抗体鉴定等方面。

一、抗原-抗体反应抗原-抗体反应是单克隆抗体筛选的基础。

抗原是指能够与抗体结合的物质，具有特异的抗原表位。

抗体是由B细胞产生的免疫球蛋白，能够识别并结合抗原表位。

抗原-抗体反应具有高度特异性和可逆性，是免疫学检测中最常用的反应之一。

二、筛选阳性克隆在单克隆抗体的制备过程中，首先需要筛选出能够产生所需抗体的阳性克隆。

通常采用有限稀释法将B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，获得大量的杂交瘤细胞。

通过筛选，选出能够产生所需抗体的阳性克隆。

三、克隆扩增筛选出的阳性克隆需要进行克隆扩增，以获得足够数量的细胞产生抗体。

通常采用有限稀释法或连续传代法进行克隆扩增，使杂交瘤细胞在培养基中增殖，产生大量的单克隆抗体。

四、抗体纯化获得的单克隆抗体往往含有杂质，如蛋白质、DNA等，需要进行纯化。

常用的纯化方法包括蛋白质A柱层析法、凝胶过滤法和离子交换层析法等。

这些方法能够将抗体与杂质分离，获得高纯度的单克隆抗体。

五、抗体鉴定纯化后的单克隆抗体需要进行鉴定，以确保其特异性和活性。

鉴定方法包括抗原结合试验、免疫荧光法、ELISA等。

通过这些方法可以检测单克隆抗体的特异性、亲和力和生物学活性，确保其适用于生物学研究和医学诊断。

总之，单克隆抗体的筛选原理主要包括抗原-抗体反应、筛选阳性克隆、克隆扩增、抗体纯化和抗体鉴定等方面。

通过对这些过程的了解和掌握，可以制备出高质量的单克隆抗体，为生物学研究和医学诊断提供有力的工具。

4.1 单克隆抗体制备原理

第四章单克隆抗体第一节单抗制备的原理细胞融合最重要的应用是什么？那就是单克隆抗体的制备，单克隆抗体结构一致，氨基酸序列一致，只识别某一特定抗原决定簇，特异性强，可以标准化大量生产。

单克隆抗体主要有两个方向的应用，一是用于免疫学检测，一是用于治疗性抗体药物的研制。

这两个方向都是现代生物产业最重要的发展方向，对免疫学、医学和农业等学科的发展有着极其重要的支撑作用。

多克隆抗体是指由多个B细胞克隆产生的抗体，可识别多种抗原表位，是一组单克隆抗体混合的产物，可直接由抗原免疫获得。

多克隆抗体虽然在特异性上不如单克隆抗体，但是它制备简单、效价高、捕获力强，仍然是基础研究和诊断领域广泛使用的有效工具。

多克隆抗体主要存在于免疫后的机体血清中，又称抗血清。

由于这种抗体是针对多种抗原表位的，所以特异性不高，其应用也受到一定的限制。

单克隆抗体是指由单一B细胞克隆产生的只识别单一抗原表位的抗体，简称单抗。

单抗氨基酸序列一致，高度专一，容易纯化，可用在免疫检测和特异性治疗等各个方面。

传统的单抗制备技术主要是B细胞杂交瘤技术，随着现代生物技术的发展，现在已经有抗体库技术、基因工程技术和B细胞永生化等多种技术可用于单抗的制备。

我们将从以下三个方面介绍单抗制备的原理，一是单抗制备的免疫学原理，二是细胞学原理，三是杂交细胞的筛选原理。

单抗制备的免疫学原理：哺乳动物机体具有一套复杂的防御系统来保护自己，其中一个重要的防御机制就是体液免疫。

外来抗原刺激诱导机体免疫系统活化，B淋巴细胞增殖并转化为浆细胞，浆细胞分泌抗体（图1），抗体在其他免疫蛋白的帮助下，可以清除或中和抗原。

图1 乳动物机体具有一套复杂的防御系统来保护自己对于抗原的免疫刺激，每一个淋巴细胞都会合成并分泌一种单一的抗体，这些抗体可以高度特异地识别免疫抗原的特定区域，这个区域即抗原表位，也叫抗原决定簇。

一般来说，大分子抗原有多个表位抗原，每一个活化的淋巴细胞克隆只识别单一的表位，只产生一种针对某一个抗原表位的特异性抗体（图2）。

简述单克隆抗体技术的基本原理

简述单克隆抗体技术的基本原理单克隆抗体技术是生物技术领域的一项重要技术，在医药研发、诊断和治疗等方面都有着广泛的应用和前景。

单克隆抗体技术的基本原理是通过选择一种特定的免疫细胞，获取它产生的特异性抗体并使其进行不限制性复制，最终获得具有高度特异性和稳定性的单克隆抗体。

下面将详细介绍单克隆抗体技术的基本原理，包括鼠源性、嵌合型和人源性单克隆抗体技术，以及单克隆抗体生产的流程和应用。

一、鼠源性单克隆抗体鼠源性单克隆抗体是最早使用的单克隆抗体，其制备原理是将鼠类动物免疫一种抗原，收集其脾细胞，将其与骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞，然后将杂交瘤细胞单克隆化，即从杂交瘤中分离出单个克隆细胞并培养扩大。

鼠源性单克隆抗体的优点是制备简单、产量高，但由于小鼠免疫系统与人类的巨大差异，鼠源性抗体往往容易引起免疫原性反应，从而限制了其在临床应用中的使用。

二、嵌合型单克隆抗体为了克服鼠源性单克隆抗体的局限性，研究人员提出了嵌合型单克隆抗体技术。

嵌合型单克隆抗体是由人源性的Fc区和鼠源性的可变区域组成，它可以确保高度特异性和稳定性的又可以降低免疫原性反应。

嵌合型单克隆抗体的制备方法是将人源性的IgG1的Fc片段与包含鼠源性单克隆抗体的可变区域进行基因重组，最终获得嵌合型单克隆抗体。

嵌合型单克隆抗体优点是高度特异性和稳定性、免疫原性反应小。

嵌合型单克隆抗体的制备过程较为复杂，且其效价可能比鼠源性单克隆抗体略低。

随着生物技术的不断发展，研究人员逐渐开始研制具有人源性的单克隆抗体，其能够更加充分地体现在人体内生物学免疫动态，从而降低了潜在的体内免疫原性反应。

人源性单克隆抗体制备方法有两种，一种是在小鼠背景中将人源性单克隆抗体进行筛选和生产，另一种是通过人免疫系统获得人源性单克隆抗体。

人免疫系统产生抗体的原理与小鼠类似，但需要额外进行一系列的筛选和优化步骤，以保证细胞系的干净和稳定性。

由于人源性单克隆抗体与人体内的免疫系统具有良好的兼容性和相似性，因此在临床应用中具有极高的价值。

制备单克隆抗体的原理

制备单克隆抗体的原理
单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，可以识别并结合到特定的抗原上。

制备
单克隆抗体的原理主要包括抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。

首先，制备单克隆抗体的第一步是抗原免疫。

通常选择小鼠或兔子等动物作为
免疫动物，将目标抗原注射到动物体内，激发动物产生特异性抗体。

在免疫过程中，抗原会激发动物体内的B细胞产生抗体，其中包括对抗原特异性的B细胞。

接下来是细胞融合。

将免疫动物体内的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

这些杂交瘤细胞具有B细胞产生抗体的能力，同时又具有骨髓瘤细胞
的无限增殖能力，从而可以长期稳定地产生单克隆抗体。

随后是筛选和鉴定。

通过细胞培养和克隆技术，筛选出产生特定单克隆抗体的
杂交瘤细胞，并将其进行扩增。

接着，利用ELISA、Western blot等方法对单克隆
抗体进行鉴定，确定其对目标抗原的特异性和亲和力。

最后是大规模生产。

经过筛选和鉴定的单克隆抗体细胞株可以进行大规模的培
养和生产，以满足科研和临床的需求。

总的来说，制备单克隆抗体的原理是通过抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等
步骤，最终获得特异性的单克隆抗体。

这种单克隆抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景，可以用于疾病诊断、药物研发、免疫治疗等方面，对于促进医学科研和临床应用具有重要意义。

单克隆抗体的原理和应用

单克隆抗体的原理和应用一、单克隆抗体的概述单克隆抗体是由单个抗体细胞产生的，与多克隆抗体相比，具有更高的特异性和亲和力。

单克隆抗体的理论基础是两个重要的概念：克隆和抗体。

二、单克隆抗体的原理单克隆抗体的制备基于两种核心技术：融合技术和原代细胞培养技术。

下面将详细介绍单克隆抗体的制备流程：1.免疫原选择：根据需要，选择合适的免疫原，如蛋白质、多肽、细胞或病毒等。

2.免疫兔子或小鼠：将免疫原注射到兔子或小鼠体内，激发其免疫系统产生抗体。

3.细胞融合：从免疫动物体内获得脾细胞（或其他抗体产生细胞）和特定癌细胞（如髓细胞瘤细胞）。

4.杂交细胞的培养：将脾细胞和癌细胞混合，通过特定的条件培养，使脾细胞与髓细胞瘤细胞融合成杂交细胞。

5.克隆筛选：将杂交细胞分装到96孔板中，使每个孔中只有一个细胞，并培养、筛选出分泌特定抗体的单克隆细胞。

6.抗体生产：将筛选出的单克隆细胞扩大培养，并收集培养液，从中提取纯化的单克隆抗体。

三、单克隆抗体的应用单克隆抗体具有广泛的应用领域，下面将介绍其在医药、生物科学和疾病诊断中的应用：1.疾病诊断：单克隆抗体可用于疾病诊断，如流感病毒、癌症标记物等的检测。

通过与特定抗原结合，单克隆抗体能够提供高度特异性的诊断结果。

2.药物研发：单克隆抗体是药物研发中重要的工具，可用于药物靶点的筛选和验证，提高药物研发的效率和成功率。

3.治疗：单克隆抗体在治疗中也有广泛的应用。

例如，一些单克隆抗体药物可用于肿瘤治疗，通过靶向肿瘤细胞表面的特定抗原，抑制肿瘤生长和扩散。

4.生物学研究：单克隆抗体在生物学研究中起着重要的作用。

例如，用于检测蛋白质的表达和定位，通过与目标蛋白结合，实现对蛋白质功能的研究。

5.蛋白质纯化：单克隆抗体可用于蛋白质的纯化。

通过与目标蛋白结合，可以将蛋白质从混合物中选择性地纯化出来，用于后续的实验或应用。

四、总结单克隆抗体是一种高度特异性和亲和力的抗体，其制备基于细胞融合技术和原代细胞培养技术。

单克隆抗体制备的基本原理

单克隆抗体制备的根本原理一、单克隆抗体的概念抗体〔antibody〕是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。

常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。

一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。

即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。

因而，常规血清抗体又称多克隆抗体〔polyclonal antibody〕，简称多抗。

由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。

因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供给的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。

随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以完成。

1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。

这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。

通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体〔monoclonal antibody，McAb〕，简称单抗。

与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能延续地无限量供给。

单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的开展。

德国科学家柯勒〔Georges Ko1er〕和英国科学家米尔斯坦〔Cesar Milstein〕两人由此杰出奉献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。

二、杂交瘤技术〔一〕杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面开展的必定结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论根底，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。

单克隆抗体的制备原理

单克隆抗体的制备原理单克隆抗体是一种高度特异性的抗体，它可以识别并结合到特定的抗原上。

在生物医学研究和临床诊断中，单克隆抗体具有非常重要的应用价值。

那么，单克隆抗体是如何制备的呢？下面我们将介绍单克隆抗体的制备原理。

首先，单克隆抗体的制备需要一种特殊的细胞——B细胞。

B细胞是一种免疫细胞，它可以产生抗体来识别和结合抗原。

在制备单克隆抗体的过程中，我们需要从免疫动物（通常是小鼠或兔子）的脾脏中获取B细胞。

接着，我们需要一种特殊的细胞——骨髓瘤细胞。

骨髓瘤细胞是一种恶性浆细胞瘤，它具有不断增殖的能力。

我们将B细胞与骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。

这种杂交瘤细胞具有B细胞产生抗体的特性，同时也具有骨髓瘤细胞的不断增殖能力。

随后，我们需要对杂交瘤细胞进行筛选和鉴定，筛选出产生特定抗原结合能力的单克隆细胞。

这一步需要利用特定的实验方法和技术，如细胞培养、酶联免疫吸附实验（ELISA）等，来鉴定单克隆细胞的抗原结合能力。

最后，我们需要大规模培养和提取单克隆细胞，获得足够的单克隆抗体。

这些单克隆抗体可以用于生物医学研究、临床诊断、药物研发等领域。

在这个过程中，我们还需要对单克隆抗体进行纯化和鉴定，确保其纯度和特异性。

总的来说，制备单克隆抗体的过程是一个复杂而精细的过程，需要多种细胞、实验方法和技术的配合。

通过这些步骤，我们可以获得高质量、高特异性的单克隆抗体，为生物医学研究和临床诊断提供有力的支持。

在单克隆抗体的制备过程中，我们需要严格控制各个环节，确保单克隆抗体的质量和特异性。

同时，随着生物技术的不断发展，制备单克隆抗体的方法也在不断更新和改进，为单克隆抗体的应用提供更多可能性。

综上所述，单克隆抗体的制备原理涉及到多个环节，需要细致的操作和专业的知识。

通过这些步骤，我们可以获得高质量、高特异性的单克隆抗体，为生物医学研究和临床诊断带来更多的可能性。

希望本文对单克隆抗体的制备原理有所帮助，谢谢阅读！。

单克隆抗体制备原理

单克隆抗体制备原理
单克隆抗体是一种针对特定抗原的抗体，具有高度的特异性和亲和力。

其制备
原理主要包括抗原免疫、融合细胞制备和筛选、单克隆抗体生产等步骤。

首先，抗原免疫是单克隆抗体制备的第一步。

研究人员首先需要选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面分子等。

然后将抗原注射到小鼠或兔子等动物体内，激发其产生特异性抗体。

在免疫过程中，动物的免疫系统会识别抗原并产生多克隆抗体，其中包括针对不同位点的抗体。

接着，融合细胞制备和筛选是单克隆抗体制备的关键步骤。

研究人员需要从免
疫动物体内获取B细胞，然后与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。

这些杂
交瘤细胞具有B细胞的抗体产生能力和骨髓瘤细胞的无限增殖能力。

接着，通过
限稀稀释法或单细胞分选法筛选出产生特定单克隆抗体的杂交瘤细胞。

最后，单克隆抗体生产是单克隆抗体制备的最后一步。

研究人员需要将筛选出
的单克隆抗体杂交瘤细胞进行大规模培养，获取足够的单克隆抗体。

随后，通过细胞培养上清液的收集、纯化、结构表征等步骤，最终得到纯化的单克隆抗体。

总之，单克隆抗体制备原理包括抗原免疫、融合细胞制备和筛选、单克隆抗体
生产等步骤。

通过这些步骤，研究人员可以获取到具有高特异性和亲和力的单克隆抗体，为生物医学研究和临床诊断治疗提供重要的工具和药物。

单克隆抗体发挥免疫作用的原理

单克隆抗体发挥免疫作用的原理单克隆抗体，这个名字听起来是不是很高大上，其实它就是我们身体里的“特种兵”。

想象一下，当有敌人侵入，比如细菌或病毒，咱们的免疫系统就像是一支训练有素的军队，随时准备出击。

而单克隆抗体就是这些“士兵”中的精英，专门针对特定的敌人。

这玩意儿的工作原理其实挺简单。

想象一下，你在参加一个聚会，突然有人冲进来搞事情。

你会立马想要把他赶出去。

单克隆抗体就是那种有强烈目的感的家伙。

他们从一群免疫细胞中“挑选”出来，专门针对特定的病原体，像是给它们贴上了个大标签。

这样一来，当这些抗体碰到目标，就能迅速识别并发动攻击。

说到攻击，单克隆抗体的本事可不止于此。

它们不仅仅是发出信号，还会直接参与“战斗”。

想象一下，敌人被抗体抓住，就像是被绑住的俘虏。

这时，免疫系统里的其他细胞就像是接到命令的士兵，纷纷出动来“消灭”这个敌人。

这样一来，病原体就很难有逃脱的机会了。

更有意思的是，单克隆抗体还能记住这些敌人。

等到下一次再遇到同样的入侵者，免疫系统就能更快地做出反应，真的是“见招拆招”。

就像我们生活中碰到的老朋友，久而久之自然就熟悉了。

这种“记忆”能力让我们的免疫系统更加强大，也让我们在日常生活中少受很多病痛的折磨。

再说说它的生产过程，哎呀，那真是科技的奇迹！科学家们可以在实验室里“造”出单克隆抗体。

他们会把一种特定的抗原引入到小鼠体内，激活小鼠的免疫系统。

然后，从小鼠的脾脏中提取出产生抗体的细胞，接着与肿瘤细胞融合，形成“杂交瘤细胞”。

这些细胞就像是超级工厂，能够不断地生产出大量的单克隆抗体，真是让人惊叹。

单克隆抗体的应用也非常广泛。

它们不仅仅用于疾病的治疗，还是医学研究中的“秘密武器”。

比如，在癌症治疗中，科学家们会设计针对癌细胞的单克隆抗体，帮助身体更有效地识别和攻击癌细胞。

还有在疫苗研发、病毒检测等领域，单克隆抗体也扮演着重要角色，简直就是医学界的小英雄。

不过，单克隆抗体也并非完美无缺，有时候它们的使用会带来一些副作用。

单克隆抗体药物原理

单克隆抗体药物原理
嘿，让咱来聊聊单克隆抗体药物原理哈。

你可以把我们的身体想象成一个大城堡，里面住着好多好多细胞。

有时候呢，会有一些坏家伙，比如病菌啥的，来攻击我们的城堡。

这时候单克隆抗体就像是一群训练有素的特种兵。

它们怎么来的呢？科学家们就像厉害的教练，先找到一个能对付坏家伙的细胞，然后培养它，让它不断复制，就有了好多好多一样的抗体啦，这就是单克隆啦。

这些单克隆抗体特别厉害，它们能精准地找到那些坏家伙，然后紧紧抱住它们，不让它们捣乱。

就好像特种兵一下子就把敌人给揪住了，让敌人没办法作恶啦。

而且哦，这些单克隆抗体很专一，只对付特定的坏家伙，不会乱攻击其他的。

比如说，针对感冒病菌的单克隆抗体就专门对付感冒病菌，不会去管其他的。

这样一来，就能很有效地保护我们的身体啦。

你说这单克隆抗体是不是超级厉害呀！。

单克隆抗体制备的基本原理

单克隆抗体制备的基本原理一、单克隆抗体的概念抗体antibody是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白..常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的;因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分..一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇;所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物..即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体;仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成..因而;常规血清抗体又称多克隆抗体polyclonalantibody;简称多抗..由于常规抗体的多克隆性质;加之不同批次的抗体制剂质量差异很大;使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦..因此;制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标..随着杂交瘤技术的诞生;这一目标得以实现..1975年;Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术;他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合;形成B细胞杂交瘤..这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征;既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死;又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体..通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系;即杂交瘤细胞系;它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体;即所谓单克隆抗体monoclonalantibody;McAb;简称单抗..与多抗相比;单抗纯度高;专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应..单抗技术的问世;不仅带来了免疫学领域里的一次;而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用;促进了众多学科的发展..德国科学家柯勒GeorgesKo1er和英国科学家米尔斯坦CesarMilstein两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖..二、杂交瘤技术一杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果;抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等;为杂交瘤技术提供了必要理论基础;同时;骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备..1975年8月7日;Kohler和Milstein在英国自然杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”Continuousculturesoffusedcellssecretinganti bodyofpredefinedspecificity的着名论文..他们大胆地把以前不同骨髓瘤细胞之间的融合延伸为将丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶hypoxanthineguanosinephosphoribosyltransferase;HGPRT的骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合..融合由仙台病毒介导;杂交细胞通过在含有次黄嘌呤hypoxanthine;H、氨基喋呤aminopterin;A和胸腺嘧啶核苷thymidine;T的培养基HAT中生长进行选择..在融合后的细胞群体里;尽管未融合的正常脾细胞和相互融合的脾细胞是HGPRT+;但不能连续培养;只能在培养基中存活几天;而未融合的HGPRT-骨髓瘤细胞和相互融合的HGPRT-骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活;只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞因得到分别来自亲本脾细胞的HGPRT和亲本骨髓瘤细胞的连续继代特性;而在HAT培养基中存活下来..实验的结果完全像起始设计的那样;最终得到了很多分泌抗绵羊红细胞抗体的克隆化杂交瘤细胞系..用这些细胞系注射小鼠后能形成肿瘤;即所谓杂交瘤..生长杂交瘤的小鼠血清和腹水中含有大量同质的抗体;即单克隆抗体..这一技术建立后不久;在融合剂和所用的骨髓瘤细胞系等方面即得到改进..最早仙台病毒被用做融合剂;后来发现聚乙二醇PEG的融合效果更好;且避免了病毒的污染问题;从而得到广泛的应用..随后建立的骨髓瘤细胞系如SP2/0-Ag14;X63-Ag8.653和NSO/1都是既不合成轻链又不合成重链的变种;所以由它们产生的杂交瘤细胞系;只分泌一种针对预定的抗原的抗体分子;克服了骨髓瘤细胞MOPC-21等的不足..再后来又建立了大鼠、人和鸡等用于细胞融合的骨髓瘤细胞系;但其基本原理和方法是一样的..二杂交瘤技术的基本原理细胞融合是一个随机的物理过程..在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中;经融合后细胞将以多种形式出现;如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等..正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天;无需特别筛选;细胞的多聚体形式也容易死去..而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除..在细胞融合后;要从上述五种细胞中筛选出杂交瘤细胞;一般使用HAT培养进行筛选;HAT培养基中含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶T三种成分..细胞的DNA合成有内源性途径主要途径和外源性途径旁路途径两种方式..内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原酶的催化下来合成DNA；而外源性途径则是利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶Hypoxanthineguzninephosphoribosyltransferase;HGPRT或胸腺嘧啶激酶thymidinekinase;TK的催化下来补救合成DNA;HAT培养基中氯基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂;能有效地阻断DNA合成的内源性途径..B淋巴细胞具有HGPRTTK这两种酶;因此在内源性途径被阻断后仍能利用HAT培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶来合成DNA;可在HAT培养基中存活;但B淋巴细胞是正常细胞;故不能长期存活..杂交瘤技术中所使用和SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞为HGPRT-的TK-缺陷型;缺乏HGPRT酶和TK酶在内源性途径被阻断后不能进行DNA的外源性合成;故不能在HAT培养基中存活..杂交瘤细胞由于继承了B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性;能够合成HGPRT酶和TK酶;故在HAT养基中能长期存活..因此将融合后的混合细胞在HAT培养基中培养两周后;只有杂交瘤细胞能存活下来;成为制造单克隆抗体的细胞源..三、单克隆抗体制备的方法与步骤一单抗制备的基本流程单克隆抗体制备的主要步骤有：①正常小鼠免疫处理；②用物理、化学和生物方法促使细胞融合；③杂交瘤细胞的筛选与培养；④单克隆抗体的提纯..二单克隆抗体制备的基本方法抗原提纯与动物免疫对抗原的要求是纯度越高越好;尤其是初次免疫所用的抗原..如为细胞抗原;可取1×107个细胞作腹腔免疫..可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化;如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原;可将抗原所在的电泳条带切下;研磨后直接用以动物免疫..选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠;鼠龄在8～12周;雌雄不限..为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡;可同时免疫3～4只小鼠..免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同;因动物、抗原形式、免疫途径不同而异;以获得高效价抗体为最终目的..免疫间隔一般2～3周..一般被免疫动物的血清抗体效价越高;融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大;而且单克隆抗体的质量如抗体的浓度和亲和力也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关..末次免疫后3～4天;分离脾细胞融合..骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的B细胞同源..如待融合的是脾细胞;各种骨髓瘤细胞株均可应用;但应用最多的是Sp2/0细胞株..该细胞株生长及融合效率均佳;此外;该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重链或轻链..细胞的最高生长刻度为9×105/ml;倍增时间通常为10～15h..融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞活性应大于95％..骨髓瘤细胞株在融合前应先用含8-氮鸟嘌呤的培养基作适应培养;在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为2105/ml;次日一般即为对数生长期细胞..在体外培养条件下;细胞的生长依赖适当的细胞密度;因而;在培养融合细胞或细胞克隆化培养时;还需加入其他饲养细胞feedercell..常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞;制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔;轻揉腹部数次;吸出后的液体中即含小鼠腹腔细胞;其中在巨噬细胞和其他细胞..亦有用小鼠的脾细胞、大鼠或豚鼠的腹腔细胞作为饲养细胞的..在制备饲养细胞时;切忌针头刺破动物的消化器官;否则所获细胞会有严重污染..饲养细胞调至1×105/ml;提前一天或当天置板孔中培养..细胞融合细胞融合是杂交瘤技术的中心环节;基本步骤是将两种细胞混合后加入PEG使细胞彼此融合..其后吧培养液稀释PEG;消除PEG的作用..将融合后的细胞适当稀释;分置培养板孔中培养..融合过程中有几个问题应特别注意..①细胞比例：骨髓瘤细胞与脾细胞的比值可从1:2到1:10不等;常用1:4的比例..应保证两种细胞在融合前都具有较高活性..②反应时间：在两种细胞的混合细胞悬液中;第1min滴加4.5ml培养液；间隔2min滴加5ml培养液;尔后加培养液50ml..③培养液的成分：对融合细胞;良好的培养液尤其重要;其中的小牛血清、各种离子和营养成分均需严格配制..如融合效率降低;应随时核查培养基情况..有限稀释法筛选阳性株一般选用的骨髓瘤细胞为HAT敏感细胞株;所以只有融合的细胞才能待续存活一周以上..融合细胞呈克隆生长;经有限稀释后一般稀释至0.8个细胞/孔;按Poisson法计算;应有36％的孔为1个细胞/孔..细胞培养至覆盖0％～20％孔底时;吸取培养上清用ELISA检测抗体含量..首先依抗体的分泌情况筛选出高抗体分泌孔;将孔中细胞再行克隆化;尔后进行抗原特异的ELISA测定;选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存..单克隆抗体的制备和冻存筛选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备;因为融合细胞随培养时间延长;发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加..抗体制备有两种方法..一是增量培养法;即将杂交瘤细胞在体外培养;在培养液中分离单克隆抗体..该法需用特殊的仪器设备;一般应用无血清培养基;以利于单克隆抗体的浓缩和纯化..最普遍采用的是小鼠腹腔接种法..选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠;先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射;一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去..通常在接种一周后即有明显的腹水产生;每只小鼠可收集5～10ml的腹水;有时甚至超过40ml..该法制备的腹水抗体含量高;每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平..此外;腹水中的杂蛋白也较少;便于抗体的纯化..接种细胞的数量应适当;一般为5×105/鼠;可根据腹水生长情况适当增减..选出的阳性细胞株应及早冻存..冻存的温度越低越好;冻存于液氮的细胞株活性仅有轻微的降低;而冻存在－70℃冰箱则活性改变较快..细胞不同于菌种;冻存过程中需格外小心..二甲亚砜DMSO是普遍应用的冻存保护剂..冻存细胞复苏后的活性多在50％～95％之间..如果低于50％;则说明冻存复苏过程有问题..单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化方法同多克隆抗体的纯化;腹水特异性抗体的浓度较抗血清中的多克隆抗体高;纯化效果好..按所要求的纯度不同采用相应的纯化方法..一般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化目的;也有采用较简单的酸沉淀方法..目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法;多用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体最常用Sepharose交联;制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱;回收率可达90％以上..蛋白可与IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3结合;同时还结合少量的IgM..洗脱液中的抗体浓度可用紫外光吸收法粗测;小鼠IgG单克隆抗体溶液在A280nm时;1.44吸光单位相当于1mg/ml..经低pH洗脱后在收集管内预置中和液或速加中和液对保持纯化抗体的活性至关重要..。