两种园林植物的组织培养和种质创新研究

两种园林植物的组织培养和种质创新研究本研究是以两种园林植物作为实验材料,优秀的垂直绿化植物——灰毡毛忍冬和优美的地被植物——过路黄,同时这两种植物也是重要的药用植物。本实验建立了灰毡毛忍冬初代培养、丛生芽诱导增殖、壮苗培养、生根及移栽完整的快繁体系以及再生体系,为灰毡毛忍冬大规模工厂化生产提供一定的理论和实验指导。

对实验室已收集的过路黄种质资源经行了种质创新研究,包括多倍体诱导和遗传转化体系的探讨。主要研究结果如下：1.灰毡毛忍冬快繁体系的建立。

初代培养外植体灭菌以75%酒精处理20-30s、5.0% NaClO处理15min的方法效果最好。1/2MS+6-BA 1.0mg/L+IBA0.1mg为最佳的诱导丛生芽的培养基,诱导的增殖倍数为5.52。

1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.1mg为最佳的壮苗培养基。生根培养中选经过壮苗培养且基部有一定程度木质化的外植体接种于以1/2 MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.2mg/L+AC 0.5 g/L,光照条件以前期5d暗培养,后期光照培养为宜,接种后第

5d即可生根,生根率为93.33%,平均生根数为2.51。

在移栽时,先将炼苗之后的带根苗种在沙床中,14d之后再把苗移栽到腐殖

土+蛭石+珍珠岩=6：2：2(v／v)的基质中是最佳的移栽方法,移栽成活率为

94.44%。2.灰毡毛忍冬再生体系的建立。

用固体培养基培养时,以无节茎段作为外植体接种于1/2MS 6-BA 3.0

mg/L+IBA 0.1mg的培养基中,再生效果最佳,诱导率为98.89%,增殖倍数为7.64；若是用液体培养基,用无节茎段作为外植体,则诱导再生效果最好的培养基是

1/2MS 6-BA 4.5 mg/L+IBA 0.15mg,诱导率为100%,增殖倍数为11.82。3.本实验

首次诱导出过路黄四倍体植株。

试验中,随着Oryzalin的浓度和处理时间的增加,外植体存活率在逐渐降低,且不带叶片的有节茎段经Oryzalin处理之后的成活率也比带半片叶的有节茎段成活率低。诱导的变异率以Oryzalin浓度为10μmol/L处理48h时最高,为61.11%。

经流式细胞仪检测有染色体加倍成为四倍体的过路黄植株。四倍体植株在茎粗、节间长度、叶形、气孔和花与二倍体存在显著差异。

4.过路黄愈伤组织诱导。以过路黄叶片和无节茎段为外植体,愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L+6-BA 0.4 mg/L,愈伤组织诱导的最佳外植体为幼嫩的无节茎段,愈伤组织再生的最佳培养基为MS+6-BA0.1 mg/L+NAA0.1 mg/L。

5.过路黄遗传转化体系的探索中,培养基中添加Cef 300 mg/L能有效抑菌且对外植体再生抑制作用最小,抗生素Km 50mg/L进行筛选,该遗传转化体系还有待于进一步探索。