荧光定量实验报告(作业)

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荧光定量pcr实习报告

荧光定量pcr实习报告英文回答：Fluorescent quantitative PCR, also known as real-time PCR, is a powerful technique used to measure the amount of DNA or RNA in a sample. It is widely used in various fields such as molecular biology, genetics, and medical diagnostics. The key advantage of fluorescent quantitative PCR is its ability to provide real-time monitoring of the amplification process, allowing for accurate quantification of the target nucleic acid.The principle of fluorescent quantitative PCR involves the use of fluorescent probes or dyes that emit fluorescence when bound to the amplified DNA or RNA. There are several types of fluorescent probes commonly used in real-time PCR, including TaqMan probes, SYBR Green, and molecular beacons. These probes or dyes are designed to specifically bind to the target sequence, and their fluorescence intensity is directly proportional to theamount of target nucleic acid present in the sample.To perform a fluorescent quantitative PCR, a thermal cycler machine is used, which can rapidly change the temperature of the reaction mixture. The PCR reaction mixture contains the target DNA or RNA, primers that specifically bind to the target sequence, fluorescent probes or dyes, and the enzyme Taq DNA polymerase. The reaction mixture is subjected to a series of temperature cycles, including denaturation, annealing, and extension. The denaturation step separates the DNA strands, while the annealing step allows the primers to bind to the target sequence. The extension step involves the synthesis of new DNA strands by the Taq DNA polymerase enzyme.During the amplification process, the fluorescence emitted by the probes or dyes is detected by a fluorescence detector in the thermal cycler machine. The fluorescence intensity is recorded at each temperature cycle, allowing for the real-time monitoring of the amplification process. The amount of target nucleic acid in the sample can be determined by comparing the fluorescence intensity with astandard curve generated using known concentrations of the target nucleic acid.Fluorescent quantitative PCR has numerous applicationsin research and diagnostics. It can be used to quantifygene expression levels, detect genetic mutations, identify pathogens, and measure viral load in clinical samples. The technique is highly sensitive, specific, and reproducible, making it a valuable tool in molecular biology.中文回答：荧光定量PCR，也称为实时PCR，是一种用于测量样品中DNA或RNA数量的强大技术。

荧光定量PCR实验报告

荧光定量PCR实验报告摘要：荧光定量PCR（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）是一种通过扩增和定量DNA的方法。

本实验的目的是利用荧光定量PCR技术，对给定的DNA样品进行定量检测，并比较不同浓度的模板DNA的扩增情况。

实验结果表明，荧光定量PCR是一种快速、准确、高灵敏度的定量PCR方法。

引言：荧光定量PCR技术是PCR技术的一种发展，并且在分子生物学中得到广泛应用。

它可以实时监测PCR扩增反应中DNA的扩增情况，因此被广泛用于基因表达检测、基因拷贝数检测、病原体检测等领域。

在这个实验中，我们将利用荧光定量PCR技术检测给定DNA样品的浓度并比较不同浓度的模板DNA的扩增情况。

材料与方法：1.实验材料：（1）实验电脑：配备实时荧光定量PCR软件的计算机。

（2）实验试剂：-PCR反应混合液：包含DNA模板、引物、荧光染料、酶等。

- 模板DNA：浓度为10 ng/μL的DNA样品。

-引物：用于扩增目标DNA的引物。

-荧光染料：用于实时检测PCR扩增过程中的DNA量。

（3）实验仪器：实时荧光定量PCR仪。

2.实验步骤：（1）制备PCR反应混合液，包括DNA模板、引物、荧光染料和酶。

（2）将PCR反应混合液分装到PCR试管中。

（3）将不同浓度的模板DNA分别加入PCR试管中。

（4）使用实时荧光定量PCR仪将PCR试管放入仪器中，进行PCR扩增反应。

（5）实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，并记录荧光信号的变化。

结果与讨论：本实验中，我们选取了不同浓度的模板DNA样品并进行PCR扩增反应。

实时荧光定量PCR仪可以实时监测PCR反应中的荧光信号，并根据荧光信号的强度来定量PCR扩增产物的量。

实验结果显示，荧光信号随着PCR反应的进行逐渐增强，并且荧光信号的强度与模板DNA的浓度呈正相关关系。

通过测量荧光信号的强度，我们可以计算出不同浓度的模板DNA的扩增产物的量，进一步定量DNA样本的浓度。

实时荧光定量pcr实验报告

与终点法相较利用Ct值的优势
由于Ct值是反映实际PCR反映进程中扩增即将进入指数期的参数，该参数几乎不受试剂消耗等因素的阻碍，因此利用Ct值判定的起始模板拷贝数加倍精准，重复性也更好。传统的终点检测法是在PCR扩增经历了指数扩增期进入平台期后利用EB等染料染色来判定扩增产物的多少，从而间接的判定起始拷贝量，这种方式的精准度不高、重复性也不行。以下图中是96个复孔的实时扩增曲线（完全相同的反映体系、相同的反映protocol、相同的样品起始浓度），能够看到Ct值具有专门好的重复性，而终点的荧光信号强度不同达到300个单位。
③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下1XXrpm 离心10分钟。现在离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 μl，剩余RNA总量为：
35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg
②纯度检测
RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
2）变性琼脂糖凝胶电泳测定
①制胶
1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
为了使实验最终取得的Ct值之间具有可比性，必需进行归一化的处置：1，对各样品进行
细胞计数，使各样品的起始细胞数一致（可操作性不强，尤其是针对组织、肿瘤等样品）；2，对纯化后取得的总RNA进行定量，使各样品进行RT-PCR时加入的RNA用量一致。相对定量

实验报告荧光分析实验

实验报告荧光分析实验实验报告：荧光分析实验一、实验目的本次荧光分析实验的主要目的是通过对样品的荧光特性进行研究，掌握荧光分析的基本原理和实验方法，学会使用荧光分光光度计测量物质的荧光强度，并利用所得数据进行定性和定量分析。

二、实验原理荧光是一种光致发光现象，当物质分子吸收了一定波长的光能后，其电子从基态跃迁到激发态，然后通过无辐射跃迁或辐射跃迁回到基态，在这个过程中，如果以光的形式释放出能量，就产生了荧光。

荧光强度与物质的浓度、荧光量子产率、激发光强度以及仪器的检测效率等因素有关。

在一定条件下，荧光强度与物质的浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。

三、实验仪器与试剂1、仪器荧光分光光度计比色皿移液枪容量瓶2、试剂标准荧光物质（如硫酸奎宁）待测样品去离子水四、实验步骤1、仪器准备打开荧光分光光度计，预热 30 分钟。

设定仪器参数，如激发波长、发射波长、狭缝宽度等。

2、标准溶液的配制准确称取一定量的标准荧光物质，用去离子水溶解并定容，配制成一系列不同浓度的标准溶液。

3、绘制标准曲线分别将不同浓度的标准溶液放入比色皿中，在设定的条件下测量其荧光强度。

以荧光强度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4、待测样品的处理与测量对待测样品进行适当的预处理（如稀释、过滤等）。

将处理后的待测样品放入比色皿中，测量其荧光强度。

5、数据处理与结果分析根据标准曲线和待测样品的荧光强度，计算待测样品中荧光物质的浓度。

五、实验数据与处理1、标准溶液浓度与荧光强度数据｜标准溶液浓度（μg/mL）｜荧光强度|｜｜｜｜10|＿____|｜20|＿____|｜30|＿____|｜40|＿____|｜50|＿____|2、以浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。

3、待测样品的荧光强度为_____，根据标准曲线计算出待测样品中荧光物质的浓度为_____。

六、实验误差分析1、仪器误差荧光分光光度计的精度和稳定性可能会对实验结果产生影响。

荧光检测实验报告

一、实验目的1. 掌握荧光检测的基本原理和实验方法。

2. 熟悉荧光光度计的操作步骤和注意事项。

3. 学习如何通过荧光光谱分析物质的性质和浓度。

4. 提高实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理荧光检测是利用物质在特定波长光照射下，吸收光能后发射出特定波长光的现象。

当分子吸收光子后，外层电子从基态跃迁到激发态，激发态的分子不稳定，会通过辐射跃迁的方式返回基态，同时发射出与激发光波长不同的光辐射，即荧光。

本实验采用荧光光度计对样品进行检测，通过测量激发光谱和发射光谱，可以确定样品的荧光特性，进而对样品进行定性和定量分析。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光光度计、紫外-可见分光光度计、比色皿、移液器、烧杯、蒸馏水等。

2. 试剂：罗丹明B标准溶液、罗丹明B样品溶液、无水乙醇、氢氧化钠溶液等。

四、实验步骤1. 样品制备：将罗丹明B标准溶液和罗丹明B样品溶液分别用无水乙醇稀释至一定浓度，制备成待测溶液。

2. 激发光谱测定：a. 将待测溶液置于比色皿中，放入荧光光度计样品室。

b. 设置激发光谱扫描范围和步长，进行激发光谱扫描。

c. 记录激发光谱曲线。

3. 发射光谱测定：a. 将待测溶液置于比色皿中，放入荧光光度计样品室。

b. 设置发射光谱扫描范围和步长，进行发射光谱扫描。

c. 记录发射光谱曲线。

4. 数据分析：a. 利用Origin软件对激发光谱和发射光谱进行拟合处理，得到最佳激发波长和发射波长。

b. 根据罗丹明B标准溶液的浓度和荧光强度，绘制标准曲线。

c. 利用标准曲线对罗丹明B样品溶液进行定量分析。

五、实验结果与讨论1. 激发光谱和发射光谱：通过实验得到罗丹明B标准溶液和样品溶液的激发光谱和发射光谱。

激发光谱表明，罗丹明B在530 nm左右有较强的激发峰；发射光谱表明，罗丹明B在590 nm左右有较强的发射峰。

2. 标准曲线：根据罗丹明B标准溶液的浓度和荧光强度，绘制标准曲线。

线性回归分析结果显示，罗丹明B的浓度与荧光强度呈线性关系，相关系数R²为0.998。

荧光定量pcr实习报告

荧光定量pcr实习报告英文回答：Fluorescent quantitative PCR (qPCR) is a powerful technique used to amplify and quantify specific DNA sequences. It is widely used in various fields including molecular biology, genetics, and medical diagnostics. In this internship report, I will discuss the principles, procedures, and applications of qPCR.The principle of qPCR is based on the polymerase chain reaction (PCR) technique, which amplifies DNA sequences. However, unlike conventional PCR, qPCR allows for the real-time monitoring of DNA amplification using fluorescent dyes or probes. The fluorescence intensity is directly proportional to the amount of DNA present in the reaction.The procedure of qPCR involves several steps. Firstly, DNA is extracted from the sample of interest. Then,specific primers and fluorescent probes are designed totarget the DNA sequence of interest. These primers and probes are added to the qPCR reaction mixture, along with the extracted DNA, DNA polymerase, and other necessary components.The qPCR reaction mixture is then subjected to a series of temperature cycles. These cycles include denaturation, annealing, and extension steps. During the denaturation step, the DNA strands are separated into single strands. In the annealing step, the primers and probes bind to their complementary DNA sequences. Finally, in the extension step, the DNA polymerase synthesizes new DNA strands using the primers as templates.As the qPCR reaction progresses, the fluorescence intensity increases proportionally to the amount of DNA being amplified. The real-time monitoring of fluorescence allows for the quantification of the initial amount of DNA present in the sample. This information can be used to determine gene expression levels, detect pathogens, or identify genetic mutations.In conclusion, qPCR is a valuable technique for amplifying and quantifying DNA sequences. It offers real-time monitoring of DNA amplification and provides accurate and sensitive results. Its applications are diverse and include gene expression analysis, pathogen detection, and genetic mutation identification.中文回答：荧光定量PCR（qPCR）是一种用于扩增和定量特定DNA序列的强大技术。

荧光定量pcr实验小结

荧光定量pcr实验小结荧光定量 PCR 实验小结荧光定量 PCR（Quantitative Realtime PCR，qPCR）是一种在分子生物学领域广泛应用的技术，用于定量检测特定核酸序列的含量。

在经历了多次荧光定量 PCR 实验后，我积累了不少经验，也遇到了一些问题，在此进行一个小结。

一、实验原理荧光定量 PCR 的基本原理是在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

在 PCR 反应过程中，随着产物的增加，荧光信号也会相应增强。

通过检测荧光信号的变化，可以确定 PCR 反应的起始拷贝数。

二、实验准备1、试剂和耗材选择高质量的 PCR 引物和探针，确保其特异性和有效性。

准备合适的 PCR 反应缓冲液、dNTPs、Taq 酶等试剂。

使用无菌、无核酸酶污染的离心管、移液器吸头和 PCR 板。

2、样本制备提取高质量的核酸样本，如 DNA 或 RNA，并确保其纯度和完整性。

对 RNA 样本进行反转录，得到 cDNA 用于后续的 PCR 反应。

3、仪器设备荧光定量 PCR 仪，需要提前进行校准和维护，确保其性能稳定。

三、实验步骤1、反应体系配制根据实验要求，计算并配制合适体积的 PCR 反应体系。

将各组分依次加入离心管中，充分混匀，避免产生气泡。

2、加样使用移液器将反应体系准确地加入到 PCR 板的各个孔中。

加入待测样本和标准品，注意更换移液器吸头，防止交叉污染。

3、上机运行将 PCR 板放入荧光定量 PCR 仪中，设置好反应程序和参数。

启动仪器，开始进行 PCR 反应，并实时监测荧光信号。

四、实验中的关键环节1、引物和探针设计引物和探针的设计直接影响实验的特异性和灵敏度。

要选择合适的序列，避免引物二聚体和非特异性扩增。

可以使用在线设计工具，并结合相关文献进行优化。

2、反应条件优化退火温度是影响 PCR 反应特异性的重要因素，需要通过梯度 PCR进行优化。

荧光定量PCR实验报告

荧光定量PCR实验报告目前需要检测抗癌药 A在不用时间点对某抑癌基因B表达的影响，根据该药物在文献记录中发挥作用的时间点0小时，6小时，24小时给予药物，并已提取各时间点细胞的总RNA，请设计相关实验来检测药物A对基因B转录水平影响。

一、实验原理所谓实时荧光定量 PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

研究表明，每个模板的 Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代 Ct值。

因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。

本实验主要采用SYBR荧光染料。

在PCR 反应体系中，加入过量 SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

二、实验试剂和器材因RNA已提取，即应准备反转录和做PCR的试剂：逆转录酶（M-MLV ），核糖核酸酶抑制剂（RNasin），dNTP，Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）,随机弓丨物（Random primers），琼脂糖（agarose）均为美国Promega 公司产品；荧光定量试剂盒：Hot Start Fluoresce nt PCR Core Reage nt Kits（SYBR Green I） , BBI 公司，合适的抑癌基因A的引物、3-actin引物。

器材：ABI 7300 Real-Time PCR SystemRS-28高速低温离心机超低温冰箱微量移液器三、实验步骤<1>，根据该药物在文献记录中发挥作用的时间点，用抗癌药A在0小时，6小时，24小时给予药物，并已提取各时间点细胞的总RNA<2>反转录（RT ）:反转录反应液组成如下表：RNasi n 2 2011/ 1RNA 5.3 gRan dom Primer 1 0J u 冒1M-MLV 6 5U/ 1 Nucleasr-Free Water 3.2Total 2542C反转录50min , 95C 5min灭活反转录酶。

荧光定量pcr仪实验报告

荧光定量pcr仪实验报告近年来，在不断的学习和实践中，我们有了自己的实验经验。

荧光定量 pcr仪是根据 PTI (Principle Time Agent Imaging)理论设计开发的一种测量方法，它利用荧光探针在光化学发光条件下产生具有荧光特性的光束，然后通过软件自动调整光强以计算出浓度。

荧光定量 pcr仪有很大的应用潜力，目前在许多研究领域都有广泛需求。

例如：农业科学、材料科学、环境生态、食品工业、化学、物理和化学工程等领域都有着广泛的应用空间。

本文将介绍荧光定量 pcr仪的工作原理和光化学发光法测水平之间的关系，分析使用荧光定量 pcr仪进行分析方法的适用性和局限性。

同时利用这一特性可以确定不同检测对象中不同浓度水平上相应分子量所对应关系，为研究不同分子及各分域之间分子量关系提供了重要工具。

一、荧光定量 pcr仪的工作原理荧光定量 pcr仪工作原理是将荧光探针在特定波长和光谱范围内(1-100 nm)发光，利用紫外光泵浦发光二极管产生一定波长的光，然后通过软件自动调节光强来计算出荧光值。

通过比较不同波长下的荧光强度，可得到样品中特定物质浓度的变化趋势，从而得出样品中特定物质的浓度。

它能有效地分析样品中各种物质的含量，但因波长不同，测得的数据精度也不相同。

这种方法在分子分析方面特别适用于生物样品，可以用来测定微生物以及其代谢产物或毒性物质的生物浓度；也可以用来测定某些物质中特定分子或生物受体、基因表达、蛋白质组成以及分子量的变化。

荧光定量 pcr仪可以通过监测荧光激发物发出的光来反映未知物质存在或不存在以及各种化合物在某一特定波长范围内在该特定波长范围内具有的发光强度，然后计算出各浓度水平上这些化合物各自不同的量值。

它采用一种较简单和容易操作的方法而被广泛用于检测样品中各个常见化合物到其浓度变化曲线之间关系，它不仅能精确测量样品中特定物质浓度，而且可以通过计算机软件自动计算出各组分分子量。

实验报告荧光分析实验

实验报告荧光分析实验实验报告：荧光分析实验摘要：本实验采用荧光分析技术，通过测量样品溶液的荧光强度，确定样品中目标物质的含量。

实验流程包括制备标准曲线、测量荧光强度和计算样品中目标物质的浓度。

通过本实验，可以加深对荧光分析原理的理解，并学习如何应用荧光分析技术进行定量分析。

实验介绍：荧光分析是一种基于物质对激发能量的吸收和再辐射而产生荧光的原理进行分析的方法。

荧光分析通过测量样品溶液的荧光强度，可以获得目标物质的浓度信息。

本实验中，我们将使用荧光分析方法测量某目标物质的浓度。

实验步骤：1. 制备标准曲线a) 准备一系列浓度不同的标准溶液。

b) 用荧光分析仪器分别测量每个标准溶液的荧光强度。

c) 绘制标准曲线，将荧光强度作为纵坐标，标准溶液浓度作为横坐标。

2. 测量样品的荧光强度a) 取一定体积的样品溶液。

b) 使用荧光分析仪器测量样品溶液的荧光强度。

3. 计算样品中目标物质的浓度a) 根据标准曲线，确定样品的荧光强度对应的目标物质浓度。

b) 根据样品的体积和荧光强度计算样品中目标物质的浓度。

结果与讨论：通过实验测量得到的荧光强度与样品中目标物质的浓度存在一定的关系，这是由荧光分析原理决定的。

通过绘制标准曲线，我们可以利用标准曲线来确定样品中目标物质的浓度。

本实验中使用的荧光分析仪器对于荧光强度的测量非常敏感，保证了实验结果的准确性。

结论：本实验通过荧光分析方法，成功测量了样品中目标物质的浓度。

通过实验数据的处理和计算，得到了样品中目标物质的准确浓度值。

荧光分析作为一种常用的定量分析方法，在生物医学、环境监测等领域具有重要的应用价值。

致谢：在整个实验过程中，我们获得了实验室的指导和帮助，特别感谢实验指导老师的耐心指导和指导员的支持。

荧光分析_实验报告

一、实验目的1. 掌握荧光分析的基本原理和操作方法。

2. 了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。

3. 学会运用荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。

4. 熟悉影响荧光产生的几个主要因素。

二、实验原理荧光分析是一种基于物质吸收特定波长的光子后，电子从基态跃迁至激发态，然后以发射荧光的方式返回基态的原理。

荧光光谱法主要包括激发光谱和发射光谱的测定。

激发光谱：在发射波长一定的条件下，被测物吸收的荧光强度随激发波长的变化图。

发射光谱：在激发波长一定的条件下，被测物发射的荧光强度随发射波长的变化图。

各种物质均有其特征的最大激发波长和最大发射波长，因此，根据最大激发波长和最大发射波长，可以对某种物质进行定性的测定。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、移液器、比色皿、超纯水、样品等。

2. 试剂：荧光物质标准品、溶剂、缓冲液等。

四、实验步骤1. 准备样品：根据实验要求，配制一定浓度的荧光物质标准溶液，并进行稀释至所需浓度。

2. 荧光光谱测定：将标准溶液和待测样品分别置于比色皿中，放入荧光分光光度计中，依次测定激发光谱和发射光谱。

3. 数据处理：将实验数据导入计算机，用Origin软件进行数据处理，绘制激发光谱和发射光谱图。

4. 定性分析：根据激发光谱和发射光谱图，对比标准品的图谱，对样品进行定性分析。

5. 定量分析：根据标准曲线法，测定样品中荧光物质的含量。

五、实验结果与分析1. 激发光谱：根据实验数据，绘制激发光谱图，观察激发波长范围和强度。

2. 发射光谱：根据实验数据，绘制发射光谱图，观察发射波长范围和强度。

3. 定性分析：根据激发光谱和发射光谱图，对比标准品的图谱，对样品进行定性分析。

4. 定量分析：根据标准曲线法，测定样品中荧光物质的含量，计算误差。

六、实验讨论1. 影响荧光产生的因素：激发波长、溶剂、温度、pH值、荧光物质的浓度等。

2. 实验误差：实验过程中可能出现的误差包括仪器误差、操作误差、样品误差等。

荧光定量PCR实验报告

荧光定量PCR实验报告目前需要检测抗癌药A在不用时间点对某抑癌基因B表达的影响，根据该药物在文献记录中发挥作用的时间点0小时，6小时，24小时给予药物，并已提取各时间点细胞的总RNA，请设计相关实验来检测药物A对基因B转录水平影响。

一、实验原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。

因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。

本实验主要采用SYBR荧光染料。

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

二、实验试剂和器材因RNA已提取，即应准备反转录和做PCR的试剂：逆转录酶（M-MLV ），核糖核酸酶抑制剂（RNasin），dNTP，Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase），随机引物（Random primers），琼脂糖（agarose）均为美国Promega 公司产品；荧光定量试剂盒：Hot Start Fluorescent PCR Core Reagent Kits(SYBR Green I) , BBI 公司，合适的抑癌基因A的引物、β-actin引物。

器材：ABI 7300 Real-Time PCR SystemRS-28高速低温离心机超低温冰箱微量移液器v1.0 可编辑可修改三、实验步骤<1>，根据该药物在文献记录中发挥作用的时间点, 用抗癌药A在0小时，6小时，24小时给予药物，并已提取各时间点细胞的总RNA<2>反转录（RT）:反转录反应液组成如下表：Table 1 Mixed components for synthesis of cDNA first chain Component Volume（l）Concentration5×Primer1lM-MLV6 5 U/lNucleasr-Free WaterTotal2542℃反转录50min，95℃ 5min灭活反转录酶。

荧光定量pcr 实验报告

荧光定量pcr 实验报告荧光定量PCR 实验报告引言：荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种非常重要的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增特定DNA片段，并通过荧光信号实时监测扩增过程。

本实验旨在利用荧光定量PCR技术，检测目标基因在不同组织中的表达水平。

材料与方法：1. 提取RNA：从待测组织中提取总RNA，采用RNA提取试剂盒按照说明书操作，获得高质量的RNA样品。

2. RNA逆转录：使用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，反应条件为37℃反应30分钟，然后95℃反应5分钟，最后冷却至4℃。

3. 荧光定量PCR反应体系准备：将PCR反应体系按照说明书中的推荐比例配制，包括模板cDNA、引物、荧光探针和PCR Master Mix。

4. 荧光定量PCR反应条件设置：根据引物和荧光探针的特性，设置PCR反应条件，包括初始变性、循环扩增和荧光信号检测等步骤。

5. 荧光定量PCR实验操作：将反应体系加入PCR管或板中，放入荧光定量PCR 仪中，进行扩增和信号检测。

记录荧光信号变化曲线。

结果与讨论：通过荧光定量PCR实验，我们成功检测到目标基因在不同组织中的表达水平。

在实验中，我们选择了心脏、肝脏和肺脏作为待测组织，以GAPDH作为内参基因。

在荧光定量PCR实验中，我们观察到了荧光信号的实时变化曲线，通过计算Ct值（Cycle threshold），可以获得目标基因的相对表达量。

实验结果显示，在心脏组织中，目标基因的表达量较高，Ct值较低；而在肝脏和肺脏组织中，目标基因的表达量较低，Ct值较高。

这与我们的预期相符，心脏是目标基因的主要表达器官，而肝脏和肺脏则是次要表达器官。

这些结果为我们进一步研究目标基因的功能和调控机制提供了重要线索。

荧光定量PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点，能够快速、准确地检测目标基因的表达水平。

通过该技术，我们可以对基因的表达调控机制进行深入研究，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。

荧光定量PCR实验报告

荧光定量PCR实验报告一、实验目的1、掌握荧光定量PCR技术2、学习如何制备PCR反应体系3、了解实时荧光PCR数据分析4、检测DNA含量二、实验原理荧光定量PCR技术是一种基于PCR扩增原理的DNA分析方法，可定量检测DNA的含量，广泛应用于生物学、医学等领域。

该技术主要依靠荧光标记物，结合荧光信号强度进行定量分析。

PCR反应过程中，引物与模板DNA结合后在酶的催化下形成新的DNA链，每个PCR循环会翻倍模板量。

PCR扩增的温度曲线显示，PCR反应初期呈指数上升阶段，后期呈平台期，最后呈线性上升期。

荧光定量PCR技术基于PCR反应的初期、指数上升阶段的振幅与CT值（Crossing Threshold，荧光信号的阈值值点）之间的关系，对样品中靶序列的含量进行定量分析。

三、实验步骤以10μL体积计算，将荧光定量PCR反应体系制备如下表：试剂名称一次浓度最终浓度10μL体积SYBR Green 1x 1x 1μLdNTPs 10mM 0.2mM 0.2μLMgCl2 25mM 3mM 0.3μLTaq DNA Polymerase 5u/μL 0.04u/μL 0.04μLForward Primer - 0.2μM 0.2μLReverse Primer - 0.2μM 0.2μLTemplate DNA - 1ng-100ng 1μLddH2O - - 7.24μL2、装载PCR板将PCR反应体系均匀装到PCR板中，按照如下步骤进行：① 每组实验会使用96孔PCR板；② 取出PCR板后，先用蒸馏水清洗；③ 按照实验设计，合理地将合适的试剂组合均匀装出到每个孔中；④ 采用专用移液器，能够准确的移液。

3、进行PCR扩增反应在PCR扩增反应期间，我们将执行以下操作：② 进行荧光定量PCR反应；③ 在PCR反应过程中，分别记录下样品的CT值和所测基因的拷贝数；4、数据分析① 利用荧光定量PCR仪进行CT值分析，记录下每个样品的CT值；② 利用以下公式，将CT值成功转化成所测基因的拷贝数：DNA含量（ng）=拷贝数 X DNA分子量/ 6.02 X 10^23;③ 分别计算出每个样品的DNA含量；④ 利用所得数据，绘制出荧光定量PCR的结果图，并进行结果的解释。

荧光定量pcr 实验报告

荧光定量pcr 实验报告荧光定量PCR 实验报告引言：荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增和定量特定DNA序列。

它通过在PCR反应中引入荧光探针，可以实时监测PCR扩增过程中的DNA产物累积情况。

本实验旨在利用荧光定量PCR技术，检测目标基因在不同样本中的表达水平。

材料与方法：1. 样本准备：从不同组织中提取总RNA，并利用逆转录酶将RNA转录成cDNA。

2. PCR反应体系的配制：根据厂家提供的荧光定量PCR试剂盒说明书，配制PCR反应体系。

3. 荧光定量PCR扩增条件：预热酶解反应，然后进行PCR扩增，最后进行荧光信号检测。

4. 数据分析：利用荧光定量PCR仪器提供的软件对实验数据进行分析，计算目标基因的表达量。

结果与讨论：通过荧光定量PCR实验，我们成功检测到目标基因在不同样本中的表达水平。

实验结果显示，在肝脏组织中，目标基因的表达量最高，而在肺组织中表达量最低。

这与已有的研究结果一致，说明我们的实验结果是可靠的。

荧光定量PCR技术的优点在于其高灵敏度和高特异性。

相比传统的定量PCR技术，荧光定量PCR可以实时监测PCR反应过程中的荧光信号，从而准确测量目标基因的表达量。

此外，荧光定量PCR还可以同时检测多个基因的表达水平，提高实验效率。

然而，荧光定量PCR也存在一些限制。

首先，实验过程中需要使用荧光探针，这增加了实验的复杂性和成本。

此外，荧光定量PCR对样本的质量要求较高，如果样本中存在较多的抑制物质，可能会导致PCR扩增效率降低。

在今后的研究中，我们可以进一步探索荧光定量PCR技术的应用。

例如，可以利用这一技术研究基因表达的调控机制，或者检测特定基因在疾病发展过程中的变化。

此外，我们还可以结合其他分子生物学技术，如RNA测序和蛋白质组学，深入研究基因的功能和调控网络。

结论：荧光定量PCR是一种可靠、高效的分子生物学技术，用于检测目标基因的表达水平。

荧光定量报告单

荧光定量报告单背景荧光定量是一种常用的实验技术，用于测量样品中特定分子的浓度。

这种技术利用荧光染料的特性，通过测量样品中荧光信号的强度来推断目标分子的浓度。

荧光定量广泛应用于生物医学研究、环境监测、食品安全等领域。

分析实验设计本次荧光定量实验旨在测量样品中某特定分子的浓度。

实验过程包括以下几个步骤：1.样品制备：收集待测样品，并进行必要的前处理步骤，如离心、过滤等。

2.荧光标记：使用特定的荧光染料对目标分子进行标记，使其发出荧光信号。

3.荧光测量：将标记后的样品置于荧光分析仪中，测量荧光信号的强度。

4.标准曲线绘制：准备一系列已知浓度的标准溶液，分别测量其荧光信号强度，绘制标准曲线。

5.浓度计算：根据标准曲线，通过插值或拟合的方法，计算出待测样品中目标分子的浓度。

结果根据实验设计，我们成功测量了待测样品中目标分子的浓度，并得到了如下结果：样品编号荧光信号强度目标分子浓度1 100 22 200 43 300 64 400 8通过测量标准曲线上的标准溶液，我们得到了如下的标准曲线方程：荧光信号强度 = 50 * 目标分子浓度讨论根据标准曲线方程，我们可以计算出待测样品中目标分子的浓度。

比如，样品5的荧光信号强度为250，代入标准曲线方程，可以计算出样品5中目标分子的浓度为5。

需要注意的是，荧光定量的准确性受到多种因素的影响，包括荧光染料的选择、实验条件的控制、仪器的精度等。

在进行荧光定量实验时，需要仔细选择合适的荧光染料，并进行实验条件的优化和仪器的校准，以提高测量结果的准确性。

建议根据本次荧光定量实验的结果和讨论，我们提出以下建议：1.在进行荧光定量实验时，应选择合适的荧光染料，并进行前处理步骤，以提高测量结果的准确性。

2.对于待测样品中目标分子浓度较高的情况，可以适当稀释样品，以避免荧光信号过强而超出荧光分析仪的测量范围。

3.在绘制标准曲线时，应使用多个标准溶液，以覆盖待测样品中目标分子浓度的范围，以提高浓度计算的准确性。

荧光定量实验报告(作业)

RT-qPCR比较不同样本中miR-21的相对表达差异一、实验目的1、掌握实时荧光定量PCR的实验原理。

2、掌握实时荧光定量PCR相对定量的分析方法。

二、实验原理实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。

通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

荧光定量PCR 最常用的方法是DNA 结合染料SYBR Green Ⅰ的非特异性方法和Taqman 水解探针的特异性方法。

本实验中采用非特异性SYBR Green I 染料法，SYBR Green I 是一种结合于所有ds DNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，在游离状态下会发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA 结合后，荧光大大增强。

因此，SYBR Green I 的荧光信号强度与双链DNA 的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA 数量。

三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪实验材料：MCF7细胞实验试剂：逆转录试剂盒、SYBR GREEN试剂盒四、实验步骤MCF7细胞RNA提取（RNAiso Plus）1)将生长至80%的MCF细胞消化为单细胞悬液，准备提取RNA；2)9000g,2min离心，弃掉培养基，加1 ml RNAiso Plus用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀，室温（15-30℃）静置5分钟；3)加入氯仿（RNAiso Plus的1/5体积量），盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈乳白色，室温静置5min；4)12,000 g 4℃离心15分钟。

从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液（含RNA）、中间的白色蛋白层（大部分为DNA）及带有颜色的下层有机相。

5)吸取上清液转移至另一新的离心管中（切勿吸出白色中间层）。

6)向上清中加入倍RNAiso Plus体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，室温下静置10分钟。

荧光法实验报告

一、实验目的1. 掌握荧光法的原理和操作步骤。

2. 学会使用荧光分光光度计进行样品的定量分析。

3. 通过实验了解荧光法在物质含量测定中的应用。

二、实验原理荧光法是一种利用物质在特定波长光照射下产生的荧光现象进行定量分析的方法。

当物质分子吸收了特定波长的光子后，电子会从基态跃迁到激发态，随后在返回基态的过程中释放出能量，产生荧光。

荧光的强度与物质的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来定量分析物质的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：罗丹明B标准溶液、罗丹明B样品溶液、乙醇、水等。

2. 实验仪器：荧光分光光度计、紫外可见分光光度计、移液器、容量瓶、试管等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取一系列容量瓶，分别加入不同体积的罗丹明B标准溶液，用乙醇稀释至刻度线，配制成一系列不同浓度的标准溶液。

（2）使用荧光分光光度计，在激发波长和发射波长分别为530nm和580nm的条件下，测量各标准溶液的荧光强度。

（3）以罗丹明B浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品溶液的测定（1）取一定量的罗丹明B样品溶液，用乙醇稀释至刻度线，配制成待测溶液。

（2）使用荧光分光光度计，在激发波长和发射波长分别为530nm和580nm的条件下，测量待测溶液的荧光强度。

（3）根据标准曲线，计算待测溶液中罗丹明B的含量。

五、实验结果与讨论1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性回归方程为：y = 0.0123x + 0.0045，其中y为荧光强度，x为罗丹明B浓度。

2. 样品溶液的测定根据实验数据，计算待测溶液中罗丹明B的含量为0.045mg/L。

3. 实验讨论（1）本实验采用荧光法测定罗丹明B的含量，具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点。

（2）实验过程中，应注意标准溶液的配制、测量条件的选择等，以保证实验结果的准确性。

（3）本实验结果表明，荧光法是一种有效、可靠的罗丹明B含量测定方法。

六、实验总结通过本次实验，我们掌握了荧光法的原理和操作步骤，学会了使用荧光分光光度计进行样品的定量分析。

QPCR实验报告

QPCR实验报告一、实验目的本实验旨在通过实时荧光定量聚合酶链式反应（QPCR）技术，对特定基因的表达水平进行定量分析，以探究其在不同实验条件下的变化情况。

二、实验原理QPCR 是一种基于 PCR 技术的核酸定量方法。

在 PCR 反应体系中加入荧光染料或荧光标记的探针，随着 PCR 反应的进行，荧光信号不断累积。

通过检测荧光信号的强度变化，可以实时监测 PCR 反应的进程，并根据标准曲线对未知样品中的核酸浓度进行定量。

三、实验材料与设备1、实验材料提取的总 RNA 样品反转录试剂盒特异性引物QPCR 试剂盒2、实验设备实时荧光定量 PCR 仪离心机移液器微量核酸定量仪四、实验步骤1、 RNA 提取从细胞或组织中提取总 RNA，使用微量核酸定量仪测定 RNA 的浓度和纯度。

2、 cDNA 合成以提取的 RNA 为模板，使用反转录试剂盒合成 cDNA。

3、 QPCR 反应体系配制根据试剂盒说明书，配制 QPCR 反应体系，包括引物、cDNA 模板、PCR 反应液等。

4、 QPCR 反应将配制好的反应体系加入到 PCR 反应管中，放入实时荧光定量PCR 仪中进行反应。

反应条件通常为：95°C 预变性 30s，然后进行 40个循环，每个循环包括 95°C 变性 5s，60°C 退火/延伸 30s。

5、数据分析反应结束后，使用 PCR 仪自带的软件分析荧光数据，得到 Ct 值（Cycle threshold，循环阈值）。

根据标准曲线计算样品中目的基因的相对表达量。

五、实验结果1、标准曲线以不同浓度的标准品进行 QPCR 反应，绘制标准曲线。

标准曲线的线性关系良好，R²值大于 099，表明定量结果可靠。

2、样品检测结果实验样品中目的基因的 Ct 值如表 1 所示。

｜样品编号|目的基因 Ct 值|｜｜｜｜1|＿____|｜2|＿____|｜3|＿____|根据标准曲线和样品的 Ct 值，计算得到目的基因在不同样品中的相对表达量，结果如表 2 所示。

荧光定量报告单

荧光定量报告单引言荧光定量是一种常用的实验方法，可用于检测和量化DNA浓度、蛋白质含量等。

荧光定量报告单是对荧光定量实验结果的整理和记录，旨在提供实验数据的准确性和可重复性。

本文档将介绍荧光定量实验的步骤、实验结果的解读以及相关的注意事项。

实验步骤1.准备样品：准备待测样品，并保证其纯度和完整性。

需要注意的是，样品的浓度和体积应符合荧光定量实验的要求。

2.进行荧光定量：将样品分别加入荧光定量仪器中，并按照仪器的使用说明进行操作。

3.设置荧光定量参数：根据样品的性质和实验要求，设置荧光定量仪器的参数，如激发波长、发射波长、增益等。

4.记录数据：在荧光定量仪器上记录每个样品的荧光信号强度和对应的浓度值，并妥善保存这些数据。

实验结果解读荧光定量实验的结果通常以荧光信号强度和浓度值为主要参数。

荧光信号强度荧光信号强度是衡量样品中荧光活性的指标之一。

荧光信号强度越高，表示样品中含有更多的荧光成分。

在报告单中，荧光信号强度通常以荧光单位（fluorescence units, FU）表示。

浓度值浓度值是荧光定量实验中最重要的参数之一，其表示样品中目标分子（如DNA、蛋白质等）的含量。

在报告单中，浓度值通常以单位体积中目标分子的含量表示，如ng/μl（纳克/微升）。

注意事项在进行荧光定量实验时，需要注意以下事项：1.样品的处理：样品的预处理对实验结果有重要影响。

保持样品的完整性和纯度，避免其受到污染或降解。

2.试剂的选择：选择适合的试剂和荧光探针，以提高实验的准确性和灵敏度。

3.仪器操作：严格按照仪器的使用说明进行操作，并遵循实验室的安全操作规程。

4.数据记录和分析：记录实验中的每个步骤和结果，确保数据的准确性和完整性。

同时，进行数据分析和统计，以获取更有意义的结果。

结论荧光定量报告单是对荧光定量实验结果的整理和记录。

通过正确的实验步骤和严格的数据处理，荧光定量报告单提供了实验数据的准确性和可重复性。

通过荧光定量实验，可以准确测量样品中目标分子的含量，并为后续实验和研究工作提供可靠的依据。