细菌的革兰氏染色
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1.选用活跃生长期菌种染色，老龄菌影响染色
结果。
2.涂片不易过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键。
10
六、实验结果
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
11
NEGATIVE
12
临床意义
1)鉴别细菌；
青霉素
2)选择药物；
肺炎链球菌
淋病奈瑟氏球菌
13
3)与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒
微生物学实验
实验二 细菌的革兰氏染色 （Gram stain）
生命科学与技术学院
牛艳芳
1
一、目的要求
• 掌握革兰氏染色的方法； • 了解革兰氏染色的原理；
• 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
2
二、基本原理
革兰氏染色法是细菌细胞
的复合染色法，是由丹麦医生
Hans Chris源自文库ian Gram 于1884
6
三、实验器材
菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
试剂：草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、番红复染液、
生理盐水；
其他: 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、吸水纸等。
7
四、 实验步骤
年创立的一种鉴别不同类型细
菌的染色方法。
3
革兰氏染色步骤示意图
甲菌 初染 媒染 碘液 脱色 乙醇 复染 番红 红色（G-） 紫色（G＋）
结晶紫
乙菌
4
G+和 G- 细胞壁成分结构比较（立体模型）
磷壁酸
胞壁酸
肽聚糖 外膜
多糖
孔蛋白 蛋白质
脂质
肽聚糖
周质空间 膜蛋白
细胞膜
膜蛋白
G＋
G－
5
革 兰 氏 染 色 的 原 理 分 析
15
四、 实验步骤
1.制片 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染 6.镜检
1.培养物常规涂片、干燥和固定; 2.结晶紫对涂片进行初染1min，水洗； 3.用碘液进行媒染1min，水洗； 4.用乙醇进行冲洗脱色20～30s，水洗； 5.用番红复染液进行复染1min，水洗； 6.从低倍到高倍、再到油镜观察。
16
1.制片 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染 6.镜检
1.培养物常规涂片、干燥和固定; 2.结晶紫对涂片进行初染1min，水洗； 3.用碘液进行媒染1min，水洗； 4.用乙醇进行冲洗脱色20～30s，水洗； 5.用番红复染液进行复染1min，水洗； 6.从低倍到高倍、再到油镜观察。
8
五、注意事项
素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的
致病作用不同。
14
七、实验报告
1．结果
绘制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄
球菌的形态图，并判断它们分别被染成了什么颜
色？属于G-菌或G+菌？分析原因。
2．思考题
（1）革兰氏染色成败的关键步骤是什么？
（2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样
能判断你的染色技术操作正确，结果可靠？
结果。
2.涂片不易过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键。
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六、实验结果
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
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NEGATIVE
12
临床意义
1)鉴别细菌；
青霉素
2)选择药物；
肺炎链球菌
淋病奈瑟氏球菌
13
3)与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒
微生物学实验
实验二 细菌的革兰氏染色 （Gram stain）
生命科学与技术学院
牛艳芳
1
一、目的要求
• 掌握革兰氏染色的方法； • 了解革兰氏染色的原理；
• 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
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二、基本原理
革兰氏染色法是细菌细胞
的复合染色法，是由丹麦医生
Hans Chris源自文库ian Gram 于1884
6
三、实验器材
菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
试剂：草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、番红复染液、
生理盐水；
其他: 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、吸水纸等。
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四、 实验步骤
年创立的一种鉴别不同类型细
菌的染色方法。
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革兰氏染色步骤示意图
甲菌 初染 媒染 碘液 脱色 乙醇 复染 番红 红色（G-） 紫色（G＋）
结晶紫
乙菌
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G+和 G- 细胞壁成分结构比较（立体模型）
磷壁酸
胞壁酸
肽聚糖 外膜
多糖
孔蛋白 蛋白质
脂质
肽聚糖
周质空间 膜蛋白
细胞膜
膜蛋白
G＋
G－
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革 兰 氏 染 色 的 原 理 分 析
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四、 实验步骤
1.制片 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染 6.镜检
1.培养物常规涂片、干燥和固定; 2.结晶紫对涂片进行初染1min，水洗； 3.用碘液进行媒染1min，水洗； 4.用乙醇进行冲洗脱色20～30s，水洗； 5.用番红复染液进行复染1min，水洗； 6.从低倍到高倍、再到油镜观察。
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1.制片 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染 6.镜检
1.培养物常规涂片、干燥和固定; 2.结晶紫对涂片进行初染1min，水洗； 3.用碘液进行媒染1min，水洗； 4.用乙醇进行冲洗脱色20～30s，水洗； 5.用番红复染液进行复染1min，水洗； 6.从低倍到高倍、再到油镜观察。
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五、注意事项
素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的
致病作用不同。
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七、实验报告
1．结果
绘制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄
球菌的形态图，并判断它们分别被染成了什么颜
色？属于G-菌或G+菌？分析原因。
2．思考题
（1）革兰氏染色成败的关键步骤是什么？
（2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样
能判断你的染色技术操作正确，结果可靠？