从全血中抽提白细胞
全血基因组DNA的提取
分子生物学检验技术
分子生物学
研究对象
分子水平
探讨生命现象
2021/11/2
DNA及RNA
其表达产物蛋白质 功能 遗传 关系、作用
以超乎想象的速度飞速发展，渗透到医学每一个领域。
与临床检验诊断学关系
使疾病诊断深入到基因水平
基因诊断
可以毫不夸张的说，如果没有分子生物学的应用， 人类探索生命活动的行为将会寸步难行。
GenTLE solution Ⅰ： 破坏血细胞同时，与核酸形成电中性的复合体。 GenTLE solution Ⅱ： 复合体离心收集后清洗，洗涤作用。
GenTLE solution Ⅲ： 将DNA从核蛋白中解离出来。
异丙醇：将DNA沉淀回收。
70%酒精：利用DNA不溶于酒精的特性，去除DNA沉淀中 残留的盐类分子。
2021/11/2
5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照 物进行判定是必要的。 6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品 应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。 7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状 及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA 分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶 的浓度。小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以 提高分辨率。
1.缓冲系统：注意缓冲液的使用是否正确。 2.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一 致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。 倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。 3.样品加入量：加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载， 从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
实验样品采集运输保存方法
实验样品采集运输保存方法1. RNA实验样品采集、保存方法1.1 使用范围及样品量类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service样本量：样本样本量动物组织样品50-100mg哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞）1*107个哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞）15cm2植物组织样品100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组织需要量，尽可能多些，但不必超过1g1.2 动物组织样品1.2.1 新鲜组织样品A. 使用RNAlater试剂取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在0.5cm一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。
4度孵育过夜，此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。
B. 使用Trizol试剂取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。
匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。
1.2.2 冻存组织生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。
细胞沉淀（1*107个）中加入1ml Trizol裂解液反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全-70保存1.3 贴壁细胞从培养容器中吸出并弃去培养液培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。
反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。
-70度保存。
1.4 植物组织样品准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。
去白细胞血的临床应用推荐
（二）阻止或延缓HLA同种免疫
1、白细胞抗原的同种免疫发生率为39%（20%～71%）； 2、诱发HLA同种免疫的白细胞阈值为5x106/单位血； 3、HLA同种免疫是血小板输注无效的主要原因； 4、去除白细胞可显著降低HLA同种免疫发生率（多次 妊娠者效果差）。
*目前“去白”输血已成为减少同种免疫和 预防血小板输注无效的标准输血方法。
因子。
*相对于去除白细胞的优点，缺点微 不足道。
27
七、质量评估
（一）要求：既能有效地清除白细胞，又能保证有效成分足 够回收；
（二）过滤条件标准化并进行有效质控； （三）准确计数残留白细胞至关重要：
1、当WBC<100/μ1时，血细胞计数仪无法检测；
2、血涂片间接计数更不可靠； 3、Nageotte计数板，流式细胞仪、PCR计数法较可靠； 4、Nageotte计数板（大容量计数板，腔体容积50µl）可准确
*目前国际上仅使用（五）和（六）两法。
9
※表6 去除红细胞中白细胞方法比较
方法
白细胞去除率（%） 红细胞回收率（%）
离心法
65-88
83-92
冰冻融化法
90-98
80-90
洗涤法 过滤法
80-90 >99
70-80 90-96
10
※表7 去除血小板中白细胞方法比较
新型血细胞分离机制备法
过滤法
血小板损失
3
※表1 血液及血液成分中白细胞含量*
血液成分
新鲜全血 浓缩红细胞 去白膜红细胞 洗涤红细胞 冰冻去甘油红细胞 手工采血小板 机采血小板 新鲜冰冻血浆
*400ml为1U
白细胞含量（个/U*）
109 108-109
全血、去白细胞全血和去白细胞悬浮红细胞储存期末溶血率比较
全血、去白细胞全血和去白细胞悬浮红细胞储存期末溶血率的比较【摘要】目的比较全血、去白全血和去白细胞悬浮红细胞储存期末溶血率。
方法选择60袋400ml全血，随机分为a、b﹑c三组，每组各20袋，a组为全血，b组为去白全血，c组为去白细胞悬浮红细胞。
轻轻混匀通过无菌结合机，分别取样本﹙4±2﹚℃保存至储存期末，检测存期末的总血红蛋白浓度，血细胞比容和上清游离血红蛋白的浓度，计算储存期末溶血率。
结果储存期末溶血率，c组高于a﹑b两组，差异具有统计学意义（p<0.05）；a、b两组比较，差异无统计学意义。
结论血液在制备过程中，过滤和离心使红细胞的脆性增加和去除血浆后内环境的改变，在一定程度上都会影响红细胞储存期末溶血率。
【关键词】全血；去白细胞全血；去白细胞悬浮红细胞；储存期末溶血率溶血是红细胞膜的完整性受到破损或裂解释放血红蛋白引起血浆颜色改变，储存期末红细胞制品的溶血程度是评价保存红细胞质量的重要参数，常用溶血率来表示。
虽然已有多种措施能提高红细胞在血液制备、保存和运输过程中的稳定性，但红细胞离体后仍将增加溶血的危险，其溶血率并随保存期的延长而明显升高。
红细胞制品中游离血红蛋白含量过高，对于接受输血治疗的患者具有潜在的安全隐患[1]。
《全血及成分血质量要求（gb18469-2012）》中增加了红细胞储存期末溶血率标准，作者于2012年8～12月对全血﹑去白全血和去白细胞悬浮红细胞储存期末溶血率进行比较。
现报告如下。
1材料与方法1.1材料采血用由山东威高集团医用高分子有限公司提供的采血袋与白细胞过滤器一体的四联袋（血液保存液为cpd-a；红细胞保存液为map，含腺嘌呤、甘露醇﹑氯化钠﹑枸橼酸﹑枸橼酸钠、葡萄糖和磷酸二氢钠），大容量低温离心机（德国贺力士），低温操作台，分浆夹，热合机，无菌结合机，冰箱（4℃±2℃，日本sanyo 公司）。
3讨论由表ⅰ可以看出，三种不同血液制品储存期末溶血率均低于0.8%，符合《全血及成分血质量要求（gb18469-2012）》，但也发现储存期末溶血率c组与a﹑b两组比较差异都具有统计学意义（p<0.05），分析其原因可能为：①在滤除白细胞过程中，过滤前混匀时对血袋的摇晃或震荡会导致部分红细胞的脆性增加以及衰老红细胞的溶解[2]。
血液中去除白细胞技术方法的研究探讨
血液中去除白细胞技术方法的研究探讨目的通过探讨血液中去除白细胞的不同技术方法，掌握白细胞滤除率，确保临床用血有效性。
方法根据血液品种需要，采用不同血袋，分别采用成分制备后过滤法、采血6 h内、8 h后直接过滤后制备悬浮红细胞法，分析过滤后白细胞滤除率、红细胞回收率指标。
结果制备后过滤法可以制备各种血液成分，保障了血小板和新鲜冰冻血浆的质量。
制备后过滤法、6 h内直接过滤法与8 h 后直接过滤法白细胞残留量、血红蛋白含量、过滤时间差异有统计学意义。
采血8 h后直接过滤法适合用于乡镇或路程较远的县城采血、减少滤器堵塞情况。
结论三种过滤法制备的去白细胞悬浮红细胞均符合GB18469-2012《全血及成分血质量要求》要求。
血站可根据采血实际情况选择不同方法。
标签：去除白细胞采血时间制备方法去白细胞血液成分是现阶段国内外一致公认的既安全又高效的血液成分之一，国内文献报道输血反应率为0.32%～0.45%[1]，去白细胞血液输注在临床中已开始应用。
如何更有效去除血液中的白细胞，提高红细胞收集率，各地血站均在探讨。
本站于2012年科研立项开展血液去白细胞技术研究，通过不同方法了解分析去除白细胞数据，为不断提高临床用血安全、有效提供有力依据。
1资料与方法1.1一般资料2012～2013年在本站参加无偿献血者705人，献血量为200 mL、300 mL、400 mL，以采血时间将其分为三组。
1.2制備方法用含CPD方或ACD-B或CPDA方保养液的带白细胞过滤器的采血袋采集，在采血后直接成分制备后过滤、6 h后先过滤后成分制备、8 h 后先过滤后成分制备[2]。
成分制备后过滤法：在采血6 h内分离制备浓缩血小板、新鲜冰冻血浆、悬浮红细胞，30 min～2 h内接驳过滤；6 h内先过滤后成分制备：采用即采即滤型一次性去白细胞多联采血袋采集全血，在采血后6 h内直接过滤。
然后制成去白细胞悬浮红细胞。
8 h后直接过滤法：采用隔夜过滤型一次性去白细胞多联采血袋采集全血，在采血后8 h以上至48 h内直接过滤，制成去白细胞悬浮红细胞。
浅谈去白细胞输血对肿瘤患者免疫
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学 术 探 讨
Ａ ａ ｅ ｃ Ｓｕ ｙ ｃ ｄ ｍｉ ｔｄ
６１・
Ｃｈｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆＥｔ ｎ ｍｅ ｉｉｅ ａ பைடு நூலகம் Ｅｔ ｎ ｐ ｒ ｃ ｉｅｅ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｈ ｏ ｄｃｎ ｎ ｈ ｏ ｈａｍａ ｙ
浅 谈 去 白细胞 输 血 对 肿 瘤 患者 免疫
自从 Ｌ ｎ ｓ ｅ ｎ ｒ ａ ｄ ｔ ｉｅ 发现 红 细 胞 Ａ ０ 型 系统 开始 ，输 血 逐 瘤生长 、转移 的作用 ，且该作用能被动的传递给未接受过血 Ｂ血 渐成 为了临床疾病 治疗 的一种有 效措施 。近 二十年 来，随着 制 品的动物 ，这种作用与异基 因血 中的 白细胞有关 。许多研 输血技术 日臻完善及多学科技术领域 的融入 ，使其得到 了划 究结果也表 明，异基 因输血有促进肿瘤生长、转移 的作用 。 白细胞 与感染 的相关性 。笔者通过对多例直肠癌手术病 时代 的发展 ，成为一 门由多学科交叉构成 的新 兴医学——输 血医学ｎ。 人进行研究 ，发现去 白细胞成分输注组术后腹腔脓肿、肺 炎 随着 输血 医学的发 展，输血 引起 的一些并发症 ，也逐渐 等感染率均较含 白细胞输注组明显降低；去 自细胞成 分输注 受到人们重视 和公认 。输血 引起 的免疫性和非免疫性副 减少 了输血免疫抑制反应，使术后感染率降低。另外 ，通过 作用 ，都可能对病人 的健康造成伤害 。特别是近些年输血 引 对心外科病人研究发现 ，去 白细胞成分输注 使术后感染率及 起 的受者免疫功能 的变化 ，尤其对肿瘤 患者 的免疫功 能及其 死亡率 明显降低。 预后影响倍受医学界关注 。有关研究指 出输血 引起 的免疫功 些学者对 同种 同系和 同种异系小 鼠的感染模型进行输 能障碍主要与 白细胞及其分解产物有关 ，其 中 白细胞表面抗 血与存活率 的关系分析后证实 ，同系小 鼠输 血后的存 活率明 原Ｍ Ｃ Ｉ及Ｂ 巴细胞表面抗原在诱发Ｈ Ａ Ｈ－ Ｉ 淋 Ｌ 同种 免疫 反应 中可 显高于异系小 鼠输血后的存活率，井认为输血后 由白细胞 携 能发挥着主要作用 。供血 中的白细胞在许 多输血不 良反应 中 带 的删 ｃ 原 的 提 呈 再 免 疫 调 节 和 细 菌 感 染 的 敏 感 性 上 起 相 抗 的作用得到重视 ，并有相 当部分研究得 出两者统计学意义上 当大的作用。 的相关性 。相关 的不 良输血反应 ，如 非溶血性 发热性输血反 ’ 汇 集近年６ 篇前瞻性 随机 临床研究结果 发现 ，肿瘤外科 应 同种免疫 、输血相关移植物抗宿主病 、成人 呼吸窘迫综合 围手术期输注异体血液后细菌感染明显增加，与输注 血制 品 洗 征、亲 自细胞性病毒传播及潜伏病毒激活 、输血相关免疫抑 的 种类 及 输 血 量有 关 。输 注 少 白细 胞 的压 积 红 细 胞／ 涤红 细 制等 。因此 ，通过物理 、化学方法减 除或灭活血液 中的白细 胞，感染率 明显低于输注全血。输注 自体压积红细胞感染率低 胞在 国内外 已成为预防输血副作用的最有效 手段 。 于输注异体洗涤红细胞／ 压积红细胞。输注 自体全血与洗涤 红 细胞／ 压积红细胞 的感染率无 明显差异 。而 输注少 白细胞贮 １ 去白细胞输血定义 即输血 前通 过物理 、化 学方法 减少或 灭活 血液 中的 白 存洗涤 红细胞／ 积红细胞感染 率明显低于输注 全血 ；但输 压 注新鲜 少 白细胞的压积 红细胞３ ４ — 单位 以上 ，则术后感染 率 细胞 的一种输血技术和方法 。主要方法有 ：离 心去 白膜法 、 洗涤法 、冰冻去甘油法 、过滤法 、血 细胞 分离机机采 少 白细 与输注全血无差别 。笔者认为感染率增加的原因与异体血 液 胞成分、紫外线照射血液或血液成分 、 丫射线照射血液或血 中自细胞成分及其分解产物引起受者免疫抑制有关 。 液成分 。其 中过滤法为迄今最有效 、最 常用 的清 除 白细胞 的 ３ 白细胞 与病毒感染的相关性 临床研 究证 实，通过去 白细胞输血可有效地防止主要 寄 方法 ，其特点是清 除率 高、残 留 白细 胞少、有 效成 分回收率 高 、操作简单 、价格适宜，可有效预防Ｆ Ｈ Ｒ Ｌ 同种免疫 生于受感染 白细胞 中的亲 自细胞病毒。一些科学家将 潜伏 感 ＮＴＳ ＨＡ 及 亲 自细 胞 病 毒 的 传 播 。 染Ｈｖ Ｉ的淋 巴细胞 （Ｌ ） （ｃ 与红细胞血小板血浆一起混合培养时， 没有病毒活化的表现 ，而与 白细胞一起 孵育时，发现 培养 液 ２ 输血对肿瘤患者 免疫功 能的影响 Ｉ 抗原浓度升高 ，几天后有Ｈ Ｖ Ｉ 释放，而且释放量 大量动物实验和临床研究表 明：输血可导致肿瘤患者免 上清液 中Ｈ Ｖ 与 白细 胞剂量有关 ，释放 出的ｆ Ｖ ｔ 又感染先 前未感染 的培养 ｌ 疫抑制 ，进一步加重 了肿瘤 患者本 身的免疫功能障碍 ，从而 、 增加术后感染率及促进肿瘤 生长 、转 移及 术后复发，影响预 细 胞 。 以上研究表 明，输注异基 因全血可使受者免疫功能发生 后 ，降低 ５ 年存活率 。研究还表 明输血 的这 种副作用主要 与 抑制 ，从而 导致受者输血后感染率较未输血和输注去 自细胞 异 基 因 中的 自细 胞 有 关 。 白细胞与肿瘤 生长的相关性 。临床研究上用荷瘤小 鼠及 异基 因血及输注 同基 因全血者高，术后恶性肿瘤 的复发率和 荷瘤兔 ，分别为其输注 异基 因全血、 同基因全血及少 白细胞 转移率较未输血和输注去白细胞异基因血及输注 同基因全血者 的异基 因血 ，观察 不同种类 的血制品对肿瘤生长及肺转移结 高，且这些副作用主要与异基因全血中的白细胞密切相关。 节 的影响 。结果发现 ，输注 异基 因全 血的荷瘤小 鼠肺转移结 ４ 围手术期输血 与肿瘤关系的国内外研 究现状 节 数较 输 注 同基 因全 血 及 少 白细 胞 的异 基 因血 的荷 瘤 小 鼠肺 结 国内外学者对围手术期输血与肿瘤的关系均进行 了研究， 节数明显增加：接受同基因全血与少白细胞的异基因血输注的 围术期输血促进恶性肿瘤病人术后复发 的报道首先见于结肠 荷瘤小鼠肺转移结节数无 明显差异。将异基因全血、同基因全 癌，随后相 继报道 发生在肺癌 、乳腺癌及 肾癌等恶性肿瘤 。 些学者认 为围手术期输血可抑制肿瘤患者免疫功能 ，患者 血及少 白细胞 的异基因血分别输注给非荷瘤小鼠／ 非荷瘤 兔， 淋巴细胞亚 分 离其脾 细胞 ，再 分别输 注给 未接 受过 血制 品的荷 瘤小 鼠 预后不 良，但其具体机制有待进一步研究 。应用Ｔ ／ 荷瘤兔 ，比较后者的肺结节数发现，接受异基因全 血的非荷 群来检测肝癌患者机体免疫功能国内外已进行了大量的研究 。 淋 瘤小 鼠 乍 荷瘤兔 的脾细胞所致的肺结节数 明显高于接受 同基 有 的学者提 出是否可将Ｔ 巴细胞 亚群 检测作为肝癌 术后随 Ａ 己用于头颈部肿瘤 、 胃癌 、 因全血及少白细胞异基 因血的非荷瘤小 鼠／ 非荷瘤兔 的脾 细胞 访指标 ，用于 监测肝癌复发 Ｉ Ｐ 肾癌、肺癌以及卵巢癌等的辅助诊 断、监测 肿瘤 的复发和预 再输注所致 的肺 转移结节数 。作者认为异基 因输血有促进肿
去白细胞悬浮红细胞的制备
去白细胞悬浮红细胞的制备1.引言1.1 概述概述部分的内容可以如下所述：悬浮在血液中的白细胞和红细胞在医学研究和临床应用中扮演着重要的角色。
然而，由于它们的不同特性和功能，分离和纯化这两类细胞成为了许多研究者和临床医生共同面临的挑战。
本文旨在探讨一种用于制备去白细胞悬浮红细胞的方法，以解决这一问题。
白细胞是免疫系统中的重要组成部分，其主要功能是抵御外来病原体和维持机体内环境的稳定。
然而，在某些疾病状态下，白细胞的数量和/或活性可能会过高，导致炎症反应或组织损伤。
因此，有时需要将白细胞与其他细胞类型分开，以便进一步研究或治疗。
与之相反，红细胞是负责氧气和二氧化碳的运输，以及维持机体血液酸碱平衡的关键细胞。
然而，在某些疾病情况下，如白血病或白细胞增多症，白细胞可能会大量存在于红细胞悬浮液中，影响血液功能和治疗效果。
因此，将红细胞从白细胞中分离出来具有重要的临床意义。
本文将重点介绍一种用于制备去白细胞悬浮红细胞的方法。
这种方法基于细胞的不同大小、形状和密度，利用离心、梯度离心和洗涤等步骤，来实现红细胞与白细胞的有效分离。
我们将详细描述每个步骤的操作方法和所需的实验条件。
最后，我们将通过实验结果和临床案例来评估该方法的可行性和应用前景。
我们希望这种方法能够为研究人员和临床医生提供一个可靠的工具，以便更好地理解和应对与白细胞和红细胞相关的疾病。
通过去除白细胞，我们可以更好地研究红细胞的功能和特性，为疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构:本文主要分为引言、正文和结论三个部分。
1. 引言：在引言部分，我们将对制备去白细胞悬浮红细胞的重要性进行概述，并介绍本文的结构和目的。
2. 正文：正文部分将分为两个要点来详细介绍去白细胞悬浮红细胞的制备方法和技术。
2.1 第一个要点：在第一个要点中，我们将介绍传统的去白细胞悬浮红细胞的制备方法，包括离心法、沉降法等，并对其原理和步骤进行详细解释。
血液中白细胞分离 步骤
血液中白细胞分离步骤
白细胞分离是一种分离血液中白细胞的技术，其步骤如下：
1. 取血：先在病人的手臂上绑上绷带，用消毒棉球清洁静脉采血部位，然后采取一定量的血液。
2. 酸化：将采取的血液加入一种酸性溶液中，溶液中的酸性物质可以使白细胞脱离其他血液成分，以便进行进一步分离。
3. 离心：将混合后的血液在离心机中旋转几分钟，此时白细胞会被离心分离出来，并沉积在离心管的底部。
离心后，可以将上层液体倒掉。
4. 再次洗涤：将沉积在离心管底部的白细胞取出来，进行一次或多次的洗涤，以除去残留的细胞碎片和其他污染物。
5. 计数：最后，使用显微镜或自动计数器来计数分离出的白细胞数量。
以上就是白细胞分离的步骤。
血液成分是如何制备的呢
血液成分是如何制备的呢日常生活中，我们常常会听说“输血”，其实，临床上在为病人输血的时候，常常使用的都是血库中的“血”，其实，血库中的“血”并不是我们献出去的全血，而是经过分离、提纯过后的血液成分，看到这里大家可能就有疑惑了——血液成分是如何制备出来的呢？接下来笔者就来为大家大致讲解一下血液成分的制备的相关知识，希望大家通过这篇文章，能够初步了解血液成分的制备。
1、浓缩红细胞的制备浓缩红细胞是临床上应用非常广泛的，制备它所用的方式也是非常经典，一般来说，我们会在规定的时间内将血浆分离出来，并依据血浆移出量的不同，让红细胞比容保持在70％-90％之间，70％的红细胞是最佳的，也是最方便进行输注的。
浓缩红细胞的制备方法如下：（1）离心法：离心法是非常经典的制备方法，首先，我们采集全血时应该使用二联塑料血袋，并将采集到全血的血袋与转移袋一同夹持，使血袋上部鼓起并直立在离心杯中，成对的离心杯放入离心机，盖好外盖并调节好离心时间和温度（一般为5kg离心7分钟，温度为4摄氏度±2摄氏度，如果离心机性能较差，则需要根据具体情况来调整和延长离心的时间），这样这可以使红细胞快速下沉。
血浆挤压器的两个夹板中间放上血袋，并把分浆管与血袋之间的堵头取掉，血浆就会流向转移袋，将封口热合，并将转移袋与血袋之间连接的分浆管切断，即可得到血袋中的浓缩红细胞。
（2）自然沉降法：自然沉降法的核心就是“自然沉降”，在沉降时，我们需要把血袋挂在温度为4摄氏度±2摄氏度的冰箱中，让红细胞自然沉降，时间为一到三天，或是直接将血袋倾斜七到八十度角，立在该温度下的冰箱中，要用的时候，就使用一次性分浆器将血浆分离出来，这样我们就获得了浓缩红细胞。
2、洗涤红细胞的制备洗涤红细胞指的就是洗涤过的红细胞，这种红细胞除了血小板和白细胞量有所降低以外，血浆蛋白也残留得很少，大约仅为原总蛋白的百分之一甚至更低，一般使用生理盐水，经过三到六次的洗涤，方可得到洗涤红细胞。
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP)
人外周血白细胞DNA提取标准操作规程(SOP) （血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)）1实验原理本法采用血液/组织/细胞基因组提取试剂盒(DP304)，从全血中分离白膜层，去除其中的红细胞及蛋白质，裂解白细胞释放DNA，再通过去除DNA中的杂质使其纯化，得到高纯度的DNA原液，最后使用微量紫外可见分光光度计对DNA 的浓度及纯度进行定量检测。
2实验仪器2.1 1.5ml EP管2.2微量移液器，10μL、50μL、200μL、1000μL2.3涡旋振荡器2.4数显恒温搅拌循环水箱2.5吸附柱CB32.6收集管2.7离心机2.8涡旋振荡器2.9微量紫外可见分光光度计（Thermo NanoDrop1000）3实验试剂3.1正常人混合血液，应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3.2红细胞裂解液（裂解红细胞）3.3缓冲液GA（轻微裂解作用，为蛋白激酶K提供反应环境），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.4蛋白激酶K（裂解蛋白质）3.5缓冲液GB（裂解白细胞，释放DNA），若溶液产生沉淀，使用前应在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。
3.6无水乙醇（沉淀DNA，去除杂质）3.7缓冲液GD（去除蛋白质），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.8缓冲液PW（去除盐），使用前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
3.9洗脱缓冲液TE（保存DNA）4实验步骤4.1样品的采集与保存：用装有EDTA的塑料管采集2mL静脉血，2000rpm离心5min，可见分层，分别为血浆层、白膜层、红细胞，将血浆吸出弃去，再通过点吸的方式将白膜层全部吸出，置于干净的1.5mL EP管备用。
如无法及时提取DNA，则应置于-80℃进行保存。
4.2样品预处理：4.2.1裂解红细胞：通过低速涡旋15s混匀样品，取150μL样品置于干净的1.5mL EP管，加入750μL红细胞裂解液，通过手摇振荡的方式进行颠倒混匀5min，然后10000rpm离心2min，吸去上清，留下白细胞沉淀。
全血基因组DNA的提取
实验2 全血基因组DNA的提取原理：由于血液各组成成分颗粒大小及比重的不同，利用明胶的吸附作用，使红细胞沉降在管底，从而与白细胞分离。
通过SDS的破膜（细胞膜和核膜）作用，使白细胞释放出DNA，然后利用酚和氯仿抽提纯化，分离除去蛋白质，最后用乙醇沉淀析出DNA。
材料：方法：1.提取WBC（1）取1ml全血（EDTA抗凝），加入等体积（1ml ）3%的明胶，盖紧后颠倒混匀，37℃水浴静置5-10分钟。
明胶是高分子的聚合物，可与红细胞粘合并使其凝聚成串钱状而加速红细胞快速沉降，使之与白细胞分离。
（2）取上清液至另一干净离心管，4000转离心5分钟。
（3）弃上清液，留沉淀。
2.破碎WBC在留有沉淀的离心管中加TES 2ml，溶解沉淀（滴管或加样器抽吸，一定要充分吹散沉淀以利于破膜）后加10% SDS 10滴，抽吸混匀，破膜。
以后的操作要小心轻柔，以免机械剪切力破坏核酸的完整性（核酸已释出）3.抽提DNA（1）加入2 ml pH 7.8的饱和酚（在通风橱中操作，吸取下层。
苯酚有毒，注意安全），颠倒混匀（一定要充分混匀）。
4000转离心5-10分钟。
（2）取上层水相至另一离心管，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）（在通风橱中操作，有毒，注意安全），颠倒混匀，4000转离心5分钟。
4.沉淀DNA将上层水相移至一小玻璃试管中，小心沿试管壁加入2.5倍体积的无水乙醇，用滴管吸上层乙醇沿管壁缓慢冲洗下层溶液（小心，不要把DNA吹散），看到DNA絮状沉淀完全析出为止。
5.溶解DNA沉淀用吸管吸出絮状沉淀至另一1.5ml小离心管，稍离心后加入70%乙醇洗涤1次（去除共沉淀的盐），离心后将乙醇去除干净，挥干5-10分钟。
将上述挥干的DNA加入200-300μl TE（或者双蒸水），轻轻震荡，使之溶解，冰箱保存备用。
结果：获得基因组DNA讨论：小组10人，个人分别为一组，有的同学的DNA成形状不明显，到实验步骤的最后没有肉眼看见DNA絮状沉淀析出，难以判断基因组DNA是否提取成功。
操作规范下通过白细胞过滤器滤除白细胞技术探析
报，2005（4）：94-95. [2] 陈焯文. 白细胞过滤器的临床应用[J]. 中国现代医学杂志，2003（1）：49-50. [3] 郑萍，蔡莉. 白细胞过滤器的临床应用[J]. 河南预防医学杂志，2006（6）：
为了保证在过滤过程中血液的流速均匀，避免因红细胞的浓度 过高而堵塞滤盘或者是流速过于缓慢，就必须把母袋中的血液轻柔 充分地混匀以后，再悬挂在白细胞过滤柜当中，悬挂的高度以正好让 目标转移袋平放到操作台的台面上为宜。当然，必须核对血袋条码和 留样 条 码，确保 二 者一 致以后再进 行白细胞的过 滤 操 作，要 把 握 好 血液流速控制开关的调节，让滴斗内的血液流速能够用肉眼辨别出
SUMMARIZE 综述
CHINA HEALTH INDUSTRY
操作规范下通过白细胞过滤器滤除白细胞技术探析
满江影 长春市中心血站，吉林长春 130000
[摘要] 使用一次性的白细胞过滤器，能够有效去除白细胞，避免和减少因输血而造成的移植物抗宿主病和病毒传染，消除或者防 止和输血有关的各种免疫抑制综合征。通过白细胞过滤器去除白细胞的原理是，在白细胞经过滤盘的时候，通过机械阻滞与吸附 的原理而去除白细胞，但是能使变形能力较强和表面光滑的红细胞经过过3 μm孔径的过滤器。我们在滤除白细胞操作实践过程 中，采用保证标准的工作环境、注意流速，充分均匀，操作轻柔、防止溶血和注意过程控制，保证血液成分质量，取得了满意效果。 [关键词] 血液成分输血；白细胞滤器；血液成分除去法；安全输血 [中图分类号] R457.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2012）12（b）-0178-01
在操作过程中，应当确保所有的血液成分制备的标签完整和清 晰，并且 要在制 备和 加 工的所 有过 程当中粘 贴 牢固；转 移 袋 和原 袋 在分离以前，献 血 条行码必 须认 真 检 查核 对；在 全 部的血液 成 分 制 备 过 程当中，必 须 要 做 好各种相关记录，在制备 完成以后，要及时地 交 给供 血 处，要 依 据不同的品种进 行 储 存，并认 真做 好 交 接 记录， 避 免 出现 差 错。要及 时处 理 医 用废 弃 物，每天 进 行1次，这 方面也 要 做 好相关记录。如果是使用联袋或者是无菌接管机来制备血液成 分，那么，在 没有 破 坏 密闭系统的这种情况下，必 须 要在净 化 室的外 边 来 进 行血 液的成 分 制备，当然，也可以运 用接 管机 在 对 接以后 实 行过滤操作。 5 讨论
提取红细胞,白细胞方式
提取红细胞,白细胞方式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：提取红细胞、白细胞是目前医学领域非常重要的一项技术，它不仅可以帮助医生诊断疾病、监测患者健康状况，还可以在一些特殊情况下拯救生命。
红细胞和白细胞是人体血液中的两种重要成分，它们的提取需要经过一系列精密的操作和技术手段才能得到纯净有效的样本。
本文将介绍提取红细胞、白细胞的常见方法和技术流程。
一、红细胞的提取方式红细胞是血液中最主要的细胞成分，它们携带氧气和二氧化碳，维持身体的正常代谢功能。
提取红细胞对于治疗贫血、输血等治疗手段至关重要。
以下是几种常见的提取红细胞的方式：1. 自体输血：自体输血是指将患者自身的血液提取出来，经过处理后再输回体内。
这样可以避免异体输血可能带来的免疫排斥反应，减少感染的风险。
自体输血主要适用于手术前准备、贫血患者等情况。
2. 血库输血：血库输血是指将经过筛查、检测的供血者的血液提取后存储在血库中，根据需要输血给患者。
这种方式适用于紧急情况、重症患者等情况。
3. 分离红细胞：通过离心、过滤等方法将红细胞与其他成分分离开来，得到纯净的红细胞样本。
这种方式主要用于实验室研究、临床诊断等需要特定样本的情况。
白细胞是血液中的免疫细胞，主要起到抵抗病原微生物、清除异物、维持免疫平衡等功能。
提取白细胞不仅可以帮助诊断感染、炎症等疾病，还可以用于免疫治疗等方面。
以下是几种常见的提取白细胞的方式：1. 血液细胞计数：通过血液细胞计数仪等设备对血液样本中的白细胞进行计数和分类。
这种方式适用于常规血常规检测、疾病诊断等情况。
3. 白细胞产品制备：通过离心、负选择、阳选择等技术将白细胞提取、富集、分离，制备成白细胞产品。
这种方式适用于治疗器官移植排异反应、免疫调节等领域。
红细胞和白细胞的提取方式各有特点，根据具体的实际需求和目的选择合适的方法非常重要。
提取红细胞、白细胞的技术不断创新和进步，为医学研究和临床治疗带来更多的可能性。
希望未来可以有更多的技术手段和方法应用于红细胞、白细胞的提取和应用中，为医学发展和患者服务带来更多的益处。
从全血中抽提白细胞
从全血中分离白细胞
操作过程：
1．用抗凝管收集全血，抗凝管需EDTA材质或者柠檬酸钠材质，不能用肝素钠材质。
2．全血白细胞分离：下列以3ml 抗凝血为例说明。
a．向一只15ml 离心管中加入3ml 抗凝血，而后加入9ml 红细胞裂解液。
盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下。
请不要剧烈振荡。
b．将离心管至于室温放置10 min（5-10 min，不要超过10 min）。
c．将离心管以2500 转离心5 min。
d．弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色班块细胞。
e．弃去上清后在管底出现可见的白色班块，此白色班块为富集的白细胞。
如果裂解不完全（白色班块里还有红色细胞），加入1ml PBS 缓冲液重悬，然后重复a－d
步骤。
f．充分裂解后，可用1ml PBS缓冲液清洗一次，2500 转离心5 min。
g．弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80％以上。
而后可加入适量Trizol （根据细胞数量而定5X106加1ml Trizol）后，用移液器充分吹打，混匀，直至出现清
亮不粘稠的液体，表示细胞充分裂解。
h．而后可以把以上的Trizol 试剂保存在生物冰中-70℃，最后用干冰运输寄于我们。
血液白细胞提取流程
血液白细胞提取流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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图解捐献白细胞流程
合格
开始 第一次验血
升白（增采集 成功，结束
不合格
失败，结束
虚线框内部分是 与捐血小板不同的流程
不合格
失败
等待 或第二次升白
捐献流程——说明
• 采集过程、采集准备
– – 整个捐献过程占用两天 升白药物的起效时间约10小时，存在个体差异，有的人可能会延长到24小时起效
图解成分献血
之
捐献白细胞
风雨无阻 出品
2017/3/12
写在前面
•
通常所说的成分献血均指捐献血小板，而捐献白细胞与之差别很大
– 捐献白细胞的最接近的流程是捐献造血干细胞（通常所说的捐骨骼），两者都需要外部药物激发献血 者身体在短期内大量制造（或大量向外周血释放）所需采集的成分。
•
和血小板相比，白细胞临床需求量很少
•
采集方式、所采集的血液成分
– – – 通过血液分离机操作 多为双针操作 每采集1单位白细胞会同时采血1单位红细胞，最终得到的是混有所需白细胞的悬浊液， 外观颜色与全血相同
•
关于上机采集
– – – 捐献者在血液分离机上的时间约3～4小时（包括准备时间15分钟、收尾时间15分钟） 捐献者全程不能离机，也不能自由活动 由于上机时间长，医生会特别提示捐献者提前去WC，有可能会提供成人纸尿裤
Q3：1单位白细胞有多少？怎么来的？ A： 成分血中所说的1单位指的是体重约70kg的成年人病人，默认所需 的成分在体内贮存量为0，输注所需成分后血相中对应的指标达到 健康指标的下限。这个下限大约相当于健康人健康指标参考值下限 的一半。 如果病人体重远大于70kg，那么每次输血时就可能需要大于1个单 位的成分血； 如果病人是未成年人，但体重比70kg少不了多少，输成分血时仍 以1个单位计； 只有婴幼儿输成分血时会少于1个单位。
全血滤除白细胞后4
全血滤除白细胞后 4ºＣ保存 1-7天再制备去白悬浮红细胞方法的探讨【摘要】目的：探讨全血滤白后4ºＣ保存1-7天再制备去白悬浮红细胞方法的可行性。
方法对去白悬浮红的常规制备方法进行了改进，由原来采集当日过滤后马上制备去白悬浮红和新鲜冰冻血浆改为采集当日过滤白细胞，放置4ºＣ低温冰箱保存1-7天不等，再集中制备去白细胞悬浮红细胞及普通冰冻血浆。
结果：用全血滤白后4ºＣ保存1-7天再制备去白悬浮红细胞和普通血浆的方法，去白悬浮红细胞质量符合全血及成分血质量要求,但有一定比例普通冰冻血浆出现轻微溶血现象。
关键词滤白后4ºＣ保存；血浆；溶血；运输成本我站为满足临床供血需求，大力发展无偿献血工作，在不同区域设置多个固定献血点,其中固定献血点A地处偏远，距离中心血站路程远，但日采血量不大，如果按照常规工作流程，每日采集的血液当天运回站内用于制备去白悬浮红和血浆，车辆运输成本很大。
如何做到既能在采集当日过滤去除白细胞，又不影响去白悬浮红和血浆的制备，还能节约车辆运输成本，针对特殊情况，我站在常规制备方法上进行了改进。
现报告如下：1材料与设备同一厂家生产的300/400ml四联滤白采血袋。
威高滤白柜、贺利氏大容量低温离心机、LMB血液分离机、低温冰箱、血浆溶血程度比色板等2成分制备方法一次性滤白采血袋常规采集血液300ml或400ml全血放置4°C低温储血冰箱降温。
当天下班前进行白细胞过滤，过滤后排出滤后袋内部分气体，（防止袋内压力过高，储存过程引发红细胞溶血）只保留小部分气体在滤后袋，热合交叉辫三段后放置4°C储血冰箱存放1-7天不等，低温冰箱实行24小时温度监控，使冰箱储血温度稳定保持在4-6°C。
每周固定日运回站内制备去白悬浮红和普通冰冻血浆。
制备参数：3500转/分，温度4°C、离心10分钟，分离上层血浆，红细胞加入MAP保养液，制备成去白悬浮红细胞，血浆进行二次离心，离心后血浆根据外观颜色判断是否符合《全血及成分血质量要求》（1）中外观颜色判断标准：肉眼观察应呈黄色澄清液体，无色泽异常、蛋白析出气泡及重度乳糜等情况。
全血细胞分析
全血细胞分析全血细胞分析是一种常见的检查方法，用于评估人体内的血细胞数量和质量。
通过分析全血细胞，医生可以判断一个人的健康状况并作出相应的诊断。
在全血细胞分析中，主要关注的参数包括红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度和血小板计数等。
这些参数可以通过血液样本在实验室中进行测定。
一般来说，医生会在体检或特定病情时要求患者进行全血细胞分析。
首先，我们来关注红细胞计数这一参数。
红细胞是携带氧气和二氧化碳的主要细胞成分，在全血细胞分析中起到了关键的作用。
红细胞计数可以反映人体的氧气输送能力和血液的稀释程度。
正常情况下，红细胞计数应该在一定范围内，否则可能提示出血、贫血、骨髓问题等疾病。
其次，白细胞计数也是全血细胞分析的重要参数之一。
白细胞是人体免疫系统的核心组成部分，它们负责抵御病菌和病毒的入侵。
白细胞计数可以反映人体的免疫能力和炎症程度。
如果白细胞计数超出正常范围，可能意味着感染、白血病或其他免疫系统问题。
此外，血红蛋白浓度也是全血细胞分析的一个关键指标。
血红蛋白是红细胞中的一种蛋白质，它可以帮助维持血液的正常氧供应。
血红蛋白浓度的增加可能是贫血、肺疾病或骨髓问题的指示。
而血红蛋白浓度的减少则可能提示贫血、出血或其他系统疾病。
最后，血小板计数也是全血细胞分析中的一个重要参数。
血小板是血液中的细小细胞碎片，它们在出血时起着重要的止血作用。
血小板计数可以反映人体的凝血功能和出血风险。
如果血小板计数过低，可能会导致易出血。
而血小板计数过高则可能与血液病、感染或炎症有关。
通过全血细胞分析，医生可以综合评估以上参数的结果，从而判断一个人的健康状况和可能存在的疾病。
然而，全血细胞分析仅仅是一个初步的筛查工具，不能替代其他更具体的诊断方法。
如果全血细胞分析的结果异常，医生通常会要求进一步检查以明确诊断。
此外，值得注意的是，全血细胞分析的结果还需要根据个体情况来进行解读。
不同年龄、性别、体质和生理状态的人群在全血细胞分析中可能有所差异。
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从全血中分离白细胞
操作过程：
1．用抗凝管收集全血，抗凝管需EDTA材质或者柠檬酸钠材质，不能用肝素钠材质。
2．全血白细胞分离：下列以3ml 抗凝血为例说明。
a．向一只15ml 离心管中加入3ml 抗凝血，而后加入9ml 红细胞裂解液。
盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下。
请不要剧烈振荡。
b．将离心管至于室温放置10 min（5-10 min，不要超过10 min）。
c．将离心管以2500 转离心5 min。
d．弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色班块细胞。
e．弃去上清后在管底出现可见的白色班块，此白色班块为富集的白细胞。
如果裂解不完全（白色班块里还有红色细胞），加入1ml PBS 缓冲液重悬，然后重复a－d
步骤。
f．充分裂解后，可用1ml PBS缓冲液清洗一次，2500 转离心5 min。
g．弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80％以上。
而后可加入适量Trizol （根据细胞数量而定5X106加1ml Trizol）后，用移液器充分吹打，混匀，直至出现清
亮不粘稠的液体，表示细胞充分裂解。
h．而后可以把以上的Trizol 试剂保存在生物冰中-70℃，最后用干冰运输寄于我们。