细胞黏附实验的步骤及方法

细胞黏附实验的步骤及方法

一、技术简介

细胞黏附主要用于判定细胞在经过各种药物处理、基因转染、敲除或培养条件改变后，细胞的黏附能力改变情况。通常可分为两类，即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞在相互识别及黏附机制方面发生了改变。

二、实验流程

1. 用无血清培养基RPMI-1640将Matrigel（人工基底膜胶）配制成

0.04μg/μl的人工基底膜胶备用，96孔板每孔中铺Matrigel 2μg，放于超净台中风干过夜。

2. 在96孔板加入适量无血清RPMI-1640细胞培养液(或PBS或生理盐水)，放置60-90分钟。

3. 洗去多余的胶，取培养的肿瘤细胞以1×104/孔接种在铺胶的96孔板中，设3个重复孔，放入37摄氏度5%CO2培养箱中培养24h。

4. 加药和模型药，培养48h。

5. MTT检测：吸掉液体，然后每孔加入MTT 10μl，继续培养4h，吸掉液体，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)100μl，在振荡器上振荡5-10分钟，在显微镜下观察无晶体，然后在酶标仪490nm波长读取数值。