微生物快速检测方法PPT讲稿
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• 快速检测的新方法
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
• 原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
• 操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
培养膜法_快速检测纸片技术
• 优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。
➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
• 缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
• 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
螺旋平板法
• 优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，
节省了大量人力物力。
• 缺点
➢ 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用百度文库可过滤样品的微生物检测。
微生物快速检测方法课件
常见微生物检测项目
• 常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
• 致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
• 传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测
测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌
使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
• 原理
电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的
对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
• 优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。
➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测
简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变
化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
• 原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 应用
➢ 细菌总数
测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群
测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌
指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
• 特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
• FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测
仪 ➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞
• 应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
• ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
• 优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
• 缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
• 原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光素 +光
技术进行计数。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。
➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
• 美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相
结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
• 原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
• 操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
培养膜法_快速检测纸片技术
• 优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。
➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
• 缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
• 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
螺旋平板法
• 优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，
节省了大量人力物力。
• 缺点
➢ 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用百度文库可过滤样品的微生物检测。
微生物快速检测方法课件
常见微生物检测项目
• 常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
• 致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
• 传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测
测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌
使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
• 原理
电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的
对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
• 优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。
➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测
简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变
化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
• 原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 应用
➢ 细菌总数
测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群
测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌
指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
• 特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
• FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测
仪 ➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞
• 应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
• ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
• 优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
• 缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
• 原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光素 +光
技术进行计数。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。
➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
• 美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相
结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。