微生物快速检测方法PPT讲稿
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食品安全快速检测技术微生物快速检测专题PPT课件
加水的纸片
大肠杆菌
大肠杆菌革兰氏染色
电子显微镜下的出血性大肠杆菌
细菌
大肠菌群检测试剂盒
图1加样后排气泡
图2 大肠菌群阳性（左） 大肠菌群阴性（右）
图3 大肠菌群试管阳性（左） 大肠菌群试剂盒阳性（右）
方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸 增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用
食品安全快速检测技术及应用
7
项目八 食品中微生物的 快速检测
概述
我国细菌性食物中毒中，70% ～ 80%是由沙门 菌引起的。
在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个环节 中都有污染微生物的可能。 一旦污染，微生物将大 量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染和 食物中毒。
食品中病原菌的快速检测面临的主要问 题
案例
夏令时节是各类冷饮产品的销售 旺季，某市消保委近期对该市流 通领域的冰淇淋进行了比较试验。 检测显示，22件样品中，有10 件不符合标准。其中，冰雪皇后 (DQ)、酷圣石、多乐星等多个 知名品牌因大肠菌群超标等原因 上了“黑榜”。
据专家分析，大肠菌群超标的主 要原因是二次污染。如加工器具 没有定期清洗消毒，操作人员在 上完卫生间后洗手不彻底，个人 卫生状况未达标，直接影响最终 产品的卫生状况。
食品菌落总数严重超标，会破坏食品的营养成分，加速食品腐败变质，使食品 失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，容易患痢疾等肠道疾病， 可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。
食品中菌落总数——纸片法
细菌在测试片 上生长后会显 示红色斑点， 选择菌落数适 中（30～300个） 的测试片进行 计数，乘以稀 释倍数后即为 每毫升（或每 克）样品中所 含的细菌菌落 总数。
大肠杆菌
大肠杆菌革兰氏染色
电子显微镜下的出血性大肠杆菌
细菌
大肠菌群检测试剂盒
图1加样后排气泡
图2 大肠菌群阳性（左） 大肠菌群阴性（右）
图3 大肠菌群试管阳性（左） 大肠菌群试剂盒阳性（右）
方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸 增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用
食品安全快速检测技术及应用
7
项目八 食品中微生物的 快速检测
概述
我国细菌性食物中毒中，70% ～ 80%是由沙门 菌引起的。
在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个环节 中都有污染微生物的可能。 一旦污染，微生物将大 量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染和 食物中毒。
食品中病原菌的快速检测面临的主要问 题
案例
夏令时节是各类冷饮产品的销售 旺季，某市消保委近期对该市流 通领域的冰淇淋进行了比较试验。 检测显示，22件样品中，有10 件不符合标准。其中，冰雪皇后 (DQ)、酷圣石、多乐星等多个 知名品牌因大肠菌群超标等原因 上了“黑榜”。
据专家分析，大肠菌群超标的主 要原因是二次污染。如加工器具 没有定期清洗消毒，操作人员在 上完卫生间后洗手不彻底，个人 卫生状况未达标，直接影响最终 产品的卫生状况。
食品菌落总数严重超标，会破坏食品的营养成分，加速食品腐败变质，使食品 失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，容易患痢疾等肠道疾病， 可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。
食品中菌落总数——纸片法
细菌在测试片 上生长后会显 示红色斑点， 选择菌落数适 中（30～300个） 的测试片进行 计数，乘以稀 释倍数后即为 每毫升（或每 克）样品中所 含的细菌菌落 总数。
微生物快速检测
食品微生物检验技术
目录页
快速检测方法及应用 3M测试法操作步骤 3M测试法结果判读
— 1—
快速检测方法及应用
1.选择、鉴定用培养基法 2.基因探针技术 3.微生物自动监测仪
— 2—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 选择、鉴定用培养基法
微生物具有种属特异性酶，在培养基质中加入相应的显色酶 底物，经微生物生长代谢产生酶水解底物释放色原物质，使 培养物着色从而进行目标微生物筛选鉴别。 优点：分离与鉴定合二为一，省时、操作简便、敏感性和特 异性较高。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
2.优点：
避免物理性污染（如玻璃器皿打碎等）； 红色菌落易识别，容易计数，误差小； 菌落分布均匀，不出现重叠现象； 很少菌落蔓延；密闭性好；透气膜等。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试法操作步骤
1.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。 2.使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。 3.允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。 4.使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。 5.轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。 6.拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
1.3M测试片：
由上下两层组成，上层的薄膜上通过粘合剂结合了指示剂，并涂覆了冷水可 溶性凝胶，下层的纸片上涂覆了改良的培养基，并印有方格以便于计数。它 是一种预先制备好的培养基系统，只需要将待测样品或样品稀释液直接接种 ，即可进行下一步的培养和计数。
目录页
快速检测方法及应用 3M测试法操作步骤 3M测试法结果判读
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快速检测方法及应用
1.选择、鉴定用培养基法 2.基因探针技术 3.微生物自动监测仪
— 2—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 选择、鉴定用培养基法
微生物具有种属特异性酶，在培养基质中加入相应的显色酶 底物，经微生物生长代谢产生酶水解底物释放色原物质，使 培养物着色从而进行目标微生物筛选鉴别。 优点：分离与鉴定合二为一，省时、操作简便、敏感性和特 异性较高。
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食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
2.优点：
避免物理性污染（如玻璃器皿打碎等）； 红色菌落易识别，容易计数，误差小； 菌落分布均匀，不出现重叠现象； 很少菌落蔓延；密闭性好；透气膜等。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试法操作步骤
1.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。 2.使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。 3.允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。 4.使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。 5.轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。 6.拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
1.3M测试片：
由上下两层组成，上层的薄膜上通过粘合剂结合了指示剂，并涂覆了冷水可 溶性凝胶，下层的纸片上涂覆了改良的培养基，并印有方格以便于计数。它 是一种预先制备好的培养基系统，只需要将待测样品或样品稀释液直接接种 ，即可进行下一步的培养和计数。
微生物检验(ppt版)
•芽胞抗原：
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
15
第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
42
第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
21
痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
30
第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
有免疫原性和血清学诊断价值
14
第十四页，共七十五页。
炭疽(tànjū)毒素：
--保护性抗原〔PA)、致死因子〔LF〕、 水肿
因子〔EF〕三个组分
--单独皆无致病性，与PA结合才显示出致 病性
--具有抗吞噬和免疫原性
15
第十五页，共七十五页。
抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热(ɡàn rè)140℃ 3h才能杀灭
在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中别离出 能引起多种野生动物和家畜感染〔羊、马、狗、猫、
鸟、鱼等〕 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染
42
第四十二页，共七十五页。
致病物质： 李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子 内在素——外表(wàibiǎo)蛋白〔侵袭性蛋白〕 磷脂酶C
(yìzhì)
噬菌体裂解(liè jiě)
(shēnɡ huà)
动 响生 串
荚 青毒
力
化珠
观
试
膜 霉力 肿 素试
确定报告
察
验
胀 抑验
试制
反
验
第二十一页，共七十五页。
21
痰、呕吐物、CSF及 炎症分泌物
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
荚膜肿胀试验
直接涂片
荚膜染色 G染色 初步报告
食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性
状正常，应引起注意
30
第三十页，共七十五页。
二、微生物特性(tèxìng)
形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成(xíngchéng)圆形芽胞、
微生物检测技术演示文稿ppt课件
2019
-
134
pH
低温保藏
腌制
微生物 食品
aw
干燥
高温保藏
2019
-
15
消毒 --杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达 到无害化的FF。
灭菌 --用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一 切微生物的方法。
2019
-
16
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方
细菌的特殊结构有荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
2019
-
32
大肠杆菌
2019
-
33
金黄色葡萄球菌
2019
-
34
2019
-
35
2019
-
36
2、酵母
酵母菌（yeast）是一通俗名称，没有确切定义。 一般认为酵母菌具有以下五个特点： ➢ 个体一般以单细胞状态存在 ➢ 多数出芽繁殖，也有的裂殖 ➢ 能发酵糖类产能 ➢ 细胞壁常含有甘露聚糖 ➢ 喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长酸度较
法。高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活， 从而起灭菌作用。低温通常起抑菌作用。 嗜冷微生物适合于－ 10℃生活的细菌，最适生长温度在20℃左右。 嗜温微生物生 长温度在15～45℃之间，最适生长温度在37℃左右的细菌。
嗜热微生物生长温度在30～75℃之间，最适生长温度在55℃， 在100℃以上温度生长，称为嗜高热微生物。
2019
-
28
2. 快速酶触反应及代谢产物的检测
快速酶触反应是根据细菌在生长繁殖过程中 可合成和释放某些特异性的酶，根据酶的特性，选 用相应的底物和指示剂，反应的测定结果有助于细 菌快速诊断。如美国3M Petfifilm TM微生物测试片 可分别快速测定细菌总数、霉菌、酵母菌、大肠杆 菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。
微生物检验 PPT课件
技术逐渐推 广应用
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
二、基本原理
抗体与荧光素结合后，并不影响其和相应抗原
发生特异性结合反应，事先将待测抗原固定于载玻
片上，滴加荧光标记抗体，若荧光标记抗体与相应 抗原发生特异性结合反应，不能被缓冲液冲掉，在 荧光显微镜下可观察到荧光，否则荧光抗体被缓冲 液冲掉，在荧光显微镜下观察不到荧光。
四乙基罗丹明 (RB200) 570
四甲基异硫氰酸罗丹明 (TRITC) 550
最大发射 光波长
520～530
595～600
620
荧光颜色
黄绿色
橘红色
橙红色
4.荧光抗体的制备
荧光抗体的制备程序： 制备免疫血清或McAb ↓ 抗体纯化 ↓ 抗体标记： 搅拌法、透析法 方法 ↓ 标记物提纯：去除游离荧光素 去除过度标记或未结合抗体 ↓ 标记物鉴定：含量、特异性、效价、F/P 鉴定 ↓ 实际应用
3.荧光色素的要求
（1）应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基因 （2） 荧光效率高 （3）荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明 （4）与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质 （5）标记方法简单，安全无毒 （6）与蛋白质的结合物稳定，易于保存
异硫氰酸荧光素 ( FITC) 最大吸收 光波长 490～495
第一节 免疫荧光抗体技术检测食品微生物
经典的免疫分析技术
凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实 现自动化。
现代的免疫分析技术
荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系 （稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免 疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。
微生物快速检测技术ppt课件
采用流式细胞原 理。对微生物进 行核酸染色，用 流式细胞技术进 行计数
BactoScan FC的优缺点
• 优点：速度快(50-150样品/小时)
• 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较 高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。
• 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
美国Chemunex公司 微生物快速检测系统
其它即用胶，MPN改良法
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测 Simplate
colilert
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白 质有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌 酶类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要 具有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基 伞形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出 蓝色荧光。 • 食源性细菌悬浮于TPC培养基表面，在分隔的 小池内能迅速进行生化反应，若有检样颗粒亦 无干扰；它不是由48h形成的菌落来计数，而 是24h后在紫外灯照射下记录培养皿内能发出 蓝色荧光的阳性池数，进而由最大近似值 (MPN) 表查出细菌的MPN。阳性池数与 MPN 呈松泊分布。
基于ATP原理的用于成品检测的 微生物检测系统
• Charm LUM-96 （用于UHT产品-高温 瞬间灭菌） • Biotrace • Celsis（主要用于化妆品） • Millipore公司的MicroScan
Celsis和LUM-96
保温2天，检测30分钟（96个样）
ATP法检测成品的优缺点
• 美国Chemunex公司将流式细胞技术与活细胞荧 光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最 新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的 ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 • 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快， 处理量大。与FOSS的BactoScan FC检测死活细 胞都检测不同。 • 是目前国际上正在认可的生物荧光定量检测微 生物数量的两种方法之一。另一种是Millipore 的一款叫MicroStar的基于ATP检测的产品。
微生物检验PPT培训课件
特点是靶分子固定在细胞中，细胞固定在载玻 片上，以固定的细胞代替纯化的核酸，然后将 载玻片浸入溶有探针的溶液里，探针进入组织 细胞与靶分子杂交，而靶分子仍固定在细胞内。
检测特定生物有机体之间是否存在 亲缘关系
1.待检菌株的DNA双链 2.用碱或热变性使双链解开（DNA的变性） 3. 将单链DNA在硝酸纤维素膜上的固定 4.加放射性标记的DNA或RNA 5.保温（一般是66℃，24h）进行互补碱基配
应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、
拷贝数及表达丰度。
杂交的类型
（1）按杂交对象：
DNA-DNA RNA-DNA
（2）按作用环境：
固相杂交：是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支 持物上，一条反应核酸（标记探针）游离在溶液中。
二、核酸探针的工作原理
两条碱基互补的DNA链在适当条件下按碱 基配对原则形成杂交DNA分子。根据DNA遗 传序列的相对稳定性和互补原则，用已知特异 的碱基序列作成有标记的一小段单链(或核苷 酸序列)与被检测材料进行分子杂交。如果被 检测材料中病原的遗传序列与探针具有互补的 碱基序列，就会形成杂交双链，从而证明它们 之间具有一定程度的同源性。（p108）
感器的探针利用
第二节 PCR技术检测微生物
一、 PCR反应的基本原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)就是模板DNA、引物以及四种脱氧核糖核 苷三磷酸(dNTPs )在DNA聚合酶的催化作用下 所发生的酶促聚合反应，PCR反应是由变性--退 火--延伸三个基本反应步骤构成的。
对（杂交） 6.用缓冲溶液洗脱未杂交的部分 7.测定膜的放射性，计算杂交率
检测特定生物有机体之间是否存在 亲缘关系
1.待检菌株的DNA双链 2.用碱或热变性使双链解开（DNA的变性） 3. 将单链DNA在硝酸纤维素膜上的固定 4.加放射性标记的DNA或RNA 5.保温（一般是66℃，24h）进行互补碱基配
应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、
拷贝数及表达丰度。
杂交的类型
（1）按杂交对象：
DNA-DNA RNA-DNA
（2）按作用环境：
固相杂交：是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支 持物上，一条反应核酸（标记探针）游离在溶液中。
二、核酸探针的工作原理
两条碱基互补的DNA链在适当条件下按碱 基配对原则形成杂交DNA分子。根据DNA遗 传序列的相对稳定性和互补原则，用已知特异 的碱基序列作成有标记的一小段单链(或核苷 酸序列)与被检测材料进行分子杂交。如果被 检测材料中病原的遗传序列与探针具有互补的 碱基序列，就会形成杂交双链，从而证明它们 之间具有一定程度的同源性。（p108）
感器的探针利用
第二节 PCR技术检测微生物
一、 PCR反应的基本原理
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)就是模板DNA、引物以及四种脱氧核糖核 苷三磷酸(dNTPs )在DNA聚合酶的催化作用下 所发生的酶促聚合反应，PCR反应是由变性--退 火--延伸三个基本反应步骤构成的。
对（杂交） 6.用缓冲溶液洗脱未杂交的部分 7.测定膜的放射性，计算杂交率
《微生物检测培训》课件
介绍常用的微生物培养技术 和条件。
常见微生物检测方法
本节将详细介绍微生物快速检测、传统检测方法和分子生物学检测方法，以及它们各自的优缺点。
1 快速检测方法
探讨快速微生物检测方法的原理和应用领域。
2 传统检测方法
介绍传统的微生物检测方法，如培养和染色。
3 分子生物学检测方法
讲解分子生物学技术在微生物检测中的作用。
微生物检测实验操作
本节将解释如何正确进行微生物检测实验，包括样品采集和处理、实验室安全措施以及实际的培养 和检测步骤。
样品采集和处理
学习如何采集和处理微生物样品以确保准确的检测结果。
2
实验室安全措施
了解在微生物实验室中必须遵循的安全措施。
3
微生物培养和检测实验步骤
深入了解微生物培养和检测的各个步骤，包括培养基和仪器使用等。
《微生物检测培训》PPT 课件
本课程将为您介绍微生物检测的基本知识和实验操作。通过学习本课程，您 将掌握微生物分类、常见检测方法以及实验室安全措施。
课程概述
在本节中，您将了解本课程的背景、学习目标以及课程内容。
课程背景
介绍微生物检测在当今科 学和医学领域中的重要性。
学习目标
明确课程学习目标，为学 员提供明确的学习方向。
课程总结
在最后一节中，总结课程的重点要点，并强调微生物检测技术的重要性和应用前景。
检测技术的
探索微生物检测技术在各行业中的应用领域和未来发展趋势。
课程内容
概括课程涵盖的基本知识 和实践操作。
微生物检测基础知识
这一部分将介绍有关微生物的基本定义和分类，以及常见的微生物检测方法和微生物生长技术。
微生物的定义和分 类
解释微生物的定义，以及它 们如何根据特定特征分类。
常见微生物检测方法
本节将详细介绍微生物快速检测、传统检测方法和分子生物学检测方法，以及它们各自的优缺点。
1 快速检测方法
探讨快速微生物检测方法的原理和应用领域。
2 传统检测方法
介绍传统的微生物检测方法，如培养和染色。
3 分子生物学检测方法
讲解分子生物学技术在微生物检测中的作用。
微生物检测实验操作
本节将解释如何正确进行微生物检测实验，包括样品采集和处理、实验室安全措施以及实际的培养 和检测步骤。
样品采集和处理
学习如何采集和处理微生物样品以确保准确的检测结果。
2
实验室安全措施
了解在微生物实验室中必须遵循的安全措施。
3
微生物培养和检测实验步骤
深入了解微生物培养和检测的各个步骤，包括培养基和仪器使用等。
《微生物检测培训》PPT 课件
本课程将为您介绍微生物检测的基本知识和实验操作。通过学习本课程，您 将掌握微生物分类、常见检测方法以及实验室安全措施。
课程概述
在本节中，您将了解本课程的背景、学习目标以及课程内容。
课程背景
介绍微生物检测在当今科 学和医学领域中的重要性。
学习目标
明确课程学习目标，为学 员提供明确的学习方向。
课程总结
在最后一节中，总结课程的重点要点，并强调微生物检测技术的重要性和应用前景。
检测技术的
探索微生物检测技术在各行业中的应用领域和未来发展趋势。
课程内容
概括课程涵盖的基本知识 和实践操作。
微生物检测基础知识
这一部分将介绍有关微生物的基本定义和分类，以及常见的微生物检测方法和微生物生长技术。
微生物的定义和分 类
解释微生物的定义，以及它 们如何根据特定特征分类。
微生物检验ppt课件(2024)
涂布分离法
将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2024/1/29
19
革兰氏染色技术
初染
涂片固定后，滴加结晶 紫染色液覆盖涂片，染 色1分钟，然后水洗。
2024/1/29
媒染
脱色
复染
滴加卢戈氏碘液覆盖涂 片，媒染1分钟，然后水
洗。
用95%乙醇脱色30秒至 1分钟，然后水洗。
22
04
定期对实验室环境和设 备进行清洁、消毒和维 护，确保其功能正常
实验人员的素质与技能要求
01
02
03
04
具备微生物学、医学、检验学 等相关专业的背景和知识
熟悉微生物检验的基本原理、 方法和技术
掌握实验室安全知识和操作技 能，如生物安全防护、废弃物
处理等
具备良好的职业道德和团队协 作精神，能够认真负责地完成
及时向上级主管部门或相关方报告实验结果，并提供必 要的技术支持和建议
对实验结果进行客观、准确的评价和解释，避免主观臆 断和误导
对实验过程中出现的问题和异常情况进行及时汇报和处 理，确保实验质量和安全
2024/1/29
25
06
微生物检验的挑战与发展趋势
2024/1/29
26
微生物检验面临的挑战与问题
微生物多样性
微生物种类繁多，形态各异，对检验技术的要求极高。
2024/1/29
检验灵敏度与特异性
传统微生物检验方法灵敏度低，特异性差，难以满足临床和科研 需求。
耐药性问题
随着抗生素的广泛使用，耐药微生物逐渐增多，对检验技术提出 了更高的要求。
27
新技术在微生物检验中的应用与展望
将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2024/1/29
19
革兰氏染色技术
初染
涂片固定后，滴加结晶 紫染色液覆盖涂片，染 色1分钟，然后水洗。
2024/1/29
媒染
脱色
复染
滴加卢戈氏碘液覆盖涂 片，媒染1分钟，然后水
洗。
用95%乙醇脱色30秒至 1分钟，然后水洗。
22
04
定期对实验室环境和设 备进行清洁、消毒和维 护，确保其功能正常
实验人员的素质与技能要求
01
02
03
04
具备微生物学、医学、检验学 等相关专业的背景和知识
熟悉微生物检验的基本原理、 方法和技术
掌握实验室安全知识和操作技 能，如生物安全防护、废弃物
处理等
具备良好的职业道德和团队协 作精神，能够认真负责地完成
及时向上级主管部门或相关方报告实验结果，并提供必 要的技术支持和建议
对实验结果进行客观、准确的评价和解释，避免主观臆 断和误导
对实验过程中出现的问题和异常情况进行及时汇报和处 理，确保实验质量和安全
2024/1/29
25
06
微生物检验的挑战与发展趋势
2024/1/29
26
微生物检验面临的挑战与问题
微生物多样性
微生物种类繁多，形态各异，对检验技术的要求极高。
2024/1/29
检验灵敏度与特异性
传统微生物检验方法灵敏度低，特异性差，难以满足临床和科研 需求。
耐药性问题
随着抗生素的广泛使用，耐药微生物逐渐增多，对检验技术提出 了更高的要求。
27
新技术在微生物检验中的应用与展望
微生物快速检测技术与原理讲解66页PPT
微生物快速检测技术与原理讲解
•
46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
•
46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
微生物快速检测技术..75页PPT
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
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技术进行计数。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。
➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
• 美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相
结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。
➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
• 缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
• 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。
➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测
简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变
化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
• 原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌
使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
• 原理
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 应用
➢ 细菌总数
测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群
测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌
指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
• 特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
• FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测
仪 ➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞
电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的
对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
• 优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
• 应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
• ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
• 优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
• 缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
• 原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光素 +光
微生物快速检测方法课件
常见微生物检测项目
• 常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
• 致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
• 传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测
• 快速检测的新方法
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
• 原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
• 操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释Байду номын сангаас000倍
螺旋平板法
• 优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，
节省了大量人力物力。
• 缺点
➢ 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。
➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
• 美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相
结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。
➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
• 缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
• 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。
➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测
简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变
化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
• 原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌
使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
• 原理
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
• 应用
➢ 细菌总数
测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群
测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌
指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
• 特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
• FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测
仪 ➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞
电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的
对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
• 优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
• 应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
• ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
• 优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
• 缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
• 原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光素 +光
微生物快速检测方法课件
常见微生物检测项目
• 常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
• 致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
• 传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测
• 快速检测的新方法
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
• 原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
• 操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释Байду номын сангаас000倍
螺旋平板法
• 优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，
节省了大量人力物力。
• 缺点
➢ 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。