waters液相色谱教程
waters高效液相色谱系统操作规程(入门)
1.目的规范Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。
2.范围本规程适用于Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。
3.职责质检室仪器分析员负责Waters 高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由Waters 600E 多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters 在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487 双通道紫外检测器、Millennium32 色谱工作站/ 电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。
5. 程序5.1. 准备5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45 ym滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2.开机和泵操作5.2.1.开机5.2.1.1.接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E 泵、2487 检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2.打开Millennium32 软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
在Project 档内选择所需的项目，右击『Run Samples 』图标，选择色谱系统“600_2487” 后打开QuickSet 窗口。
5.2.2.更换溶剂5.2.2.1.打开600E 泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN 位置；5.2.2.2.将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3.按］Direct ］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min （梯度配比阀在0ml/min 时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100% ，其它为0% ；5.2.2.5.将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW 位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8.转动手柄至RUN 位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
Waters高效液相色谱仪使用及维护
• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右 下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单 击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的 一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许 将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项 目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现 有父项目的文件夹。
waters液质联用色谱仪操作流程
waters液质联用色谱仪操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!Waters液质联用色谱仪的操作流程详解Waters液质联用色谱仪（LC-MS）是一种先进的分析仪器，广泛应用于生物化学、药物分析、食品安全检测等领域。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
WATERS液相色谱教程三四七(最全)
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反压与流速的关系
流速对反压的影响是线性关系 流速增加，反压亦增大 下图的实验条件： –2.1×30mm Symmetry C18柱,20℃
Pressure vs. Flow Rate at 20?C 5000 4500 4000 3500 3000
有机滤膜(≤0.5 µ m)/水溶性滤膜(≤0.45 µ m) 膜片可更换
– 一次性使用的膜“Cartridge”
使用方便简单，交叉污染小 有更小内径，可用于微量样品的处理
高速离心
大于：10,000rpm
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超滤
机理
– 超滤是一种基于分子量分离的技术
排气后的色谱泵即可用于实验运行
– 注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如:进样器、色谱柱 如需要，恢复排气时断开的控制线
根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
若使用缓冲盐流动相,用前和用后均需用水过渡 (包括排气操作)
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样品预处理常用的方法
高速离心取上清液 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-液萃取 固相提取(Solid Phase Extract,SPE )
– Oasis和Sep-Pak固相提取小柱
其它
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去除微粒的方法
过滤
– 过滤膜/过滤装置
Pressure vs. Temperature 5000 4500 4000 3500 3000
50% MeOH 50 % ACN 100% H2O 100% MeOH 100% ACN
Waters液相色谱教程
各种锥箍和管路接头长epth长度不合适造成柱前死体积
色谱柱的连接
锥箍锥度不合适造成渗漏
Waters色谱柱的连接
测柱效-良好的色谱实验习惯
测柱效的方法
色谱柱的正确使用及操作
正确使用色谱柱(一)
正确使用色谱（二）
色谱柱的在线保护装置
保护柱
色谱柱的存放
启动液相色谱仪器的流程
流动相的脱气
流动相脱气的方法
流动相的保存
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
保存于棕色玻璃瓶中的超纯水
色谱泵的排气操作
色谱泵的运行
Waters液相色谱教程4
紫外-可见光检测器原理基于样品池(S)中的样品对光产生吸收,与参比池(R)有信 号差如是可变波长检测器,还有分光系统(光栅) 流动池灯R S样品入口光电二极管2004 Waters CorporationBeer's Law – 比尔定律光能量: – P0 = 透过溶剂的光能量 – P = 透过样品的光能量光通量(透过率%):T=P/P0A吸光度: A = -log(T)= log(P0/P)B吸光度 = 单位吸光度×流动池长度×溶液浓度 – 即: A = abc** * * ** * *透过率 %吸光度 AU ** 浓度浓度2004 Waters Corporation影响紫外检测器灵敏度的因素信号强度(S) – 从比尔定律可看出 1AU 样品的种类 样品浓度及进样的体积 检测池的长度 – 所使用的波长,检测器的 时间常数噪音 10% 1%.25AU噪音(N) – 流动相 – 所使用的波长,灯的能量 – 检测器的时间常数 – 非检测器因素 电噪音,泵脉动等S/N = 1/0.1=10 S/N = 0.25/0.01 = 252004 Waters Corporation示差折光效应的影响示差折光效应的危害 – 产生假的紫外吸收变化: 定量误差,光谱图不准确 梯度时严重的基线漂移梯形狭缝设计 – 用于2487的最新专利设计 – 消除示差折光效应影响的同时,提高灵 敏度及线性范围梯形池设计 – 最初的专利设计这是示差折 光效应的一个例 子,光从一个介 质到另一个介质 发生折射现象2004 Waters Corporation溶剂对紫外检测器的影响乙 腈 190nm不同种类溶剂有其特定的 止波长溶剂的质量好坏对其截止 长有影响为何溶剂质量不好? – 含紫外吸收的杂质 – 溶解在其中的氧气 – 缓冲液溶质的紫外吸收截止波长 – 又称溶剂吸收波长的上限甲 醇 210nm200 220 240 260或溶剂透过波长的下限2004 Waters Corporation流动相背景吸收的影响理想状态背景吸收会减 小线性范围21实际情形Absorbance1许多溶剂产生 背景吸收0背景吸收0Concentration2004 Waters CorporationWaters 2487 检测器2004 Waters Corporation2487检测器的特点专利的梯形狭缝池设计 –消除示差折光效应的影响其它特点– – – – – –波长范围: 190 - 700 nm 光源: 氘弧灯 双通道,高灵敏度,检测范围:±2AU 仪器内集成比色皿位置,可做光谱扫描 灯开/关定时器: 时间编程 多种功能,胜任更复杂的工作 MaxPlot,RatioPlot,灯优化软件等 注: AU(Absorbance Unit) 吸光度单位2004 Waters Corporation2487检测器的光路filter wheellamp housing window slitspherical mirrorbeam splittergratingcuvettesample diode flow cell photo diodes reference diode2004 Waters Corporation梯形狭缝流动池的比较进口 出口圆柱形池进口 出口梯形池进口 出口梯形狭缝池2004 Waters Corporation光电二极管矩阵检测器原理Shutter Holographic Grating CellD2 LampDiode Array 512 Diodes 190 - 800 nm2004 Waters CorporationPDA检测器的三维(3D)图2AUY1AU吸光度0190波长Z450051015X时间2004 Waters Corporation几种不同的分辨率定义二极管分辨率: 每个二极管的分辨率 – 检测器的波长范围是190 到 800nm 而二极管矩阵中有 512个二极管.因此, 610nm除以512 大约等于 1.2 nm/ 每个二极管光学分辨率: – 狭缝宽度决定光学分辨率,2996的光学分辨率是1.2nm– 光学分辨率影响光谱分辨率光谱分辨率: – 光谱分辨率是指在采集光谱数据时数据点之间的波长间 隔(nm), 2996的光谱分辨率最高是1.2 nm.2004 Waters Corporation光学分辨率及数字分辨率高分辨率的光学单元应 是:一束光照在一 个 光电二极管上 光学分辨率及数字分辨 率相同 但是带来的问题是:1nm 的二极管及1nm分辨率–光 通 量 下 降 导 致 噪 音光电二极管 加大 –光 学 分 辨 率 和 噪 音 是 一对矛盾狭缝2004 Waters Corporation光学分辨率及数字分辨率加大光通量– 增加狭缝宽度1nm的二极管及3nm的分辨率牺牲分辨率狭缝光电二极管– 通过狭缝的光要照到彼此 相邻的光电二极管上,三 相邻光电二极管的光谱信 息是一样的 – 如左图所示,虽然数字分 率是1nm,实际的光学分 辨率只有 3nm2004 Waters Corporation"苯"的不同分辨率光谱图1.2 nmAbsorbanceAbsorbance2.4 nm230.00250.00nm270.00230.00250.00nm270.003.6 nmAbsorbance4.8 nmAbsorbance230.00250.00nm270.00230.00250.00nm270.002004 Waters CorporationWaters 2996 PDA 检测器PDA(PhotoDiode Array):光电二极管矩阵2004 Waters Corporation2996 检测器的光路全新的光路设计– 不用聚光镜及各种消 色差镜以减少光路能 量损失 – 反相梯形光束流动池 用以消除示差折光效 应影响同时提高灵敏度及分 辨率– 分辨率:1.2nm – 噪音:±1.5×10-5AU2004 Waters Corporation专利技术:反相梯形光束检测池2004 Waters Corporation2996 检测器的特点兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息 – 在收集色谱图的同时,得到光谱图: 三维(3D) 数据 – 亦可采集单波长色谱图: 二维(2D)数据色谱峰的纯度鉴定,色谱峰的确认任意波长的再处理所有的操作皆通过Empower软件控制完成2004 Waters Corporation。
Waters2695高效液相色谱仪操作规程
Waters2695高效液相色谱仪操作规程使用Waters2695高效液相色谱仪前，请认真阅读使用说明，熟悉仪器的使用方法。
一、自检开主机和二极管阵列检测器（PADA）（或荧光检测器FD），仪器进入自检阶段。
约2分钟后PADA两个灯都亮，正常；主机自检所需时间较长，自检完后显示idle。
二、配置系统1．项目管理数据（相当于新建文件夹）名（设定后将出现在运行样品中）。
2．系统三、运行样品在采集数据项目栏中选定项目（即将此次实验数据选择存放位置）→确定出现运行样品表：分为单一与样品组进样。
1．单一进样品瓶，进样体积，运行时间）如没有可直接选用的方法组，可以在左栏通过“创建方法组”来设定使用的仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进行参数设置）：创建方法组→选择仪器方法（新建→编辑仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中→下一步→出现“缺省方法项”对话框，点下一步→出现“命名方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相同）对话框→完成。
返回“运行样品”对话框，选方法组和仪器方法。
Notice:主机W2695的参数配置主要是针头深度设置，脱气设置，流量(4000psi)，泵模式（等度和梯度），柱温（划√）。
检测器W2699的参数配置主要是输入开始波长和结束波长（200-700nm）。
检测器W2475的参数配置：设定发射波长（λem）、激发波长（λex），增益（默认值为10太大，改为1即可）。
PADA能看到光谱图和色谱图；但是对于FD没有光谱图，在“运行样品”的右栏只出现一个图谱。
FD回零不好时按面板上的“auto zero”（FD 的其余操作可以通过软件调节）与样品组进样界面相比，多了一个进样按钮（等监视基线平稳后，按中断按钮，再按此按钮即进样分析）。
2．样品组进样左栏可以设置有关样品的信息（每一栏的设置为下拉式菜单），右栏出图，左下栏给出仪器信息，最下栏显示仪器状态。
waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法
Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法1 仪器组成及开机1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。
2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。
2 溶剂管理系统的准备2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕，光标选“ Degasser ”，按【 Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“ Continuous ”，按【 Enter 】。
2.2 启动溶剂管理系统2.2.1 干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“ Status （ 1）”屏幕下，按【 Direct Function 】，光标选“ Dry Prime ”，按【 Enter 】，显示“ Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“ Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2.2.2 湿启动在“ Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“ Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“ Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“ Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【 OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。
Waters高效液相色谱仪
海德氨基酸工业有限公司标准操作规程1 目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。
2 适用范围 Waters高效液相色谱仪的使用操作。
3 责任者质管部QC检验人员。
4 内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。
4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“Program Manager”窗口。
4.1.3 在“Program Manager”窗口，双击“Millennium”图标，进入相应窗口。
4.1.4 在“Millennium”窗口，双击“Session Manager”图标，进入“Millennium V2.10”窗口，进行内存自检。
4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login－Version2.10”窗口，在“User Name”输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“Login”进入“Millinniam Version2.10－Session Manager－User System”窗口，双击所选“Project”图标，即进入“Project”窗口。
4.2 进样4.2.1 在“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“PCM－410”。
4.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检。
4.2.3 自检完毕，进入“Quick Set”窗口，按“Mode”选择“Quick Start”进入“Method Set”窗口，选择“Using Exiting Method”自动进入“Quick Set Acquisition”窗口，按“Set Up Instrument”，进入仪器安装状态。
4.2.4 安装完毕，按“Cancel”，退出“Quick Set Acquisition”窗口，在样品登药业有限公司标准操作规程题目Waters高效液相色谱仪操作规程编号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 2 页记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。
Waters液相色谱教程3
液相色谱检测模式
响应类型
RI 折射率
通用型
UV/VIS FLUOR 紫外/可见 荧光
选择性 选择性
ECD 电化学
选择性
COND ELSD 电导 蒸发光散射
选择性 半通用
灵敏度
µg
ng
pg
pg
pg
ng
线性范围 104
105
103
106
105
103
流速敏感 Yes
– 两个压力传感器感应并 调整柱塞内压力，柱塞 间交换平稳
– 没有出口阀，减少故障 率
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2695溶剂输送系统的特点
独立的柱塞杆驱动马达
– 双压力传感器，监视系统及柱塞腔压力 – 软件根据传感器的反馈，控制所有功能 – 完全没有压力的脉动 – 只有两个进口阀，没有出口阀，可靠性极高
的工作
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2695 样品管理系统:特点
全电子设计,除电源外,
不需其它任何动力
极佳的线性范围及进样
重现性
交差污染极小（全自动
进样针内、外清洗装置）
低维护成本
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2695:样品管理系统
样品瓶数目: 120, 分装于5个样品盘(24瓶/盘) 进样次数: 每瓶可进1 到99次 标准样品瓶: 2 mL 样品室温控: 4 到40℃ ,增量 1℃ 进样体积: 标准配置:0.1 到100 uL 定量环选件: 0.1到2000 uL 最小样品量: 10 uL, 用低体积的内插式小瓶 (Insert) 最小进样量: 0.1 uL
液相色谱教程WATERS
4 3 2 1 2 3
Conventional C18
T
Modern C18 Ideal
4
5 Buffer pH
6
7
8
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色谱图常见问题分析(二)
色谱图多峰少峰问题: –色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题
色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题: –双峰或肩峰 进样量或样品浓度过大 保护柱或色谱柱进口堵塞 保护柱或色谱柱污染或失效 –前伸峰 进样量或样品浓度过大 溶样的溶剂相对于流动相太强 保护柱或色谱柱污染或失效
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色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题: –平头峰 检测器设置不正确 进样体积太大或样品浓度太高 –拖尾峰 保护柱或色谱柱问题:污染或失效 进样问题 检测器时间常数不正确
色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题:
– 所有的峰均为负峰: 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 光学装置尚未达到平衡 – 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相
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HPLC常见问题分析
• 流路基线噪音问题
–基线漂移 系统不稳或未化学平衡 温度波动 流动相未正确脱气 流动相被污染;流动相中有稳定剂或稳定剂变化 检测器流动池漏;系统中有渗漏 色谱柱污染;固定相渗漏 选用不正确的检测波长(相对于溶剂) 有迟流出的组分
waters 高效液相操作规程
waters 高效液相操作规程
《waters高效液相操作规程》
在液相色谱分析中，waters高效液相技术被广泛应用。
为了保证色谱分析的准确性和可靠性，操作规程至关重要。
下面是waters高效液相操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：准备样品并将其溶解在合适的溶剂中。
2. 色谱柱准备：根据分析的要求选择合适的色谱柱，并进行适当的洗涤和平衡。
3. 色谱条件设置：设置流速、温度、检测波长等色谱条件。
4. 样品进样：按照预定的体积和条件将样品进样进入色谱仪。
5. 色谱分离：启动色谱仪进行色谱分离，并记录相关数据。
6. 数据处理：对色谱数据进行处理和分析，得出结果。
7. 清洗设备：分析结束后，对色谱柱和仪器进行彻底的清洗。
以上是waters高效液相操作规程的一般步骤，具体操作还需根据实验室的具体情况和分析要求进行调整和完善。
这些步骤的严格执行和规范操作将有助于提高色谱分析的准确性和可靠性，确保实验结果的有效性和科学性。
waters高效液相色谱操作规程
Waters高效液相色谱操作规程1、用途：进行样品纯度和杂质的分析，可以满足双波长采集数据。
2、系统组成：本系统由2个Waters 515 HPLC Pump溶剂输送泵, 7725i手动进样阀、Waters2489紫外-可见检测器、Waters原装色谱数据工作站和电脑等组成，柱温箱、不间断电源等辅助设备。
3、准备3.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水膜，含有机相用有机膜），超声脱气20min。
3.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向，顺序是从进样器流经色谱柱进入检测器方向，色谱柱箭头方向为流速方向）。
3.3倒掉废液瓶中的废液。
3.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4、操作规程4.1启动仪器：4.1.1首先打开柱温箱并设置柱温箱温度为40℃按柱温箱控制界面上的ready键启动柱温箱。
4.1.2依次开启电脑、检测器和泵控开关。
4.1.3将泵1、泵2吸滤器相应的放入到准备好的流动相中。
4.1.4泵的排气：逆时针方向将泵前置阀门旋转180。
并用烧杯进行收集，按MENU键进入到PURGE状态，点击EDIT ENTER键进行脱气排空处理(约3-5分钟)，排空结束后再按RUN/STOP键关闭，顺时针方向将泵前置阀门旋转180。
拧紧。
4.1.5五分钟后打开电脑桌面上的Empower工作站，进行仪器与电脑的连接。
本机用户名：system 密码：manager。
4.2参数设置：4.2.1建立新的分析方法（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
若为已有方法的分析项目，直接调用即可（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
4.2.2泵的设置4.2.2.1等度洗脱：将泵1的吸滤器放入准备好的流动相的储液瓶中，设置流速，按RUN/STOP键开启流速。
4.2.2.2梯度洗脱：1、分别按照工作站设置将泵1、泵2的吸虑器放入到相应的准备好的流动相储液瓶中。
2、将两个泵的流速分别设置到初始流速相应的数值。
waters高效液相色谱[资料]
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Waters高效液相色谱操作说明0一．简介0本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相0二．操作流程00.准备工作0确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误01.开机0打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。
检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。
待程序完全启动，整个开机过程结束。
系统默认进入上次使用的方案。
2.建立新方法和新方案02.1新建方案0方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。
2.1.1创建步骤0选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。
→单击"finish"02.1.2打开创建的方案0在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了02.2新建方法0在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。
试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。
02.2.1新建方法步骤0单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"3 02.2.2洗脱方式的设定（重要）0在programmed flow中可看到。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
Waters 515高效液相色谱仪使用方法
Waters 515高效液相色谱仪使用方法一、打开仪器与工作站：1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗口。
二、运行样品：1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。