组织铁含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
血清铁浓度检测试剂盒说明书
货号：MS2802 规格：100管/96样血清铁浓度检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
测定原理：亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备实验用品及仪器：离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前配制，加入15mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15mL蒸馏水充分溶解。
标准液：液体×1 支（EP管），100μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。
测定：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到520nm，蒸馏水调零。
2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。
3. 空白管：取EP管，依次加入125μL蒸馏水，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
加入62μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm 测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，依次加入125μL标准液，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
加入62μL氯仿，充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液210μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520nm测定吸光度，记为A标准管。
5. 测定管：取EP管，依次加入125μL血清，125μL试剂一，125μL试剂二，混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却。
二甲酚橙分光光度法测定铁含量
二甲酚橙分光光度法测定铁含量X丛晓英(内蒙古化工职业学院,内蒙古呼和浩特 010010) 摘 要:本实验通过利用分光光度计测定样品中微量铁的含量,本实验选定的显色剂为二甲酚橙先测定二甲酚橙的最大吸收波长K =570nm ,二甲酚橙-铁的最大吸收波长K =570nm ,二甲酚橙-盐酸的最大吸收波长K =450nm 。
然后进行了实验条件的摸索:最佳射入波长的选择、缓冲溶液的最佳波长、酸性条件的最佳波长、显色剂用量的最佳量。
在最佳实验条件下测定淀粉、蔗糖、自来水中的微量铁的含量。
关键词:二甲酚橙;分光光度法 中图分类号:T M351 文献标识码:A 文章编号:1006—7981(2012)02—0021—02 分光光度法指紫外,可见分光光度法,属于吸收光度法的一种.该方法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。
此课题主要应用为可见分光光度法的测定,分光光度法主要用于微量组分定量测定,也能用于常量组分的测定;可测单组分,也可测多组分。
1 实验部分1.1 仪器与试剂722分光光度计、FA 2004电子天平、HCL (0.05mol /L )、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、铁标液(1g /L )、氯化铜溶液(1g /L )、氯化锌溶液(1g /L )、硫酸铝钾溶液(1g /L )、蔗糖溶液、淀粉溶液、自来水。
测定条件的确定及实验结果 二甲酚橙—铁稀液的最大吸收波长的确定以蒸馏水为参比确定二甲酚橙溶液最大吸收波长为570nm 。
以蒸馏水为参比确定铁标液与二甲酚橙(盐酸)的络合物的最大吸收波长为570nm 。
以蒸馏水为参比确定二甲酚橙和盐酸的混合物的最大吸收波长(取1.0ml 二甲酚橙,1.5ml 盐酸以蒸馏水定容至50ml)波长/nm综上所述:二甲酚橙的最大吸收波长K =570nm ,二甲酚橙-铁的最大吸收波长K =570nm ,二甲酚橙—盐酸的最大吸收波长K =450nm 。
根据显色反应的要求,二甲酚橙—铁稀液,二甲酚橙—盐酸溶液的对比度$K =570nm -450nm =120nm >60nm 正符合显色剂与有色化合物的对比度$K =60nm 以上。
维生素 B1(VB1)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4374
维生素B1（VB1）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4374规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体35mL×1瓶4℃保存稀释液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体6mL×1瓶4℃保存试剂二液体7mL×1瓶4℃保存试剂三液体6mL×1瓶4℃保存试剂四液体15mL×1瓶4℃保存试剂五液体8mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；2、标准品：10mg维生素B1。
临用前加入1mL稀释液，配成10mg/mL（即10000µg/mL）的标准液。
产品说明：维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有重要的作用。
VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁士蓝在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。
技术指标：最低检出限：7.366µg/mL线性范围：7.8125-250µg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟或反复离心2-3次至上清无浑浊）。
血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity,TIBC)试剂盒说明书
货号：MS2811 规格：100管/96样血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
测定原理：Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。
碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合，剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放，并且进一步被还原 Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。
A2减A1与TIBC浓度呈正比。
自备实验用品及仪器：天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
（临用前根据用量将A液和B液按1:1混合）试剂四：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。
测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至562nm。
血清总铁结合力计算公式：总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe3+的μmol数。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.5478x+0.0281，R2=0.9981总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V反总÷V样=20.99×（ΔA-0.0281）b. 用 96 孔板测定的计算公式如下第1页，共2页标准曲线：y=0.2739x+0.0281，R2=0.9981总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V反总÷V样=41.98×（ΔA-0.0281）V 反总：反应总体积，0.46mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL注意事项：1. 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
Fe说明书
铁（Fe）测定试剂盒（亚铁嗪比色法）使用说明书【产品名称】通用名称：铁（Fe）测定试剂盒（亚铁嗪比色法）商品名称：英文名称：Reagent Kit for Iron (Fe) Test (Ferrozine Colorimetry) 【包装规格】SI7967 R1 7 × 50 ml R2 2 × 42 mlSI7753 R1 2 × 64 ml R2 2 × 16 mlSI7754 R1 8 × 60 ml R2 2 × 60 mlSI7553 R1 4 × 50 ml R2 1 × 50 mlSI7554 R1 6 × 100 ml R2 2 × 60 mlSI7253 R1 3 × 20 ml R2 3 × 5 mlSI7254 R1 4 × 50 ml R2 2 × 20 mlSI5054 R1 2 × 100 ml R2 2 × 20 mlSI0054 R1 4 × 100 ml R2 1 × 100 mlSI0001 R1 1 × 64 ml R2 1 × 16 ml朗道校准血清CAL2350 1 × 5ml【预期用途】本试剂盒用于检测人体样本中铁离子的含量，临床上主要用于贫血的辅助诊断。
【检验原理】血清样本中与转铁蛋白结合的铁，在酸性介质中从转铁蛋白中解离出来，再被还原剂抗坏血酸等还原为二价铁，后者与亚铁嗪络合成紫红色复合物，在562nm处该复合物有特定吸收峰，其吸光度与血【主要组成成分】氯化胍 4.5mol/L硫脲100mmol/L R2：亚铁嗪 1.7mmol/L 抗坏血酸40mmol/L不同批号试剂盒各组分不能互换。
【储存条件及有效期】未开封的试剂2~8℃密闭避光保存（勿冷冻），有效期为18个月。
分光光度法测铁含量
分光光度计测定工业盐酸中的铁含量周次：双周二一、实验目的1.掌握一种测定溶液中铁含量的实验方法。
2.掌握分光光度计的测试原理和使用方法。
3.学习如何选择吸光度分析的实验条件。
二、实验原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。
所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b(cm)成正比。
其定律表达式：A=abc（a是比例系数）。
当c的单位为mol/l时，比例系数用ε表示，则A=εbc称为摩尔吸光系数。
其单位为L·mol-1·cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。
邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此配合物的lgK稳= 21.3，摩尔吸光系数ε510= 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2 Fe3+ + 2 NH2OH·HCl →2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜，用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。
三、仪器与药品752型分光光度计1台；容量瓶（50mL）7只；量筒（100mL）1个；烧杯（100mL）4只；胖肚移液管（25 mL）2支；刻度移液管（10 mL）2支；洗耳球1只。
100μg·mL-1铁标准溶液；0.15% 邻二氮菲水溶液；10%盐酸羟胺溶液；1mol·L-1乙酸钠溶液；1 mol·L-1 NaOH溶液；6 mol·L-1 HCl（工业盐酸试样）。
血清铁测定试剂盒说明书50T
本试剂盒仅用于科研、实验室血清铁测定试剂盒说明书50T一、原理：在酸性溶液和还原剂的作用下，使运铁蛋白中铁与蛋白分离，使血清中的高铁还原成亚铁，后者与双吡啶结合成粉红色的络合物，在一定范围内，铁离子的多少与色泽成正比。
二、试剂的组成与配制：1、100mg/L铁标准贮备液：1ml 溶液一瓶，4℃保存3个月。
2mg/L铁标准应用液的配制：取铁标准贮备液0.2ml加蒸馏水定溶至10ml, 4℃保存。
2、铁显色剂：2号甲粉剂一支，2号乙粉剂一支，二号丙液100ml×1瓶，4℃保存6个月。
用时将甲、乙二粉剂倒入丙液中，充分混匀，溶解，即为铁显色剂，4℃避光保存。
2mg/L铁标准应用液(ml)0.5血清(ml) 0.5 铁显色剂（ml） 1.51.51.5混匀后，沸水浴5分钟，（空白及标准管可以不煮），冷却后离心，3500转/分，离心10分钟，取上清液1.0ml,0.5cm光径，波长520nm,双蒸水调零，测各管吸光度OD值。
四、计算与举例：1、计算公式：血清铁（mg/L）=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准浓度（2mg/L）血清铁（umol/L）=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准浓度(35.81umol/L)*标准管铁含量为2000ug/L,铁原子量为55.847，所以标准管铁含量为35.81umol/L 2、举例：取血浆0.5ml按操作表进行血清（浆）铁测定，在520nm处，0.5cm光径，测定各管吸光度为：空白管0.000，标准管0.038，测定管0.037，则计算如下：血清铁(umol/L)=空白管吸光度标准管吸光度空白管吸光度测定管吸光度??×标准液浓度=0038.00037.0??×35.81=34.87（umol/L）五、注意点：1、玻璃器材需严格清洗，避免铁的污染，建议最好用一次性塑料试管。
2、若上清浑浊，可再用另一试管再次离心后比色。
铁离子(Fe)测定试剂盒(Ferene法)产品技术要求
铁离子（Fe）测定试剂盒（Ferene法）组成：试剂盒由试剂1（R1）、试剂2（R2）和校准品（选配）组成：试剂1（R1）：醋酸缓冲液：200mmol/L，硫脲：42mmol/L， Trion X-100：0.50%；试剂2（R2）：呋喃三嗪二钠盐：2mmol/L，盐酸羟胺：200mmol/L。
校准品（选配）：单水平的液态校准品，在盐酸缓冲液中添加Fe离子，稳定剂<0.1%。
定值范围：（80.0～120.0）μmol/L。
校准品具有批特异性，详见瓶签。
预期用途：本产品用于体外定量测定人体血清或血浆中铁离子的含量。
2.1 外观液体双试剂：R1：无色透明液体； R2：黄绿色澄清液体。
校准品：无色至淡黄色澄清液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3溯源性根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品可溯源至国家标准物质GBW08616。
2.4 试剂空白吸光度在37℃、600 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度（A）应<0.3。
2.5 分析灵敏度测定浓度为50μmol/L时，吸光度差值（△A）应在(0.085～0.180) 范围之间。
2.6 线性范围在[2，120]μmol/L线性范围内，线性相关系数r2≥0.996。
在（50，120]μmol/L范围内的相对偏差≤10%；测定结果[2，50]μmol/L时绝对偏差≤5.0μmol/L。
2.7 重复性试剂盒测试项目重复性 CV< 6%。
2.8 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应< 6%。
2.9 准确度相对偏差：用参考物质作为样本进行检测，测量结果与参考物质靶值的相对偏差应不超过±10%。
2.10稳定性2.10.1效期稳定性原包装试剂（含校准品）在（2～8）℃下有效期为18个月，取失效期的试剂盒检测其试剂空白、分析灵敏度、线性范围、重复性、准确度应分别符合2.4、2.5、2.6、2.7、2.9的要求。
血清铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)
铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)简介：铁是人体必需微量元素，总含量约为3270mg 。
铁分布较广，有67.6%的铁作为血红蛋白分子的辅基分布于血红蛋白中，参与铁的运输。
Leagene 铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)再被还原剂还原为Fe 2+，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过分光光度计检测562nm 处吸光度值，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 (选做)制备样品：① 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Fe 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe 的检测。
高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Fe ，可以使用ddH 2O 稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe 含量。
2、 制备铁标准工作液。
配制好以后，4℃避光保存3个月有效。
3、 Fe 检测：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，按下表操作。
编号 名称TC1016 50T Storage试剂(A): 铁标准(100μg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(C): Fe Assay buffer 60ml 4℃ 试剂(D): 亚铁嗪显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份加入物 空白管 标准管 测定管 ddH 2O/ml 0.45 — — 铁标准(2μg/ml)/ml — 0.45 — 待测样品/ml——0.45Fe Assay buffer/ml 1.2 1.2 1.2混匀，于562nm处，以空白管调零，读取测定管吸光度(即血清空白)。
亚铁嗪显色液/ml 0.05 0.05 0.054、混匀，室温静置，分光光度计562nm处检测，以空白管调零，比色杯光径0.5cm，再次读取各管吸光度，1h内比色完毕。
铁含量亚铁嗪比色法检测试剂盒说明书分光法48样
铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书（分光法48样）一、产品简介：在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。
适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。
二、试剂盒组分与配制：二、所需仪器和用品：可见分光光度计、Im1.玻璃比色皿（光径ICm）、可调式移液器、离心机、蒸储水。
四、铁含量检测：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！Iv样本制备：①组织样本：取约0.1g组织，加入Im1.提取液，进行冰浴匀浆。
4o C×12000rpm离心5min,取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积（m1.）为1：5~10的比例进行提取。
②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入Im1.提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W,超声3s,间隔IOs,重复30次）；1200OrPm4℃离心Iomin,取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌，’细胞数量（104）：提取液（m1.）为500~1000:1的比例进行提取。
③液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：①可见分光光度计预热30min,设定波长到562nm,蒸储水调零。
②所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：试剂二I40I40 40充分混匀，置室温15min后，若浑浊则需30（X）rpm离心5min后取全部上清液至Im1.玻璃比色皿（光径1cm）中，于波长562nm处读取各管吸光度A。
五、结果计算：1、按照组织质量计算：铁含量（μg∕g）=（C标准XVI）X（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷（VI÷VxW）=2×（A测定-A空白）÷（A标准-A空白）÷W铁含量（nmo1.∕g）=（C标准XV1.）X（A测定-A空白）:（A标准-A空白）÷（VI:VXW）XI （P÷Mr=35.8IX（A测定-A空白）+（A标准-A空白）÷W2、按细胞数量计算：铁含量（μg∕104ce1.1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）:（A标准・A空白H（VI÷Vx细胞数量）=2×（A测定-A空白H（A标准-A空白）4•细胞数量铁含量（nmo1./IO,ce1.1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）÷∙（A标准-A空白）÷（VWVx 细胞数量）×103÷Mr=35.81×（A测定・A空白H（A标准・A空白）♦细胞数量3、按照液体体积计算：铁含量（μg∕m1.）=（C标准XVI）X（A测定・A空白）÷（A标准・A空白）÷V1=2×（A测定-A空白）÷∙（A标准・A空白）铁含量（μmo1.∕1.）=（C标准XVI）X（A测定-A空白片（A标准-A空白HV1.X1.O3.Mr=35.81×（A测定・A空白H（A标准・A空白）C标准…铁标品浓度，2μg∕m1.; V1.…加入样本体积，0.24m1.：Vi提取液体积，1m1.：W一样本取样质量，g；Mr―铁分子量，55.847o。
邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量（详细）
邻菲罗啉紫外可见分光光度法测定铁含量一、仪器1．紫外可见分光光度计(UV-1800PC-DS)；配1cm石英比色皿2个（比色皿可以自带）；2．容量瓶：100mL1个；50mL11个；3．吸量管：5mL2支；10mL3支；二、试剂1．标准储备溶液：200μg·mL-1铁标准储备溶液。
2．未知液：未知浓度的铁标准溶液。
20μg·mL-13．其他：100g·L-1盐酸羟胺溶液、1g·L-1邻菲罗啉溶液、pH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
三、实验操作1．吸收池配套性检查玻璃吸收池在600nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值作为校正值。
2．标准使用溶液的制备用10mL吸量管移取200 ug/mL 铁的标准储备溶液10.00 mL 于100 mL 容量瓶中，配制成20 ug/mL浓度的标准使用溶液。
3．绘制吸收曲线选择测量波长⑴用10mL吸量管移取20 ug/mL 铁的标准溶液5.00 mL 于50 mL 容量瓶中，⑵用5mL吸量管依次加入然后加入5mL100g·L-1盐酸羟胺溶液，摇匀。
放置2min后，⑶用5mL吸量管加入5mL1g·L-1邻菲罗啉溶液，⑷用10mL吸量管加入10mLpH=4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，⑸用蒸馏水稀释至刻度线摇匀。
⑹用1cm吸收池，以试剂空白为参比，在400~600nm间扫描其吸收曲线，并根据吸收曲线的吸光度确定最大吸收波长。
4．标准工作曲线的绘制⑴取50 mL容量瓶6只，分别移取（务必准确移取）20 ug/mL铁标准溶液2.0 mL，4.0 mL，6. 0mL ，8.0 mL ，10.0 mL于5只容量瓶中，不加铁标准溶液醅空白液作参比，⑵各加5ml盐酸羟胺溶液，摇匀经二分钟后，再各加10ml NaAc溶液及5ml 邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度线,充分摇匀,待测定。
血清铁浓度检测试剂盒说明书 可见分光光度法
血清铁浓度检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1730规格：50T/48S产品内容：试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存。
临用前配制，每瓶各加入10mL蒸馏水充分溶解。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
临用前配制，每瓶各加入313μL冰醋酸，加入10mL蒸馏水充分溶解。
标准液：液体3mL×1瓶，1000μmol/L Fe3+标准液，4℃保存。
临用前用蒸馏水稀释8倍即125μmol/L 的标准溶液进行实验。
产品说明：血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁，该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备仪器和用品：可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。
2.标准液：提前取出标准液用蒸馏水稀释8倍即125μmol/L。
3.操作表：加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水400--125μmol/mL标准液--400血清（浆）-400-试剂一400400400试剂二400400400混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液700μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管。
血清铁浓度计算：血清铁含量(μmol/L)=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)] =125×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) C标准液：125μmol/L Fe3+标准液。
注意事项：1、血清铁含量少，所用器皿（EP管）需要注意，避免被铁污染。
ATP含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法
ATP含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法ATP含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0300规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入7mL蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；试剂三：液体8mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×2支，-20℃保存。
临用前每支加入0.4mL蒸馏水溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入3.2mL蒸馏水；试剂六：粉剂×2支，-20℃保存。
临用前加入0.5mL蒸馏水备用，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；标准品：粉剂×1支，-20℃保存。
5mg ATP，临用前加入0.826mL蒸馏水配成10μmol/mL的ATP标准溶液。
产品说明：ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。
测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，NADPH和ATP含量成正比，以此反应ATP含量。
自备仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水和氯仿。
操作步骤：一、ATP的提取：1、血清（浆）中ATP的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL提取液），充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
组织铁含量检测试剂盒说明书 微量法
组织铁含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4355规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入5mL蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用；试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入235μL冰醋酸，加入7.5mL蒸馏水充分溶解；溶解后4℃保存一周；标准液：液体3mL×1瓶，1μmol/mL Fe3+标准液，4℃保存；临用前稀释8倍即0.125μmol/mL的标准溶液进行实验，现用现配。
产品说明：铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。
缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。
亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。
测定操作：1、样本处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
4000g4℃离心10分钟，取上清。
2、操作步骤：（1）可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至520nm。
蒸馏水调零。
（2）加样表：第1页，共2页加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水120--0.125μmol/mL标准液--120样本-120-试剂一606060试剂二120120120混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入60μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层无机相200μL，加入微量玻璃比色皿或者96孔板中，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A空白管。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告
邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1.学习确定实验条件的方法和测定微量铁的分光光度法；2.掌握TU—1901型双光束紫外可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理1.在可见光分光光度法测定无机物时，通过显色反应生成吸光系数较大的有色物质进行测。
2.确定适宜实验条件：改变其中一个影响因素，暂时固定其它影响因素，测吸光度，通过吸光度—该因素的曲线确定最适宜的显色条件。
其他因素的确定也照此方法。
3.本实验以邻二氮菲（phen）为显色剂，是光度法测定微量铁的优良试剂，pH在2~9时（pH=5~6），Fe2+ + 3phen [Fe(phen)3]2+(稳定的红色配合物)lgK稳=21.3，λmax=510nm,ε510=1.1×104L·cm-1·mol-1用盐酸羟胺将Fe（Ⅲ）还原为Fe（Ⅱ），以邻二氮菲做显色剂可测定试样中铁含量。
本方法选择性高，杂离子难以干扰。
三、仪器与试剂TU—1901型双光束紫外可见分光光度计，1cm比色皿，10mL 吸量管，50mL 比色管。
1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液，100μg·mL-1铁标准溶液，0.15%phen水溶液，10%盐酸羟胺溶液，1 mol·L-1醋酸钠溶液，工业盐酸（试样）。
四、实验操作1.吸收曲线的绘制和测量波长的选择用吸量管吸取2.00mL1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液注入50mL比色管中，再加入 1.00mL10%盐酸羟胺溶液，摇匀后，加入2.00mL0.15%phen水溶液和5.00mL1 mol·L-1醋酸钠溶液，稀释至刻度线，摇匀。
以蒸馏水为参比液，将上述试液装入1cm比色皿（2/3左右），在440nm~560nm 之间，每隔5nm测一次吸光度，以吸光度A为纵坐标，波长λ为横坐标绘制吸收曲线，选择最适宜波长。
ATP含量检测试剂盒(可见分光光度法)使用说明
ATP含量检测试剂盒（可见分光光度法）使用说明注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0300规格：100T/48S产品内容：组分规格保存试剂一底物液Ⅰ粉剂×1瓶室温保存底物液Ⅰ配制：用时加10mL煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解完全；临用前观察如有结晶，可沸水浴溶解后置于37℃保存待测。
试剂二底物液Ⅱ20mL×1瓶4℃保存试剂三促进剂粉剂×2支-20℃保存稀释液760μL×2瓶4℃保存试剂三应用液（促进剂）配制：临用前取1支试剂三稀释液加入1支试剂三粉剂中，充分溶解备用。
试剂四沉淀剂液体 5.5mL×1瓶4℃保存试剂五显色剂甲液7mL×4瓶4℃保存乙液6mL×4瓶4℃保存显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配。
试剂六终止剂50mL×1瓶室温保存试剂七ATP标准品粉剂×2支4℃保存5mmol/L ATP标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容至1mL，制备5mmol/L ATP标准品贮备液。
1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1:4稀释，即5倍稀释。
产品说明：三磷酸腺苷（adenosine5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。
ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。
ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。
通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。
通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。
ATP含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的ATP水平。
自备仪器和用品：分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵和蒸馏水。
铁测定试剂盒(5-Br-PADAP显色剂法)产品技术要求北检·新创源
铁测定试剂盒（5-Br-PADAP显色剂法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中铁的含量。
1.1规格具体产品规格见下表:1.2组成成分试剂1：醋酸-醋酸钠≥50mmol/L试剂2：5-Br-PADAP ≥0.01%2.1 外观2.1.1 外包装完整无破损；2.1.2 试剂1：无色或橙黄色澄清透明液体；2.1.3 试剂2：橙红色澄清透明液体。
2.2 净含量净含量不低于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长546nm、副波长700nm、37℃条件下, 试剂空白吸光度不大于0.8。
2.4 线性2.4.1 线性范围[1.3，90.0]μmol/L，相关系数r＞0.990。
2.4.2 线性偏差（10.0，90.0]μmol/L线性范围内，相对偏差不超过±10%；[1.3，10.0]μmol/L线性范围内，绝对偏差不超过±1μmol/L。
2.5 分析灵敏度检测浓度为38.3μmol/L的样本时，吸光度变化不小于0.08。
2.6 重复性测试（6.0±2.0）μmol/L、（20.0±5.0）μmol/L和（35.0±5.0）μmol/L的血清样本或质控样本，重复测试20次，CV≤8%。
2.7 批间差用三个不同批号的试剂测试（20.0±5.0）μmol/L的同一样本，重复测试3次，相对极差R≤8%。
2.8 准确度测定GBW09152标准物质，测定结果不超过标示值的±10%。
2.9 稳定性原包装试剂2～8℃避光储存，有效期12个月。
取到效期后两个月内产品进行检测，检测结果应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6和2.8的要求。
实验报告-紫外-可见分光光度法测铁的含量-
一、实验目的：
了解朗伯-比尔定律的应用，掌握邻二氮菲法测定铁的原理；了解分光光度计的构造；掌握分光光度计的正确使用方法；学会吸收曲线的绘制和样品的测定原理。
二、实验原理
邻菲啰啉是测定微量铁的较好试剂。
在pH＝2～9 的条件下，邻菲啰啉与Fe2+生成稳定的橙红色配合物，其反应式如下：
Fe3+能与领二氮菲生成淡蓝色配合物（不稳定），故显色前加入还原剂：盐酸羟胺使其还原为Fe2+。
三、仪器及试剂
紫外可见分光光度计、铁标准溶液：含铁0.01mg/mL、0.1%邻菲罗啉水溶液、10%盐酸羟胺水溶液、1mol/lNaAc缓冲溶液（pH4.6）。
四、实验步骤
1．吸收曲线的绘制和测量波长的选择
吸取0.0mL和6.0mL 铁标准溶液分别注入两个50 mL容量瓶中，依次加入5mlNaAc溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔0.5nm测吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
2、标准曲线的绘制
分别吸取铁的标准溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于6只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在其最大吸收波长下，用1cm比色皿，以试剂溶液为空白，测定各溶液的吸光度，以铁含量(mg/50ml)为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
五、实验记录及数据处理
（1）绘制曲线图。
（2）。
辅酶ⅡNADP（H）含量试剂盒说明书分光光度法50管24样
辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒说明书分光光度法 50 管/24 样正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和 NADPH 含量测定可以计算 NADP（NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
测定原理分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP+和 NADPH。
NADPH 通过 PMS 的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm 下检测吸光值，从而测定 NADPH 含量。
利用 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原 NADP+为 NADPH，从而检测 NADP+含量。
所需的仪器和用品可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制酸性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；碱性提取液：50mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 支，-20 ℃保存，用时加入 4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂 4℃保存一周；试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂 4℃保存一周；试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 4mL 蒸馏水，混匀；用不完的试剂 4℃保存一周；试剂五：液体 1.8mL×1 支，4 ℃保存；试剂六：液体 30mL×1 瓶，4 ℃保存；试剂七：液体 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
NADP+和 NADPH 的提取1 血清（浆）中 NADP+和 NADPH 的提取NADP+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆），加入 1mL 酸性提取液），95℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
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组织铁含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4350
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入7.5mL蒸馏水充分溶解，试剂一变黑后则不能使用；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前配制，加入375μL冰醋酸，加入12mL蒸馏水充分溶解；溶解后4℃保存一周；
标准液：液体3mL×1瓶，1μmol/mL Fe3+标准液，4℃保存；临用前稀释8倍即0.125μmol/mL的标准溶液进行实验，现用现配。
产品说明：
铁是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。
缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。
亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+，Fe2+进一步与2,2’-联吡啶显色，在520nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。
测定操作：
1、样本处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
4000g4℃离心10分钟，取上清。
2、操作步骤：
（1）可见分光光度计预热30min，波长调至520nm。
蒸馏水调零。
（2）加样表：
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加入试剂（μL）空白管测定管标准管蒸馏水400--
--400
0.125μmol/mL标准
液
样本-400-
试剂一200200200
试剂二400400400
混匀后盖紧，置于沸水浴5min，自来水冷却；加入200μL氯仿（自备），充分震荡混匀；室温10000rpm，离心10min，小心吸取上层液800μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即测定吸光度，分别记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A空白管。
3、组织铁含量计算：
（1）按组织鲜重计算:
组织铁含量（μg/g鲜重）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷W
= 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W
（2）按组织蛋白浓度计算
组织铁含量（μg/mg prot）=（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）
= 6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr。
C标准液：0.125μmol/mL Fe3+标准液；55.845：Fe的相对分子质量，55.845μg/μmol；Cpr：样品蛋
白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。
注意事项：
1、当ΔA大于1时，建议将样品用提取液稀释后进行测定；ΔA过小时，可增加酶促反应时间（1h或2h）或
增加加入的样品体积来测定。
2、试剂一溶解变黑后则不能使用；试剂二有毒性，做好防护措施。
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