基因组文库和cDNA文库的比较(课堂PPT)
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材料影响
cDNA文库能反映 mRNA信息，但 不能直接获得基 因的内含子序列 和基因编码区外 大量的调控序列 信息。需要基因
组文库。
cDNA文库中，高 丰度mRNA的
cDNA克隆,所占 比例较高,分离基 因容易;低丰度 mRNA的cDNA克 隆,所占比例较低,
分离基因困难;
• 感谢聆听！ • THANK YOU!
复杂性低、筛选
假阳性概率低。
简易。其克隆子
基因组克隆子
数为基因组文库 的十分之一。
复杂，假阳性 概率高。
真核生物克隆序 列直接应用于基 因工程，基因组 文库不能。
以mRNA为原料， 研究RNA病毒的基 因组结构和基因克 隆分离。
• 03 • 基因组文库优点
基因组文库含有 全部基因，
cDNA文库只含有 全部蛋白质编码 的结构基因且受
• 01 • 文库构建（真核）
真核生物和原核生物基因组 文库构建的原理和过程基本 相似，方法有异（原核采用 质粒载体或λ载体）。下面 介绍三种方法：
a.构建 λ噬菌体型基因组文库
• 01 • 文库构建（真核）
由于筛选困难、重组效率低、文 库不易贮存，Cosmid使用不如λ 噬菌体载体普遍。
b.构建 Cosmid基因组文库
• 01 • 文库构建（真核）
酵母人工染色体
c.构建酵母人工染色体型基因组文库
基因组文库
概念 文库制备
• 02 • 概念
cDNA文库：以mRNA为模板， 经反转录酶催化，在体外反转录 成cDNA，与适当的载体连接后 转化受体菌，则每个细菌含有一 段cDNA，并能繁殖扩增，这样 包含着细胞全部mRNA信息的 cDNA克隆集合称为该组织细胞 的cDNA文库。
公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）
• 02 • 文库构建
细胞总RNA的制备及mRNA的分离
包括mRNA、tRNA、rRNA
cDNA第一条链的合成
oligo引导合成法、随机引物引导合成法
双链cDNA的合成
四种常用方法
cDNA与载体的连接和噬菌体颗粒的包 装及转染或质粒的转化
• 02 • 文库构建
公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）, 实际克隆子数应为2N~3N或更大。
• 01 • 文库构建（原核）
制备基因组DNA并片段化
物理学方法：机械类或超声波等 生物化学方法：限制酶部分切割
筛选鉴定基因组文库
DNA片段与载体重组连接
原核生物基因组较小，一般采用质粒载体 或λ载体。
重组DNA导入受体菌细胞并扩增
•基因组文库和cDNA文库的比 较
• 0 • 基因组文库 1
• 0 • cDNA文库 2
• 0 • 两者比较 3
基因组文库
概念 文库构建（原核） 文库构建（真核）
Hale Waihona Puke Baidu
• 01 • 概念
基因组文库：某种生物基因组的 全部遗传信息通过克隆载体贮存 在一个受体菌的群体中，这个受 体菌群体就是该种生物的基因组 文库。
oligo 引 导 合 成 第 一 链
• 02 • 文库构建
双 链
DNA
合 成 方 法
• 02 • 文库构建
大 肠 杆 菌
RNaseH
酶 降 解 取 代 法
• 02 • 文库构建
Oligo
寡 聚 引 物 引 导 法
• 02 • 文库构建
PCR法
比较
cDNA文库优点 基因组文库优点
• 03 • cDNA文库优点
cDNA文库能反映 mRNA信息，但 不能直接获得基 因的内含子序列 和基因编码区外 大量的调控序列 信息。需要基因
组文库。
cDNA文库中，高 丰度mRNA的
cDNA克隆,所占 比例较高,分离基 因容易;低丰度 mRNA的cDNA克 隆,所占比例较低,
分离基因困难;
• 感谢聆听！ • THANK YOU!
复杂性低、筛选
假阳性概率低。
简易。其克隆子
基因组克隆子
数为基因组文库 的十分之一。
复杂，假阳性 概率高。
真核生物克隆序 列直接应用于基 因工程，基因组 文库不能。
以mRNA为原料， 研究RNA病毒的基 因组结构和基因克 隆分离。
• 03 • 基因组文库优点
基因组文库含有 全部基因，
cDNA文库只含有 全部蛋白质编码 的结构基因且受
• 01 • 文库构建（真核）
真核生物和原核生物基因组 文库构建的原理和过程基本 相似，方法有异（原核采用 质粒载体或λ载体）。下面 介绍三种方法：
a.构建 λ噬菌体型基因组文库
• 01 • 文库构建（真核）
由于筛选困难、重组效率低、文 库不易贮存，Cosmid使用不如λ 噬菌体载体普遍。
b.构建 Cosmid基因组文库
• 01 • 文库构建（真核）
酵母人工染色体
c.构建酵母人工染色体型基因组文库
基因组文库
概念 文库制备
• 02 • 概念
cDNA文库：以mRNA为模板， 经反转录酶催化，在体外反转录 成cDNA，与适当的载体连接后 转化受体菌，则每个细菌含有一 段cDNA，并能繁殖扩增，这样 包含着细胞全部mRNA信息的 cDNA克隆集合称为该组织细胞 的cDNA文库。
公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）
• 02 • 文库构建
细胞总RNA的制备及mRNA的分离
包括mRNA、tRNA、rRNA
cDNA第一条链的合成
oligo引导合成法、随机引物引导合成法
双链cDNA的合成
四种常用方法
cDNA与载体的连接和噬菌体颗粒的包 装及转染或质粒的转化
• 02 • 文库构建
公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）, 实际克隆子数应为2N~3N或更大。
• 01 • 文库构建（原核）
制备基因组DNA并片段化
物理学方法：机械类或超声波等 生物化学方法：限制酶部分切割
筛选鉴定基因组文库
DNA片段与载体重组连接
原核生物基因组较小，一般采用质粒载体 或λ载体。
重组DNA导入受体菌细胞并扩增
•基因组文库和cDNA文库的比 较
• 0 • 基因组文库 1
• 0 • cDNA文库 2
• 0 • 两者比较 3
基因组文库
概念 文库构建（原核） 文库构建（真核）
Hale Waihona Puke Baidu
• 01 • 概念
基因组文库：某种生物基因组的 全部遗传信息通过克隆载体贮存 在一个受体菌的群体中，这个受 体菌群体就是该种生物的基因组 文库。
oligo 引 导 合 成 第 一 链
• 02 • 文库构建
双 链
DNA
合 成 方 法
• 02 • 文库构建
大 肠 杆 菌
RNaseH
酶 降 解 取 代 法
• 02 • 文库构建
Oligo
寡 聚 引 物 引 导 法
• 02 • 文库构建
PCR法
比较
cDNA文库优点 基因组文库优点
• 03 • cDNA文库优点