结核分枝杆菌药敏试验结果的判读
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10
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (3)
PS
?Break Point MIC
PR
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
11
不同药物的表型药敏试验结果的可靠性 差异较大
一般认为,以固体培养基为基础的DST,诊断利福平和 异烟肼耐药的准确性最高,链霉素和乙胺丁醇次之,而一 些临界浓度与药物最低抑菌浓度(MIC)接近,或是临床疗效 不显著的药物(如二线抗结核药物)的药敏试验结果需要 慎重解读。
份
份
TCH 70
70 100%
备注(微孔板对罗氏) --
PNB 70 SM 70 INH 70 EMB 70 RFP 70 RFT 70 LFX 70
AM 70 CM 70
PAS 70 RFB 70 PTO/ET 70 O
70 100%
--
68 97.10%
2人份敏感对耐药(长到第二孔):18012、17076
67
96%
3人份中敏对敏感18012、18026、18039
62 88.60% 3人份中敏对敏感18038、18026、18002 ,5人份中敏对耐药18039、18033、18015、18014、
68 97.10%
18013 1人份中敏对敏感、1人份无法判读(跳孔)对敏感
59 84.30%
2人份中敏对敏感,9人份中敏对耐药
结核分枝杆菌药敏试验结果的判读
国家结核病临床实验室
1
结核病耐药问题提高了临床对DST的需求
Increasing Trend
XDR
TDR
Almost all the drugs
DR
MDR
INH and RIF
MDR Plus Quinolone and Aminoglyocside
Any one or more Other than MDR/XDR
12
表型药敏试验
V.S.
V.S.
13
固体罗氏培养基法与液体培养基法DST的比较
不同方法
药物种类
价格 (RMB)
罗氏培养基 多种(除PZA外) 15元/药
从培养到获得DST 结果
2-3个月
液体培养基 多种(包括PZA) >100元/药
2-4周
14
微孔板法药敏试验
板式药敏试验的技术特点:
1. 包含的药物种类较多,包括是包括了一些新型的抗结核药 物,如莫西沙星,克拉霉素,阿莫西林/克拉维酸钾、氯 法齐明。
2
药物敏感性试验的方法
一、表型药敏试验
ü固体培养基药敏试验:绝对浓度法; 比例法 ü液体培养基药敏试验:MGIT960; BacT/ALERT 3D; üMIC测定:药敏板法
二、分子药敏试验
ü基因测序 ü间接基因测序法: 线性探针杂交技术;基因芯片;GeneXpert;HRM
3
药敏试验结果的不一致问题
2. 获得耐药浓度,发现中度敏感/低度耐药菌株。 3. 缩短报告结果时间。一般2周,特殊情况下3周报告结果。 4. 提高了标准化程度。药敏培养板的制备实现了标准化,结
果的读取依赖专业设备,有利于质量控制。
以固体药敏试验为对照评估板式药敏试验结果
70人份对照药物符合率统计
总数/ 符合数/ 符合率
66 94.30%
4人份中敏对耐药
17
分子药敏试验
V.S.
V.s.
基因芯片
HAIN Test
GeneXpert
18
19
结核分枝杆菌耐药机制
p基因型耐药:相关的耐药基因发生突变,是生长活跃的细菌 的主要耐药机制,导致疗效降低。 p表型耐药或药物耐受:由于一些表观遗传学改变,如蛋白表 达水平变化,蛋白修饰等导致的持留菌对药物的敏感性降低, 导致治疗的周期延长、复发。
1. 同一份患者不同时间留取的标本结果不一致 2. 同一份患者不同的方法间结果不一致
4
比例法和绝对浓度法的选择
5
绝对浓度法与比例法的差别
差异
比例法
绝对浓度法
接种菌量
10-4 mg和10-6 mg 10-3 mg
培养基药物浓度
IHN:0.2μg /ml SM:4.0μg /ml RFP:40μg /ml EMB:2.0μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
9
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (2)
Clinically susceptible strains (PS)
Break point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
69 98.60% 68 97.10% 69 98.60%
17993(0.8浓度敏感对1浓度敏感) 2人份敏感对耐药17999、18044 1人份敏感对耐药18026(NTM)
70 100%
--
57
81.40%
10份是中敏对耐药17076、17081、17082、17085、18013、18014、18026、18043、18049、 18051,3份是敏感对耐药18002、18015、18050
H 81.1%
R 92.5%
S 83.6%
E 98.6%
比例法诊断耐药的比例高于绝对浓度法
对两种方法不符合的菌株的MIC测定显示:这些菌株对相应药物的MIC值都
接近临界值。
刘宇红.中华结核和呼吸杂志.2000 7
耐药诊断临界值的确定:
(1)能够最大限度的区分临床上可能的敏感株和可能 的耐药株; (2) 这个浓度应该是血和组织浓度可以达到的; (3)当以这个浓度诊断细菌学耐药时,可能会出现临 床反应性降低。
IHN:1,10μg /ml SM:10,100μg /ml RFP:50,250μg /ml EMB:5,50μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
报告结果时间
4-6周
4周
6
绝对浓度法和比例法药敏试验出现结果差异
用两种药敏试验方法测定了360株结核分枝杆菌对H、R、S、E的药敏性, 两种方法的符合率:
8
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (1)
Clinically susceptible strቤተ መጻሕፍቲ ባይዱins (PS)
Break Point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (3)
PS
?Break Point MIC
PR
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
11
不同药物的表型药敏试验结果的可靠性 差异较大
一般认为,以固体培养基为基础的DST,诊断利福平和 异烟肼耐药的准确性最高,链霉素和乙胺丁醇次之,而一 些临界浓度与药物最低抑菌浓度(MIC)接近,或是临床疗效 不显著的药物(如二线抗结核药物)的药敏试验结果需要 慎重解读。
份
份
TCH 70
70 100%
备注(微孔板对罗氏) --
PNB 70 SM 70 INH 70 EMB 70 RFP 70 RFT 70 LFX 70
AM 70 CM 70
PAS 70 RFB 70 PTO/ET 70 O
70 100%
--
68 97.10%
2人份敏感对耐药(长到第二孔):18012、17076
67
96%
3人份中敏对敏感18012、18026、18039
62 88.60% 3人份中敏对敏感18038、18026、18002 ,5人份中敏对耐药18039、18033、18015、18014、
68 97.10%
18013 1人份中敏对敏感、1人份无法判读(跳孔)对敏感
59 84.30%
2人份中敏对敏感,9人份中敏对耐药
结核分枝杆菌药敏试验结果的判读
国家结核病临床实验室
1
结核病耐药问题提高了临床对DST的需求
Increasing Trend
XDR
TDR
Almost all the drugs
DR
MDR
INH and RIF
MDR Plus Quinolone and Aminoglyocside
Any one or more Other than MDR/XDR
12
表型药敏试验
V.S.
V.S.
13
固体罗氏培养基法与液体培养基法DST的比较
不同方法
药物种类
价格 (RMB)
罗氏培养基 多种(除PZA外) 15元/药
从培养到获得DST 结果
2-3个月
液体培养基 多种(包括PZA) >100元/药
2-4周
14
微孔板法药敏试验
板式药敏试验的技术特点:
1. 包含的药物种类较多,包括是包括了一些新型的抗结核药 物,如莫西沙星,克拉霉素,阿莫西林/克拉维酸钾、氯 法齐明。
2
药物敏感性试验的方法
一、表型药敏试验
ü固体培养基药敏试验:绝对浓度法; 比例法 ü液体培养基药敏试验:MGIT960; BacT/ALERT 3D; üMIC测定:药敏板法
二、分子药敏试验
ü基因测序 ü间接基因测序法: 线性探针杂交技术;基因芯片;GeneXpert;HRM
3
药敏试验结果的不一致问题
2. 获得耐药浓度,发现中度敏感/低度耐药菌株。 3. 缩短报告结果时间。一般2周,特殊情况下3周报告结果。 4. 提高了标准化程度。药敏培养板的制备实现了标准化,结
果的读取依赖专业设备,有利于质量控制。
以固体药敏试验为对照评估板式药敏试验结果
70人份对照药物符合率统计
总数/ 符合数/ 符合率
66 94.30%
4人份中敏对耐药
17
分子药敏试验
V.S.
V.s.
基因芯片
HAIN Test
GeneXpert
18
19
结核分枝杆菌耐药机制
p基因型耐药:相关的耐药基因发生突变,是生长活跃的细菌 的主要耐药机制,导致疗效降低。 p表型耐药或药物耐受:由于一些表观遗传学改变,如蛋白表 达水平变化,蛋白修饰等导致的持留菌对药物的敏感性降低, 导致治疗的周期延长、复发。
1. 同一份患者不同时间留取的标本结果不一致 2. 同一份患者不同的方法间结果不一致
4
比例法和绝对浓度法的选择
5
绝对浓度法与比例法的差别
差异
比例法
绝对浓度法
接种菌量
10-4 mg和10-6 mg 10-3 mg
培养基药物浓度
IHN:0.2μg /ml SM:4.0μg /ml RFP:40μg /ml EMB:2.0μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
9
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (2)
Clinically susceptible strains (PS)
Break point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
69 98.60% 68 97.10% 69 98.60%
17993(0.8浓度敏感对1浓度敏感) 2人份敏感对耐药17999、18044 1人份敏感对耐药18026(NTM)
70 100%
--
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81.40%
10份是中敏对耐药17076、17081、17082、17085、18013、18014、18026、18043、18049、 18051,3份是敏感对耐药18002、18015、18050
H 81.1%
R 92.5%
S 83.6%
E 98.6%
比例法诊断耐药的比例高于绝对浓度法
对两种方法不符合的菌株的MIC测定显示:这些菌株对相应药物的MIC值都
接近临界值。
刘宇红.中华结核和呼吸杂志.2000 7
耐药诊断临界值的确定:
(1)能够最大限度的区分临床上可能的敏感株和可能 的耐药株; (2) 这个浓度应该是血和组织浓度可以达到的; (3)当以这个浓度诊断细菌学耐药时,可能会出现临 床反应性降低。
IHN:1,10μg /ml SM:10,100μg /ml RFP:50,250μg /ml EMB:5,50μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
报告结果时间
4-6周
4周
6
绝对浓度法和比例法药敏试验出现结果差异
用两种药敏试验方法测定了360株结核分枝杆菌对H、R、S、E的药敏性, 两种方法的符合率:
8
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (1)
Clinically susceptible strቤተ መጻሕፍቲ ባይዱins (PS)
Break Point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)