结核分枝杆菌药敏试验结果的判读

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10
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (3)
PS
?Break Point MIC
PR
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
11
不同药物的表型药敏试验结果的可靠性 差异较大
一般认为,以固体培养基为基础的DST,诊断利福平和 异烟肼耐药的准确性最高,链霉素和乙胺丁醇次之,而一 些临界浓度与药物最低抑菌浓度(MIC)接近,或是临床疗效 不显著的药物(如二线抗结核药物)的药敏试验结果需要 慎重解读。


TCH 70
70 100%
备注(微孔板对罗氏) --
PNB 70 SM 70 INH 70 EMB 70 RFP 70 RFT 70 LFX 70
AM 70 CM 70
PAS 70 RFB 70 PTO/ET 70 O
70 100%
--
68 97.10%
2人份敏感对耐药(长到第二孔):18012、17076
67
96%
3人份中敏对敏感18012、18026、18039
62 88.60% 3人份中敏对敏感18038、18026、18002 ,5人份中敏对耐药18039、18033、18015、18014、
68 97.10%
18013 1人份中敏对敏感、1人份无法判读(跳孔)对敏感
59 84.30%
2人份中敏对敏感,9人份中敏对耐药
结核分枝杆菌药敏试验结果的判读
国家结核病临床实验室
1
结核病耐药问题提高了临床对DST的需求
Increasing Trend
XDR
TDR
Almost all the drugs
DR
MDR
INH and RIF
MDR Plus Quinolone and Aminoglyocside
Any one or more Other than MDR/XDR
12
表型药敏试验
V.S.
V.S.
13
固体罗氏培养基法与液体培养基法DST的比较
不同方法
药物种类
价格 (RMB)
罗氏培养基 多种(除PZA外) 15元/药
从培养到获得DST 结果
2-3个月
液体培养基 多种(包括PZA) >100元/药
2-4周
14
微孔板法药敏试验
板式药敏试验的技术特点:
1. 包含的药物种类较多,包括是包括了一些新型的抗结核药 物,如莫西沙星,克拉霉素,阿莫西林/克拉维酸钾、氯 法齐明。
2
药物敏感性试验的方法
一、表型药敏试验
ü固体培养基药敏试验:绝对浓度法; 比例法 ü液体培养基药敏试验:MGIT960; BacT/ALERT 3D; üMIC测定:药敏板法
二、分子药敏试验
ü基因测序 ü间接基因测序法: 线性探针杂交技术;基因芯片;GeneXpert;HRM
3
药敏试验结果的不一致问题
2. 获得耐药浓度,发现中度敏感/低度耐药菌株。 3. 缩短报告结果时间。一般2周,特殊情况下3周报告结果。 4. 提高了标准化程度。药敏培养板的制备实现了标准化,结
果的读取依赖专业设备,有利于质量控制。
以固体药敏试验为对照评估板式药敏试验结果
70人份对照药物符合率统计
总数/ 符合数/ 符合率
66 94.30%
4人份中敏对耐药
17
分子药敏试验
V.S.
V.s.
基因芯片
HAIN Test
GeneXpert
18
19
结核分枝杆菌耐药机制
p基因型耐药:相关的耐药基因发生突变,是生长活跃的细菌 的主要耐药机制,导致疗效降低。 p表型耐药或药物耐受:由于一些表观遗传学改变,如蛋白表 达水平变化,蛋白修饰等导致的持留菌对药物的敏感性降低, 导致治疗的周期延长、复发。
1. 同一份患者不同时间留取的标本结果不一致 2. 同一份患者不同的方法间结果不一致
4
比例法和绝对浓度法的选择
5
绝对浓度法与比例法的差别
差异
比例法
绝对浓度法
接种菌量
10-4 mg和10-6 mg 10-3 mg
培养基药物浓度
IHN:0.2μg /ml SM:4.0μg /ml RFP:40μg /ml EMB:2.0μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
9
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (2)
Clinically susceptible strains (PS)
Break point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
69 98.60% 68 97.10% 69 98.60%
17993(0.8浓度敏感对1浓度敏感) 2人份敏感对耐药17999、18044 1人份敏感对耐药18026(NTM)
70 100%
--
57
81.40%
10份是中敏对耐药17076、17081、17082、17085、18013、18014、18026、18043、18049、 18051,3份是敏感对耐药18002、18015、18050
H 81.1%
R 92.5%
S 83.6%
E 98.6%
比例法诊断耐药的比例高于绝对浓度法
对两种方法不符合的菌株的MIC测定显示:这些菌株对相应药物的MIC值都
接近临界值。
刘宇红.中华结核和呼吸杂志.2000 7
耐药诊断临界值的确定:
(1)能够最大限度的区分临床上可能的敏感株和可能 的耐药株; (2) 这个浓度应该是血和组织浓度可以达到的; (3)当以这个浓度诊断细菌学耐药时,可能会出现临 床反应性降低。
IHN:1,10μg /ml SM:10,100μg /ml RFP:50,250μg /ml EMB:5,50μg /ml KM: 30μg /ml OFLX: 3μg /ml
报告结果时间
4-6周
4周
6
绝对浓度法和比例法药敏试验出现结果差异
用两种药敏试验方法测定了360株结核分枝杆菌对H、R、S、E的药敏性, 两种方法的符合率:
8
可能敏感株和可能耐药株的MIC分布情况 (1)
Clinically susceptible strቤተ መጻሕፍቲ ባይዱins (PS)
Break Point MIC
Clinically resistant strains (PR)
Frequency of strains
Minimal inhibitory concentrations (MIC)
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