2012 胡萝卜组织培养
高中生物实验:胡萝卜的组织培养
高中生物实验:胡萝卜的组织培养一、实验目的:胡萝卜是细胞和组织培养中常用的经典材料,是教学实验的良好材料。
通过本实验实训,要求学生熟悉胡萝卜离体根培养的基本方法和步骤,掌握愈伤组织诱导的基本技能。
二、实验原理:植物体的茎,根,叶细胞一般都具有全能性,在一定条件的营养和激素等条件下,可以脱分化形成愈伤组织。
将愈伤组织转接到含有不同激素成分的培养基上,就可以诱导其再分化生成胚状体或丛芽,进而发育成完整的小植株。
植物组织培养的全过程,证明了分化的植物细胞,仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
三、实验用具:超净台解剖刀刮皮刀不锈钢打孔器培养皿温箱四、方法步骤:1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净,用刮皮刀除去表皮1-2mm,横切成大约10mm厚的切片。
以下步骤均在无菌条件下进行。
2. 胡萝卜片经70%乙醇处理30秒钟后,用无菌水冲洗一遍,再用、2%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟,无菌水冲洗3~4次。
3. 将胡萝卜片放入培养皿中,一手用镊子固定胡萝卜片,一手用打孔器垂直打孔,每个小孔打在靠近维管形成层的区域,务必打穿组织。
然后从组织片中抽出打孔器,将胡萝卜组织片收集在装有无菌水的培养皿。
重复打孔步骤,直至收集到足够数量的组织圆片。
4. 用镊子取出组织圆片,放入培养皿中,用刀片将组织圆片切成2mm长的小块,放入装有无菌水的培养皿中。
在整个操作过程中镊子和解剖刀要多次火焰消毒,冷却后再使用。
5、将胡萝卜组织小块放到灭过菌的滤纸上,吸干水分后接种到培养基表面。
注意接种时培养瓶要有一定倾斜度,接种过程中镊子不要直接在培养基上方完成,以减少污染机会。
6、将培养物一部分置于25。
C温箱中暗培养,另一部分到光照培养室中进行培养,以比较光照和暗培养对愈伤组织诱导的反应。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍:胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含多种维生素和营养物质,对人体健康有益。
为了提高学生对胡萝卜的认识和了解,培养学生对胡萝卜的种植和养护技能,本次教学设计旨在通过胡萝卜组织培养的实践活动,引导学生了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
教学目标:1. 知识目标:了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
2. 技能目标:掌握胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧。
3. 情感目标:培养学生对农业和植物生长的兴趣,增强学生的实践动手能力。
教学内容:1. 胡萝卜的生长过程介绍:播种、发芽、生长、收获。
2. 胡萝卜组织培养的原理和意义。
3. 胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧。
教学步骤:步骤一:胡萝卜的生长过程介绍(10分钟)1. 教师通过图片或视频展示胡萝卜的生长过程,介绍播种、发芽、生长和收获的各个阶段。
2. 引导学生观察和描述胡萝卜在不同生长阶段的外观特征和变化。
步骤二:胡萝卜组织培养的原理和意义(15分钟)1. 教师简要介绍胡萝卜组织培养的原理,即通过培养胡萝卜的细胞和组织,在无土条件下实现胡萝卜的生长。
2. 引导学生思考和讨论胡萝卜组织培养的意义,如提高胡萝卜的产量和品质,减少土壤污染等。
步骤三:胡萝卜组织培养的操作步骤和技巧(40分钟)1. 教师向学生介绍胡萝卜组织培养的操作步骤,包括材料准备、组织分离、培养基配制、组织培养和转移等。
2. 演示胡萝卜组织培养的操作过程,并解释每个步骤的目的和注意事项。
3. 学生分组进行实践操作,按照教师的指导完成胡萝卜组织培养的实验。
4. 教师巡回指导学生操作,并及时纠正错误和解答疑惑。
步骤四:实验结果观察和总结(15分钟)1. 学生观察和记录胡萝卜组织培养的实验结果,包括组织生长情况和细胞形态等。
2. 学生根据观察结果,总结胡萝卜组织培养的效果和影响因素。
步骤五:教学反思和讨论(10分钟)1. 教师引导学生回顾整个教学过程,让学生表达对本次教学的感受和收获。
2. 学生提出问题和困惑,教师进行解答和讨论,帮助学生进一步理解和巩固所学知识。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计一、背景介绍胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含维生素和纤维素,对人体健康有很多好处。
为了提高学生对胡萝卜的了解和培养他们的兴趣,本教学设计旨在通过多种教学方法和活动,帮助学生全面了解胡萝卜的生长过程和营养价值,并培养学生的观察力、思考能力和动手能力。
二、教学目标1. 知识目标:a. 了解胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 了解胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
2. 能力目标:a. 培养学生的观察力和描述能力。
b. 培养学生的思考能力和问题解决能力。
c. 培养学生的动手能力和团队合作精神。
3. 情感目标:a. 培养学生对胡萝卜的兴趣和喜爱。
b. 培养学生的环保意识和对自然的敬畏心。
三、教学内容和步骤1. 教学内容:a. 胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
c. 胡萝卜的种植和生长过程。
2. 教学步骤:步骤一:导入通过展示一些胡萝卜的图片,引起学生对胡萝卜的兴趣,并提问学生对胡萝卜的了解程度。
步骤二:胡萝卜的外观特征和生长环境a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的外观特征和生长环境。
b. 学生观察并描述胡萝卜的外观特征,教师引导学生进行讨论和总结。
步骤三:胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
b. 学生分组进行小组讨论,总结胡萝卜的营养成分和对人体健康的好处。
步骤四:胡萝卜的种植和生长过程a. 教师通过图片和文字介绍胡萝卜的种植和生长过程。
b. 学生观察并描述胡萝卜的种植和生长过程,教师引导学生进行讨论和总结。
步骤五:实践活动a. 学生分组进行胡萝卜的种植实验,每个小组负责一盆胡萝卜的种植。
b. 学生记录胡萝卜的生长过程,并定期观察和测量胡萝卜的生长情况。
步骤六:总结和展示a. 学生小组展示他们种植的胡萝卜,并分享他们的观察和体验。
b. 教师引导学生总结本次教学的重点和收获,鼓励学生提出问题和思考。
胡萝卜愈伤组织培养论文
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:植物组织培养的基础是利用细胞的全能性即指已经分化了的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能,植物组织培养不仅能使处于分生状态的细胞继续保持分生能力,同时也可以使成熟组织中的细胞恢复分裂能力。
了解胡萝卜的植物组织培养的基本概念、基本原理和操作方法知道分化的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全部基因。
胡萝卜的植物组织培养主要研究不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验表明在母液中加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)的不如单独加入2,4-D(2.2 mg/L)形成愈伤组织的速度快,效果好。
关键词:胡萝卜;分化;愈伤组织;诱导一、引言植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用:单倍体育种,离体胚培养和体外受精,细胞融合,基因转化,培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
在组织培养过程中,常会遇到一些问题使实验无法进行下去,甚至导致整个实验的失败,给科研和生产造成损失。
如培养过程中的污染,褐变和玻璃化是组织培养中公认的三大难题。
胡萝卜营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
从20世纪初到近几年,胡萝卜一直是科研人员的主要研究对象。
20世纪50年代末Saward等人从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织,并将它置于液体培养基中进行培养,使它分化出愈伤组织,然后把从愈伤组织所得到的胚状体转移到固体培养基上继续培养,获得了完整的胡萝卜试管植株。
同一基因型的不同外植体其愈伤组织的发生能力有明显差异,这与不同外植体的分化程度和脱分化能力不同有关。
近年来的研究表明,以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和贮藏根。
培养方法:1、非试管微组织快繁非试管微组织快繁技术是将外植体(一般要求带一叶一芽)放置在室内外普通沙子培养基上进行培养,利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。
胡萝卜的组织培养
胡萝卜的组织培养(一)组织培养1.准备(1)器具准备:①高压蒸汽灭菌锅:培养基,接种工具,蒸馏水的消毒。
手持喷雾器:装70%的酒精,用于外植体,接种工具,操作人员的消毒。
②超净工作台:用于无菌操作。
③设备:培养架,温度控制器,摇床,光照培养箱,烘干器,蒸馏水器,冰箱,电炉,天平,温度计,酸度计,显微镜,分注器,移液器,磁力搅拌器,④常用玻璃器具:量筒,培养皿,烧杯,50ml锥形瓶,容量瓶,广口瓶,滴管,移液管,试管,酒精灯,玻璃棒,⑤常用金属仪器:镊子,剪刀,解剖刀,解剖针,接种针,刀架⑥其他用品:滤纸,标签,消毒酒精棉球,封口用品(2)试剂:MS基本培养基2,4-D:生长素类似物NAA:生长素类似物6-BA:细胞分裂素类似物酒精(体积分数70%):消毒次氯酸钠(体积分数20%):消毒无菌水A.MS基本培养基配方:上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL(pH5.6~5.8)B.分别向MS基本培养基中加入植物激素:(pH5.6~5.8)诱导愈伤组织形成培养基:MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D诱导分化芽的培养基:MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA诱导生根的培养基:MS+0.1 mg/L NAA3.灭菌:灭菌后冷却置于常温下观察3天,检查灭菌是否彻底。
4.取材接种:a.将萝卜洗净削皮切段,擦手消毒。
b.在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒,用无菌水清洗两到三次,用次氯酸钠溶液处理30min,用无菌水清洗两到三次。
c.用无菌滤纸吸取水分,在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片,选取有形成层的部位,切取1cm2的小块。
d.将组织块接种到培养基上,封口。
贴上标签,写明材料、日期、编号。
e.将培养基放在23-26°C的恒温箱培养。
4天后观察材料污染情况,14天后,观察愈伤组织生长情况。
5观察记录:每天观察外植体的生长情况,记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。
胡萝卜愈伤组织培养及继代培养要点
本科学生综合性实验报告
学号:104120265 姓名:段昌福
学院:生命科学学院专业、班级:10应用生物教育B班实验课程名称:胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验
教师:杨世忠
开课学期:2013 至2014 学年第二学期填报时间:2013 年 6 月日
云南师范大学教务处编印
)无菌操作流程:
二.实验报告
书中横卧着整个过去的灵魂——卡莱尔
人的影响短暂而微弱,书的影响则广泛而深远——普希金
人离开了书,如同离开空气一样不能生活——科洛廖夫
书不仅是生活,而且是现在、过去和未来文化生活的源泉——库法耶夫
书籍把我们引入最美好的社会,使我们认识各个时代的伟大智者———史美尔斯
书籍便是这种改造灵魂的工具。
人类所需要的,是富有启发性的养料。
而阅读,则正是这种养料———雨果。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍:胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含多种维生素和矿物质,对人体健康非常有益。
为了促进胡萝卜的种植和消费,我们计划开展一项胡萝卜组织培养教学活动。
通过该活动,我们希望能够向学生们介绍胡萝卜的生长过程和培养技术,提高他们对胡萝卜的认识和兴趣。
活动目标:1. 了解胡萝卜的生长过程和培养技术。
2. 培养学生对胡萝卜的兴趣和意识。
3. 培养学生的观察、实验和团队合作能力。
活动内容:1. 胡萝卜生长过程介绍:通过幻灯片或视频展示,向学生们介绍胡萝卜的生长过程,包括种子发芽、幼苗生长、根茎形成等。
2. 胡萝卜培养实验:将学生分成小组,每个小组提供一盆胡萝卜种子和土壤。
指导学生按照正确的方法进行胡萝卜的种植和培养,包括选择适宜的土壤、浇水、施肥等。
3. 观察和记录:学生们每天观察胡萝卜的生长情况,并记录下来。
可以使用相机或绘图的方式记录胡萝卜的不同生长阶段。
4. 团队合作:学生们在小组中共同合作,分工合作,互相帮助,共同完成胡萝卜的培养过程。
鼓励学生们分享经验和交流学习成果。
5. 结果展示:活动结束后,学生们将展示他们培养的胡萝卜植株,并分享他们的观察和记录。
可以组织一个胡萝卜品尝会,让学生们亲自品尝自己培养的胡萝卜。
活动时间安排:1. 第一周:介绍胡萝卜的生长过程和培养技术,并分组进行胡萝卜种植。
2. 第二周至第六周:学生们观察和记录胡萝卜的生长情况,并进行必要的护理工作。
3. 第七周:学生们展示他们培养的胡萝卜植株,并进行品尝会。
活动评估:1. 观察记录评估:根据学生们的观察记录,评估他们对胡萝卜生长过程的理解和观察能力。
2. 团队合作评估:评估学生们在小组合作中的表现,包括分工合作、互相帮助等。
3. 结果展示评估:评估学生们对胡萝卜培养结果的展示和分享能力。
活动资源准备:1. 幻灯片或视频介绍胡萝卜的生长过程。
2. 胡萝卜种子和土壤。
3. 相机或绘图工具用于记录胡萝卜的生长情况。
4. 活动展示和品尝会所需的场地和设备。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍:胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含多种维生素和矿物质,对人体健康具有重要的保健作用。
为了提高人们对胡萝卜的认识和培养胡萝卜的种植技能,我们计划开展一项胡萝卜组织培养教学活动。
活动目标:1. 培养学生对胡萝卜的兴趣和认识;2. 培养学生的观察和实践能力;3. 培养学生的合作意识和团队精神;4. 培养学生的种植技能和绿色环保意识。
活动内容:1. 胡萝卜的介绍:通过讲解胡萝卜的起源、营养价值、种类等方面的知识,引发学生对胡萝卜的兴趣和好奇心。
2. 胡萝卜的观察:组织学生观察不同种类的胡萝卜,了解其形状、颜色、大小等特点,并让学生用手触摸胡萝卜的表面,感受其质地。
3. 胡萝卜的种植:向学生介绍胡萝卜的种植方法和技巧,包括土壤准备、播种、浇水、施肥等环节。
然后,分成小组,每个小组分配一块土地,让学生亲自动手进行胡萝卜的种植实践。
4. 胡萝卜的生长观察:学生定期观察胡萝卜的生长情况,记录胡萝卜的高度、叶子的颜色、根部的形状等信息,并与其他小组的观察结果进行比较,探讨影响胡萝卜生长的因素。
5. 胡萝卜的采摘和品尝:当胡萝卜生长到一定程度时,学生可以亲自采摘胡萝卜,并进行清洗和处理。
然后,组织学生品尝胡萝卜,了解其口感和味道,并讨论胡萝卜对健康的益处。
6. 胡萝卜的创意应用:鼓励学生发挥创造力,将胡萝卜应用于烹饪、制作美食或制作手工艺品等方面,展示胡萝卜的多样性和可塑性。
活动评估:1. 观察记录:通过学生的观察记录,评估学生对胡萝卜的观察能力和记录能力。
2. 口头表达:组织学生进行小组讨论,让学生分享自己的观察结果和体会,评估学生的口头表达能力和团队合作能力。
3. 作品展示:学生可以展示自己制作的胡萝卜相关作品,如烹饪成果、手工艺品等,评估学生的创意能力和实践能力。
活动时间安排:本次活动预计在一个月内完成,具体时间安排如下:- 第一周:胡萝卜的介绍和观察;- 第二周:胡萝卜的种植和生长观察;- 第三周:胡萝卜的采摘和品尝;- 第四周:胡萝卜的创意应用和活动总结。
胡萝卜愈伤组织实验报告
北京师范大学珠海分校实验报告姓名:实验名称:胡萝卜愈伤组织的诱导学院(系、所):工程技术学院学科专业:生物技术导师姓名:报告时间:2012.2.15—2012.3.20实验序号01实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导实验时间2012.2.15—2012.3.20实验室工程技术学院1206 1209 1.研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜(Daucus carrot),属于十字花科植物,是一种十分重要的蔬菜植物。
由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展,作为生物技术研究的理想材料,许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展,特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多。
因此继续深入研究还是很有必要的。
此外,由于市面上的胡萝卜价格比较便宜,材料易得,而且在组织培养方面容易诱导发生,我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
1.2 组织培养植物组织培养概念(广义)又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞,原生质体等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念(狭义)指用植物各部分组织,如形成层。
薄壁组织。
叶肉组织。
胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2.实验设备与材料2.1 实验设备冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶(棕色和白色)、量筒、烧杯、容量瓶、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、精密pH试纸(5.4~7.0)、PH试纸(5.4~7.0)、封口膜、橡皮筋、微波炉、高压蒸汽灭菌锅、已灭菌滤纸、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、大烧杯、小烧杯、50ml三角瓶、50ml 量筒、100ml量筒、10ml和5ml还有2ml吸管、200ml定容瓶。
胡萝卜组织培养
六、常见错误举例
• 材料切得过小。 • 材料消毒时间过长。 • 切材料时下面没垫滤纸。 • 镊子、刀在酒精灯上烧过立即放到盛酒精的烧杯里。 • 操作时,手、三角烧瓶在盛材料的培养皿上方活动,
容易把菌带到材料上。 • 把接种的切块压入培养基里面。 • 接种时瓶口垂直向上,手、镊子上的脏物掉到瓶里。 • 升汞回收倒入酒精桶里。
七、课后作业及预习
• 课后作业
有几种常用的外植体消毒液?主要原理是什 么?效果如何?
• 预习
根癌农杆菌转化的原理及方法。
实验步骤
• 材料处理
安全第一
1)配75%酒精,倒升汞;
2)把胡萝卜切成约440×20×10 mm方块,4条。
• 消毒和清洗
4)把切好的材料,放在100 mL的烧杯里,加入75%酒精,浸
8)用烧过的镊子将外植体放到培养基上,3块/瓶;
9) 盖好封口膜和牛皮纸,放回316,23~28℃,避光培养。
• 在无菌坏境下,将切好的外植体立即接在培养 基上,每瓶接种2~4个,防止交叉污染。
• 接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿 用无菌胶带封口。
三、无菌操作步骤
• 接种3天前用甲醛熏蒸接种室,并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌;
• 接种前20分钟,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯; • 接种员洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,换穿拖鞋等; • 上工作台后,用酒精棉球搽拭双手(特别是指甲处)和工作
泡30秒;
5)然后将外植体转入0.2%升汞中,浸泡25~30分钟,不能超
过30分钟;
6)把带有升汞和组织材料的烧杯拿到超净工作台,取出材料,
放入培养皿,用灭菌水洗4~5分钟,重复3次,用滤纸吸干。
• 接种与培养
胡萝卜愈伤组织诱导
胡萝卜愈伤组织的诱导摘要:以胡萝卜直根为外植体,进行植物组织培养,并探讨解决胡萝卜组织培养不易成功的因素。
先后进行了两次实验,研究了不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。
实验结果表明在母液中加入2,4-D(2.2 mg/L)效果最好,优于加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)。
关键词:胡萝卜;愈伤组织;激素一、引言19世纪30年代,德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说,根据这一学说,如果给细胞提供和生物体内一样的条件,每个细胞都应该能够独立生活。
1902年,德国植物学家哈伯兰特在细胞学说的基础上,大胆提出要在试管中人工培育植物。
他预言离体的植物细胞具有发育上的全能性,能够发育成为完整的植物体。
这种细胞全能性的理论是植物组织培养的理论基础。
1958年,一个振奋人心的消息从美国传向世界各地,美国植物学家斯蒂瓦特等人,用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养,终于得到了完整植株,并且这一植株能够开花结果,证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论,近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。
植物的组织培养广义又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞,原生质体等,通过无菌操作,在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义是指用植物各部分组织,如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。
在植物育种上的应用:单倍体育种,离体胚培养和体外受精,细胞融合,基因转化,培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。
胡萝卜愈伤组织的诱导与继代培养实验报告
4)培养基消毒灭菌时间不宜过长,也不可超过灭菌锅规定的压力范围;否则,培养基中的蔗糖、有机物质,特别是维生素类物质就会分解,导致培养基变质、变色,甚至难以凝固。
5)当灭菌完成后,应切断电源或热源,待灭菌锅内气压接近“0”时,方可打开放气阀,拧开灭菌锅盖取出培养基。切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气,否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾,导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出,造成浪费或污染,甚至烫伤工作人员。
A继代培养前准备工作
a)接种室的清洁和消毒;
b)超净工作台的开机和消毒;
c)剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备;
d)实验材料的准备(选择装有无污染的已分化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于净工作台上)
B愈伤组织继代培养
a)将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体产生的愈伤组织在已灭菌的培养皿中剥离
每组1~2根胡萝卜,用试管刷和肥皂洗净,进行初次表面清洁;洗净后用干净的烧杯盛放,用小刀切成合适大小的4段(每人1段),转入超净台待用。
(4)植物材料的表面灭菌和接种
A.操作人员洗手消毒
B.装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
C.将待消毒的材料浸入75%的酒精中10秒,取出转入无菌水冲洗干净。(酒精单独一个杯子装,消毒完毕转下一组使用)
D.培养基的分装
配制好的培养基要趁热分装,培养基分装完后,用封口膜封严瓶口,并用棉线扎紧。本次实验中500ml分装到20个三角瓶,每人5瓶。
E.培养基的灭菌
培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。消毒灭菌时,压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa(可在0.105~0.12MPa间,但不得超过0.14 MPa),温度121℃时保持15~30 min左右即可。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计背景介绍:胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含丰富的营养物质,对人体健康有益。
为了提高学生对胡萝卜的认识和了解,培养学生的动手能力和创造力,我们计划开展胡萝卜组织培养教学活动。
活动目标:1. 让学生了解胡萝卜的基本知识,包括胡萝卜的特点、生长环境和营养价值等;2. 培养学生的动手能力和创造力,通过实践活动提高学生的实际操作能力;3. 培养学生的团队合作意识,通过小组合作完成培养胡萝卜组织的任务;4. 培养学生的观察和记录能力,通过观察和记录胡萝卜组织的生长过程,提高学生的科学素质。
活动准备:1. 胡萝卜种子:准备一定数量的胡萝卜种子,确保每一个学生都能参预到培养活动中;2. 培养容器:准备透明的培养容器,可以使用透明塑料盒或者玻璃容器;3. 培养介质:准备适合胡萝卜种子生长的培养介质,可以使用土壤或者湿润的棉花等;4. 实验器材:准备一些基本的实验器材,如喷壶、剪刀等;5. 实验记录表:准备实验记录表,让学生记录胡萝卜组织的生长过程;6. 安全措施:提醒学生注意安全,如正确使用实验器材,避免触碰有毒物质等。
活动步骤:1. 引入胡萝卜知识:通过图片、视频或者简短的讲解,向学生介绍胡萝卜的基本知识,包括胡萝卜的特点、生长环境和营养价值等。
2. 分组讨论:将学生分成小组,让他们讨论胡萝卜组织培养的重要性和意义,并让每一个小组提出一个培养胡萝卜组织的设想。
3. 设计培养方案:根据小组讨论的结果,让学生设计培养胡萝卜组织的方案,包括培养容器的选择、培养介质的准备和种子的处理等。
4. 实施培养活动:根据学生设计的方案,让每一个小组挨次进行胡萝卜组织的培养活动。
学生需要按照步骤将胡萝卜种子放入培养容器中,加入适当的培养介质,并进行必要的观察和记录。
5. 观察和记录:每一个小组在培养过程中需要观察胡萝卜组织的生长情况,并记录生长过程中的变化和观察结果。
可以使用实验记录表进行记录。
6. 分享和总结:每一个小组培养完成后,让他们分享自己的观察和记录结果,并进行总结。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计一、任务背景胡萝卜是一种常见的蔬菜,富含丰富的维生素和纤维素,对人体健康有很多好处。
为了提高学生对胡萝卜的认识和培养其对胡萝卜的兴趣,我们决定开展胡萝卜组织培养教学活动。
本教学设计旨在通过实践活动,让学生了解胡萝卜的生长过程和培养技巧,培养学生的观察力和动手能力。
二、教学目标1. 知识目标:a. 了解胡萝卜的生长过程和结构特点;b. 掌握胡萝卜的培养技巧和注意事项;c. 理解植物生长的基本原理。
2. 能力目标:a. 培养学生的观察力和动手能力;b. 提高学生的科学实验设计和数据分析能力;c. 培养学生的团队合作和沟通能力。
3. 情感目标:a. 培养学生对植物培养的兴趣和热爱;b. 培养学生的耐心和细心。
三、教学内容与步骤1. 教学内容:a. 胡萝卜的生长过程和结构特点;b. 胡萝卜的培养技巧和注意事项;c. 植物生长的基本原理。
2. 教学步骤:步骤一:引入胡萝卜的生长过程和结构特点(10分钟)a. 向学生介绍胡萝卜的生长过程,并展示相关图片;b. 解释胡萝卜的结构特点,如根、茎、叶和花等。
步骤二:讲解胡萝卜的培养技巧和注意事项(15分钟)a. 介绍胡萝卜的适宜生长环境,如土壤、温度和湿度等;b. 解释胡萝卜的播种和养护技巧,如种子的深度和间距等;c. 强调胡萝卜的注意事项,如防止病虫害和施肥等。
步骤三:进行胡萝卜组织培养实验(30分钟)a. 将学生分成小组,每组分配一份胡萝卜种子和培养介质;b. 指导学生按照实验步骤进行胡萝卜的组织培养;c. 引导学生观察和记录胡萝卜的生长情况,并进行数据分析。
步骤四:总结胡萝卜组织培养实验结果(10分钟)a. 让学生展示和交流各组的实验结果和数据分析;b. 引导学生总结实验结果,探讨影响胡萝卜生长的因素;c. 提醒学生胡萝卜组织培养的意义和应用前景。
四、教学资源和评估方式1. 教学资源:a. 胡萝卜的图片和视频资料;b. 胡萝卜种子和培养介质;c. 实验器材和实验室设备。
胡萝卜组织培养系统实验
胡萝卜组织培养系统实验文档编制序号:[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称:细胞工程实验院系:生命科学学院年级专业:2013级生物技术(国家生命科学与技术基地班)姓名:杨梦梅选课号:学号:座号:A2开课日期:学期:2015秋季学期任课教师:吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者:杨梦梅同组实验者:赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT;继代培养1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系;细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期(生长平台)。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension cell lines ofCarrots’ callusAbstract: Carrots’ flesh roots can induce callus as explants, and then it establishessusp ension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is mg/ L 2, 4- D+ mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to thepeak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density 胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富,约含有88%的水、6%~8%糖、1%~2%植物纤维,0.7%~1.2%蛋白质、1%灰份及0~3%脂肪,及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
胡萝卜组织培养系统实验
云南大学生命科学实验教学中心实验报告课程名称:细胞工程实验院系:生命科学学院年级专业:2013级生物技术(国家生命科学与技术姓名:杨梦梅选课号:2015107066学号:20131070156座号:A2开课日期:2015.09 学期:2015秋季学期任课教师:吕琦、牛芸云南大学生命科学实验教学中心制胡萝卜愈伤组织的诱导、继代及细胞悬浮培养研究第一作者:杨梦梅同组实验者:赵姗( 云南大学生命科学学院,昆明650504)摘要: 以胡萝卜肉质根为外植体诱导出愈伤组织, 并建立细胞悬浮系. 实验结果表明: 胡萝卜肉质根是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的可行外植体; 诱导致密型愈伤组织的最佳激素浓度配比是 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT;继代培养 1代~ 2时,可得到高活性的悬浮细胞系;细胞悬浮培养细胞经过 14 天达到高峰期(生长平台)。
关键词: 胡萝卜; 组织培养; 细胞悬浮培养; 致密型愈伤组织;The study about inducement, subculture and suspension celllines of Carrots’ callusAbstract: Carrots’flesh roots can induce callus as explants, and then it establishes suspension cell lines. The experimental results show that: Carrots’flesh roots really can induce callus and then make suspension cell lines. In order to induce high density callus, the best hormone ratio is 0.5 mg/ L 2, 4- D+ 0.4 mg/ L KT. Subculturing the cell line for 1 to 2 times, we can obtain the suspension cell line with high activity. After 2 weeks, the cell line reaches to the peak of growth.Keywords: Carrot; tissue culture experiments; suspension cell; callus in high density胡萝卜( Daucus carota L . ) , 属于十字花科植物, 是一种十分重要的蔬菜作物, 由于胡萝卜肉质根营养丰富,约含有88%的水、6%~8%糖、1%~2%植物纤维,0.7%~1.2%蛋白质、1%灰份及0~3%脂肪,及其适于生食、加工、烹调等多种用途, 在世界范围内广泛栽培。
胡萝卜幼苗根、茎、叶组织培养再生植株
胡萝卜幼苗根、茎、叶组织培养再生植株张唯;王伟;续晨;贲爱玲;张君艳;蔡小宁【摘要】[ Objective]J The aim was to study plant regeneration of carrot. [ Method] The root, stem and leaf of two month old seedlings were taken as explants. Effect of different medium and different explants on callus induction and callus differentiation was analyzed. [ Result] The three explants could induce callus. The stem as explants was the best for callus quality, its rate of callus induction and differentiation rate were the highest. [Conclusion] The callus induction and regeneration system of carrot seedlings was established, which lays foundation for the future experiments.%[目的]研究胡萝卜幼苗的组织培养再生技术.[方法]以培养约2个月的胡萝卜幼苗为材料,分别取幼苗的根、茎、叶为外植体,研究不同培养基、不同外植体对愈伤组织诱导的影响,以及培养基对愈伤组织分化的影响.[结果]根、茎、叶为外植体均能产生愈伤组织,但以茎为外植体诱导的愈伤组织质量最佳,其愈伤组织的诱导率和分化率均为最高.[结论]建立了胡萝卜试管培养幼苗的愈伤组织诱导和再生植株体系,为今后的试验打下了基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)012【总页数】2页(P7013-7014)【关键词】胡萝卜;幼苗;组织培养;再生植株【作者】张唯;王伟;续晨;贲爱玲;张君艳;蔡小宁【作者单位】南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171;南京晓庄学院,江苏南京211171【正文语种】中文【中图分类】S631.2胡萝卜为伞形科二年生草本植物,是世界上最重要的蔬菜之一,栽种面积非常广泛。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计引言概述:胡萝卜组织培养是生物学实验课程中常见的实验项目之一,通过培养胡萝卜组织,学生可以了解植物的生长过程和组织培养技术。
本文将介绍一套胡萝卜组织培养的教学设计,帮助教师更好地进行实验教学。
一、实验目的1.1 帮助学生了解植物胡萝卜的生长过程和组织培养技术。
1.2 培养学生的实验操作能力和观察分析能力。
1.3 培养学生的团队合作意识和科学研究精神。
二、实验材料准备2.1 胡萝卜:选择新鲜的胡萝卜,去皮切成小段备用。
2.2 培养基:准备含有适当植物激素的培养基,促进组织生长。
2.3 实验器材:包括培养皿、移液器、显微镜等实验器材。
三、实验步骤3.1 培养基制备:将培养基倒入培养皿中,待凝固。
3.2 组织培养:将胡萝卜组织放入培养基中,放置在适当的温度和光照条件下。
3.3 观察记录:定期观察胡萝卜组织的生长情况,记录生长速度和形态变化。
四、实验结果分析4.1 生长速度:观察不同培养条件下胡萝卜组织的生长速度,比较结果。
4.2 形态变化:观察胡萝卜组织的形态变化,分析植物生长的规律。
4.3 实验效果评价:评价实验结果的可靠性和教学效果,总结实验经验。
五、实验拓展5.1 实验设计:根据胡萝卜组织培养实验结果,设计相关实验课题。
5.2 实验研究:开展更深入的植物组织培养研究,探索新的实验方向。
5.3 实验应用:将胡萝卜组织培养技术应用于其他植物的组织培养实验中,拓展实验内容。
结语:通过以上教学设计,胡萝卜组织培养实验可以更好地帮助学生理解植物生长过程和培养技术,培养他们的实验操作能力和科学研究精神。
教师可以根据实际情况进行适当调整,提高实验教学的效果和趣味性。
希望本文的内容对胡萝卜组织培养教学设计有所帮助。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
• 切材料时下面没垫滤纸。
• 镊子、刀在酒精灯上烧过立即放到盛酒精的烧杯里。 • 操作时,手、三角烧瓶在盛材料的培养皿上方活动, 容易把菌带到材料上。 • 把接种的切块压入培养基里面。
• 接种时瓶口垂直向上,手、镊子上的脏物掉到瓶里。
• 升汞回收倒入酒精桶里。
一、组织培养基本原理
• 全能性
植物体的每一个完整的细胞都拥有 形成完整植株的全部遗传信息,在一定 的条件下都具有产生一株完整个体的潜 在能力。
• 去分化 去除外植体原有的分化性状,重新进入新 的发育分化状态。
二、组织培养的方法和步骤
1、培养材料的采集
• 选择原则: 根据培养目的、易于诱导、带菌少。 生理状态:幼嫩的组织 取材季节:易成活,生长旺盛 植物的长势:生长健壮的组织 外植体大小:应根据培养目的而定 胚胎培养或脱除病毒,则外植体宜小; 快速繁殖,外植体宜大。 一般外植体大小在0.5~1.0 cm为宜。
2、外植体的表面消毒处理
• 外植体的表面清洗:洗衣粉清洗,吐温。 • 外植体表面灭菌(一般采用2次灭菌法)
先用70%酒精浸10~30s;
转到其它消毒溶液,灭菌液要充分浸没材料。
• 无菌水涮洗
涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类, 涮洗3-l0次左右。
灭菌剂 酒精 氯化汞 漂白粉 次氯酸钙
使用浓度 (%) 70-75 0.1-0.2 饱和溶液 9-10
消毒难易 易 较难 易 易
灭菌时间 0.1-3 2-10 5-30 5-30
灭菌效果 好 最好 很好 很好
次氯酸钠
过氧化氢 抗菌素
2(活性氧)
10-12 4-50mg/L
易
最易 中
5-30
5-15 30-60
很好
好 较好
3、制备外植体与接种
• 将已消毒的材料,用无菌刀、剪、镊子等,在 无菌的环境下,剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和 种皮胚乳等,叶片则不需剥皮。在操作中严禁 用手接触材料。
四、本实验—胡萝卜的接种培养
1、胡萝卜的切块处理
• • • • 2人/组,8瓶/组,留2瓶下次用; 把胡萝卜切成约4cm的段,怎么切呢? 去除表皮,去除木质部和髓; 切成约40×20×10 mm的条状,共切4块。
皮层 形成层
木质部
韧皮部
2、消毒和清洗
• • •
把切好的材料,放在100 mL的烧杯里,加入75% 酒精(现配100mL ),浸泡30秒; 然后将外植体转入0.2%升汞中(250mL烧杯装 100mL升汞),浸泡25-30分钟; 把带有升汞的烧杯拿到超净工作台,取出材料, 放入培养皿,用无菌水洗4-5分钟,重复3次。
植物的组织培养
第二节 胡萝卜的组织培养
预备任务
• 2人/组, 2组/1个无菌操作台。
• 每组取如下工具放于无菌操作台上先行灭菌 从306取培养皿、镊子; 从316室取1瓶无菌水和8瓶培养基; 带1个500 mL的烧杯,作废液缸;1个500 mL的烧杯装工业 酒精100mL。 • 注意 放置物品时,先关灭紫外灯,放好后,关上门,再开启紫 外灯; 托盘不能放到无菌操作台里,要带回来。
3、接种与培养
• 把洗净的材料用烧过的镊子夹到盛有滤纸的 培养皿里,去除表面一层,然后切成约 8×8×5 mm的块; 把切好的材料,用烧过的镊子夹到锥形瓶里, 2~3块/瓶,包好封口膜和牛皮纸; 将培养基放回316原位,在23~28℃恒温避光 条件下培养。
• •
五、注意事项
• 防火
实验中要常用酒精消毒、用酒精灯烧镊子、刀具, 注意安全;手上涂酒精,要干后才能接近火源。
七、课后作业及预习
• 课后作业
有几种常用的外植体消毒液?主要原理是什 么?效果如何?
• 预习
根癌农杆菌转化的原理及方法。
实 验
•
步
骤
材料处理 安全第一 1)配75%酒精,倒升汞; 2)把胡萝卜切成约4cm的段; 3)去除表皮、木质部和髓,切成约40×20×10 mm方块,4条。 • 消毒和清洗 4)把切好的材料,放在100 mL的烧杯里,加入75%酒精,浸 泡30秒; 5)然后将外植体转入0.2%升汞中,浸泡25~30分钟,不能超 过30分钟; 6)把带有升汞和组织材料的烧杯拿到超净工作台,取出材料, 放入培养皿,用灭菌水洗4~5分钟,重复3次,用滤纸吸干。 • 接种与培养 7)把洗净的材料用烧过的镊子夹到盛有滤纸的培养皿中,去 除表面一层,然后切成约8×8×5 mm的块; 8)用烧过的镊子将外植体放到培养基上,3块/瓶; 9) 盖好封口膜和牛皮纸,放回316,23~28℃,避光培养。
• 在无菌坏境下,将切好的外植体立即接在培养 基上,每瓶接种2~4个,防止交叉污染。
• 接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿 用无菌胶带封口。
三、无菌操作步骤
• 接种3天前用甲醛熏蒸接种室,并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌; • 接种前20分钟,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯; • 接种员洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,换穿拖鞋等; • 上工作台后,用酒精棉球搽拭双手(特别是指甲处)和工作 台面; • 用酒精棉球搽拭接种工具,再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干; • 接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳 嗽等; • 接种完毕后要清理干净工作台,可用紫外线灯灭菌30分钟, 若连续接种,每5天要大强度灭菌一次。
• 无菌操作
材料经升汞消毒后,还需严格进行无菌操作;为防 止染菌,手要用酒精擦干净,镊子和刀经常在火焰 上烧,锥形瓶、手不要放在盛材料的培养皿上方。
• 废液处理 实验完后,75%酒精和工业酒精,均应倒回到工业 酒精的罐中 ;升汞有剧毒,小心不要溅出,废液倒 回原处;酒精和升汞千万别搞混。
六、常见错误举例