真菌胞内蛋白质提取方法的建立
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［文章编号］ １６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０３－０５９０－
０５［收稿日期］ ２０１１－０８－
１５［基金项目］ 国家自然科学基金资助课题（３０９１０１０３９０３，３０７７０１２０
）［作者简介］ 王 爽（１９７６－）
，女，吉林省长春市人，主治医师，医学博士，主要从事真菌分子学鉴定及耐药机制的研究。
［通信作者］ 王 丽（Ｔｅｌ：０４３１－８５６１９４８６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｌｉ９９＠ｊ
ｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）真菌胞内蛋白质提取方法的建立
王 爽１，
２，姜兰香１，张 宇２，３
，贺 丹２，田 庄２，高 嵩２，横山耕治４，王 丽２（１．吉林大学第二医院皮肤科，吉林长春１３００４１；２．吉林大学白求恩医学院病原生物学系，吉林长春１３００２１；３．吉林大学第二医院检验科，吉林长春１３００４１；４．日本千叶大学真菌研究中心，日本千叶２６０－
８６７３）［摘 要］ 目的：研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响，为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法：分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象，培养时间为３６、４８和７２ｈ，超声波工作时间为２０ｓ、３ｍｉｎ、５ｍｉｎ，１０ｍｉｎ，超声波功率为３３２．５和４７５．０Ｗ，通过蛋白质浓度检测和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白质电泳分析，比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量，观察不同因素对蛋白质提取效果的影响。结果：２株真菌均在培养３６ｈ时提取胞内蛋白质的浓度最大，白假丝酵母在功率３３２．５Ｗ、超声３ｍｉｎ时得到胞内蛋白质的数量和种类最多，茄病镰刀菌在功率３３２．５Ｗ、超声１０ｍｉｎ时得到蛋白质的数量和种类最多。结论：使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质，从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率３方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。［关键词］ 白假丝酵母；茄病镰刀菌；超声波；培养时间［中图分类号］ Ｒ３７９．２ ［文献标志码］ Ａ
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ ｆｕｎｇ
ｕｓＷＡＮＧ Ｓｈｕａｎｇ１，
２，ＪＩＮＧ Ｌａｎ－ｘｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ２，
３，ＨＥ Ｄａｎ２，ＴＩＡＮ Ｚｈｕａｎｇ２
，
ＧＡＯ Ｓｏｎｇ２，ＫＯＪＩ Ｙｏｋｏｙａｍａ４，ＷＡＮＧ Ｌｉ ２（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００４１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｏｒｍａｎ Ｂｅｔｈｕｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ
ｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００４１，Ｃｈｉｎａ；４．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｙｃｏｌｏｇｙ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｃｈｉｂｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｉｂａ ２６０－８６７３，Ｊａｐａｎ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｔｅ ｔｉｍｅ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｏｎ ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｙｐｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌｉｎａ ａｎｄ ｔｏｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ａ ｒｅｌｉａｂｌｅ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍｆｕｎｇｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌｉｎａ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ（３６，４８，ａｎｄ ７２ｈ），ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ（２０ｓ，３ｍｉｎ，５ｍｉｎ，ａｎｄ １０ｍｉｎ）ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ（３３２．５Ｗａｎｄ ４７５．０Ｗ）．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｂｏｔｈ ｓｔｒａｉｎｓ ｇｏｔ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｑｕａｎｔｉｔｙｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｈｅｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｆｏｒ ３６ｈ．Ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ｗａｓ ３３２．５Ｗａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｗａｓ ３ｍｉｎ，ｂｕｔ ａｓ ｔｏ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌｉｎａ，ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ３３２．５Ｗａｎｄ １０ｍｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙｃｏｍｐｏｓｉｔｅｌｙ ｕｓｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｇｌａｓｓ ｂｅａｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ０
９５第３８卷 第３期
２０１２年５月吉 林 大 学 学 报 （医 学 版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．３
Ｍａｙ
２０１２